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大连市集中空调公共场所从业人员嗜肺军团菌感染调查
冯帆;姜红梅;田军川;关磊;李乃鑫
【期刊名称】《环境与健康杂志》
【年(卷),期】2007(24)6
【摘要】目的了解集中空调公共场所从业人员血清嗜肺军团菌抗体水平,研究人群中嗜肺军团菌隐性感染及其影响因素。
方法于2005年8—10月随机抽取210名大连市集中空调公共场所从业人员,并检测其血清中嗜肺军团菌(Lp)8～10型抗体水平。
结果集中空调公共场所从业人员嗜肺军团菌Lp10型感染率较高(30.48/),且不存在年龄、性别、工作年限的差异。
结论大连市集中空调公共场所从业人员存在嗜肺军团菌隐性感染,应加强大连市公共场所集中空调系统的卫生管理及军团菌监测工作。
【总页数】2页(P429-430)
【关键词】嗜肺军团菌;集中空调;公共设施
【作者】冯帆;姜红梅;田军川;关磊;李乃鑫
【作者单位】大连市开发区卫生监督和疾病预防控制中心监督二科;大连市疾病预防控制中心环境职业卫生防护所
【正文语种】中文
【中图分类】R126.4
【相关文献】
1.深圳市公共场所集中空调通风系统从业人员健康状况调查 [J], 吴浩生;殷道根;仇君;曹中强;杜玉开;章明辉;林奕嘉
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公共场所集中空调冷却水中军团菌污染状况调查摘要】目的了解泉州市公共场所集中空调通风系统冷却塔水中的嗜肺军团菌污染状况。
方法于2008年至2010年每年的6月至8月在泉州市随机抽取三星级以上酒店、超市、医院的空调冷却水，进行军团菌培养、检测和评价方法参照《公共场所集中空调通风系统卫生规范》（卫生部，2006年）。
结果抽检93份样品，阳性30份，阳性率32.26%。
超市阳性率最高为81.82%，医院阳性率36.36%，酒店阳性率21.67%。
结论我市公共场所集中空调通风系统的嗜肺军团菌检测阳性率较高，提示我市超市、医院、酒店集中空调通风系统的军团菌污染危险不可忽视，应加大卫生监督管理力度,使广大群众在公共场所活动有安全感。
公共场所集中空调通风系统卫生检测指标应列入国家强制标准。
【关键词】集中空调冷却水嗜肺军团菌污染随着国民经济迅猛发展和人民生活水平不断提高，集中式中央空调广泛使用，由此引发的军团菌污染水质、空气所致的军团菌病已经成为一个重要公共卫生问题受到人们的关注，目前已证实集中空调冷却水是引起军团菌病散发和流行的最重要来源。
我们于2008至2010年对泉州市三星级以上酒店、超市、医院的集中空调冷却塔水进行嗜肺军团菌检测，现将结果报告如下。
1 调查内容与方法1.1调查对象泉州市随机抽取三星级以上酒店、超市、医院，共计51家，其中酒店40家、超市5家、医院6家。
将所抽单位内的所有冷却塔作为调查对象，以无菌方法采集水样93份。
1.2调查内容集中空调通风系统冷却水中的嗜肺军团菌。
1.3检测方法冷却水嗜肺军团菌检测按照卫生部在2006年3月制定的《公共场所集中空调通风系统卫生规范》附录 A中冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检验方法，用加有硫代硫酸钠的无菌玻璃瓶,采集冷却塔500ml的水样,4h内送检。
1.4判定标准集中空调通风系统冷却水和冷凝水中不得检出嗜肺军团菌。
2 结果调查显示，公共场所集中空调通风系统冷却塔水抽检的单位51家，19家检出嗜肺军团菌，合格率为62.74%。
深圳市空调冷却塔水军团菌污染状况调查摘要:目的了解深圳市宾馆、大型写字楼、地铁等各类建筑物的空调冷却塔水军团菌污染状况。
方法随机采集中央空调冷却塔水样品并进行细菌培养和鉴定，再以聚合酶链式反应（PCR）等方法加以验证。
结果共采集水样28件，分离到1株军团菌，经鉴定为嗜肺军团菌Lp1型。
结论深圳市中央空调冷却塔存在军团菌的污染，需引起重视，防止军团菌病发生。
关键词:军团菌;嗜肺军团菌;冷却塔;污染状况Detection of Legionella pneumophila in cooling tower water of central air conditioning system in Shenzhen City.ZHANG Ran，CHEN Gui-bing，SHI Xiao-lu，et al.（Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention，Shenzhen518020，Guangdong，P.R.China）Abstract:Objective To investigate the contamination status of cooling water of central air conditioning syatem with Legionella pneumophila in in hotels，buildings and subways in Shenzhen City. Methods Cooling tower water samples from central aircondi-tioning system were randomly taken，cultured and then Legionella pneumophilia was isolated.Pobymerase chain reaction（PCR）was used for confirmation of the differentiation. Results Twenty-eight cooling water samples were collected and a strain of Legionella pneumophilia serovar Lp1was isolated. Conclusion The water in cooling tower of central air conditioning system in Shenzhen City has been contaminated with Legionella pneumophilia and measures be taken for preventing infection with Legionella pneumophilia.Key words:Logionella;Leginella pneumophilia;Cooling tower;Contaminationstatus军团菌是引起军团菌病的一种急性呼吸道传染病的病原体，于1977年在美国首次发现并证实。
公共场所嗜肺军团菌污染状况调查分析
［摘要］目的应用PCR技术对奉贤地区部分公共场所空调冷却塔水及其他环境（淋浴设施等）进行军团菌污染状况调查。
方法于2010年5月和10月，分别采集中央空调冷却塔水样品及环境样品用聚合酶链（PCR）对其进行嗜肺军团菌检测，同时用常规法进行分型鉴定。
结果采集的125份样品中，PCR法检出嗜肺军团菌45份，阳性检出率为36%，水样检出率远高于环境（分别为67.19%和3.28%）。
在检出的59株军团菌中共鉴定出6种不同菌型，其中LP1为重点菌型，占50.85%。
且在同一样品中检出不同菌型有2株以上的占35.29%。
结论奉贤地区中央空调冷却塔及环境中存在军团菌污染，需引起重视，以防止军团菌所致的疾病暴发或流行。
军团菌是一种革兰阴性杆菌，能引起急性呼吸道传染病[1]，军团菌已被发现存在40个种，60多个血清型。
经流行病学调查研究，这种细菌存在于各种自然界水源以及空调水管道，供水系统等人工水源中，在引进空调冷却塔做冷却水时，随空调器把细菌散布于室内空气中，被人吸入而引发肺炎。
我国自1982年南京首次证实军团菌病例以来已有多起军团菌爆发流行［2］，上海在近几年内也从患者和环境中分离到军团菌［3］。
而上海地区健康人血清抗体水平调查也证明军团菌早已存在，并对人群构成潜在威胁［4］。
近年来从军团菌的流行可以看出军团菌对人类健康的威胁已达到不容忽视的程度，因此对该病的研究也越来越受到人们的重视。
目前用于军团菌检测的常规培养约7～10d，不仅花费大量时间和精力，还具有敏感性、特异性差的缺点，且操作复杂，易造成漏检和误检。
分子生物学技术的发展为军团菌检测提供了新的契机，该课题应用聚合酶链（PCR）技术，检测环境中的军团菌，以分析奉贤地区军团菌的污染状况。
1．材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验菌株大肠埃希菌（A TCC25922）、肠炎沙门菌（ATCC13076）均购于美国典型微生物菌种中心保藏中心提供标准菌株。
米克达德军团菌、杜莫夫军团菌由市疾控中心提供。
1.1.2 样品来源2010年分别在5月和10月以单纯随机抽样方式选取奉贤地区具有集中式中央空调设备的各大型超市，酒店共10家。
以无菌方式采集空调冷却塔水于无菌广口瓶中，每件约200 ml（根据《公共场所集中空调通风系统卫生规范》），共采集64件。
以沾湿生理盐水的棉签反复涂抹空调出风口以及酒店浴室莲蓬头出水口表面，剪去棉签接触手部位，将棉签置5 ml生理盐水中，共采集61件，采样后即送实验室检验。
1.1.3 培养基GVPC平板由柯玛嘉公司提供，血琼脂平板，各反应试剂由上海市疾病预防控制中心提供，均在有效期内使用。
1.1.4 诊断血清军团菌诊断血清由上海市疾病预防控制中心提供,均在有效期内使用。
1.1.5 PCR扩增仪Techne Flexigene；全自动数码凝胶成像系统Tanon GIS-2010。
1.1.6 PCR试剂盒嗜肺军团菌（LP）PCR检测试剂由上海健益生物科技有限公司提供。
1.2 方法
1.2.1 分离培养鉴定样品经负压过滤后,剪碎放入蒸馏水中,混合振荡后吸取1毫升进行酸处理,静置5分钟后同时接种GVPC平板和血平板.36℃，5%CO2培养72 h后进行鉴定[5]。
1.2.2 PCR检测方法样品经负压过滤后,剪碎放入5 ml蒸馏水中，混合后取500 µl,12 000 rpm/min离心5 min,弃上清液，加100 µl DNA提取液入沉淀中，振荡混匀，置100℃水浴加热10 min,12 000 rpm/min离心5 min，保留上清液待用。
取4 µl上清液加入26 µl PCR反应液中,同时做阳性对照。
振荡混匀，将PCR反应管放入PCR扩增仪中。
首先预变性94℃5 m
in，然后按94℃30 s、55℃30 s、72℃60 s循环35次，最后72℃延长5 min。
取15 µl的扩增产物加入2%琼脂糖凝胶孔中进行电泳，然后用凝胶成像系统进行分析。
1.2.3 PCR特异性试验以嗜肺军团菌DNA作为阳性对照，以其他菌株DNA作为干扰菌进行PCR特异性检测。
1.2.4 测序验证将PCR结果阳性的样品扩增产物送至上海生工生物工程有限公司进行测序验证。
2 结果
2.1 PCR检测结果
2.1.1 PCR反应和测序验证一共采集125份样品进行嗜肺军团菌的检测，有45份样品检出阳性。
经上海生工生物工程有限公司测序验证,送检的阳性样品扩增产物确认为嗜肺军团菌,见图1。
2.1.2 PCR特异性引物只与嗜肺军团菌发生阳性扩增，扩增长度为430bp，其他菌没有扩增产物，具有很好特异性，结果见图2。
M:100bpDNA标准带；1: 嗜肺军团菌;2:阴性对照; 3: 肠炎沙门菌; 4: 米克达德军团菌; 5:大肠埃希菌; 6: 杜莫夫军团菌
图2 嗜肺军团菌特异性检测情况
2.1.3 样品检测情况用PCR检测的125份样品中，水样64份，环境样品61份，水样的阳性检出率远远高于环境中的阳性检出率。
经统计学分析，水样与环境样品检出率的比较差异有统计学意义（X2 =55.37，P<0.05）。
3 讨论
运用PCR技术对奉贤地区大型中央空调和部分环境的军团菌污染调查中发现，中央空调冷却塔水中的阳性率达67.19%，远高于环境中的阳性率3.28%，证明上海奉贤区空调冷却水军团菌污染相当严重。
冷却塔作为中央空调系统的一部分，其产生的循环水不仅为军团菌提供了理想的生存环境［6 ］，而且提供了传播的形式—气溶胶。
冷却塔水被污染后，通过空调机入口和通风管被抽入室内或在冷却塔一定范围形成气溶胶，人引吸入而被感染。
空调系统冷却塔污染是导致军团菌感染的主要原因之一［7 ］，由于军团菌是一类水生菌群，生存环境界限广泛，水中存活时间较长，因此水质的跟踪检测及水的消毒十分重要。
在此次的调查中，检出了6种不同菌型，而其中又以LP1为重点菌型，占检出菌的50.85%。
这与之前国内报道的军团菌分布情况一致［8］。
而且在同一样品中检出了不同菌型，2株以上的占35.29,%，证明奉贤地区空调冷却塔水中存在着严重的多重污染，由军团菌污染环境可能导致严重后果应该引起足够的重视。
在军团菌的研究中从环境中检出的菌株以空调系统冷却塔水较多，而此次在酒店的浴室花洒中检出了2株军团菌，这属少见，也充分说明军团菌就存在日常生活中。
提醒市民对自己家里的淋浴器等设备也要进行定期检测、消毒、清除水、污物。
军团菌病爆发流行的可能性正日益临近，居民小区的集中供水，加湿器，热水器，空调器的日益普及无时不刻提醒卫生管理部门急需重视这个文明病。
由于军团菌的培养分离方法繁琐，人工培养条件的苛刻及其生长代谢的缓慢导致标本检出率低下，从而造成事实上的假阴性，漏检。
检测技术相对滞后，对于军团菌的预防与治疗十分不利。
PCR方法检测军团菌完全是从细菌的基因水平入手，针对5SrRNA设计的属特异性引物，从而比以往所有传统的外显蛋白质表型检测更为可靠。
而运用聚合酶链反应技术（PCR）的高敏感性，强特异性和快速等特点，可以克服常规检验技术的缺陷,显著简化了操作，有利于军团病防治工作的开展。
而此次运用两种方法对嗜肺军团菌进行检测，检出率
无明显差异可能由于环境中军团菌的阳性检出率太低所致。
军团菌病约90%是由嗜肺军团菌所致，某些军团菌含有的巨噬细胞感染增强基因（mip）看调控24-27KD外膜蛋白形成，这种蛋白可以使正常身强体壮的人患病［9］。
这使得过去认为军团菌为条件致病菌的理论受到看极大冲击，也使得这种可通过气溶胶传播的呼吸道传染病变得日益恐怖。
因此，努力做好防范工作是我国卫生管理部门亟待重视和解决的问题之一。
目前，尚无军团菌相关疫苗，所以加强对军团菌重要传染源-水系统的卫生管理，加强军团菌监测，建立快速的检测技术，是预防军团菌病发生和流行的关键。
