茶叶审评与检验Ⅱ检验部分课件实训二 茶叶中游离氨基酸的测定

茶叶中游离氨基酸的测定茶叶是一种传统的饮品，具有多种保健功效。

而茶叶中的游离氨基酸是决定茶叶品质的重要因素之一。

本文将探讨茶叶中游离氨基酸的测定方法及其意义。

一、茶叶中游离氨基酸的意义游离氨基酸是构成蛋白质的基本组成部分，也是人体所需的重要营养物质之一。

在茶叶中，游离氨基酸的含量与茶叶的品质有着密切的关系。

茶叶中游离氨基酸的含量高低直接影响着茶叶的口感和香气，也是评价茶叶质量好坏的重要指标之一。

因此，准确测定茶叶中游离氨基酸的含量对于茶叶品质的评价具有重要意义。

常用的测定茶叶中游离氨基酸含量的方法主要有色谱法、高效液相色谱法和光谱法等。

以下将分别介绍这几种方法的原理和步骤。

1. 色谱法色谱法是一种常用的游离氨基酸测定方法。

其原理是利用色谱柱将茶叶样品中的游离氨基酸分离出来，再通过检测器测定其浓度。

具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。

（2）色谱柱分离：将提取得到的茶叶样品溶液注入色谱柱进行分离，根据游离氨基酸的特性选择合适的色谱柱。

（3）浓度测定：通过色谱柱后，游离氨基酸会进入检测器，根据吸光度或荧光强度等参数测定游离氨基酸的浓度。

2. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和测定游离氨基酸的方法。

其原理是利用高效液相色谱仪将茶叶样品中的游离氨基酸分离出来，并通过检测器测定其浓度。

具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。

（2）色谱柱分离：将提取得到的茶叶样品溶液注入高效液相色谱仪进行分离，根据游离氨基酸的特性选择合适的色谱柱。

（3）浓度测定：通过高效液相色谱柱后，游离氨基酸会进入检测器，根据吸光度或荧光强度等参数测定游离氨基酸的浓度。

3. 光谱法光谱法是一种简单快速的游离氨基酸测定方法。

其原理是利用游离氨基酸在特定波长下的吸收特性来测定其浓度。

具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。

总游离氨基酸测定（完整版）实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化合物二酮茚－二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm下测其含量。

因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉.仪器与用具：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸水浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计.一、试剂1.水合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装入烧杯，加入正丙醇15ml，使其溶解加入正丁醇30 ml、乙二醇60 ml、乙酸-乙酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕色瓶冰箱保存，10天内有效。

2.乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯乙酸钠54.4g，加入无氨蒸馏水100 ml，电炉加热至沸，使其体积减半，冷却后加冰乙酸30 ml，加蒸馏水定容至100 ml。

3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘干至恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异丙醇并定容至50ml。

取此液5ml蒸馏水稀释到50ml，即为5μg/ml氨基酸标液。

4.0.1%抗坏血酸：称取0.050g抗坏血酸，溶于50 ml蒸馏水中，即配即用。

5.10％乙酸二、标准曲线制备加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。

以吸光度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线三、实验步骤：1.烟末0.5g于研钵中加入5 ml10%乙酸，研磨匀浆后用蒸馏水定容100 ml，用滤纸过滤到三角瓶中备用。

2.1ml滤液加入到20ml 干燥试管中，加1 ml蒸馏水，水合茚三铜3ml, 0.1%抗坏血酸0.1ml, 加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。

测定茶叶中游离氨基酸总量研究采用茚三酮比色法测定茶叶中游离氨基酸总量。

确定采用沸水萃取，以0.2mg/ml的谷氨酸标准溶液在吸取系列工作液后不加水，加入0.5ml的PH8.0的磷酸盐缓冲液和0.5ml2%茚三酮溶液，采用数显电热恒温水浴锅沸水浴15min加热，冷却后蒸馏水定容至25ml，在570nm处测定吸光度。

所得线性方程A=4.312X-0.017，相关系数r=0.99955，回收率达到92.2%左右，精确度为0.8%，试验操作简单，重复性和稳定性良好。

茶叶游离氨基酸茚三酮比色法茶叶中游离氨基酸含量是用来描述茶叶鲜爽程度的一个重要品质指标，还是人体所必需的营养物质，同事对人体疾病的康复和预防起着极重要的保健作用。

测定茶叶中游离氨基酸含量对茶叶的开发利用具有一定的指导意义。

以谷氨酸为标准品，采用分光光度计为测定仪器，探索一种适合于茶叶游离氨基酸含量的分析方法。

本试验对该方法的主要影响因素，精密度和回收率等进行研究，确定了茶叶中游离氨基酸总量的测定方法。

1材料与方法1.1仪器和用具数显电热恒温水浴锅，型号电子分析天平：感量为0.0001g，型号紫外可见分光光度计。

可调式电炉。

1.2试剂和溶液所用试剂应为分析纯（AR），水为蒸馏水。

PH8.0磷酸盐缓冲液：1/15mol/L磷酸氢二钠溶液95ml和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液5ml，混匀。

2%茚三酮溶液：称取水合茚三酮（纯度不低于99%）2g，加50ml水和80mg氯化亚锡搅拌均匀。

分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100ml。

1.3试验方法1.3.1标准贮备液及标准溶液的配制准确称取100mg谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100ml水，定容作为母液。

（1ml含谷氨酸1mg）。

配制成0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.3mg/ml，0.4mg/ml，0.5mg/ml浓度的标准溶液。

采用GB/T8314-2002中茶游离氨基酸的测定方法进行测定。

游离氨基酸测定（完整版）总游离氨基酸测定（完整版）实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与⽔合茚三酮作⽤，产⽣蓝紫⾊的化合物⼆酮茚－⼆酮茚胺，产物的颜⾊深浅与游离氨基酸含量成正⽐，⽤分光光度计在570nm下测其含量。

因蛋⽩质中的游离氨基酸也会产⽣同样反应，在测定前必须⽤蛋⽩质沉淀剂将其除掉.仪器与⽤具：100ml容量瓶；漏⽃；三⾓瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸⽔浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计.⼀、试剂1.⽔合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装⼊烧杯，加⼊正丙醇15ml，使其溶解加⼊正丁醇30 ml、⼄⼆醇60 ml、⼄酸-⼄酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕⾊瓶冰箱保存，10天内有效。

2.⼄酸-⼄酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯⼄酸钠54.4g，加⼊⽆氨蒸馏⽔100 ml，电炉加热⾄沸，使其体积减半，冷却后加冰⼄酸30 ml，加蒸馏⽔定容⾄100 ml。

3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘⼲⾄恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异丙醇并定容⾄50ml。

取此液5ml蒸馏⽔稀释到50ml，即为5µg/ml氨基酸标液。

4.0.1%抗坏⾎酸：称取0.050g抗坏⾎酸，溶于50 ml蒸馏⽔中，即配即⽤。

5.10％⼄酸⼆、标准曲线制备加塞⼦密封于沸⽔中加热15分钟，取出后⽤冷⽔迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红⾊被空⽓逐渐氧化褪去，待呈现兰紫⾊时，⽤60％⼄醇定容⾄20ml，摇匀于570nm波长下⽐⾊。

以吸光度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线三、实验步骤：1.烟末0.5g于研钵中加⼊5 ml10%⼄酸，研磨匀浆后⽤蒸馏⽔定容100 ml，⽤滤纸过滤到三⾓瓶中备⽤。

2.1ml滤液加⼊到20ml ⼲燥试管中，加1 ml蒸馏⽔，⽔合茚三铜3ml, 0.1%抗坏⾎酸0.1ml, 加塞⼦密封于沸⽔中加热15分钟，取出后⽤冷⽔迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红⾊被空⽓逐渐氧化褪去，待呈现兰紫⾊时，⽤60％⼄醇定容⾄20ml，摇匀于570nm波长下⽐⾊。

茶叶中氨基酸含量的测定实验三茶叶中氨基酸含量的测定一、分析意义氨基酸，是生物合成蛋白质的基本单位又是蛋白质分解的产物，在生物体内是重要的生物活性物质。

氨基酸是可溶于水的含氮化合物，对茶叶品质有重要的影响，是公认的茶叶呈味物质，也是构成茶叶色香味的重要化学因子。

二、方法原理氨基酸在pH8.04条件下与茚三酮共热，α－氨基酸能与茚三酮反应产生兰紫色缩合物，其反应过程按如下步骤进行：三、样品、试剂与仪器设备1、样品：不同等级绿茶。

2、pH8.04磷酸缓冲液：先配制1/15M磷酸氢二钠和1/15磷酸二氢钾溶液(配制方法同实验二)。

用时取1/15M的KH2PO4溶液5ml、1/15M的Na2HPO4溶液95ml混匀，即为pH8.04磷酸缓冲液。

3、2％茚三酮溶液：称取2g水合茚三酮加50毫升蒸馏水，加氯化亚锡80毫克(SnCl 2·2H2O)(AR级)，搅拌均匀后，逐渐加水溶解，分次过滤，滤液在暗处放置一昼夜，加水定容至100ml 。

4、主要仪器：分光光度计四、测定步骤1、供试液制备(同实验二)2、定量吸取供试液1ml ，注入25ml 容量瓶中，加0.5mlpH8.04的磷酸缓冲液，和0.5ml 的2％茚三酮溶液，置于沸水浴中加热15min ，待冷却后加水定容至25ml ，10min 后于570nm 波长处，0.5cm 比色杯测定吸光度A 值。

3、计算：注：“0.57”——用已知的不同浓度配制的茶氨酸，按上述操作程序测定吸光度，作标准曲线，当吸光度等于1.00时，每1ml 供试液中含茶氨酸0.57mg 。

注意事项1、比色液在1小时内吸光度较稳定，比色须在该时间内完成，不及放置过久；2、沸水浴中加热15min 时容量瓶一定要浸没浴沸水浴中，且打开瓶塞。

氨基酸％＝×100。

茶游离氨基酸总量测定文件类别：作业指导书文件编号：撰写单位：版本: 第 1 版发行日期：机密等级: □机密□一般合计页数: 共 2 页核准审核初审制订会审名称茶游离氨基酸总量测定文件编号:1 原理氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热，形成紫色络合物，用分光光度法在特定的波长下测定其含量。

2 仪器和用具分析天平：感量0.0001g。

分光光度仪。

3 试剂和溶液3.1 pH8.0磷酸盐缓冲液：按《茶茶多酚测定》中3.2的规定，配制1/15M磷酸氢二钠（3.2.1）和1/15M磷酸二氢钾（3.2.2）溶液。

然后取1/15M的磷酸氢二钠溶液95ml和1/15M磷酸二氢钾溶液5ml，混匀。

3.2 2%茚三酮溶液：称取水合茚三酮（纯度不低于95%） 2g，加50ml水和80mg氯化亚锡（GB 638-78，分析纯），搅拌均匀。

分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100ml。

3.3 茶氨酸或谷氨酸标准液：称取100mg茶氨酸或谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100ml水中，作为母液。

准确吸取5ml母液，加水定容至50ml作为工作液（1ml含茶氨酸或谷氨酸0.1mg）。

4 操作方法4.1取样方法按“茶叶原料验收规范”（文件编号…………）要求进行取样。

4.2试液制备按《茶茶多酚测定》中4.2.1试液制备之规定，制备试液。

4.3 测定准确吸取试液（4.2）0.5ml，注入25ml容量瓶中，加0.5ml水，0.5mlpH 8.0缓冲液（3.1）和0.5ml 2%茚三酮溶液（3.2），在沸水浴中加热15min。

待冷却后加水定容至25ml。

放置10min后，用10mm比色杯，在570nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。

生效日期页次1/2 页序 A 表号:R-0110-002-1A 文件标准用纸名称 茶 游离氨基酸总量测定 文件编号:4.4氨基酸定量标准曲线的制作分别吸取0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml 氨基酸工作液（3.3）于一组25ml 容量瓶中，各加水至4ml 、茚三酮溶液（3.2）0.5ml 和缓冲液（3.1）2ml ，在沸水浴中加热15min ，冷却后加水定容至25ml ，按4.3的操作测定吸光度（A ）。

茶叶中游离氨基酸总量的测定实验报告一、实验目的本实验旨在测定茶叶中游离氨基酸总量，了解茶叶的品质和营养价值，为茶叶的生产、加工和质量控制提供科学依据。

二、实验原理茶叶中的游离氨基酸在一定条件下与茚三酮反应，生成蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。

通过比色法测定反应液在特定波长下的吸光度，与标准曲线对照，即可计算出茶叶中游离氨基酸的总量。

三、实验材料与仪器1、实验材料茶叶样品：选取不同品种、不同产地的茶叶若干。

标准氨基酸溶液：精确配制一定浓度的谷氨酸标准溶液。

茚三酮试剂：称取适量茚三酮，用乙醇溶解并定容。

缓冲溶液：磷酸缓冲液（pH 80）。

2、实验仪器分光光度计分析天平恒温水浴锅容量瓶、移液管、比色皿等玻璃仪器四、实验步骤1、样品处理称取一定量的茶叶样品，用研钵研碎后，置于具塞三角瓶中。

加入适量的沸水，在水浴中浸提一定时间，冷却后过滤，滤液即为待测液。

2、标准曲线的绘制分别吸取不同体积的标准氨基酸溶液于一系列容量瓶中，加入缓冲溶液和茚三酮试剂，定容后摇匀。

将上述溶液置于沸水浴中加热一定时间，取出冷却至室温。

以空白溶液为参比，在分光光度计上于特定波长处测定吸光度。

以氨基酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3、样品测定吸取适量的待测液于容量瓶中，按照绘制标准曲线的步骤加入缓冲溶液和茚三酮试剂，定容、加热、冷却。

测定样品溶液的吸光度，根据标准曲线计算出游离氨基酸的含量。

五、实验结果与分析1、实验数据记录标准曲线测定数据：记录不同浓度标准氨基酸溶液的吸光度值。

样品测定数据：记录样品溶液的吸光度值及对应的计算结果。

2、结果计算根据标准曲线方程，计算样品中游离氨基酸的浓度。

按照样品处理时的稀释倍数，计算茶叶中游离氨基酸的总量。

3、结果分析比较不同茶叶样品中游离氨基酸总量的差异，分析可能的原因，如茶叶品种、生长环境、加工工艺等。

讨论实验过程中可能存在的误差来源，如样品处理的均匀性、反应条件的控制、仪器的精度等，并提出改进措施。

绿茶中游离氨基酸的测定
绿茶作为一种传统流行的饮料，在人们日常生活中极具普及性，它也是一种有益的饮品，因为它含有大量的氨基酸。

随着科技的发展，对绿茶中游离氨基酸的测定越来越受到关注，它不仅能够为我们提供更多有关绿茶的资讯，而且有助于提高绿茶的品质，提高饮料的饮用安全性。

在测定绿茶中游离氨基酸时，使用的主要技术是HPLC和GC。

HPLC 是一种高效液相色谱技术，可以用来快速测定绿茶中游离氨基酸的含量，且结果准确可靠，但相较于其他分析方法，耗时较长，且设备成本较高。

GC(气相色谱)分析技术也常用于测定游离氨基酸的含量，它的优点就是快速、灵敏度高、分辨力强，但是GC分析技术不适用于大分子物质，在测定中使用燃料便利，污染严重，不利于环境保护。

在测定游离氨基酸时，还可以使用酶联免疫电泳法，这种方法具有灵敏度高、反应简单、操作实用的优点，可以有效测定绿茶中的游离氨基酸，但是需要大量的试剂，且反应效率较低。

此外，近年来，许多研究者也开始尝试使用质谱技术来测定绿茶中的游离氨基酸，质谱技术可以快速、准确地分析游离氨基酸，而且不受物质大小的限制，而且检测速度快，重复性较好，可以作为测定绿茶中游离氨基酸的新手段。

总之，对绿茶中游离氨基酸的测定，有HPLC、GC和酶联免疫电泳法、质谱技术等多种方法可供选择，具体的选择要根据实际的要求而定。

例如，如果要高精度测定氨基酸，则可以选择HPLC技术；如
果要追求快速、灵敏度高，可以选择质谱技术。

测定完毕后，可以通过对结果的分析，有助于我们提高对绿茶品质的认知，为我们提供更高质量、更安全饮料。