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粪大肠菌群选择培养基的配方在微生物实验室中，培养基是进行微生物研究的基本工具。
为了研究粪便样本中的大肠菌群，需要选择适合的培养基来提供必要的营养和生长条件。
本文将介绍粪大肠菌群选择培养基的配方，并解释每种成分的作用。
一、粪大肠菌群选择培养基的基本配方粪便样本中的大肠菌群包含多种菌群，为了选择性地培养大肠杆菌等大肠菌群，下面是一个基本的粪大肠菌群选择培养基的配方：1. 蛋白胨：10克蛋白胨是由动物骨、肌肉等进行高温水解得到的蛋白质消化产物，富含氨基酸和小肽。
它提供大肠菌群所需的氮源和碳源。
2. 酵母提取物：5克酵母提取物是由酵母经过洗涤、蒸煮和水解得到的产物，富含维生素和生长因子。
它提供大肠菌群所需的维生素和生长因子。
3. NaCl：5克NaCl是常见的食盐，提供培养基的渗透调节剂，维持细菌细胞的渗透平衡。
4. 溴酚紫：0.01克溴酚紫是一种天然紫色染料，在培养基中添加后可以抑制其他细菌的生长，有助于选择性培养大肠菌群。
5. 石蜡：10克石蜡是一种水不溶性物质，添加到培养基中可以形成一层液体表面的覆盖物，用于限制氧气进入培养基，提供更适合大肠菌群生长的微氧环境。
6. 聚乙二醇：600克聚乙二醇是一种高分子聚合物，用于增稠培养基。
增稠后的培养基可以避免细菌过快沉降并更好地支持细菌生长。
7. pH调节剂根据实验需要，可以使用酸或碱来调节培养基的pH值，一般维持在7.2左右，利于大肠杆菌的生长。
二、其他可能加入的成分除了上述基本成分，粪大肠菌群选择培养基还可以根据实验需要添加其他成分。
以下是一些常见的选择：1. 抗生素为了选择性地培养大肠菌群，可以添加抗生素来抑制其他细菌的生长。
常见的选择包括氯霉素、链霉素、四环素等。
2. 鲍曼氏酚红鲍曼氏酚红是一种指示性染料，可以根据颜色的变化来判断大肠杆菌是否发酵产生酸。
3. 氧气捕捉剂为了提供更适合大肠杆菌生长的微氧环境，可以添加氧气捕捉剂，例如多聚胺。
三、配方使用方法根据以上配方，将适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl等溶解在适量的蒸馏水中，并调整pH值，最后加入溴酚紫、石蜡和聚乙二醇，充分搅拌混合。
条件致病菌肠球菌摘要：肠球菌不像大多数的乳酸菌一样，它不被认为是“安全可靠”（GRAS）。
对于肠球菌的安全评价仍存有争议。
虽然肠球菌被认为是“积极“或在奶酪技术中有用，但它的隔离种群已经作为对人类的条件致病菌出现。
因此，这些细菌对发酵乳制品是否有益处于似是而非的地位，以为它存在有潜在的危险。
本篇综述是概述了肠球菌的积极的和消极的两种特性，并举例说明这个菌的具有争议的特性。
根据食品安全评价准则，我们提出对于每个潜在的技术应变逐个进行评估，并且建议肠球菌在发酵食品中使用前进行个别研究。
1.简介肠球菌最初列为D群链球菌，这种分类可以追溯到由兰斯菲尔德建立的计划。
1984年，肠球菌给予了新的位置被列为肠球菌属，在经过DNA-DNA和DNA-RNA杂交的研究后证明它与链球菌属有较远的关系(Schleifer and Kilpper-Balz, 1984)。
到目前为止32种已被提议列入肠球菌属（2005年10月26号)。
肠球菌种适宜在6.5％氯化钠，40％胆汁盐且pH值在9.6，并可以在60°C的环境下生存30分钟。
大多数品种也可以在10℃至45℃之间生长(Moellering,1992;Flahautet al.,1996)。
粪肠球菌和屎肠球菌都是人类消化道微生物自然存在的菌种，在胃肠道中因为个体差异其含量差异变化很大（在每克消化系统内容物中含有102和108）。
肠球菌通常从食品、植物、水和土壤中分离，可能由于它的来源是粪便使得他们的天性在恶劣环境中比较耐受(Giraffa,2002)。
在牛奶和奶酪制品中通常会找到粪肠球菌、屎肠球菌和少量的坚忍肠球菌，偶然也会发现小肠肠球菌和铅黄肠球菌。
不同于其他乳酸菌，肠球菌不能被认为是“一般认为安全”（GRAS），并且它在水中检测是作为粪便污染物的指标的(Godfree et al.,1997)。
一般认为对于肠球菌的安全评价程序是一个模棱两可的状况。
一方面，肠球菌在作为奶酪技术中作为发酵培养物被认为是由积极作用的(Giraffa,2003)；另一方面，它们被认为是新兴的人类病原体(Moellering,1992)。
粪大肠菌群选择培养基的配方《粪大肠菌群选择培养基的配方》引言：粪大肠菌群是一类常见的肠道菌群，其中包括了许多对人体健康有重要影响的细菌。
为了研究和了解这些细菌的特性和功能，科研人员需要使用适当的培养基来进行菌种的培养和繁殖。
下面将介绍一种常用的粪大肠菌群选择培养基的配方。
正文：粪大肠菌群选择培养基的配方一般包括碳源、氮源、维生素和矿物质等成分，下面是一种常用的配方：1. 碳源：加入适当的碳源可以提供能量和营养物质，常用的碳源包括葡萄糖、蔗糖或果糖等，其中葡萄糖是最常用的碳源。
2. 氮源：适当的氮源是菌群生长所必需的，常用的氮源包括氨基酸、尿素或肉汤等。
其中，氨基酸是菌群所需的基本构建块，尿素可以近似地模拟肠道环境。
3. 维生素：加入适当的维生素可以满足菌群的生长和代谢需求。
这些维生素可以从商业化合物中购买，例如维生素B群以及维生素K等。
4. 矿物质：选择适当的矿物质来源可以提供细菌的营养需求。
常用的矿物质包括钠、钾、镁、钙等。
5. pH调节剂：粪大肠菌群选择培养基需要保持适当的pH值，通常维持在6.8-7.2之间。
为了调节pH值，可以加入缓冲液，常见的缓冲液有磷酸盐缓冲液、碳酸氢钠缓冲液等。
6. 抗生素：在培养基中添加特定的抗生素可以选择性地抑制或促进某些菌群的生长。
例如，可以加入氯霉素、碳青霉素或氨苄青霉素等抗生素。
结论：粪大肠菌群选择培养基的配方需要综合考虑碳源、氮源、维生素和矿物质等多个因素。
以上所列的配方是一种常用的选择，但具体的配方还需要根据实验目的和需要进行调整。
通过合理的配方设计，科研人员能够更好地培养粪大肠菌群，为相关研究提供有益支持。
![一种饲料级屎肠球菌制剂及其生产方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/87b0d4c8541810a6f524ccbff121dd36a32dc4b0.png)
专利名称：一种饲料级屎肠球菌制剂及其生产方法
专利类型：发明专利
发明人：杨毅,张保国,孙胜,杨发祥,尚海丽,赵崇钧,郭绍青,张海鹍
申请号：CN202111458005.5
申请日：20211201
公开号：CN114350543A
公开日：
20220415
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种饲料级屎肠球菌制剂及其生产方法。
本发明的生产方法，将菌种屎肠球菌取出后，经菌种活化培养、种子摇瓶培养、种子罐培养、发酵培养、过滤和真空干燥后制得饲料级屎肠球菌制剂，其中，种子摇瓶培养、种子罐培养、发酵培养所用的培养基是利用豆粕、玉米浆农业生产废弃物为原料制得的。
该生产方法使用低成本的培养基即可生产饲料级屎肠球菌制剂，不仅可提高乳酸屎肠球菌的活菌数和固态产品的货架期，还可大幅度降低生产成本；相比于现有的生产方法，该生产方法还具有培养方法更简单，可简化发酵操作和缩短发酵生产周期的优势；该生产方法的培养菌量可达200～300亿/mL，干粉菌量损失小于10％，微生物活菌量相比于现有技术大大提高。
申请人：云南省微生物发酵工程研究中心有限公司
地址：650000 云南省昆明市中国(云南)自由贸易试验区昆明片区经开区昌宏路49号
国籍：CN
代理机构：昆明鸿昊知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：姜钰芸
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一株猪源粪肠球菌 DT － 02 的培养基优化尹 望 杜志琳 李雪平北京好实沃生物技术有限公司，北京101399摘 要 在成功筛选到一株猪源粪肠球菌 DT －02 后，首先在 M ＲS 培养基的基础上对该菌进行培养基优 化。
先进行单因素优化，后进行正交设计试验，最终得的最优培养基组合为葡萄糖 3. 0%、蛋白胨 3. 0% 、 MnSO 4 ·H 2 O 0. 07 g / L 、酵母粉 1% 、无水乙酸钠 1. 4% 、柠檬酸氢二铵 0. 5% 、MgSO 4 ·7H 2 O 0. 2% 、K 2 HPO 40. 2% 和吐温 －80 0. 4% 。
优化后的 M ＲS 培养基使摇瓶发酵活菌数提升了 58. 79% 。
关键词 粪肠球菌; 培养基优化; 单因素优化; 正交设计 中图分类号: 文献标志码: 文章编号: 1002－ 2813 ( 2015) 01 － 00018 － 04 S816. 3 A10. 13557 / j . cnki. issn 1002 － 2813. 2015. 01. 005 DOI 编号: ml / L ，pH 6. 8。
肠球菌属是人和恒温脊椎动物肠道内的革兰阳 性菌，有着非常重要的医学意义。
肠球菌广泛存在 于各种乳制品和发酵食品中，不仅能够影响食品的 风味和质地，还能产生乳酸、有机酸、乙醇、过氧 化氢、双乙酰和细菌素等许多抑菌物质。
如一些肠 球菌素具有广谱抗菌作用。
粪肠球菌作为肠球菌属 最常见的一种，现已作为益生菌和发酵剂广泛用于 微生态制剂、保健食品及发酵食品的工业生产中。
文章通过单因素优化及正交设计对一株猪源粪肠球 菌进行了培养基优化，为该菌应用于微生态制剂提 供理论基础。
温 － 80 1 M ＲS 固体培养基: 牛肉膏 10、酵母膏 5、葡萄 糖20、无水乙酸钠 5、柠檬酸氢二铵 2、MnSO 4 · H 2 O 0. 05、K 2 HPO 4 2、Mg SO 4 ·7H 2 O 0. 2 和琼脂粉 g / L ，吐温 － 80 1 ml / L ，pH 6. 8。
粪肠球菌微胶囊的制备及稳定性研究龚阿琼;王学东;戴晋军;谭斌【期刊名称】《国外畜牧学-猪与禽》【年(卷),期】2012(032)011【总页数】2页(P58-59)【作者】龚阿琼;王学东;戴晋军;谭斌【作者单位】武汉工业学院食品学院,湖北武汉430023;武汉工业学院食品学院,湖北武汉430023;安琪酵母股份有限公司,湖北宜昌443003;安琪酵母股份有限公司,湖北宜昌443003【正文语种】中文【中图分类】TQ460.6近年来，随着人们对益生菌保健作用的逐渐认识，对其活菌制剂的研究也日渐增多。
活菌制剂是能够调节动物肠道菌群的生态平衡，对宿主起到有益作用的活的微生物制剂，由于它不仅具有与抗生素饲料添加剂相似的有益作用，而且还有具有无毒、无副作用、无残留、无抗药性、无污染等优点，已逐步发展成为最具有应用前景的抗生素替代品。
粪肠球菌(E.faecalis)又叫粪链球菌，普遍存在于自然界，一般栖居在动物的肠腔，也是人体上呼吸道或肠道的常居益生菌。
由于影响益生菌活力的因素众多，例如温度、湿度、酸碱度、机械力等，导致益生菌极易失活，降低了益生菌的作用功效。
微胶囊技术在食品、药品、饲料等方面应用广泛，本试验通过对益生菌的微胶囊包埋，有效增强了它对高温、干燥、胃酸以及胆汁等不良环境因子的抵抗能力，同时降低了其受机械力的影响，达到为菌体生存提供更好的微环境，提高益生菌的存活率，增加其稳定性的目的。
1 材料和方法1.1 试验材料1.1.1 菌种粪肠球菌菌粉：安琪酵母股份有限公司提供。
1.1.2 培养基MRS液体培养基：蛋白胨10 g，牛肉浸膏10 g，酵母浸膏5 g，K2HP042 g，柠檬酸氢二铵2 g，葡萄糖20 g，乙酸钠5 g，Tween-80 1 mL，MgS04·7H20 0.58 g，MnS04·4H20 0.25 g，1 000 mL蒸馏水，用l mol/LNaOH调节pH为7.0，115℃灭菌30 min。
屎肠球菌廉价培养基的研制李英英;陈曦;宋铁英【摘要】[目的]为了降低屎肠球菌微胶囊制剂的发酵成本,[方法]用自主分离的一株屎肠球菌作为发酵菌株,用玉米和豆粕替代MRS基础培养基中的碳源和氮源,设计不同替代比例的MRS廉价培养基,经过培养和计数,筛选出价格低廉又适合该菌株生长的廉价培养基.[结果]玉米和豆粕作为碳源和氮源制成的替代培养基适合该屎肠球菌生长;结合价格和培养效果,筛选出碳源50％替代、氮源100％替代的MRS-C50 N100替代培养基为适合用于屎肠球菌工业化发酵的廉价培养基.[结论]MRS-C50 N100替代培养基既可以极大降低屎肠球菌的发酵成本,又可以使活菌数达到益生菌制剂要求的有效活菌量,可用于屎肠球菌微胶囊制剂的工业化生产.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2018(046)032【总页数】3页(P80-81,90)【关键词】屎肠球菌;MRS,廉价培养基;饲料原料【作者】李英英;陈曦;宋铁英【作者单位】福建省农业科学院生物技术研究所,福州350003;福建省农业科学院生物技术研究所,福州350003;福建省农业科学院生物技术研究所,福州350003【正文语种】中文【中图分类】S816.6乳酸菌是动物肠道内的主要益生菌，具有促进营养物质的消化和吸收[1]，维持肠道内微生态平衡[2]，增强机体免疫力[3]，提高生产性能[4]等作用。
为解决畜牧行业中抗生素滥用引发的药残和耐药性问题，在动物日粮中添加乳酸菌制剂等抗生素替代物已经成为很多人的选择[5]。
屎肠球菌是乳酸菌中抗逆性较强的一类菌[6]，培养和保存条件都较为容易，是制作乳酸菌微胶囊制剂时的首选菌种[7]。
在前期研究中，我们已经筛选到一株抗逆性较强的猪源屎肠球菌，通过喷雾干燥工艺制备成屎肠球菌微胶囊制剂，并且对制成的屎肠球菌微胶囊制剂进行了高温耐受性、耐酸性、肠溶性、稳定性和动物田间小规模试验，证明该屎肠球菌微胶囊制剂对高温、胃液、肠液均有较好的耐受性，并且可显著提高断乳仔猪生产性能[4]。
但是前期培养屎肠球菌使用的MRS培养基中氮源物质是蛋白胨、牛肉膏和酵母膏，价格昂贵，造成屎肠球菌微胶囊制剂生产成本过高，难以推广。
豆粕是动物饲料配方中最主要的氮源物质，与MRS培养基中的氮源物质(蛋白胨、酵母膏和牛肉膏)相比，豆粕价格低廉且易得[8]。
若用豆粕替代MRS培养基中的蛋白胨、酵母膏和牛肉膏，可大幅度降低屎肠球菌微胶囊制剂的生产成本。
而玉米是动物全价饲料中的碳源物质[9]，与培养基中原有的碳源(葡萄糖)相比，价格更低且来源稳定更易获得。
用豆粕和玉米作为培养基中的氮源和碳源，可以降低成本，有利于屎肠球菌微胶囊制剂的工业化生产。
本研究拟用豆粕和玉米部分或者全部替代MRS基础培养基中的氮源和碳源成分，制成MRS替代培养基；再用前期分离得到的屎肠球菌作为菌株，进行培养计数，最后结合价格，筛选出高效、价廉的MRS廉价培养基，为屎肠球菌微胶囊制剂在饲料和养殖行业中的推广奠定基础。
1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 试验菌株。
来自福建省某猪场周边土壤自主分离到的屎肠球菌(BBH201305001)，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，菌种保藏代号：CGMCC No.8296。
1.1.2 试剂。
蛋白胨，牛肉膏，酵母膏，豆粕,葡萄糖,玉米,磷酸二氢钾，乙酸钠，硫酸镁(MgSO4 ·7H2O)，硫酸锰(MnSO4·4H2O)，柠檬酸三胺，吐温-80，稀盐酸等。
1.2 试验方法1.2.1 MRS基础培养基配制。
蛋白胨10‰，牛肉膏10‰ ，酵母膏4‰ ，葡萄糖20‰,磷酸二氢钾2‰，乙酸钠5‰，硫酸镁0.2‰，硫酸锰0.05‰，柠檬酸三胺2‰，吐温-80 1‰，pH 5.7，121 ℃、15 min灭菌。
1.2.2 MRS替代培养基配制及筛选。
利用与MRS基础培养基中氮源含量相当的豆粕替代原有的氮源物质(蛋白胨，牛肉膏和酵母膏)制成MRS替代培养基，替代比例为50%记作MRS-N50，全部替代时记作MRS-N100；同样，用玉米替代培养基中的碳源物质(葡萄糖)，50%替代时记作MRS-C50，全部替代时记作MRS-C100，以此类推。
配制替代培养基时先进行氮源或碳源单替代，设置50%和100%两个梯度进行替代，即MRS-C50、MRS-C100、MRS-N50、MRS-N100 4个配方，接种菌株进行培养计数；根据单替代的结果设计氮源碳源双替代配方，同样接种菌株进行培养计数；结合双替代配方培养计数的结果以及培养基的价格，筛选出价格低廉又适合屎肠球菌生长的替代配方。
1.2.3 培养计数。
取保藏的屎肠球菌接种于MRS培养基中，37 ℃、180 r/min 培养16～20 h，制备成种子液。
以基础培养基为对照组，替代培养基为实验组，每组设3个平行，接种10%的种子液后37 ℃、180 rpm/min 培养20～24 h，涂板计数。
2 结果与分析2.1 氮源和碳源单替代培养计数的结果用豆粕和玉米进行单替代制成廉价培养基，培养计数的结果如表1所示，替代培养基MRS-C50、MRS-C100和MRS-N50培养计数的结果均高于MRS基础培养基，仅MRS-N100的结果略低于基础培养基。
但4种替代培养基中，MRS-N100的价格最低。
表1 氮源碳源单替代培养基培养计数结果及培养基价格比较Table 1 Comparisons of the culture count result and price for substituting mediums with alternative nitrogen or carbon sourceMRSMRS-C50MRS-C100MRS-N50MRS-N100活菌数Viable count∥lgcfu/mL9.39±0.229.70±0.2410.03±0.089.44±0.228.90±0.13价格百分比Price percentage∥%10099.8699.7253.096.182.2 氮源单替代及氮源碳源双替代培养基培养计数的结果表2为氮源单替代及氮源碳源双替代培养基培养计数的结果，MRS-N50和MRS-C50N50 2种氮源半替代培养基的培养计数结果高于MRS基础培养基，而MRS-N100和MRS-C50N1002种氮源全替代培养基的结果略低于MRS基础培养基。
同时，在氮源替代比例相同时，用玉米进行氮源替代培养计数的结果比不进行碳源替代的结果更高，即MRS-C50N50高于MRS-N50，MRS-C50N100高于MRS-N100。
表2 氮源单替代及氮源碳源双替代培养基培养计数结果及培养基价格比较Table 2 Comparisons of the culture count result and price for substituting mediums with alternative nitrogen source or alternative nitrogen and carbon sourceMRSMRS-N50MRS-N100MRS-C50N50MRS-C50N100活菌数Viablecount∥lg cfu/mL9.46±0.139.51±0.179.00±0.089.72±0.079.01±0.13价格百分比Price percentage∥%10053.096.1852.956.042.3 氮源碳源双替代培养基培养计数的结果表3为氮源碳源双替代培养基培养计数的结果，3种替代培养基计数结果从高到低依次是MRS-C50N50、MRS-C50N75、MRS-C50N100，其中MRS-C50N50和MRS-C50N75的培养计数结果比基础MRS培养基略高，而MRS-C50N100的结果则略低。
3种双替代培养基中MRS-C50N50最适合菌株生长，但MRS-C50N100价格最低。
表3 氮源碳源双替代培养基培养计数结果及培养基价格比较Table 3 Comparisons of the culture count result and price for substituting mediums with alternative nitrogen and carbon sourceMRSMRS-C50N50MRS-C50N75MRS-C50N100活菌数Viable count∥lgcfu/mL9.29±0.209.48±0.149.32±0.259.06±0.39价格百分比Price percentage∥%10052.9529.506.043 讨论3.1 氮源和碳源单替代试验豆粕和玉米是配合饲料中主要的氮源和碳源，与MRS 培养基中氮源和碳源物质相比，不仅价格低廉，而且来源更稳定。
若用其替代MRS培养基中的氮源和碳源物质，可降低MRS培养基的制作成本，有利于屎肠球菌微胶囊制剂的工业化生产和其在养殖行业中的推广应用。
用豆粕和玉米进行单替代制成廉价培养基培养计数的结果中，碳源半替代、全替代及氮源半替代后培养计数的结果均高于MRS基础培养基，仅氮源全替代的结果略低于基础培养基。
因此，认为用豆粕和玉米作为氮源和碳源制成替代培养基适合该菌株生长。
4种替代培养基MRS-C50、MRS-C100、MRS-N50和MRS-N100价格分别是MRS基础培养基的99.86%、99.72%、53.09%和6.18%，可以看出，氮源替代对培养基的价格影响远大于碳源替代对培养基价格的影响。
同时，豆粕和玉米作为培养基原料的主要缺点是二者不溶于水，若将基础培养基中的氮源和碳源物质均用豆粕和玉米全替代，制成的培养基会过于黏稠，不利于菌株培养。
因此，从价格方面考虑，在进一步设计替代配方时，优先考虑氮源替代，且将碳源替代比例设置为3.2 氮源单替代及氮源碳源双替代试验氮源单替代及氮源碳源双替代培养基培养计数的结果，MRS-N50和MRS-C50N50 2种氮源半替代培养基的培养计数结果高于MRS基础培养基，而MRS-N100和MRS-C50N100 2种氮源全替代培养基的结果略低于MRS基础培养基，说明氮源半替代后制成的培养基比全替代培养基更适合该屎肠球菌生长。
试验结果还显示，MRS-C50N50高于MRS-N50，MRS-C50N100高于MRS-N100，说明当氮源替代量相同时，用玉米替代葡萄糖作为培养基的碳源更有利于该菌株生长。
因此，我们认为：碳源替代方面，用玉米50%替代葡萄糖，既可以降低培养基的价格，又利于菌株生长，同时也不会使制成的替代培养基因过于黏稠而不利于菌株培养；而氮源替代方面，用豆粕50%替代原有氮源比100%替代更适合菌株生长，但100%替代可极大程度降低培养基价格。
