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应用实时荧光PCR检测各种环境标本中的嗜肺军团菌李达;张晶波;王永全;彭晓;卢立新【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2014(000)012【摘要】目的：评价实时荧光PCR在检测各种环境标本中嗜肺军团菌的应用效果。
方法选择针对mip基因的引物和探针，优化实时荧光PCR的反应条件，并对嗜肺军团菌和其他非嗜肺军团菌进行检测，验证方法的敏感性、特异性和重复性。
将实时荧光PCR检测各种环境标本中嗜肺军团菌的效果与传统培养法进行比较。
结果实时荧光 PCR 法最低检测限达6 CFU/mL。
该方法特异性好，嗜肺军团菌呈现阳性结果，而非嗜肺军团菌均为阴性结果。
重复性好，Ct 值变异系数较小。
从菌株核酸的提取至检测完成仅需2 h左右。
实时荧光PCR法和传统培养法的检测嗜肺军团菌的阳性率差异有统计学意义（P＜0．05），实时荧光PCR检测敏感性优于传统培养法。
结论实时荧光PCR具有较好的敏感性、特异性和快速的特点，适于各种环境标本中嗜肺军团菌污染状况调查及应急事件的快速检测。
【总页数】3页(P1609-1611)【作者】李达;张晶波;王永全;彭晓;卢立新【作者单位】北京市西城区疾病预防控制中心，北京 100120;北京市西城区疾病预防控制中心，北京 100120;北京市西城区疾病预防控制中心，北京 100120;北京市疾病预防控制中心，北京 100013;北京市西城区疾病预防控制中心，北京100120【正文语种】中文【相关文献】1.双色实时荧光PCR方法结合标本混合检测方案快速筛查肠道传染病菌 [J], 李义强;杨福荣;孔敏玲;秦小洁;麦洁梅2.三重实时荧光PCR检测纯培养物和环境水体中霍乱弧菌方法的建立及应用 [J], 麻丽丹;王殿夫;王多春;曹际娟3.恙虫病东方体与莫氏立克次体双重实时荧光PCR检测方法建立及其在鼠类检测中的应用 [J], 高玉峰;孔文;罗佳;程晓兰;王萍;米伟惠4.3种实时荧光PCR仪对120份新型冠状病毒检测标本的检测结果比较 [J], 黄玉兰;韩声付;曾林子;肯布;张光慧;贾春燕;彭秀娟;杨小蓉5.应用实时荧光PCR快速检测血培养标本中的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌 [J], 李媛;熊樱;易佰城;陈国金;彭莎;孙怀超;杨友华;何超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
卫生监督员考试题库（公共场所）一、填空题1、公共场所分7类28种。
2、公共场所卫生许可证有效期限四年，每2年复核一次。
3、发生公共场所突发公共卫生事件的单位，应以最快方式报告，同时在2小时内完成初次报告。
4、保证公共场所卫生安全的第一负责人是公共场所的法定代表人或者负责人。
5、人工建造游泳场所应设置游泳池及急救室、更衣室、淋浴室、公共卫生间、水质循环净化消毒设备控制室及库房。
并按更衣室、强制淋浴室和浸脚池、游泳池的顺序合理布局，相互间的比例适当，符合安全、卫生的使用要求。
6、订制《公共场所卫生管理条例》的目的是为了创造良好的公共场所卫生条件，预防疾病，保障人体健康。
7、《公共场所卫生管理条例》规定：经营单位须取得卫生许可证后，方可向工商行政管理部门申请登记，办理营业执照。
8、从业人员个人卫生“四勤”是指勤洗手、勤理发、勤洗澡、勤剪指甲。
9、违反《公共场所卫生管理条例》时，卫生行政部门可根据情节轻重，给予警告罚款停业整顿吊销“卫生许可证的行政处罚。
10、游泳场所更衣室地面应使用防滑防渗水易于清洗的材料建造，地面坡度应满足建筑规范要求并设有排水设施。
墙壁及内顶用防水、防霉、无毒材料覆涂。
11、游泳场所更衣室应配备与设计接待量相匹配的密闭更衣柜、鞋架等更衣设施，并设置流动水洗手及消毒设施。
更衣柜宜采用光滑、防透水材料制造并应按一客一用的标准设置。
更衣室通道宽敞，保持空气流通。
1、12、常年开放的室内游泳池宜设有空气调节和换气设备池水温度调节设施。
13、住宿场所，是指向消费者提供住宿及相关综合性服务的场所，如宾馆、饭店、旅馆、旅店、招待所、度假村等。
14、新建、改建、扩建住宿场所在可行性论证阶段或设计阶段和竣工验收前应当委托具有资质的卫生技术服务机构进行卫生学评价。
2、15、客房不带卫生间的住宿场所，应设置公共卫生间、公共浴室、公用盥洗室等。
16、游泳场所应配备余氯、PH值、水温度计等水质检测设备。
17、人工游泳池浸脚消毒池池水余氯含量应保持5-10毫克/升，应当每4小时更换一次。
嗜肺军团菌胶体金法是一种用于检测嗜肺军团菌的方法。
这种检测方法基于免疫学原理，利用胶体金颗粒的特性和嗜肺军团菌的抗原进行反应，从而实现对嗜肺军团菌的检测。
胶体金法具有简便、快速、灵敏度高、特异性好等优点，因此被广泛应用于嗜肺军团菌的检测。
在检测过程中，首先需要采集患者的样本，如痰液、血液等，然后将样本与胶体金试剂混合，如果样本中存在嗜肺军团菌的抗原，就会与胶体金颗粒发生反应，形成可见的红色或紫色沉淀。
需要注意的是，嗜肺军团菌胶体金法只是一种初筛方法，如果检测结果为阳性，还需要进一步进行确诊试验，如培养法、PCR等，以确定病原体种类和数量。
此外，由于嗜肺军团菌的感染具有一定的危险性，因此在操作过程中需要注意安全防护，避免感染风险。
公共场所水环境中活嗜肺军团菌的快速检测方法郭沛;赵龙;胡翮【摘要】旨在建立一种基于16S rRNA前体的分子学检测方法用于快速检测活嗜肺军团菌,应用该方法与ISO标准法调查公共场所水环境中嗜肺军团菌的水平及污染现状.此研究方法的理论基础在于营养刺激后可诱导嗜肺军团菌16S rRNA前体的合成,后者可作为检测细胞活性的指标.分别应用预刺激RT-qPCR法和ISO法对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌以及非军团菌进行检测,并验证两种方法的特异性、灵敏度.应用预刺激RT-qPCR法和ISO法检测公共场所水环境中的嗜肺军团菌,比较两者结果的一致性.结果显示,预刺激时间大于3h时,嗜肺军团菌16S rRNA前体的增长缓慢,最佳预刺激时间设置为3h.预刺激RT-qPCR法与ISO法均能较好地检出嗜肺军团菌,特异性均为100％,预刺激法的最低检测浓度(Limit of detection,LOD)为102Cell/L,ISO标准法的LOD为104 Cell/L.预刺激法及ISO法的总阳性率分别为43.5％(30/69)和40.6％(28/69),两种方法的检出率差异无明显统计学意义(C2=0.119,P=0.730).预刺激RT-qPCR法是一种快速有效的检测活嗜肺军团菌的方法,诊断灵敏度及特异性高,是ISO标准法潜在的替代方案.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2019(035)003【总页数】7页(P203-209)【关键词】嗜肺军团菌;PCR;水环境;公共场所;16S rRNA;快速检测方法【作者】郭沛;赵龙;胡翮【作者单位】湖南省湘潭市食品药品检验所,湘潭411100;湖南省湘潭市食品药品检验所,湘潭411100;湖南省湘潭市食品药品检验所,湘潭411100【正文语种】中文军团菌病是一种细菌性疾病，主要表现为自限性非肺炎性庞蒂亚克热（Pontiac fever）和军团菌病症状，其特征是严重的呼吸道症状，包括具有高度致命性的肺炎。
嗜肺军团菌荧光定量PCR检测朱水荣;张政;卢亦愚;任红宇;扬仕贵;高晓萍【期刊名称】《中国公共卫生》【年(卷),期】2008(24)9【摘要】目的建立特异、快速、敏感的TaqMan探针荧光定量PCR方法,用于检测嗜肺军团菌mip基因。
方法嗜肺军团菌及其他军团菌DNA模板来自中国疾病预防控制中心呼吸道室,嗜肺军团菌地方株及其他对照株由本中心菌种室供给。
利用嗜肺军团菌mip基因保守序列设计引物和TaqMan探针,对其进行筛选,同时对荧光定量PCR反应条件和反应体系进行优化,并对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他细菌进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性等。
结果该方法在检测多株嗜肺军团菌时,均出现阳性信号,而对非嗜肺军团菌和其他细菌则未有阳性扩增结果出现。
检测灵敏度达10个拷贝/反应,从菌株核酸的提取至检测完成仅需2 h左右,可减少常规PCR操作的污染机会。
结论TaqMan荧光定量PCR方法可定量检测嗜肺军团菌,具有特异性高、快速、敏感等特点,适于外环境污染源状况的调查及应急事件的快速定量检测。
【总页数】3页(P1111-1113)【关键词】嗜肺军团菌;mip基因;TaqMan探针;荧光定量PCR【作者】朱水荣;张政;卢亦愚;任红宇;扬仕贵;高晓萍【作者单位】浙江省疾病预防控制中心微生物所,杭州310051;中国疾病预防控制中心【正文语种】中文【中图分类】Q503【相关文献】1.嗜肺军团菌lvgA基因分析及实时荧光定量RT-PCR对军团菌的检测 [J], 单小云;胡野;应延风;屠平光2.嗜肺军团菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 [J], 杜昕颖;黄留玉;苏晓;王玉飞;龚春丽;庄妤冰;苑锡铜;陈泽良;袁静;宋宏彬3.嗜肺军团菌荧光定量PCR方法的建立及在公共场所集中空调检测中的应用 [J], 冯华;刘雪林;张传福;史云;靳连群;王强;戚红卷;林彦峰;胡晓丰;董德荣4.嗜肺军团菌荧光定量PCR方法的建立及在公共场所集中空调检测中的应用 [J], 冯华; 张传福; 史云; 靳连群; 王强; 戚红卷; 林彦峰; 胡晓丰; 董德荣; 刘雪林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
嗜肺军团菌检测标准一、引言嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）是一种革兰氏阴性杆菌，是人类军团病的主要病原体。
军团病是一种由吸入含有嗜肺军团菌的气溶胶引起的急性呼吸道传染病。
为确保公共卫生安全，准确、快速地检测嗜肺军团菌成为防控军团病的关键环节。
本文将详细介绍嗜肺军团菌的检测标准，以期为相关领域提供有益的参考。
二、样本采集与处理1.样本采集：采集疑似军团病患者呼吸道分泌物、痰液、支气管肺泡灌洗液等样本。
采样时应遵循无菌操作原则，避免污染。
2.样本处理：将采集到的样本立即送至实验室，进行处理。
处理过程中，应对样本进行匀浆、离心等操作，以提取细菌。
三、实验室检测1.细菌培养：将处理后的样本接种于选择性培养基上，如BCYE培养基。
在35-37℃、5%二氧化碳环境下培养3-10天，观察菌落形态。
2.生化试验：对疑似菌落进行生化试验，如氧化酶试验、尿素试验、马尿酸盐试验等，以初步鉴定嗜肺军团菌。
3.分子生物学检测：采用PCR（聚合酶链式反应）等分子生物学技术对疑似菌落进行核酸检测，以确定嗜肺军团菌的存在。
PCR检测具有较高的灵敏度和特异性，可用于嗜肺军团菌的快速诊断。
四、结果判定与报告根据实验室检测结果，结合患者临床表现和流行病学史，进行综合判断。
如细菌培养、生化试验和分子生物学检测结果均符合嗜肺军团菌特征，可判定为嗜肺军团菌感染。
检测报告应包括患者信息、样本信息、检测方法和结果等内容。
五、质量控制与注意事项1.质量控制：实验室应建立严格的质量控制体系，包括定期校准检测设备、验证检测方法的准确性、参加室间质评等，以确保检测结果的准确性和可靠性。
2.注意事项：在样本采集、运输、处理和检测过程中，应严格遵守生物安全规范，防止交叉感染和实验室感染。
同时，实验室人员应具备相应的专业技能和生物安全意识，确保检测工作的顺利进行。
六、总结与展望本文详细介绍了嗜肺军团菌的检测标准，包括样本采集与处理、实验室检测、结果判定与报告以及质量控制与注意事项等方面。
深圳市空调冷却塔水军团菌污染状况调查摘要:目的了解深圳市宾馆、大型写字楼、地铁等各类建筑物的空调冷却塔水军团菌污染状况。
方法随机采集中央空调冷却塔水样品并进行细菌培养和鉴定，再以聚合酶链式反应（PCR）等方法加以验证。
结果共采集水样28件，分离到1株军团菌，经鉴定为嗜肺军团菌Lp1型。
结论深圳市中央空调冷却塔存在军团菌的污染，需引起重视，防止军团菌病发生。
关键词:军团菌;嗜肺军团菌;冷却塔;污染状况Detection of Legionella pneumophila in cooling tower water of central air conditioning system in Shenzhen City.ZHANG Ran，CHEN Gui-bing，SHI Xiao-lu，et al.（Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention，Shenzhen518020，Guangdong，P.R.China）Abstract:Objective To investigate the contamination status of cooling water of central air conditioning syatem with Legionella pneumophila in in hotels，buildings and subways in Shenzhen City. Methods Cooling tower water samples from central aircondi-tioning system were randomly taken，cultured and then Legionella pneumophilia was isolated.Pobymerase chain reaction（PCR）was used for confirmation of the differentiation. Results Twenty-eight cooling water samples were collected and a strain of Legionella pneumophilia serovar Lp1was isolated. Conclusion The water in cooling tower of central air conditioning system in Shenzhen City has been contaminated with Legionella pneumophilia and measures be taken for preventing infection with Legionella pneumophilia.Key words:Logionella;Leginella pneumophilia;Cooling tower;Contaminationstatus军团菌是引起军团菌病的一种急性呼吸道传染病的病原体，于1977年在美国首次发现并证实。
公共场所嗜肺军团菌检测标准嘿，大家知道吗？公共场所里有一种小小的细菌，叫嗜肺军团菌。
这玩意儿可不能小瞧啊！你想想，咱们平时去的那些大商场、游泳馆、酒店啥的，人来人往的，要是有这嗜肺军团菌在捣乱，那可不得了！就好像家里有个调皮的小捣蛋鬼，到处乱跑乱搞破坏。
那怎么检测它呢？这可得好好说道说道。
检测嗜肺军团菌就像是一场侦探游戏，我们得找到各种线索来抓住这个“小坏蛋”。
首先呢，采样就很关键啦！就好比我们要去抓小偷，得先知道他可能会在哪些地方出现吧。
我们得在那些容易藏着嗜肺军团菌的地方采集样本，比如空调系统的冷却水啊、淋浴喷头的水啊之类的。
这可不是随随便便弄一下就行的，得专业、得仔细！然后呢，检测方法也有很多种。
就像我们有不同的工具来对付不同的情况一样。
有的方法很灵敏，能一下子就发现它的踪迹；有的方法可能稍微慢点，但也能把它给揪出来。
检测的时候可不能马虎啊！这可不是闹着玩的。
要是没检测好，让嗜肺军团菌这个“小捣蛋”溜走了，那后果可能很严重呢！大家想想，如果因为没检测好，让很多人感染生病了，那多糟糕啊！我们得像爱护自己家一样爱护这些公共场所。
检测嗜肺军团菌就是为了让大家能安心地在这些地方玩耍、工作、休息。
就像我们会定期打扫家里一样，对公共场所的检测也得重视起来呀！而且啊，这可不是一次性的事情哦！得经常去检测，就像我们要经常检查家里的东西有没有坏一样。
不能说今天检测了没问题，以后就不管啦！那可不行！大家说，我们能让嗜肺军团菌在公共场所里肆意妄为吗？当然不能啊！所以啊，大家都要重视起来，让我们一起把这个“小捣蛋鬼”给抓住，让我们的生活环境更加安全、健康！总之，公共场所嗜肺军团菌检测可太重要啦！这关系到我们每个人的健康和安全呢！大家可别不当回事儿呀！。
公共场所环境样品中嗜肺军团菌定量检验方法1范围青岛精诚仪器仪表有限公司本标准规定了公共场所空气、水、土等不同类别环境样品中嗜肺军团菌的定量检测方法。
本标准适用于公共场所环境样品中嗜肺军团菌的定量检测，其他环境样品中嗜肺军团菌的定量检测可参照执行。
2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T18204.3公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物GB/T18204.5公共场所卫生检验方法第5部分：集中空调通风系统3空气中嗜肺军团菌定量检测3.1原理采用液体冲击法采样、叠氮溴乙锭（EMA）前处理结合定量聚合酶链反应(qPCR)方法定量检测室内空气和集中空调送风中存活的嗜肺军团菌。
3.2仪器和设备3.2.1微生物气溶胶浓缩器：采样流量≥100L/min，3.0μm以上粒子的捕集效率≥80%（或浓缩比≥8）。
3.2.2液体冲击式微生物气溶胶采样器：采样流量7L/min～15L/min，0.5μm以上粒子的捕集效率≥90%。
3.2.3便携式冷藏箱。
3.2.4冷冻离心机：温度4︒C。
3.2.5恒温水浴锅或金属浴：温度范围50︒C～99︒C。
3.2.6荧光定量PCR仪：非耦合6色激发光片和6色检测滤光片通道，4°C–100°C温度范围。
3.2.7卤素灯：500W。
3.2.8涡旋震荡器：调速范围0~3000rpm。
3.3材料和试剂3.3.1酵母浸出粉。
3.3.2蒸馏水。
3.3.3EMA固体粉：5mg/管。
3.3.4无核酸酶去离子水。
3.3.5矿物油，用于减少气溶胶采样时的吸收液蒸发。
3.3.6核酸提取试剂盒：DNA产量15～30μg，A260/A280在1.7～1.9之间。
3.3.7引物：上游引物5’-GAAAATAAAGTAAAAGGGGAAGCC-3’；下游引物5’-ATCAATCAGACGACCAGTGTATTC-3’。
3.3.8探针：5’-FAM-AGGCGTTGTTGTATTGCCAAGTGGTT-TAMRA-3’。
3.3.9标准品质粒。
3.3.10荧光定量PCR反应体系。
3.3.11离心管：1.5mL透明离心管和1.5mL棕色离心管。
3.3.12离心管：15mL，50mL。
3.4样品的采集3.4.1采样吸收液成分：酵母浸出粉12g蒸馏水1000mL3.4.2采样吸收液制法：将酵母浸出粉（3.3.1）12g加蒸馏水至1000mL，121℃下高压灭菌15min，每20mL采样吸收液分装于灭菌后的50mL离心管（3.3.12）中备用。
3.4.3采样点：室内空气按GB/T18204.3中6.4.1规定，集中空调送风按GB/T18204.5中9.5.1规定。
3.4.4将装有采样吸收液的离心管置于便携式冷藏箱（3.2.3）中送到现场，开始采样前将采样吸收液（3.4.2）20mL倒入微生物气溶胶采样器（3.2.2）中，然后用吸管加入矿物油（3.3.5）1滴~2滴。
3.4.5将微生物气溶胶浓缩器（3.2.1）与微生物气溶胶采样器（3.2.2）连接，按照微生物气溶胶浓缩器和微生物气溶胶采样器的流量要求调整主流量和浓缩流量。
3.4.6按浓缩器和采样器说明书操作，每个气溶胶样品采集空气量1m3~2m3；并记录环境温度、大气压力和总采气体积或采样流量、采样时间。
3.4.7采集的样品倒入离心管置于便携式冷藏箱中避光保存，4h内送实验室检验。
3.5样品处理方法与条件3.5.1样品的离心浓缩：将采集的气溶胶样品（3.4.7）于4℃下8000×g离心20min（3.2.4），小心吸取弃去上清，剩余1mL左右沉淀全部转移至1.5mL的透明离心管中，再次4℃下8000×g离心20min，弃去上清，剩余0.5mL沉淀。
3.5.2EMA母液{ρ[C21H18BrN5]=10mg/mL}的制备：取1管5mg EMA固体粉（3.3.3），短暂离心后加入0.5mL灭菌无核酸酶去离子水（3.3.4）。
颠倒混匀，短暂离心收集管壁液体，每100μl分装于1.5ml棕色离心管（3.3.11）中，-20℃避光保存。
3.5.3EMA工作液{ρ[C21H18BrN5]=100μg/mL}的制备：取10μlEMA母液(3.5.2)加990μl灭菌无核酸酶去离子水（3.3.4）。
颠倒混匀，短暂离心收集管壁液体，置于1.5ml棕色离心管中。
每1000μl的EMA工作液可处理70份左右样品，EMA工作液现用现配，使用前计算好所需EMA工作液量。
3.5.4样品避光孵育：取0.5mL经过离心浓缩的气溶胶样品（3.5.1）置于1.5mL透明离心管中，铝箔包裹以便避光。
加入13μLEMA工作液（3.5.3），反复颠倒，混合均匀，短暂离心收集管壁液体，4℃避光孵育5min。
3.5.5样品光照活化：去掉包裹离心管的铝箔，将离心管水平放置在碎冰上，调整样品与卤素灯（3.2.7）的距离，使其垂直距离为15cm，光照5min。
光照阶段需混匀样品1次~2次，使光照均匀，防止样品过热。
3.5.6样品存放：光照结束后，4℃保存样品，24h内提取核酸。
3.6样品核酸提取由于样品核酸提取的条件与操作步骤因使用试剂盒的不同而有差异，所以应根据所使用的核酸提取试剂盒的操作手册进行操作。
附录A所列的空气中嗜肺军团菌核酸提取操作步骤是一个实例。
3.7荧光定量PCR条件与扩增步骤3.7.1标准品系列制备：将标准品母液（3.3.8）以十倍梯度依次稀释，在107copies/mL～102copies/mL浓度范围内制备十倍梯度稀释的标准品系列。
稀释方式举例如下：取10μL浓度为X×107copies/mL的标准品母液，编号为①，加入90μL无核酸酶去离子水轻柔混匀，浓度为X×106copies/mL，编号为②；取10μL浓度为②的标准品，加入90μL无核酸酶去离子水轻柔混匀，浓度为X×105copies/mL编号为③；以此类推。
3.7.2扩增体系：每次检测包括至少5个连续浓度标准品，每标准品至少进行3个复孔检测。
每次检测包括阳性和空白对照各一个。
样品进行3个复孔检测。
荧光定量PCR扩增体系（25μL）：其中2×RealMasterMix10μL，上下游引物(10μmol/L)各1.25μL，探针(10μmol/L)0.625μL，20×Probe Enhance Solution1.25μL，模板2μL，ddH2O8.625μL。
3.7.3扩增条件：94℃预变性4min；然后94℃变性20s，60℃退火延伸60s，61s检测荧光信号，进行40个循环。
3.7.4数据处理：标准曲线相关系数R2>0.99，标准曲线斜率在-3~-3.5之间，扩增效率E 在0.9~1.2之间。
根据标准曲线和样品Ct值计算样品核酸中嗜肺军团菌浓度(copies/mL)。
3.8结果报告3.8.1采气体积换算：按式（1）换算成标准状态下采气体积。
000273P P t T V V t ⨯+⨯=（1）式中：V 0—标准状态下的采气体积，单位为立方米（m 3）；V t —实际采气体积，为采样流量与采样时间乘积，单位为立方米（m 3）；t —采样点的环境温度，单位为摄氏度（℃）；T 0—标准状态下的绝对温度，273K ；P —采样点的大气压，单位为千帕（kPa ）；P 0—标准状态下的大气压，101kPa 。
3.8.2浓度计算：空气中存活的嗜肺军团菌浓度按式（2）计算。
001.0V C C ⨯=（2）式中：C —空气中嗜肺军团菌浓度，单位为拷贝数每立方米（copies/m3）；C0—样品核酸中嗜肺军团菌浓度，单位为拷贝数每毫升核酸（copies/mL ）；V0—标准状态下采气体积，单位立方米（m3）。
3.9方法性能本方法最低检出空气中嗜肺军团菌核酸浓度为102copies/mL 。
当采气体积为2m 3时，最低检出空气中嗜肺军团菌浓度为5copies/m 3。
4水样品中嗜肺军团菌定量检测4.1分离培养法4.1.1原理集中空调冷却水、沐浴水、景观水、娱乐用水等水样品经浓缩后，接种于GVPC 琼脂平板生成单个军团菌菌落，并在BCYE 琼脂平板上生长而在L-半胱氨酸缺失的BCYE 琼脂平板上不生长，进一步经血清学实验鉴定确认为嗜肺军团菌，依照样品量、加标回收率等定量计算得出水样品中嗜肺军团菌浓度。
4.1.2仪器和设备4.1.2.1CO 2培养箱：5%CO 2，35℃~37℃。
4.1.2.2微生物过滤系统。
4.1.2.3恒温水浴箱：50℃±5℃。
4.1.2.4生物安全柜。
4.1.2.5光学显微镜。
4.1.2.6平板振荡器、涡旋振荡器。
4.1.2.7具塞采样瓶：容积 500mL。
4.1.3材料和试剂4.1.3.1硫代硫酸钠溶液[c(Na2S2O3)=0.1mol/L]。
4.1.3.2滤膜：孔径0.22µm。
4.1.3.3酸处理液[c(HCL-KCL)=0.2mol/L]：pH2.2±0.2。
4.1.3.4GVPC琼脂平板。
4.1.3.5BCYE琼脂平板。
4.1.3.6BCYE-CYE琼脂平板(L-半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板)。
4.1.3.7军团菌分型血清。
4.1.3.8氯化钠溶液[ρ(NaCL)=0.85%]。
4.1.3.9具塞试管。
4.1.3.10灭菌水。
4.1.4样品采集4.1.4.1将贝具采样瓶（4.1.2.7）用前灭菌。
4.1.4.2每瓶中加入硫代硫酸钠溶液（4.1.3.1）0.3mL~0.5mL。
4.1.4.3采样点按GB/T18204.5中3.5.3规定。
4.1.4.4无菌操作采集水样500mL。
4.1.4.5采集的样品2d内送达实验室，不必冷冻，但要避光和防止受热，室温下贮存不应超过15d，尽快及时进行实验室检测。
4.1.5检验步骤4.1.5.1样品预处理：水样品如有杂质可静置去除沉淀，将样品通过0.22µm孔径的微生物过滤系统（4.1.2.2）过滤，取下滤膜剪碎置于10mL原样品中，涡旋振荡器（4.1.2.6）充分振荡洗脱，取洗脱液备用。
4.1.5.2样品酸处理：取1mL预处理后的样品（4.1.5.1）于无菌具塞试管（4.1.3.9）中，加入适量酸处理液（4.1.3.3），使样品pH值至2.0~2.2，轻轻摇匀，处理时间5min~10min。
4.1.5.3样品接种：取酸处理的样品0.2mL，划线接种GVPC平板（4.1.3.4），使培养后应形成单个菌落。
4.1.5.4样品培养：将接种平板静置于5%CO2培养箱（4.1.2.1）中，温度35℃~37℃，孵育3d~10d。
