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鸡、猪粪便源大肠杆菌对4种抗生素耐药性的比较蒲承君;吕明环;曾钰涵;宫小燕;孙英【摘要】以琼脂稀释法对67株鸡源大肠杆菌及61株猪源大肠杆菌进行最低抑菌浓度(MIC)测定,并以SPSS分别进行卡方检验和Probit模型估算,分析不同来源大肠杆菌耐药差异显著性及不同抗生素的半数抑菌浓度(MIC50),以期对不同畜禽粪便来源的大肠杆菌耐药差异进行详细准确的探讨.结果显示,鸡源大肠杆菌对头孢噻肟、诺氟沙星、环丙沙星和四环素耐药率分别为98.51％、68.66％、56.72％和100％,猪源大肠杆菌对头孢噻肟耐药率为88.52％,对诺氟沙星、环丙沙星和四环素则100％耐药.除四环素,鸡源、猪源大肠杆菌对诺氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟的耐受差异显著(P＜0.05),51％的鸡源大肠杆菌和89％的猪源大肠杆菌均呈4重耐药.SPSS分析结果表明,Probit模型估算结果优于当前MIC50常规计算方法,头孢噻肟、诺氟沙星、环丙沙星和四环素对鸡源大肠杆菌MIC50分别为40.031μg·mL-1、40.020 μg·mL-1、2.683 μg· mL-1和101.418 μg·mL-1,对猪源大肠杆菌MICs0分别为8.724 μg· mL-1、56.044 μg· mL-1、31.214 μg·mL-1和130.915 μg·mL-1.回归方程显示环丙沙星对鸡源大肠杆菌抑制作用最强;高于40.031 μg·mL-1时,诺氟沙星抗菌作用弱于头孢噻肟,低于120.23 μg·mL-1时,诺氟沙星抗菌作用强于四环素;头孢噻肟、环丙沙星、诺氟沙星和四环素对猪源大肠杆菌的抑菌作用则呈递减趋势.同时验证了诺氟沙星和环丙沙星属同种作用机制,基于Probit模型计算更简单、快速、直观.研究结果可为畜禽养殖中大肠杆菌的耐药差异监控提供一定的数据基础.%We determined minimum inhibitory concentration (MIC) of four antibiotics to 67 Escherichia coli in chicken feces and 61 Escherichia coli in pig feces by agar dilution method,and then established Chi-square test and Probit model with Statistical Product andService Solutions (SPSS) to analyze the significance of antibiotic resistance difference and MIC50.Results indicated that resistance rate of cefotaxime,norfloxacine,ciprofloxacin and tetracycline was98.51％,68.66％,56.72％ and 100％ for Escherichia coli in chicken feces respectively.However,for Escherichia coli in pig feces,resistance rate of cefotaxime was 88.52％,and resistance rate of the other three antibiotics reached 100％.Except for tetracycline,the resistance difference between Escherichia coli in chicken feces and Escherichia coli in pig feces was significant (P＜0.05).The phenomenon was supposed to correlate with the wide use of tetracycline in livestock farms.89％ of Escherichia coli in pig feces was quadruple drug resistance while 51％ of Escherichia coli in chicken feces was quadruple drug resistance.Escherichia coli which were sensitive to the four antibiotics were not found in our study.SPSS analysis suggested that the results calculated with Probit model were better than the normal method.MIC50 of cefotaxime,norfloxacine,ciprofloxacin and tetracycline of Escherichia coliin chicken feces was 40.031 μg·mL-1,40.020 μg·mL-1,2.683 μg·mL-1 and 101.418 μg·mL-1 while that in pig feces was 8.724 μg·mL-1,56.044 μg·mL-1,31.214 μg·mL-1 and 130.915 μg·mL-1.Regression equation showed that ciprofloxacin could inhibit Escherichia coli in chicken feces significantly.When the concentration was above 40.031 μg·mL-1,antibacterial function of norfloxacine was weaker than cefotaxime.Below 120.23 μg· mL-1,antibacterial function of norfloxacine was stronger than tetracycline.The order of antibacterial function to Escherichia coli in pig feces was followed by cefotaxime ＞ ciprofloxacin ＞norfloxacine ＞ tetracycline.At the same time,it verified the same inherent mechanism for antibacterial function of norfloxacine and ciprofloxacin.Calculation of MIC50 based on Probit model was more simple,faster and more direct.Results provided essential information for monitoring the resistance difference of Escherichia coli in livestock farms.【期刊名称】《生态毒理学报》【年(卷),期】2017(012)001【总页数】7页(P141-147)【关键词】抗生素;大肠杆菌;鸡源;猪源;琼脂稀释法;最低抑菌浓度;卡方检验;Probit 模型【作者】蒲承君;吕明环;曾钰涵;宫小燕;孙英【作者单位】中国农业大学资源与环境学院,北京 100193;中国农业大学资源与环境学院,北京 100193;中国农业大学资源与环境学院,北京 100193;中国农业大学资源与环境学院,北京 100193;中国农业大学资源与环境学院,北京 100193【正文语种】中文【中图分类】X171.5抗生素在畜禽养殖中的广泛使用已使动物肠道内的细菌产生多重耐药，耐药菌可随着畜禽粪便排出体外，进而对环境中的土著细菌产生影响[1-2]。
河南省猪源粪肠球菌的分离、鉴定与耐药性分析董鹏;李金磊;狄元冉;韩楠;方忠意;高延玲;周红霞;吴志明【摘要】旨在掌握河南省猪源粪肠球菌的耐药情况.从规模化猪场抽取样品300批,采用常规方法进行粪肠球菌分离、培养、纯化,应用全自动细菌鉴定/药敏系统和PCR技术对分离菌株进行种水平鉴定,利用微量肉汤稀释法对分离菌株进行药物敏感性分析.结果表明,有154株分离菌被鉴定为粪肠球菌,总体分离率为51.33%;分离菌株对头孢西丁、克林霉素、泰妙菌素、头孢噻呋、磺胺异噁唑、红霉素、替米考星等抗菌药物耐药严重,耐药率均在90%以上,对强力霉素(多西环素)、氟苯尼考、青霉素、复方新诺明耐药性相对较强,耐药率在60%~90%.综上提示,河南省猪源粪肠球菌耐药情况严重.【期刊名称】《畜牧与饲料科学》【年(卷),期】2017(038)007【总页数】3页(P13-15)【关键词】粪肠球菌;猪;分离;鉴定;耐药性【作者】董鹏;李金磊;狄元冉;韩楠;方忠意;高延玲;周红霞;吴志明【作者单位】河南省兽药饲料监察所,河南郑州 450008;河南省兽药饲料监察所,河南郑州 450008;河南省兽药饲料监察所,河南郑州 450008;鹤壁市畜产品质量监测检验中心,河南鹤壁 458030;河南省兽药饲料监察所,河南郑州 450008;河南省兽药饲料监察所,河南郑州 450008;河南省兽药饲料监察所,河南郑州 450008;河南省兽药饲料监察所,河南郑州 450008【正文语种】中文【中图分类】S858.285.11;S854.43肠球菌原属于链球菌属，1994年正式被独立划分为肠球菌属［1］。
粪肠球菌是一种革兰阳性菌，是重要的条件致病菌［2］，广泛分布于自然界中，常栖居于人和动物的肠道中。
近年来，肠球菌感染人和动物的报道不断增加，随着耐药菌株的增多，感染后的治疗也越来越困难［3］。
先前认为粪肠球菌是人和动物的共生菌，但近年来研究发现，粪肠球菌已逐渐成为人和动物革兰阳性菌感染中仅次于葡萄球菌的第二大病原菌［4］。
猪肠外致病性大肠杆菌的分离鉴定和药敏试验徐引弟,王治方,朱文豪,梁跃,郭成留【摘要】摘要:从2006-2009年河南省发生猪高热综合征的168家规模化猪场456份病料中,分离出粗大的革兰氏阴性杆菌,通过培养特性试验、生化试验和PCR试验,鉴定出了149株猪肠外致病性大肠杆菌。
对分离菌进行小鼠毒力试验、血清分型及药敏试验,结果显示,所分离肠外致病性大肠杆菌对小鼠均有毒力,以O11、O161、O8、O138、O9、O101及O26最为流行,对头孢噻肟、头孢他啶、头孢哌酮、阿米卡星、头孢唑啉敏感。
【期刊名称】河南农业科学【年(卷),期】2011(040)001【总页数】4【关键词】关键词:猪肠外致病性大肠杆菌;分离;鉴定;药敏试验大肠杆菌是一类广泛存在于自然界,并能引起人和动物共同感染的重要人畜共患病病原。
依其致病机制可分为3类:共生型、肠内致病型和肠外致病型。
根据猪的日龄、生理与免疫状况等差异,疾病的发生有所不同,常见的猪大肠杆菌病分为3种,仔猪黄痢、仔猪白痢和猪水肿病,目前这些疫病的发病机制与危害已被人们广泛认识[1]。
近几年,北美和欧洲许多学者相继报道了一类危害严重,可特定定殖于宿主肠道外其他组织,并严重致病的一类新的大肠杆菌菌群肠外致病性大肠杆菌（extraintestin al pathogenic Escherichia coli,ExPEC）。
肠外致病性大肠杆菌是一类能引起人和动物肠外组织感染的重要人畜共患病病原,可致使不同宿主发生脑膜炎、败血症、泌尿道感染和呼吸道感染。
该病每年给全球公共医疗业造成巨大的财政支出,已引起全世界的广泛关注[1-6]。
2006年6月以来我国爆发的高热综合征给养猪业造成了巨大经济损失。
高热综合征主要由高致病性猪呼吸与繁殖综合征引起,同时有圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流感病毒、伪狂犬病毒的感染,细菌性病原如猪链球菌、大肠杆菌、副猪嗜血杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌等继发感染和混合感染。
河南省部分地区鸡沙门氏菌的分离鉴定和耐药性研究的开题报告一、研究背景和意义鸡沙门氏菌是一种常见的细菌，常常引起人和动物的肠道感染。
近年来，随着养殖业的发展以及消费生态的变化，鸡沙门氏菌的感染情况越来越严重，已经成为一个亟待研究的问题。
河南省是中国重要的畜牧业区域之一，因此对河南省部分地区鸡沙门氏菌的研究具有重要的意义。
本研究旨在通过对河南省部分地区鸡沙门氏菌的分离鉴定和耐药性研究，掌握该地区鸡沙门氏菌的流行状况和耐药情况，为该地区动物疾病防控提供科学依据。
二、研究内容和方法（一）研究内容1.采集样品：选择河南省部分地区的养殖场和市场，采集鸡粪、鸡肉等样品。
2.分离鉴定：采用细菌培养、生化鉴定、分子生物学等方法对样品中的鸡沙门氏菌进行分离、鉴定。
3.药敏试验：对分离出的鸡沙门氏菌进行药敏试验，掌握该地区鸡沙门氏菌的耐药情况。
4.数据分析：对试验结果进行统计分析，并进行相关图表的绘制。
（二）研究方法1.样品采集：采用随机抽样的方法，采集养殖场和市场中的鸡粪、鸡肉等样品。
2.细菌分离鉴定：采用营养琼脂培养基、MacConkey琼脂培养基、API酶试剂盒等方法进行分离，然后采用PCR等方法进行鉴定。
3.药敏试验：采用纸片扩散法等方法进行药敏试验。
4.数据分析：采用SPSS软件等统计分析软件进行数据处理和分析。
三、研究预期成果（一）本研究将掌握河南省部分地区鸡沙门氏菌的分布和菌株的特点和流行状况，为该地区动物疾病防控提供科学依据。
（二）本研究将明确河南省部分地区鸡沙门氏菌的耐药性情况，为该地区动物疾病防控提供参考。
（三）本研究将提供一定的科学依据和理论基础，为鸡沙门氏菌的治疗和控制提供有力支持。
四、研究计划及预算（一）研究计划1.时间安排：本研究拟于2022年3月至2022年11月开展，其中样品采集和实验操作预计用时6个月，数据处理和结果分析预计用时2个月。
2.调查范围：本研究将选择河南省某些养殖场和市场作为研究对象，共计采样300份样品。
河南省部分地区猪和鸡源粪肠球菌的分离鉴定与耐药性分析李金磊;董鹏;狄元冉;方忠意;高延玲;周红霞;吴志明【摘要】In order to understand the drug resistance of Enterococcus faecalis from swine and chickens in Henan province,480 samples were collected from scaled pig and chicken farms in four areas,E.faecalis were isolated and identified by PCR and BD PhoenixTM-100 Compact automatic microbial analysis system. The drug resistance analysis was carried out by mini-broth dilution susceptibility test.The result showed that total 254 isolates of E.faecalis were isolated,the isolating rate was 52.9%.The resistances of E.fae-calis isolates tocefoxitin,tiamulin,clindamycin,sulfisoxazole,erythromycin and tilmicosin were all above 90%,resistance to seven or more antimicrobials was observed in over 90% of E.faecalis isolates.The re-sults indicated that the drug resistance of E.faecalis from pigs and chickens in Henan province is serious, the better environmental hygiene should be provided to food animals to prevent the proliferation and spread of drug-resistant bacteria.%为了掌握河南省猪、鸡源粪肠球菌的耐药情况,从4个不同地区的规模化养殖场猪、鸡抽取样品480份,通过对细菌的分离培养和纯化,采用PCR和BD PhoenixTM-100全自动微生物鉴定系统对分离的粪肠球菌进行鉴定,并通过微量肉汤稀释法对分离菌株进行药物敏感性分析.结果显示,共分离菌株254株,分离率为52.9%.分离菌株对头孢西丁、泰妙菌素、克林霉素、磺胺异恶唑、红霉素、替米考星等耐药严重,耐药率均在90%以上,90%以上的菌株对7类及7类以上的抗菌药物耐药.表明河南省猪、鸡源粪肠球菌耐药情况严重,食用动物的环境卫生有待进一步改善,防止耐药菌的扩散和蔓延.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2018(039)004【总页数】6页(P122-127)【关键词】粪肠球菌;分离;耐药性;猪;鸡【作者】李金磊;董鹏;狄元冉;方忠意;高延玲;周红霞;吴志明【作者单位】河南省兽药饲料监察所,河南郑州450008;河南省兽药饲料监察所,河南郑州450008;河南省兽药饲料监察所,河南郑州450008;河南省兽药饲料监察所,河南郑州450008;河南省兽药饲料监察所,河南郑州450008;河南省兽药饲料监察所,河南郑州450008;河南省兽药饲料监察所,河南郑州450008【正文语种】中文【中图分类】S852.611;S858.31肠球菌原属于链球菌属，是一种革兰阳性菌，广泛分布于植物、地表水、土壤、蔬菜及动物等多种生物，对高温及恶劣环境有较强的耐受性[1-2]。
肠球菌与多种食源性动物疫病有关，能引起猪腹泻，给养殖业造成重大损失，并威胁人的健康[3]。
临床分离的肠球菌中，粪肠球菌约占80%～90%，而屎肠球菌只占5%～10%[4]。
粪肠球菌是人和动物肠道中一种重要的条件致病菌，在畜牧业生产中常作为益生菌饲料添加剂来调节畜禽肠道菌群。
但是，近年来由于抗生素的广泛使用，在兽医临床研究中，由肠球菌引起的动物疾病也日益增多[5-7]；在人类公共卫生安全上，粪肠球菌已成为医院感染的重要病原菌之一[8]，我国医院分离的病原菌中，粪肠球菌位居前3位[9]。
作为可以衡量抗菌药物耐药性水平的革兰阳性指示菌，对猪、鸡源粪肠球菌的耐药性分析和研究具有重要意义，可以为科学制定抗菌感染防治方案及细菌耐药性监测提供必要的数据支持。
本试验从河南省A、B、C、D 4个地区的规模化养猪、鸡场抽取样品，对粪肠球菌进行分离、鉴定，随后进行耐药性试验，以期掌握河南省猪、鸡源粪肠球菌的耐药情况，为指导临床合理用药和粪肠球菌的控制提供科学依据。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌株肠球菌标准菌株ATCC 29212，购自中国兽医药品监察所。
1.1.2 样品来源 2016年1月至2016年12月抽取河南省A、B、C、D 4个地区规模化养殖场猪、鸡肛门拭子样品480份，具体抽样数量见表1。
表1 样品抽样数量统计Table 1 The number of samples sampled地区Area猪源/份Isolatedfrompigs鸡源/份Isolatedfromchickens总计/份TotalA9030120B9090180C603090D6030901.1.3 培养基与试剂革兰阳性细菌鉴定板，BD公司产品；一次性无菌采样棒(BHI)，郑州君越科莱特健康科技有限公司产品；KF链球菌琼脂培养基、营养琼脂、脑心浸液琼脂，北京路桥技术有限公司产品；革兰阳性细菌药敏板，天津市金章科技发展有限公司产品。
1.1.4 仪器设备低温可叠放摇床(MaxQ SHKE6000-8CE)，Thermo公司产品；细菌浊度仪，北京中西远大产品；全自动细菌鉴定/药敏系统(BD PhoenixTM-100)；梯度PCR仪(MyCycle)、凝胶成像系统，Bio-Rad公司产品。
1.1.5 引物粪肠球菌引物P1：5′-ACTTATGTGACTAACTTAACC-3′，P2：5′-TAATGGTGAATCTTGGTTTGG-3′，扩增片段长度为326 bp。
1.2 方法1.2.1 预增菌将一次性无菌采样棒采集的样品尽快送到实验室，37℃培养16 h～20 h，同时设阳性和阴性对照。
1.2.2 样品的分离、纯化取预增菌菌液1环～2环，划线于KF链球菌琼脂培养基上，37℃培养48 h±2 h，选取单个典型菌落进行纯化，最后将纯化好的菌落划线接种于脑心浸液琼脂培养基。
1.2.3 菌株的鉴定1.2.3.1 PCR鉴定用灭菌棉签挑取纯化好的菌落，加入装有无菌生理盐水的1.5 mL离心管中，反复冷冻煮沸2次～3次，12 000 r/min离心取上清作为PCR扩增模板。
同时设阳性对照、阴性对照和空白对照。
50 μL总反应体系为：预混酶25 μL，ddH2O 18 μL，P1 1 μL，P2 1 μL，模板5 μL。
反应条件为：95℃ 5 min；95℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 30 s，35个循环；72℃ 5 min；4℃结束反应。
同时设置阳性对照、阴性对照和空白对照。
PCR结束后，取8 μL PCR产物，用15 g/L琼脂糖进行电泳，15 V/cm电泳20 min～30 min，凝胶成像系统观察结果。
1.2.3.2 鉴定系统鉴定对PCR鉴定为粪肠球菌阳性的样品，采用全自动细菌鉴定/药敏系统进一步鉴定。
1.2.4 药敏试验取营养琼脂上经鉴定的粪肠球菌菌落，用生理盐水调制0.5 MCF，吸取10 μL加入到10 mL肉汤中，然后分别取100 μL加入到96孔药敏板中，37℃培养16 h～20 h，读取药敏试验结果。
2 结果2.1 菌株分离结果经预增菌培养，KF链球菌琼脂培养基分离纯化，最后经PCR及全自动细菌鉴定/药敏系统鉴定，河南地区规模化猪、鸡场共分离粪肠球菌254株，分离率为52.9%(254/480)，其中猪源粪肠球菌154株，分离率为51.3%(154/300)，鸡源粪肠球菌100株，分离率为55.6%(100/180)。
具体情况见表2和图1。
表2 河南省各地区猪、鸡源粪肠球菌分离情况Table 2 Isolation rate of Enterococcus faecalis from pigs and chickens of several areas in Henan province地区Area猪源Isolatedfrompigs抽样数Numberofsamples分离数NumberofIsolation分离率/%Isolationrate鸡源Isolatedfromchickens抽样数Numberofsamples分离数NumberofIsolation分离率/%Isolationrate总体Total抽样数Numberofsamples分离数NumberofIsolation分离率/%IsolationrateA904550.0302170.01206655.0B904044.4903538.91807541.7 C603355.0302790.0906066.7D603660.0301756.7905358.9总计Total30015451.318010055.648025452.9M.DNA标准DL 2 000；P.阳性对照；N.阴性对照；K.空白对照；1～20.样品M.DNA Marker DL 2 000;P.Positive control; N.Negative control; K.Blank control;1-20.Samples图1 河南省猪、鸡源粪肠球菌PCR鉴定部分结果Fig.1 PCR identification results of Enterococcus faecalis isolated from pigs and chickens in Henan province2.2 药敏试验结果将分离菌株进行头孢西丁、克林霉素、泰妙菌素、磺胺异恶唑、红霉素、替米考星、头孢噻呋、强力霉素、青霉素、氟苯尼考、复方新诺明、氧氟沙星、恩诺沙星、庆大霉素、利萘唑胺、阿莫西林/克拉维酸、万古霉素等17种抗生素药物敏感性试验，分离的254株粪肠球菌对头孢西丁、克林霉素、泰妙菌素、磺胺异恶唑、红霉素、替米考星、头孢噻呋耐药较严重，耐药率分别为99.14%、98.71%、97.84%、96.12%、93.97%、93.97%、93.10%，对强力霉素(多西环素)、青霉素耐药相对严重，耐药率均在80%～90%，对万古霉素全部敏感。
