基于反相高效液相色谱法构建QSRR模型测定萘类及蒽醌类化合物的正辛醇―水分配系数
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高效液相色谱法测定决明子中蒽醌类成份的含量王宾豪杨荣平张小梅龚桥励娜【摘要】目的测定决明子中5种蒽醌类成份的含量。
方式采纳高效液相色谱法。
色谱柱:Shim-pack CLC-ODS C18柱;流动相:甲醇%磷酸水溶液梯度洗脱;流速:1 ml/min;λ:440 nm。
结果该方式准确靠得住,重现性好。
结论该方式能够测定决明子中5种蒽醌类成份的含量。
【关键词】高效液相色谱法决明子蒽醌Abstract:ObjectiveTo determine the content of anthraquinones in Semen Cassiae. MethodsHPLC method was developed .The separation was performed on an ODS column with the mobile phase of % phosphoric acid. The flow rate was 1ml/min and the detection wavelength was 440 nm. ResultsThis method was convenient and reliable. ConclusionThis method can be used to determine the content of anthraquinones in Semen Cassiae.Key words:HPLC; Semen Cassiae; Anthraquinones决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子。
性味甘、苦、咸、微寒,归肝、大肠经。
具有清肝明目、润肠通便之功效,为临床经常使用中药[1]。
其要紧化学成份为蒽醌类化合物。
本实验采纳HPLC法同时测定了决明子中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量,为决明子中有效物质研究奠定了基础。
反相高效液相色谱法测定慈姑中的几种酚类组分
谭志静
【期刊名称】《河南科技学院学报(自然科学版)》
【年(卷),期】2007(035)002
【摘要】通过实验建立了慈姑中愈创木酚、儿茶酚、焦性没食子酸的含量测定方法,该测定方法快捷、简便、准确,所测结果稳定、重现性好.实验采用ODS柱,柱温35 ℃,甲醇-水(含1%乙酸,体积比为35:65)溶液为流动相,用紫外检测器于275 nm处检测.结果表明,愈创木酚进样量为0.03 μg~1.2 μg;进样量与色谱蜂呈良好的线性关系(r=0.998);样品的加标回收率为98%~101%;相对标准偏差(RSD)为1.40%(n=6).
【总页数】2页(P41-42)
【作者】谭志静
【作者单位】安徽科技学院,分析测试中心,安徽,凤阳,233100
【正文语种】中文
【中图分类】O657.72
【相关文献】
1.油炸食品中两种酚类抗氧剂的反相高效液相色谱法测定 [J], 周建科;张前莉;韩康;张立
2.反相高效液相色谱法测定木香顺气丸中厚朴酚及和厚朴酚的含量 [J], 黄新生
3.反相高效液相色谱法测定平胃丸中厚朴酚及和厚朴酚含量 [J], 谭生建;胡文祥;康世银;王文明;张金国
4.HPLC法测定慈姑中几种酚类组分和绿原酸 [J], 谭志静
5.反相高效液相色谱法同时测定普通鹿蹄草中3种酚类成分的含量 [J], 张园园;霍艳双;陈晓辉;毕开顺
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一测多评法测定决明子中蒽醌苷元类和萘并吡喃酮苷类有效成分含量魏喜芹;魏世杰;马研妮【摘要】Objective To develop a method of quantitative analysis of multi-components by single marker(QAMS) for determination of effective components of naphthopyrone glycosides and anthraquinone aglycone in Cassia tora L.Methods The separation was performed on a Sunfire C18 column (4.6 mm ×250 mm,5 μm), and column temperature30 ℃.Aetonitrile-0.1% H3PO4 was used as the mobile phase with gradient elution.The detection wavelength was at 278 nm and 284 nm.Relative correction factor by determination of Between aurantio-obtusin and rubrofusarin-gentiobioside or chrysophanol or physcion.the method was evaluated for reproducibility, and the difference between calculated and measured values was compared. Results Rubrofusarin-gentiobioside, aurantio-obtusin, chrysophanol and physcion respectively 0.0503-1.5078, 0.3197-9.5899, 0.5070-15.2108, 0.4027-12.0814μg showed a good linear relationship, and the regression equation is Y =4.95X +2.01(R2 =0.9998),Y =1.03X +0.03(R2 =0.9999),Y=3.98X-0.12(R2 =0.9993),Y =4.81X +0.26(R2 =0.9996).The quantitative results of six batches of Cassia tora L by QAMS was basically consistent with that by external standard method.Conclusion The QAMS method was reliable and accurate, which might be used for the quality control of Cassia tora L.%目的:建立决明子中蒽醌苷元类和萘并吡喃酮苷类有效成分含量的一测多评法。
实验1 反相高效液相色谱法分离芳烃类化合物一、目的与要求1.了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法;2.了解反相高效液相色谱法的原理和应用;3.掌握用保留值定性及外标法色谱定量方法。
二、实验原理流动相为液体的色谱称为液相色谱。
经典的液相色谱由于大多在常压下操作,应用极为有限。
高效液相色谱法是在经典液相色谱的基础上,根据色谱法理论,在技术上采用高压液泵、高效色谱柱和高灵敏度的检测器发展起来的一种仪器分析方法,具有准确、快捷、方便等优点,广泛地应用于化工、医药、食品、环保、科研等各个领域。
液相色谱按分离机制不同可分为:液固吸附、液液分配、离子交换及空间排阻等几种类型。
本实验属液液分配色谱。
液液分配色谱是根据样品各组分在不相溶的两相间分配系数的不同从而实现分离的。
流动相为有机溶剂、水或有机溶剂-水等混合溶剂,固定相是由固定液(如十八烷、聚乙二醇)涂渍在惰性载体或通过化学反应键合到硅胶表面上而组成的,它与流动相互不相溶,且有一明显分界面。
当样品溶于流动相后,经色谱柱在两相间进行分配,待分配达到平衡时,样品组分的分配服从于下式:式中K 是分配系数,k 为分配比,c S 和c M 分别是组分在固定相和流动相中的浓度,V S 和V M 分别表示色谱柱中固定相和流动相的体积。
k 值除与组分的性质、固定相及流动相的性质有关外,还与温度、压力有关。
在一定条件下,k 值的大小反映了组分分子与固定液分子间作用力的大小,k 值大,说明组分与固定相的亲和力大,即组分在柱中滞留的时间长,移动速度慢。
分离顺序决定于分配系数的大小,分配系数相差越大,愈容易实现分离。
根据所选用的流动相与固定相相对极性不同,液液分配色谱又分为两类:固定相的极性大于流动相的极性,称为正相分配色谱;固定相的极性小于流动相的SM M S V V k c c K ⋅==极性,称为反相分配色谱。
化学键合固定相反相高效液相色谱中,流动相较简单,一般由甲醇—水、乙腈—水、乙腈—水—盐或甲醇—水—盐等体系构成,流动相的有机溶剂浓度、pH值和盐浓度的变化,可以改善洗脱强度,提高分离效果,所以,化学键合相反相HPLC色谱应用非常广泛,适于分离几乎所有类型的化合物。
反相高效液相色谱法同时测定3-羟基-2-萘甲酸和2-萘酚景丽洁,王树清,李健秀(吉林化工学院,吉林吉林132022)摘要:研究采用反相高效液相色谱法C18柱,同时测定3-羟基-2-萘甲酸和2-萘酚,甲醇1水=70130(体积比)为流动相,检测波长为225nm。
3-羟基-2-萘甲酸和2-萘酚的相对标准偏差分别为0.6%、0.7%,回收率分别为100.4%~102.0%、97.50%~99.08%关键词:3-羟基-2-萘甲酸;2-萘酚;高效液相色谱法中图分类号:0657.7+2文献标识码:A文章编号:0367-6358(2000)03-0150-03Simultaneous Determination of3-hydroxyl-2-NaphthoicAcid and2-Naphthol by Reversed-phase highPerformance Liguid ChromatographyJING Li-jie,WANG Shu-ging,LI Jian-xiu(Jilin Institute of Chemical Technology,Jilin Jilin132022,China)Abstract:Simultaneous determination of3-hydroxyl-2-naphthoic acid and2-naphthol was studied by re-versed-phase high performance liguid chromatography with C18column,methanol/water=70/30(V/V)as mobile phase.The detection wavelength was225nm.The relative standard deviations of3-hydroxyl-2-naphthoic acid and 2-naphthoI were 0.6%、0.7%,the recoveries were 100.4%102.0%、97.50%99.08%respectiveIy.Key words :3-hydroxyI-2-naphthoic acid ;2-naphthoI ;high performance Iiguid chromatography修稿日期:1999-11-273-羟基-2-萘甲酸通常称为2,3-酸,是合成有机染料、颜料及医药的中间体。
高效液相色谱测定苯萘蒽的含量高效液相色谱测定苯萘蒽的含量一实验目的1 熟悉HPLC的结构和操作2 了解反相高效液相色谱法3 掌握峰面积归一化法定量方法二实验原理1 仪器结构储液器→高压泵→进样器→色谱柱→检测器→记录仪↓↓梯度洗脱馏分收集器2 分离原理在反相高效液相色谱中其分离原理取决于组分与固定相间作用力的大小差异,组分的非极性相对最强,与固定相作用最强,故保留时间最长,最后被洗脱。
3 归一化法(1)定量校正因子:f i’ 即mi=fi’*A i(2)实验一般用相对定量校正因子:f i f i =A s*m i/A i*m s式中i指样品;s 指标准品,用各组分的标准样品可求出各组分的f i(3)求各组分含量X i=A i*f i/(A1f1+A2f2+…A n f n)*100%三仪器与试剂1 shimudza高效液相色谱仪,7725i手动进样伐,微量注射器(25μL),C18柱(250mm×4.6mm,5μm),超声波脱气机,抽滤器。
2 试剂:甲醇、苯、萘和蒽均为分析纯,水为二次蒸馏水,苯、萘和蒽标准溶液(浓度均为100μg/mL),未知浓度的苯、萘和蒽混合溶液。
四实验步骤1 将实验用流动相进行过滤和脱气处理2 开机,依次打开泵、检测器、工作站。
调整色谱条件(检测波长:254mnv=1.0mL/min,流动相,甲醇:水=80:20,柱温:室温),平衡色谱系统。
3 基线平稳后,取混合溶液5μL进样,记录各峰tR和A,重复两次。
分别取苯、萘和蒽的标准溶液各5μL,依次进样,以确定混合物中各组分的峰的位置。
4 清洗色谱柱,关机。
五结果处理1 根据纯品的出峰时间,确定混合物中各组分出峰顺序。
2 以苯为标准物,计算各组分的相对定量(质量)校正因子。
3 计算样品中各组分的百分含量。
六思考题1 归一化法定量有何优缺点?如果样品中各组分不能完全流出时,用此方法定量是否合适?为什么?2 解释样品中各组分的洗脱顺序。
反相高效液相色谱法测定大黄药材五种蒽醌类成分的含量许舜军;李鸿燕;曾元儿;江滨【期刊名称】《时珍国医国药》【年(卷),期】2006(17)7【摘要】目的建立同时测定大黄药材中的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的方法。
方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法对大黄药材中5种蒽醌及其苷的含量进行测定。
色谱条件如下,色谱柱:E Merek Li Chrospher 100RP-18(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-0.5%高氯酸(85:15),流速0.8ml/min,柱温40℃,检测波长为254nm。
结果在此色谱条件下,各蒽醌成分达到基线分离,且峰形良好。
芦荟大黄索线性回归方程为:Y=-2410+5374661X,r=0.9994,在0.016~0.160μg范围内呈良好线性关系,其平均回收率为104.8%,RSD=1.65%;大黄酸线性回归方程为Y=2148+5440831x,r=0.9997,在0.012—0.120μg范围内呈良好线性关系,其平均回收率为104.0%,RSD=2.71%;大黄素线性回归方程为Y=1653+4923143X,r=0.9998,在0.017—0.166lag范围内呈良好线性关系,其平均回收率为101.4%,RSD=1.86%;大黄酚线性回归方程为Y=5823+6496978X,r=0.9998.在0.029—0.286lag范围内呈良好线性关系.其平均回收率为103.2%,RSD=1.93%;大黄素甲醚线性回归方程为Y=3827+3385073X.r=0.9996,在0.008—0.079Ixg范围内呈良好线性关系,其平均回收率为102.0%,RSD=1.85%。
结论分析方法快速、灵敏、准确,所有待测组分峰分离度良好,达到定量检测的要求。
【总页数】2页(P1201-1202)【关键词】大黄;含量测定;高效液相色谱【作者】许舜军;李鸿燕;曾元儿;江滨【作者单位】广州中医药大学中药学院;广州中医药大学附属广东省中医医院【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.微柱高效液相色谱法测定虎杖及大黄样品中的大黄蒽醌类成分 [J], 郭思斌;刁红星;陈楚雄;陈壁芬2.反相高效液相色谱法测定大黄药材中游离及结合型蒽醌类衍生物的含量 [J], 张丹;蒋心惠3.高效液相色谱法测定甘肃省道地药材大黄中五种蒽醌类的含量 [J], 张强;王荣;贾正平;马骏4.白蔹药材中大黄素含量的反相高效液相色谱法测定 [J], 孟飞; 宋学立因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
基于反相高效液相色谱法构建QSRR模型测定萘类及蒽醌类化合物的正辛醇―水分配系数摘要正辛醇水分配系数(Kow)是评价药物毒性、活性及跨膜转运等的重要参数,但直接测定法实验过程复杂。
本研究采用反相高效液相色谱(RPHPLC)法,以甲醇水为流动相,以29种已知Kow的酸性和中性苯系物及萘类、醌类衍生物为模型化合物,以保留时间两点校正法(DPRTC)校正保留时间,并由SnyderSoczewinski方程得100%水相保留因子(kw),建立了表观正辛醇水分配系数Kow″与kw的定量关系(Quantitative structureretention relationship,QSRR)模型,并对模型进行了内、外部验证。
结果表明,不同pH下的QSRR模型线性相关性R2=0.974~0.976,内部验证(R2cv=0.970~0.973)和外部验证结果(6种验证化合物,1.4%≤相对误差(RE)≤7.9%)令人满意,与考虑了分子结构参数后建立的线性溶剂化能模型(LSER)相比无差异。
将建立的QSRR模型应用于11种萘类和蒽醌类化合物的Kow测定,并与软件计算值、摇瓶法实验值比较,结果表明,本方法准确性更高,且简单快捷,可用于快速准确预测复杂混合物体系中组分的Kow。
关键词正辛醇水分配系数;表观正辛醇水分配系数;反相高效液相色谱;QSRR模型;摇瓶法;萘类和蒽醌类化合物1引言药物的亲脂性与其生物活性紧密相关,是药物药代动力学和药效学的关键参数之一,对其的准确评估对于设计合理的药物分子结构非常必要[1 ]。
药物的亲脂性通常以正辛醇水分配系数(Kow)表示[2 ],测定方法主要有实验测定法和理论计算法。
实验测定有直接和间接测定法,直接测定法又分为摇瓶法(Shakeflask method,SFM)和慢搅法(Slowstirring method,SSM)。
SFM测定数据准确可靠、重现性好,但对高疏水性物质(lgKow>4)的测定较为困难[3 ];而SSM测定时间长,平衡过程中易形成沉淀、胶束或乳液[4 ]。
间接测定法有反相高效液相色谱法(RPHPLC)[5 ]、薄层色谱法(TLC)[6 ]以及逆流色谱法(CCC)[7 ]等,其中,RPHPLC 法应用最广泛。
理论计算Kow的各类方法中,应用最多的是线性溶剂化能量方程(Linear solvation energy relation ship,LSER)法,该法基于分子描述符,建立化合物结构与其性质的定量关系(Quantitative structureretention relationship,QSRR),构建该模型需挑选与Kow之间有良好线性关系且相对独立的分子描述符[8~12 ]。
但是,无论哪种理论计算法,其预测准确度都低于实验测定法。
RPHPLC法间接测定Kow是通过测定一组与待测物结构相似并有准确可靠Kow数据的模型化合物的保留因子(k),建立k与Kow之间的QSRR模型,以此求得类似结构化合物的Kow [13,14 ],其特点是测定速度快、适用于高通量和快速筛选、对样品纯度要求低、结果重现性好,测定对象范围广(0<lgKow<6),已应用于环境污染物中联苯、联苯醚等Kow 值的测定[15 ]。
但复杂混合物体系,如中药材中系列结构相似的潜在毒(活)性组分的Kow值测定尚未见报道。
蒽醌类化合物(Anthraquinones)广泛分布于蓼科、豆科等植物中,如中药大黄、何首乌等;萘类化合物主要分布于中药五加科植物,如芝麻、五味子中,均有多种药理作用,近年来发现其临床上表现出不良反应,但作用机理尚不清晰[16~19 ],迄今尚未见有该类成分的可靠Kow数据的报道。
基于蒽醌类及萘类化合物的高疏水性的特点,本研究采用RPHPLC法,以中性和酸性苯系物及萘类、醌类衍生物为模型化合物构建QSRR模型,开发快速、准确测定蒽醌类、萘类化合物Kow的简便策略,以期为准确测定类似结构的化合物的Kow提供实验依据,也为实现快速预测复杂混合物体系中结构类似组分的Kow提供实验基础。
4结论本实验以29种中性及酸性萘类和蒽醌类结构类似物作为模型化合物,建立了以lgKow″lgkw 定量关系(QSRR模型)。
采用内、外部验证模型的预测准确性,并考察了流动相pH的影响,同时以LSER考察了化合物结构参数氢键给体和受体数目、双键数目以及可转动键数目对lgKow″的相关性。
研究结果表明,所构建的QSRR模型可以快速测定难以用SFM及SSM直接测定的高疏水性化合物的Kow,这为快速准确预测复杂体系,如中药中一系列结构相似的潜在毒(活)性组分的Kow提供了可能性,也为进一步阐明组分的毒性及活性机理提供了可靠Kow数据。
References1Kaliszan R. TRACTrend Anal. Chem.,1999,18(6):400-4102Hansch C,Fujita T. J. Am. Chem. Soc.,1964,86(8):1616-16263Finizio A,Vighi M,Sandroni D. Chemosphere,1997,34(31):131-1614Brooke D N,Dobbs A J,Williams N. Ecotoxicol. Environ. Safe.,1986,11(3):25l-2605Griffin S,Grant Wyllie S,Markham J. J. Chromatogr. A,1999,864(2):221-2286Niestroj A,Pyka A,Klupsch J,Sliwiok J. J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol.,2004,27(15):2449-2461 7Bhushan Mandava N,Ito Y,Ma Y. J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol.,1998,21(12):217-2298Grisoni F,Consonni V,Villa S,Vighi M,Todeschini R. Chemosphere,2015,127:171-1799Molíkováa M,Markuszewski M J,Kaliszan R,Jandera P. J. Chromatogr. A,2010,1217(8):1305-1312 10D′Archivio A A,Maggi M A,Ruggieri F. Anal. Bioanal. Chem.,2014,407(4):1181-119011Creek D J,Jankevics A,Breitling R,Watson D G,Barrett M P,Burgess K E V. Anal. Chem.,2011,83(22):8703-871012Tyrkk E,Pelander A,Ojanper I. Anal. Chim. Acta,2012,720:142-14813Giaginis C,Theocharis S,TsantiliKakoulidou A. Anal. Chim. Acta,2006,573574:311-31814Balogh G T,SzántóZ,Forrai E,Gyrffy W,Lopata A. J. Pharm. Biomed. Anal.,2005,39(5):1057-106215Han S Y,QiaoJ Q,Zhang Y Y,Yang L L,Lian,H Z,Ge X,Chen H Y. Chemosphere,2011,83(2):131-136 16Lin L F,Lin H M,Zhang M,Ni B,Yin X B,Qu C H,Ni J. J. Hazard. Mater.,2015,299:249-259 17Xue L M,Zhang Q Y,Han P,Jiang Y P,Yan R D,Wang Y,Rahman K,Jia M,Han T,Qi L P. J. Ethnopharmacol.,2014,152(2):272-28218Wang L,Li M D,Cao P P,Zhang C F,Huang F,Xu X H,Liu B L,Zhang M. Chem. Biol. Interact.,2014,223:1-919Zhu S H,Jin J,Wang Y,Ouyang Z Z,Xi C,Li J,Qiu Y W,Wan J Z,Huang M,Huang Z Y. Food Chem. Toxicol.,2012,50(34):1149-115820Han S Y,Qiao J Q,Zhang Y Y,Lian H Z,Ge X. Talanta,2012,97:355-36121Han S Y,Liang C,Yu H M,Qiao J Q,Ge X,Lian H Z. RSC Advance,2015,5(36):28840-2884722Han S Y,Liang C,Qiao J Q,Lian H Z,Ge X,Chen H Y. Anal. Chim. Acta,2012,713:130-13523OECD 1071981,Guideline for Testing of Chemicals:Partition Coefficient (noctanol/water)Shake Flask Method 24Han S Y,Liang C,Yu H M,Qiao J Q,Ge X,Lian H Z. RSC Advance,2015,5(36):28840-2884725D′Archivio A A,Maggi M A,Ruggieri F. J Pharmaceut. Biomed.,2014,96:22423026Wu L,Gong P,Wu Y Z,Liao K,Shen H Y,Qi Q,Liu H Y,Wang G J,Hao H P. J. Chromatogr. A,2013,1303:39-4727Han S Y,Liang C,Zou K,Qiao J Q,Lian H Z,GeX. Talanta,2012,101:64-70。