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嗜肺军团菌生化鉴定结果
嗜肺军团菌生化鉴定结果通常包括以下几个方面：
1.革兰氏染色：嗜肺军团菌是一种革兰氏阴性杆菌，经过革兰氏
染色后呈红色。
2.氧化酶试验：嗜肺军团菌氧化酶试验结果为阳性，这是鉴定该
菌种的一个重要指标。
3.生长条件：嗜肺军团菌需要在特定的生长条件下才能生长繁殖，
例如在36℃左右的水环境中生存，且易通过气溶胶的形式传播。
4.培养特性：嗜肺军团菌需要在特定的培养基上培养才能获得较
好的生长效果，例如在人工水环境（如集中空调循环冷却水、
自来水、淋浴水、温泉浴池水、游泳池水、人造喷泉水）中容
易滋生。
5.抗药性：嗜肺军团菌对不同的抗生素有不同的抗药性，需要根
据药敏试验结果选择合适的抗生素进行治疗。
总之，通过以上几个方面的生化鉴定结果，可以确定是否为嗜肺军团菌感染，并采取相应的治疗措施。
淋浴水嗜肺军团菌检测原始记录管理编号：xxx/XX-XXX报告编号：第页/ 共页检测项目淋浴水中嗜肺军团菌送检日期检毕日期检测环境温度：ºС 相对湿度：% 检测地点样品来源样品编号仪器型号及编号检测方法或依据参照GB/T 18204.5-2013 《公共场所卫生检验方法第5部分：集中空调通风系统》和ISO11731-1998《水中军团菌检测方法》一、试验器材及试剂1、细菌培养皿2、BCYE培养基3、BCYE-CYS培养基4 、选择性培养基：GVPC培养基5、酸缓冲液6、灭菌水二、样品前处理1、采样：用高压灭菌的玻璃瓶取水样0.5L。
2 、送样：将样品避光避热一天内送达实验室，从采样到培养的时间间隔最大不超过15天。
三、检验步骤1、样品预处理水样：将水样mL用0.22μm微孔滤膜过滤，用镊子将滤膜转移到具帽容器中，加入15mL 灭菌水，在震荡器上震荡，时间不少于2min。
肉眼可见浑浊的污水水样可直接培养。
将预处理过的样品分成三部分，一部分不作处理，一部分热处理，一部分酸处理。
热处理：将1mL样品加入到无菌容器中50℃水浴处理30分钟。
酸处理：取1mL样品加入到无菌容器中，加入1 mL酸缓冲液，作用5min。
检测人：校核人：淋浴水嗜肺军团菌检测原始记录管理编号：xxx/XX-XXX报告编号：第页 / 共页2、接种各取0.1mL三种样品（未处理、热处理、酸处理）接种到GVPC培养基上，用无菌接种环将接种物均匀地涂抹于培养基表面。
热处理、酸处理的接种物处理过后立即进行接种。
3、培养待接种物水分被培养基吸收后，倒置培养基平皿，于5% CO2培养箱中37℃培养10天。
注意保持培养箱内湿度。
每隔三天观察培养的菌落的形态。
记下各种形态菌落的数目。
四、结果判定1、军团菌的鉴定从GVPC培养基上选择至少三个具有军团菌特征的菌落（未处理、热处理、酸处理的三种样品每个样品取三个菌落），接种于BCYE培养基和BCYE-CYS 培养基上，37℃培养2天以上。
嗜肺军团菌胶体金法是一种用于检测嗜肺军团菌的方法。
这种检测方法基于免疫学原理，利用胶体金颗粒的特性和嗜肺军团菌的抗原进行反应，从而实现对嗜肺军团菌的检测。
胶体金法具有简便、快速、灵敏度高、特异性好等优点，因此被广泛应用于嗜肺军团菌的检测。
在检测过程中，首先需要采集患者的样本，如痰液、血液等，然后将样本与胶体金试剂混合，如果样本中存在嗜肺军团菌的抗原，就会与胶体金颗粒发生反应，形成可见的红色或紫色沉淀。
需要注意的是，嗜肺军团菌胶体金法只是一种初筛方法，如果检测结果为阳性，还需要进一步进行确诊试验，如培养法、PCR等，以确定病原体种类和数量。
此外，由于嗜肺军团菌的感染具有一定的危险性，因此在操作过程中需要注意安全防护，避免感染风险。
不同年龄段嗜肺军团菌肺炎患儿的肺部临床表现及实验室检查分析1. 引言1.1 引言嗜肺军团菌肺炎是一种由嗜肺军团菌引起的肺部感染疾病，常见于婴幼儿和老年人。
随着社会的发展和老龄化趋势的加剧，该疾病的发病率也逐渐增加。
本文旨在探讨不同年龄段嗜肺军团菌肺炎患儿的肺部临床表现及实验室检查分析，为临床医生提供诊断和治疗的参考。
嗜肺军团菌肺炎在不同年龄段患儿中表现出的临床特点各有不同，包括发热、咳嗽、呼吸困难、胸痛等症状。
婴幼儿常表现为食欲不振、呼吸急促，而老年人则可能出现体温升高不明显、腹泻等非典型症状。
针对不同年龄段患儿的特点，临床医生应该有针对性地进行观察和治疗。
实验室检查在嗜肺军团菌肺炎的诊断和治疗中起着重要作用。
包括血常规、炎症指标、痰液培养等检查可以帮助医生明确病情，制定合理的治疗方案。
通过实验室检查的结果，可以更准确地判断病情的严重程度，及时调整治疗方案，提高治疗效果。
针对不同年龄段嗜肺军团菌肺炎患儿的肺部临床表现和实验室检查分析，本文将从这两个方面展开讨论，希望能为临床医生提供一些有益的参考信息，提高对该疾病的认识和诊疗水平。
【引言结束】2. 正文2.1 不同年龄段嗜肺军团菌肺炎患儿的肺部临床表现1. 婴儿期（0-1岁）：婴儿期患嗜肺军团菌肺炎的表现常常是比较隐匿的，可能表现为呼吸困难、喘息、乏力等非特异症状。
有的患儿还会出现发热、食欲不振、咳嗽等症状。
4. 学龄期儿童（6-12岁）：在这个年龄段，嗜肺军团菌肺炎患儿的肺部表现可能会有所减轻，但仍然会有持续性咳嗽、气促等症状。
有的患儿还可能伴有肺部感染等并发症。
2.2 不同年龄段嗜肺军团菌肺炎患儿的实验室检查分析1. 血常规检查：-白细胞计数和分类：嗜肺军团菌肺炎患儿常见白细胞增高，其中以中性粒细胞增多最为明显。
- C-反应蛋白（CRP）：CRP水平常升高，与病程严重程度相关。
2. 血气分析：- 氧合指标：患儿肺泡通气功能受损，常出现低氧或低氧高碳酸血症。
嗜肺军团菌单位是指用于测量或计数这种细菌的标准度量单位。
嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）是一种细菌，它是引起军团病（Legionnaires'disease）的主要病原体。
军团病是一种重型肺炎，病死率较高，尤其是在免疫力低下的患者中。
在微生物学和临床医学研究中，通常会用到以下几种单位来描述和计量嗜肺军团菌：
1.菌落形成单位：通常用CFU表示，是指在固体培养基上形成的一个可见的菌落，代表一个或多个细菌细胞的生长。
2.每毫升：在液体培养基或样品中，细菌的数量常用每毫升CFU/mL）来表示。
3.光密度单位：通过光谱光度计测量细菌悬液的光密度，可以间接估算细菌的数量，单位通常是OD 光密度）值。
4.荧光强度单位：在使用荧光标记技术检测细菌时，荧光的强度可以用特定的单位来量化，例如相对荧光单位 RFU）。
5.基因拷贝数：在分子生物学研究中，有时会使用实时定量PCR 技术来量化细菌的基因拷贝数。
6.干重或湿重：通过称量一定体积细菌沉淀的重量来衡量细菌的总量，单位通常是毫克 mg）或微克 μg）。
了解嗜肺军团菌的单位对于研究其生物学特性、进行流行病学调查以及开发疫苗和治疗方法都是非常重要的。
在实验室中，研究人员会根据不同的实验目的选择合适的单位和方法来对嗜肺军团菌进行定量分析。
嗜肺军团菌荧光定量PCR检测朱水荣;张政;卢亦愚;任红宇;扬仕贵;高晓萍【期刊名称】《中国公共卫生》【年(卷),期】2008(24)9【摘要】目的建立特异、快速、敏感的TaqMan探针荧光定量PCR方法,用于检测嗜肺军团菌mip基因。
方法嗜肺军团菌及其他军团菌DNA模板来自中国疾病预防控制中心呼吸道室,嗜肺军团菌地方株及其他对照株由本中心菌种室供给。
利用嗜肺军团菌mip基因保守序列设计引物和TaqMan探针,对其进行筛选,同时对荧光定量PCR反应条件和反应体系进行优化,并对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他细菌进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性等。
结果该方法在检测多株嗜肺军团菌时,均出现阳性信号,而对非嗜肺军团菌和其他细菌则未有阳性扩增结果出现。
检测灵敏度达10个拷贝/反应,从菌株核酸的提取至检测完成仅需2 h左右,可减少常规PCR操作的污染机会。
结论TaqMan荧光定量PCR方法可定量检测嗜肺军团菌,具有特异性高、快速、敏感等特点,适于外环境污染源状况的调查及应急事件的快速定量检测。
【总页数】3页(P1111-1113)【关键词】嗜肺军团菌;mip基因;TaqMan探针;荧光定量PCR【作者】朱水荣;张政;卢亦愚;任红宇;扬仕贵;高晓萍【作者单位】浙江省疾病预防控制中心微生物所,杭州310051;中国疾病预防控制中心【正文语种】中文【中图分类】Q503【相关文献】1.嗜肺军团菌lvgA基因分析及实时荧光定量RT-PCR对军团菌的检测 [J], 单小云;胡野;应延风;屠平光2.嗜肺军团菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 [J], 杜昕颖;黄留玉;苏晓;王玉飞;龚春丽;庄妤冰;苑锡铜;陈泽良;袁静;宋宏彬3.嗜肺军团菌荧光定量PCR方法的建立及在公共场所集中空调检测中的应用 [J], 冯华;刘雪林;张传福;史云;靳连群;王强;戚红卷;林彦峰;胡晓丰;董德荣4.嗜肺军团菌荧光定量PCR方法的建立及在公共场所集中空调检测中的应用 [J], 冯华; 张传福; 史云; 靳连群; 王强; 戚红卷; 林彦峰; 胡晓丰; 董德荣; 刘雪林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
公共场所环境样品中嗜肺军团菌定量检验方法1范围青岛精诚仪器仪表有限公司本标准规定了公共场所空气、水、土等不同类别环境样品中嗜肺军团菌的定量检测方法。
本标准适用于公共场所环境样品中嗜肺军团菌的定量检测，其他环境样品中嗜肺军团菌的定量检测可参照执行。
2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T18204.3公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物GB/T18204.5公共场所卫生检验方法第5部分：集中空调通风系统3空气中嗜肺军团菌定量检测3.1原理采用液体冲击法采样、叠氮溴乙锭（EMA）前处理结合定量聚合酶链反应(qPCR)方法定量检测室内空气和集中空调送风中存活的嗜肺军团菌。
3.2仪器和设备3.2.1微生物气溶胶浓缩器：采样流量≥100L/min，3.0μm以上粒子的捕集效率≥80%（或浓缩比≥8）。
3.2.2液体冲击式微生物气溶胶采样器：采样流量7L/min～15L/min，0.5μm以上粒子的捕集效率≥90%。
3.2.3便携式冷藏箱。
3.2.4冷冻离心机：温度4︒C。
3.2.5恒温水浴锅或金属浴：温度范围50︒C～99︒C。
3.2.6荧光定量PCR仪：非耦合6色激发光片和6色检测滤光片通道，4°C–100°C温度范围。
3.2.7卤素灯：500W。
3.2.8涡旋震荡器：调速范围0~3000rpm。
3.3材料和试剂3.3.1酵母浸出粉。
3.3.2蒸馏水。
3.3.3EMA固体粉：5mg/管。
3.3.4无核酸酶去离子水。
3.3.5矿物油，用于减少气溶胶采样时的吸收液蒸发。
3.3.6核酸提取试剂盒：DNA产量15～30μg，A260/A280在1.7～1.9之间。
3.3.7引物：上游引物5’-GAAAATAAAGTAAAAGGGGAAGCC-3’；下游引物5’-ATCAATCAGACGACCAGTGTATTC-3’。
嗜肺军团菌检测标准一、引言嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）是一种革兰氏阴性杆菌，是人类军团病的主要病原体。
军团病是一种由吸入含有嗜肺军团菌的气溶胶引起的急性呼吸道传染病。
为确保公共卫生安全，准确、快速地检测嗜肺军团菌成为防控军团病的关键环节。
本文将详细介绍嗜肺军团菌的检测标准，以期为相关领域提供有益的参考。
二、样本采集与处理1.样本采集：采集疑似军团病患者呼吸道分泌物、痰液、支气管肺泡灌洗液等样本。
采样时应遵循无菌操作原则，避免污染。
2.样本处理：将采集到的样本立即送至实验室，进行处理。
处理过程中，应对样本进行匀浆、离心等操作，以提取细菌。
三、实验室检测1.细菌培养：将处理后的样本接种于选择性培养基上，如BCYE培养基。
在35-37℃、5%二氧化碳环境下培养3-10天，观察菌落形态。
2.生化试验：对疑似菌落进行生化试验，如氧化酶试验、尿素试验、马尿酸盐试验等，以初步鉴定嗜肺军团菌。
3.分子生物学检测：采用PCR（聚合酶链式反应）等分子生物学技术对疑似菌落进行核酸检测，以确定嗜肺军团菌的存在。
PCR检测具有较高的灵敏度和特异性，可用于嗜肺军团菌的快速诊断。
四、结果判定与报告根据实验室检测结果，结合患者临床表现和流行病学史，进行综合判断。
如细菌培养、生化试验和分子生物学检测结果均符合嗜肺军团菌特征，可判定为嗜肺军团菌感染。
检测报告应包括患者信息、样本信息、检测方法和结果等内容。
五、质量控制与注意事项1.质量控制：实验室应建立严格的质量控制体系，包括定期校准检测设备、验证检测方法的准确性、参加室间质评等，以确保检测结果的准确性和可靠性。
2.注意事项：在样本采集、运输、处理和检测过程中，应严格遵守生物安全规范，防止交叉感染和实验室感染。
同时，实验室人员应具备相应的专业技能和生物安全意识，确保检测工作的顺利进行。
六、总结与展望本文详细介绍了嗜肺军团菌的检测标准，包括样本采集与处理、实验室检测、结果判定与报告以及质量控制与注意事项等方面。
深圳市空调冷却塔水军团菌污染状况调查摘要:目的了解深圳市宾馆、大型写字楼、地铁等各类建筑物的空调冷却塔水军团菌污染状况。
方法随机采集中央空调冷却塔水样品并进行细菌培养和鉴定，再以聚合酶链式反应（PCR）等方法加以验证。
结果共采集水样28件，分离到1株军团菌，经鉴定为嗜肺军团菌Lp1型。
结论深圳市中央空调冷却塔存在军团菌的污染，需引起重视，防止军团菌病发生。
关键词:军团菌;嗜肺军团菌;冷却塔;污染状况Detection of Legionella pneumophila in cooling tower water of central air conditioning system in Shenzhen City.ZHANG Ran，CHEN Gui-bing，SHI Xiao-lu，et al.（Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention，Shenzhen518020，Guangdong，P.R.China）Abstract:Objective To investigate the contamination status of cooling water of central air conditioning syatem with Legionella pneumophila in in hotels，buildings and subways in Shenzhen City. Methods Cooling tower water samples from central aircondi-tioning system were randomly taken，cultured and then Legionella pneumophilia was isolated.Pobymerase chain reaction（PCR）was used for confirmation of the differentiation. Results Twenty-eight cooling water samples were collected and a strain of Legionella pneumophilia serovar Lp1was isolated. Conclusion The water in cooling tower of central air conditioning system in Shenzhen City has been contaminated with Legionella pneumophilia and measures be taken for preventing infection with Legionella pneumophilia.Key words:Logionella;Leginella pneumophilia;Cooling tower;Contaminationstatus军团菌是引起军团菌病的一种急性呼吸道传染病的病原体，于1977年在美国首次发现并证实。
公共场所嗜肺军团菌检测标准嘿，大家知道吗？公共场所里有一种小小的细菌，叫嗜肺军团菌。
这玩意儿可不能小瞧啊！你想想，咱们平时去的那些大商场、游泳馆、酒店啥的，人来人往的，要是有这嗜肺军团菌在捣乱，那可不得了！就好像家里有个调皮的小捣蛋鬼，到处乱跑乱搞破坏。
那怎么检测它呢？这可得好好说道说道。
检测嗜肺军团菌就像是一场侦探游戏，我们得找到各种线索来抓住这个“小坏蛋”。
首先呢，采样就很关键啦！就好比我们要去抓小偷，得先知道他可能会在哪些地方出现吧。
我们得在那些容易藏着嗜肺军团菌的地方采集样本，比如空调系统的冷却水啊、淋浴喷头的水啊之类的。
这可不是随随便便弄一下就行的，得专业、得仔细！然后呢，检测方法也有很多种。
就像我们有不同的工具来对付不同的情况一样。
有的方法很灵敏，能一下子就发现它的踪迹；有的方法可能稍微慢点，但也能把它给揪出来。
检测的时候可不能马虎啊！这可不是闹着玩的。
要是没检测好，让嗜肺军团菌这个“小捣蛋”溜走了，那后果可能很严重呢！大家想想，如果因为没检测好，让很多人感染生病了，那多糟糕啊！我们得像爱护自己家一样爱护这些公共场所。
检测嗜肺军团菌就是为了让大家能安心地在这些地方玩耍、工作、休息。
就像我们会定期打扫家里一样，对公共场所的检测也得重视起来呀！而且啊，这可不是一次性的事情哦！得经常去检测，就像我们要经常检查家里的东西有没有坏一样。
不能说今天检测了没问题，以后就不管啦！那可不行！大家说，我们能让嗜肺军团菌在公共场所里肆意妄为吗？当然不能啊！所以啊，大家都要重视起来，让我们一起把这个“小捣蛋鬼”给抓住，让我们的生活环境更加安全、健康！总之，公共场所嗜肺军团菌检测可太重要啦！这关系到我们每个人的健康和安全呢！大家可别不当回事儿呀！。
HKCDC/JL-WJ-040 上海市虹口区疾病预防控制中心检验原始记录（嗜肺军团菌）样品编号：第页共页样品名称: 样号标记:收样日期: 检验完成日期:检验项目和检验依据：嗜肺军团菌卫生部《公共场所集中空调通风系统检验卫生规范》2006.3（附录A）设备：CO2培养箱（仪器编号：S/N 305529-461）生物安全柜（仪器编号：S/N 102589-95）环境温度（℃）: 环境湿度（%）:检测结果及记录：样品形状：1 材料：GVPC选择性平板：有效期，BCYE平板：有效期，血平板：有效期，军团菌分型血清：有效期（法国生物梅里埃公司提供），血平板（科玛嘉制备）分型血清（SCDC制备）2 方法与步骤：2.1无菌方法将500ml水样全部通过µm滤膜，取下滤膜仔细剪碎，置入一含15ml原水样的大试管中，涡旋震荡充分洗脱后，备用。
2.2酸处理：取5ml洗脱样品，用0.01mol/L HCL调PH至2.2，混匀后静置5分钟。
2.3热处理：取1ml洗脱样品置50℃水浴加热30min。
2.4取2.1洗脱样品，2.2酸处理样品，2.3热处理样品各0.1ml，置入GVPC平板，用L型玻璃棒将其在琼脂表面推开。
2.5将上述接种好的GVPC平板置入36℃ 2.5% CO2含量的二氧化碳培养箱中（有湿盘）培养，每日观察GVPC平板上有无可疑菌落生长。
3 培养结果：3.1三天后GVPC平板若有表面光滑，整齐，灰白，灰蓝或紫色呈典型毛玻璃状，在紫外光灯下，有荧光的可疑菌落，做革兰氏染色镜检。
3.2结果记录：3.2.1平板培养每日可疑菌落观察记录（有无可疑菌落分别以“+”，“-”表示测试人：复核人：审核人：年月日年月日年月日第页共页3.2.2 如无可疑菌落生长，则二氧化碳培养箱中培养至第十天。
4 菌落验证试验：4.1 镜检为革兰氏阴性杆菌的可疑菌落转种BCYE平板，血平板和缺L-半胱氨酸的BCYE平板，将接种好的平板置入36℃ 2.5% CO2含量的二氧化碳培养箱中（有湿盘）培养，小时作菌落验证试验。
公共场所环境样品中嗜肺军团菌定量检验方法（2）公共场所环境样品中嗜肺军团菌定量检验方法1范围青岛精诚仪器仪表有限公司本标准规定了公共场所空气、水、土等不同类别环境样品中嗜肺军团菌的定量检测方法。
本标准适用于公共场所环境样品中嗜肺军团菌的定量检测，其他环境样品中嗜肺军团菌的定量检测可参照执行。
2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T18204.3公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物GB/T18204.5公共场所卫生检验方法第5部分：集中空调通风系统3空气中嗜肺军团菌定量检测3.1原理采用液体冲击法采样、叠氮溴乙锭（EMA）前处理结合定量聚合酶链反应(qPCR)方法定量检测室内空气和集中空调送风中存活的嗜肺军团菌。
3.2仪器和设备3.2.1微生物气溶胶浓缩器：采样流量≥100L/min，3.0μm以上粒子的捕集效率≥80%（或浓缩比≥8）。
3.2.2液体冲击式微生物气溶胶采样器：采样流量7L/min～15L/min，0.5μm以上粒子的捕集效率≥90%。
3.2.3便携式冷藏箱。
3.2.4冷冻离心机：温度4?C。
3.2.5恒温水浴锅或金属浴：温度范围50?C～99?C。
3.2.6荧光定量PCR仪：非耦合6色激发光片和6色检测滤光片通道，4°C–100°C温度范围。
3.2.7卤素灯：500W。
3.2.8涡旋震荡器：调速范围0~3000rpm。
3.3材料和试剂3.3.1酵母浸出粉。
3.3.2蒸馏水。
3.3.3EMA固体粉：5mg/管。
3.3.4无核酸酶去离子水。
3.3.5矿物油，用于减少气溶胶采样时的吸收液蒸发。
3.3.6核酸提取试剂盒：DNA产量15～30μg，A260/A280在1.7～1.9之间。
3.3.7引物：上游引物5’-GAAAATAAAGTAAAAGGGGAAGCC-3’；下游引物5’-ATCAATCAGACGACCAGTGTATTC-3’。
第 6 卷 第 3 期2020 年 6 月生物化工Biological Chemical EngineeringVol.6 No.3Jun. 2020两种检测嗜肺军团菌方法的对比付喜梅，黄庆华，俞秋华*（四川省疾病预防控制中心，四川成都 610041）摘 要：目的：探讨四川省部分公共场所冷却塔水中嗜肺军团菌的污染情况，浅析传统分离方法和Legiolert定量盘系统检测方法的优缺点。
方法：依据WS394-2012《公共场所集中空调通风系统卫生规范》处理样品及分离鉴定；对检出的阳性样品采用传统计数方法和Legiolert定量盘检测方法培养7 d计数。
结果：12份冷却水中用传统分离培养方法检出阳性2份，GVPC 平皿计数最小检测浓度为20 CFU/mL，Legiolert定量盘检测方法最小检测浓度为3.9 MPN/100 mL。
结论：Legiolert定量盘检测法检测时间短、操作简单，而传统分离培养过程繁琐，检出率低。
关键词：嗜肺军团菌；Legiolert检测；公共场所中图分类号：R122.7 文献标志码：AComparison of Two Methods for Detecting Legionella PneumophilaFu Xi-mei, Huang Qing-hua, Yu Qiu-hua*(Sichuan Center of Disease Control and Prevention, Sichuan Chengdu 610041)Abstract: Objective: To explore the contamination of Legionella pneumophila in cooling tower water of some public places in Sichuan Province, and to analyze the advantages and disadvantages of traditional separation methods and legiolert quantitative disk system. Methods: according to WS394-2012 “Hygienic standard for central air conditioning and ventilation system in public places”, the samples were treated, separated and identified, and the positive samples were cultured for 7 d by traditional counting method and legiolert quantitative disk method. Results: two positive samples were detected in 12 cooling water samples by traditional separation and culture method. The minimum detection concentration of GVPC plate count was 20 CFU/mL, and the minimum detection concentration of legiolert quantitative disk test method was 3.9 MPN/100 mL. Conclusion: the detection time of legiolert quantitative disk method is obviously shortened and the operation is simple, while the traditional separation and culture process is tedious and the detection rate is low.Key words: Legionella pneumophila; Legiolert detection; Public Places军团菌是一种可以引起急性细菌性呼吸道疾病（军团菌病）的细菌，且90%以上的军团菌病是因为感染嗜肺军团菌所致（Legionella pneumophila，Lp）[1]。
细胞内抗嗜肺军团菌药物有效浓度测定【摘要】目的：探讨红霉素。
环丙沙星。
左氧氟沙星。
莫西沙星4种抗菌药物对细胞内嗜肺军团菌的抗菌活性。
方法：分别采用E-test法和有限稀释法测定上述4种药物对嗜肺军团菌ATCC 33152的细胞外抗菌活性,再用噻唑蓝比色法(MTT法)测定上述药物对嗜肺军团菌ATCC 33152的细胞内抗菌活性。
结果：细胞外抗菌活性E-test法:红霉素0.047 μg/mL。
环丙沙星0.38 μg/mL。
左氧氟沙星0.125 μg/mL。
莫西沙星0.125 μg/mL;有限稀释法:红霉素0.125μg/mL。
环丙沙星0.03 μg/mL。
左氧氟沙星0.016 μg/mL。
莫西沙星0.016μg/mL。
4种药物的细胞内抗菌活性分别为:红霉素0.25 μg/mL。
环丙沙星0.016 μg/mL。
左氧氟沙星0.016 μg/mL。
莫西沙星0.004 μg/mL。
结论：氟喹诺酮类药物在U937细胞模型中对嗜肺军团菌ATCC 33152具有很强的细胞内抗菌活性。
其中莫西沙星的细胞内抗菌活性最强。
MTT法是一种行之有效的用于检测药物对细胞内嗜肺军团菌抗菌活性的方法,可同时检测并对比各种药物样本的细胞内抗菌活性。
【关键词】嗜肺军团菌; U937细胞; 抗菌活性Abstract: Objective： To explore the intracellular antimicrobial activities of erythromycin, ciprofloxacin, levofloxacin, moxifloxacin against Legionella pneumophila. Methods： The minimum inhibition concentration (MIC) of each antibiotic was evaluated by E-test method and microdilution method respectively. The minimal extracellular concentration inhibiting intracellular multiplication (MIEC) of each antibiotic was evaluated by the MTT colorimetric assay system. Results： The MIC concentration for each drug by E-test method were: erythromycin, 0.047 μg/mL; ciprofloxacin, 0.38 μg/mL; levofloxacin, 0.125 μg/mL; moxifloxacin, 0.125 μg/mL, the MIC concentrations for each drug by microdilution method were: erythromycin, 0.125 μg/mL; ciprofloxacin, 0.03 μg/mL; levofloxacin, 0.016 μg/mL; moxifloxacin, 0.016 μg/mL. The MIEC concentration for each drug were: erythromycin, 0.25 μg/mL; ciprofloxacin, 0.016 μg/mL; levofloxacin, 0.016 μg/mL; moxifloxacin, 0.004 μg/mL. Conclusions： Fluoroquinolones have superior activity than erythromycin in U937 cells infected with L. pneumophila. Moxifloxacin is the most potent drug among the four tested antimicrobials. Our results indicated that the MTT assaysystem allows comparative and quantitative evaluations of the intracellular activities of antibiotics against L. pneumophila and efficient processing of a large number of samples.Key words: Legionella pneumophila; U937 cells; antimicrobial activities嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,Lp)是一种兼性细胞内寄生菌,可在巨噬细胞和肺泡上皮细胞内存活并繁殖,并能导致具有潜在致死性的社区获得性肺炎和医院获得性肺炎。
军团菌属检验标准操作规程1. 概述军团菌属细菌是一群病死率较高的急性呼吸道传染病的病原菌，该菌属包括45个种（60多个血清型），已从人体分离出的有嗜肺军团菌、米克戴德军团菌、波兹曼军团菌等20种。
嗜肺军团菌是军团菌属的代表种。
2. 标本类型痰等标本。
3.鉴定3.1 形态与染色革兰阴性纤细小杆菌。
荧光显微镜下可见被荧光抗体包被的发亮菌体。
3.2 培养特性在缓冲活性炭酵母提取物琼脂（BCYE）培养基上，本菌生长缓慢，应每日观察生长情况，在BCYE上需要3~5日方可见菌落，数日后增大到4~5mm，菌落呈灰白色，有光泽。
3.3 生化反应大部分菌株氧化酶试验阳性，不分解糖类，动力、明胶、马尿酸钠试验阳性，触酶试验阳性，多数菌株产生β-内酰胺酶。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌属特征革兰阴性细小杆菌，有多形性，苏丹黑染色可显蓝黑色或蓝灰色脂肪滴。
在BCYEα平板上3~5日形成蓝灰色、有光泽的菌落。
普通琼脂平板上不生长。
3.4.2 根据在BCYEα琼脂上生长的菌落，在紫外线365nm 灯光照射下产生红色荧光可推断为红色军团菌；产生蓝白色荧光，如氧化酶阳性，则为博氏和其他军团菌，如氧化酶阴性，则为杜氏、戈氏、彻氏、图森山军团菌；产生无色荧光，则根据马尿酸水解、氧化酶及其他生化反应进一步鉴定。
3.5 操作步骤3.5.1 涂片、染色革兰阴性杆菌。
3.5.2 鉴定直接荧光抗体染色，生化反应。
4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件。
5.质量控制见《质量管理程序》。
6.检验结果解释与分析本菌虽然营养要求和培养环境要求严格，但在外环境分布较广，并可长期存活，致使通过污染水源空气而传播致病。
从临床或环境标本中分离军团菌时，需先对标本作酸处理（军团菌耐酸而其他杂菌则易被酸杀灭），并使用选择性琼脂平板（在BCYEα琼脂平板上加入抗生素等抑制杂菌），以提高军团菌的检出率。
军团菌对多种抗菌药物敏感，包括红霉素、利福平、氨基糖苷类抗生素、β-内酰胺抗生素、复方磺胺甲恶唑、多西环素和福喹诺酮类等。
深圳市空调冷却塔水军团菌污染状况调查摘要:目的了解深圳市宾馆、大型写字楼、地铁等各类建筑物的空调冷却塔水军团菌污染状况。
方法随机采集中央空调冷却塔水样品并进行细菌培养和鉴定，再以聚合酶链式反应（PCR）等方法加以验证。
结果共采集水样28件，分离到1株军团菌，经鉴定为嗜肺军团菌Lp1型。
结论深圳市中央空调冷却塔存在军团菌的污染，需引起重视，防止军团菌病发生。
关键词:军团菌;嗜肺军团菌;冷却塔;污染状况Detection of Legionella pneumophila in cooling tower water of central air conditioning system in Shenzhen City.ZHANG Ran，CHEN Gui-bing，SHI Xiao-lu，et al.（Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention，Shenzhen518020，Guangdong，P.R.China）Abstract:Objective To investigate the contamination status of cooling water of central air conditioning syatem with Legionella pneumophila in in hotels，buildings and subways in Shenzhen City. Methods Cooling tower water samples from central aircondi-tioning system were randomly taken，cultured and then Legionella pneumophilia was isolated.Pobymerase chain reaction（PCR）was used for confirmation of the differentiation. Results Twenty-eight cooling water samples were collected and a strain of Legionella pneumophilia serovar Lp1was isolated. Conclusion The water in cooling tower of central air conditioning system in Shenzhen City has been contaminated with Legionella pneumophilia and measures be taken for preventing infection with Legionella pneumophilia.Key words:Logionella;Leginella pneumophilia;Cooling tower;Contaminationstatus军团菌是引起军团菌病的一种急性呼吸道传染病的病原体，于1977年在美国首次发现并证实。
现已分离到军团菌属（Legionella）共有42个种，64个血清型，其中与人类关系最为密切的是嗜肺军团菌，由它引起的肺炎，如未及时治疗，病死率很高［1］。
空调机的冷却塔水、喷水池水、淋浴池和宾馆的养鱼池水，甚至游泳池水均是军团菌其生存定居的小环境，如果该小环境中的微型生物群落结构能与其构成共生关系，军团菌就可以大量繁殖，然后通过流动水，冷却塔喷雾漂移或小泡喷射及蒸发作用产生的含菌气溶胶传播感染于人群。
目前军团菌病已成为危害人群健康的一种重要疾病。
本文对深圳市中央空调冷却塔水军团菌的污染状况进行调查，现将结果报告如下。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 主要仪器低温高速离心机（型号:Stratos），干浴器（型号:MD-OZN），超速离心机（型号:1-13），双槽PCR扩增仪（型号:MJR PTC-220），凝胶成像系统（DYY-8C电泳仪BiolMAGING SYSTEM）。
1.1.2 主要试剂GVPC和BCYEα培养基购自法国的BiomRriEux，军团菌诊断血清购自英国的OXOID生物公司，嗜肺军团菌（Legionellapneu mophi la，Lp）1-14分型，PCR 扩增反应所用的试剂10×PCR Buffer，dNTP Mixture，Taq酶，6×Loading Buffer，Marker 购自大连宝生物工程有限公司，GoldView TM DNA染料购自上海中科开端生物芯片科技股份有限公司。
1.2 方法1.2.1 水样采集从10～12月，随机采集宾馆、大型写字楼、地铁等的中央空调冷却塔水样，每个塔分东西南北四个点，离壁5cm，离水面10cm深处各采水约100ml，水样装于500ml同一灭菌广口瓶内，共采集中央空调冷却塔水28份。
1.2.2 水样预处理离心将水样富集（12000rpm/10min，26℃）至5ml浓缩液，然后取lml浓缩液于试管中，加入等量的pH2.0的0.01mol/L盐酸液混合，静置5～10min后用0.03mol/L的氢氧化钾液（约0.2ml）中和至pH约6.9作酸处理。
1.2.3 军团菌分离培养取0.1ml酸处理混合液接种于GVPC琼脂平板上，用三角环推干后放入5%CO 2 培养箱中，37℃孵育3～7d观察结果，挑可疑菌落做鉴定。
1.2.4 军团菌的鉴定在GVPC琼脂平板上菌落形态符合，革兰染色为阴性细长杆菌者同时接种于BCYEα和血平板上，在BCYEα平板长菌，在血平板上不长菌者，初步可认定为军团菌。
通过初步鉴定的菌株进行氧化酶、触酶、马尿酸盐水解、明胶液化、糖发酵、尿素酶等生化试验，然后用血清凝集鉴定分型及PCR鉴定。
1.2.5 PCR引物设计根据文献报道［2］，设计5SrRNA基因引物序列检测军团菌属，MIP基因的引物序列检测嗜肺军团菌。
1.2.6 模板处理将水样浓缩液吸打震荡混匀后取1ml到EP管，离心（12000rpm/5min），弃去上清液留沉淀，加无菌蒸溜水30μl，100℃干浴10min，然后冰浴5min，取10μl上清液做为PCR扩增的模板。
1.2.7 PCR扩增用5SrRNA和MIP两套引物分别扩增，PCR扩增在热循环仪上进行，循环参数为:加热至95℃5min，变性94℃45S，复性501min，延伸72℃1min20S，36个循环，4℃保存。
5SrRNA预计扩增片段为105bp，Mip预计扩增片段为650bp。
产物检测用含GoldView TM DNA染料的琼脂糖凝胶（1.5%）电泳，利用DNA分子量Marker确定产物分子量大小。
2 结果2.1 分离培养结果本次共检测中央空调冷却塔水28份，其中宾馆冷却塔水样13份、地铁冷却塔水样9份均未检出军团菌，大型写字楼冷却塔水样6份检出1株嗜肺军团菌，为Lp1型，此株嗜肺军团菌的鉴定结果表现为氧化酶、触酶、马尿酸盐水解、明胶液化等试验均为阳性，不分解葡萄糖、果糖、麦芽糖，尿素酶试验阴性。
以及与Lp多价及Lpl标准血清呈阳性反应。
结果见表1。
表1 空调冷却塔水军团菌检验结果（略）Table1 Results of detection of Legionella from cooling tower water of central air conditioning system2.2 PCR结果本次调查，所有样本均同时采用传统的细菌学检验方法和聚合酶链反应（PCR）来鉴定。
传统的细菌学方法从酸处理后接种平板开始到分离菌株一般要10d才可以分离出来，费时难培养且易被污染。
PCR方法则是从细菌的基因水平入手［2］，比以往所有传统的细菌学检验方法更为可靠，快速，简易，灵敏度高。
本次PCR结果，28份冷却塔水检出军团菌属PCR（5S）阳性8份，检出嗜肺军团菌PCR（MIP）阳性1份，与上述分离培养的1株嗜肺军团菌Lpl型结果一致。
PCR检测结果见表1。
3 讨论3.1 军团菌自空调系统冷却塔水国内较多的北京、上海的阳性率一般达30%左右，地铁甚至高达45%。
而此次调查空调冷却塔水嗜肺军团菌检出率较低，其原因可能与军团菌生长有季节性和采样时机有关。
3.2 此次自28份冷却塔水，检出1株嗜肺军团菌，显示深圳市中央空调冷却塔的军团菌污染的存在。
建议加强对环境水中军团菌的监测，同时开展健康人群军团菌抗体水平调查，了解本市人群中军团菌的感染情况，为今后对军团菌感染的预防研究提供参考资料［3］。
3.3 此次分离采用传统分离培养和PCR两种方法。
其中PCR方法的阳性率高，尤其是针对5SrRNA设计的属特异性引物，PCR的阳性率高于传统检测方法。
PCR方法灵敏度高，除能检测活菌外，还可检测已死亡的菌体DNA，因此若水中存在极微量的军团菌或死菌时，PCR方法能检出，但传统分离方法却是阴性。
另PCR引物SSrRNA不但能检测致病性军团菌，也能检测非致病性军团菌，方法的敏感性高和有高度特异性，与传统方法吻合率高，适合作为传统检测方法的补充，提高检测速度和准确度。
3.4 军团菌病因为人体吸入含军团菌的气溶胶导致呼吸系统损害的疾病，冷却塔的循环水（含无机盐，有机物和微生物）不仅为军团菌提供了理想的生存环境，而且提供了传播的形式一气溶胶，冷却塔水被该污染后，通过空调机入口，门窗和通风管被抽入室内或在冷却塔一定范围（200M内）形成气溶胶，人因吸入而被感染。
由于军团菌是一类水生菌群，生存环境界限广泛，水中存活时间较长，因此水质跟踪监测及水的消毒十分重要，可采取加氯，加热，化学药品，臭氧，紫外线，金属电离等消毒法并投入杀藻剂，使大致菌量低千10 3 cfu/L，消除污染的气溶胶来源。
参考文献:［1］陈悦，沈建民，王刚毅，等.军团菌和军团菌病研究进展［M］.2003，17.［2］宋勇，康晓明，李珍大.基因扩增法检测军团杆菌DNA的研究［J］.江苏医药，1994，20（19）:466.［3］王琳，李丽云，万超群.空调系统冷却塔水分离军团菌报告［J］.中国医科大学报，2000，29（1）:25～29.作者单位:深圳市疾病预防控制中心，广东深圳518020.日期：2006年12月19日- 来自[2005年第5卷第3期]栏目。
