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广谱抗肠道寄生虫药硝唑尼特(nitazoxanide)研究进展
沈一平;管晓虹;冯振卿
【期刊名称】《国际医学寄生虫病杂志》
【年(卷),期】2006(033)004
【摘要】硝唑尼特是一种新的广谱抗肠道寄生虫药.它是自苯丙咪唑类药问世30多年来值得注意的一个新发展.它的广谱活性对许多种类的原虫,特别如肠道孢子形成类原虫,以及许多常见的蠕虫,包括绦虫、线虫和吸虫均有特效.进一步的临床和基础研究将有利于使该药更有效地应用.
【总页数】4页(P221-224)
【作者】沈一平;管晓虹;冯振卿
【作者单位】210029,南京医科大学,卫生部抗体技术重点实验室;210029,南京医科大学,卫生部抗体技术重点实验室;210029,南京医科大学,卫生部抗体技术重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】R53
【相关文献】
1.墨西哥儿童肠道寄生虫的流行调查和硝唑尼特的疗效观察 [J], 王唯唯;戴世忠
2.治疗肠道寄生虫和细菌感染的新药-nitazoxanide [J], 尚炜;薛飞群
3.抗寄生虫新药硝唑尼特研究进展 [J], 张可煜;王国永;薛飞群
4.抗寄生虫新药硝唑尼特研究进展 [J], 董靖;邓旭明;邓彦宏
5.硝唑尼特(nitazoxanide)能有效治疗严重轮状病毒感染性腹泻 [J], 菅鑫妍
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气相色谱法检测硝唑尼特药物中的有机溶剂残留量郑文丽;张彩凌;张丽芳;薛飞群【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2008(42)2【摘要】建立一个气相色谱条件同时分离测定硝唑尼特中四氢呋喃及乙醇的含量.以PEG-20000为固定相,柱长25 m,进样口温度180 ℃,检测器温度200 ℃,柱温采用程序升温,氮气为载气,以二甲基甲酰胺为溶剂,以1,4-二氧六环为内标.四氢呋喃及乙醇进样量分别在0.070 8～0.212 6 μg 和0.158～1.106 μg,峰面积比与浓度呈良好的线性关系,精密度良好.此气相色谱条件可同时测定硝唑尼特中四氢呋喃及乙醇的含量,方法简便准确.【总页数】3页(P39-41)【作者】郑文丽;张彩凌;张丽芳;薛飞群【作者单位】中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫重点实验室,上海,200232;河北科技大学化学与制药工程学院,石家庄,050018;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫重点实验室,上海,200232;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫重点实验室,上海,200232【正文语种】中文【中图分类】S859.795【相关文献】1.气相色谱法测定二咖啡酰奎尼酸原料药中的有机溶剂残留量 [J], 魏君;闫平;娄艳红;谢剑炜2.毛细管气相色谱法测定甲磺酸伊马替尼原料药中4种有机溶剂残留量 [J], 王善春;张喜全;李洋;李慧3.气相色谱法测定吗啉硝唑中有机溶剂残留量 [J], 黄庆4.顶空气相色谱法测定舒尼铂中5种有机溶剂残留量 [J], 杨晓燕;沈红娅;姜倩;高安丽;杨志;王京昆;徐红贵5.气相色谱法同时测定甲磺酸伊马替尼原料药中7种有机溶剂残留量 [J], 邹江;沈丹丹;王东;王建华;罗立骏;曾令高因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
硝唑尼特的制备1目的要求1.1通过硝唑尼特的合成，了解同一体系中的一系列有机化学反应的简单操作；1.2掌握实验室一些基本仪器的操作；1.3掌握薄层色谱法和重结晶的基本方法。
2实验原理硝唑尼特（Nitazoxanid，NZT）是一种广谱抗微生物药物，属于硝基噻唑类的化合物，能够治疗多种类型的感染，包括寄生虫，细菌，病毒等。
本实验用三甲氧基磷、碘和三乙胺作为反应试剂，利用一步法合成硝唑尼特。
该路线合成成本低、收率好和环境友好，具有广泛的经济和社会效益。
3实验材料3.1试剂及物料三甲氧基磷、碘、乙酰水杨酸、三乙胺、2-氨基-5-硝基噻唑、碳酸氢钠、盐酸、二氯甲烷、无水硫酸钠、甲醇。
3.2器材磁力搅拌器、小磁子、100 mL 单颈瓶、铁桶、药勺、称量纸、分析天平、量筒、塑料吸管、玻璃塞、125 mL 广口瓶、硅胶板、直尺、铅笔、毛细管、镊子、紫外暗箱、分液漏斗、100mL 烧杯、玻璃棒、旋蒸瓶、旋转蒸发仪、真空泵、布氏漏斗、抽滤瓶、滤纸、平皿、记号笔。
4实验方法4.1硝唑尼特合成量取30mL的二氯甲烷加入到100mL单颈瓶中，向其中加入三甲氧基磷1mL，冰浴，加入碘3.0g，搅拌待碘完全溶解后，加入乙酰水杨酸3.5g和三乙胺6mL，搅拌10min，再加入2-氨基-5-硝基噻唑2.0g，撤去冰浴室温下反应4h。
4.2薄层色谱法监控反应反应4h后薄层色谱法监测反应进程：向125 mL 广口瓶中加入展开剂比例为200：1的二氯甲烷和甲醇，盖好瓶盖备用。
取一块硅胶板，在距下边0.5cm 处用铅笔画一直线，用 4 根毛细管分别蘸取硝唑尼特标准液、2-氨基-5硝基噻唑标准液、乙酰水杨酸、单颈烧瓶中反应液，等距点在画线上，待液体挥干后，画线端向下放入广口瓶中，盖上瓶盖。
待瓶中液体上行至硅胶板上边处，取出硅胶板，挥干板上液体，放入紫外暗箱观察。
观测硝唑尼特的生成情况。
4.3 粗产品的后处理通过薄层色谱法确认反应完毕后，停止搅拌，将反应液倒入分液漏斗中，加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，用30 mL二氯甲烷萃取3次（3*30m1)，充分振摇后静置分层。
·综述·摘 要：硝唑尼特（NTZ ）是上世纪七十年代开发的一个抗寄生虫药物，已被美国食品药品监督管理局（FDA ）批准用于治疗隐孢子虫或蓝氏贾第鞭毛虫引起的腹泻，被中国农业农村部批准用于治疗犬绦虫病。
近年来的研究发现，硝唑尼特不仅能抗多种寄生虫，而且对多种危害严重的人或动物病原菌、病毒也具有很好的活性，但是研究发现硝唑尼特对各种病原体的活性作用机制却各不相同。
本文主要综述了硝唑尼特对多种病原体的作用及其可能的机制，从而为硝唑尼特的利用和相关研究提供资料。
关键词：硝唑尼特；抗寄生虫；抗病毒；抗菌；作用机制中图分类号：S859.795 文献标志码：A 文章编号：1674-6422（2024）02-0218-11Research Progress on Multiple Action Mechanisms and Application of NitazoxanideHUANG Zhen 1,2, SU Yu 2, JIANG Xuejia 2, ZHU Menghan 2, ZHANG Keyu 2, WANG Zhaoxiong 1(1. College of Animal Science, Y angtze University, Jingzhou 434023, China; 2. Key Laboratory of veterinary chemicals and preparations, Ministryof agriculture and rural areas, Shanghai Institute of veterinary medicine, CAAS, Shanghai 200241, China)收稿日期：2022-01-26基金项目：国家自然科学基金（31872516）；国家重点研发计划（2018YFE0192600）作者简介： 黄振，男，汉族，硕士研究生，畜牧专业通信作者：汪招雄，E-mail：****************；张可煜，E-mail：**************.cn硝唑尼特的多重作用机制及应用研究进展黄 振1,2，苏 钰2，江雪佳2，朱梦晗2，张可煜2，汪招雄1（1.长江大学动物科学学院，荆州434023；2.中国农业科学院上海兽医研究所 农业农村部兽用化学药物与制剂学重点实验室，上海200241）Abstract: N itazoxanide (NTZ) is an anti-parasitic drug developed in the 1970s and approved by the U.S. Food and Drug Administration (FDA) for the treatment of diarrhea caused by Cryptosporidium or Giardia lamblia , and also approved by the Chinese Ministry of Agriculture and Rural Aff airs for the treatment of Canine taeniasis . In recent years, many studies have found that NTZ not only has anti-parasitic eff ects but also has good activity against a variety of serious pathogenic bacteria and viruses of human or animals. However, the action mechanisms of nitazoxanide against various pathogens exert very diff erently. In this review, we briefl y summarized the research process of the action mechanisms of NTZ on inhibiting the various pathogens so as to provide information for the utilization of NTZ. Key words: Nitazoxanide, antiparasitic, antiviral, antibacterial, mechanismChinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报2024,32(2):218-228氯硝柳胺虽然具有很好的抗绦虫效果但毒性很大，勒马克实验室的Rossignol等于上世纪70年代在氯硝柳胺的化学结构支架上用一个五环的硝基噻唑取代了一个苯环合成获得2-乙酰氧基-N-（5-硝基-2噻唑基）苯甲酰胺，即硝唑尼特（Nitazoxanide,NTZ）[1-2]。
实验四甲硝唑片的含量测定一、目的要求1．掌握紫外分光光度法测定甲硝唑片的原理及操作，并能进行有关计算。
2．熟练使用紫外分光光度计。
3．了解排除片剂中常用辅料干扰的操作。
二、实验原理根据甲硝唑能产生紫外吸收的性质，将本品用盐酸溶液配成稀溶液，在甲硝唑的最大吸收波长处测定吸收度，根据朗伯－比尔定律，用吸收系数法计算含量。
三、实验步骤1. 操作取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于甲硝唑50mg），置100mL量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约80mL，，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5mL，置200mL量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀。
取该溶液置1cm厚石英吸收池中，以相同盐酸溶液为空白，在277nm波长处测定吸收度，按C6H9N3O3的吸收系数为377计算，即得。
《中国药典》（2005）规定本品含甲硝唑（C6H9N3O3）应为标示量的93.0%~107.0%。
2. 计算根据朗伯－比尔定律：A=ECL则：C=AA= E⨯L377⨯LA1⨯⨯V⨯D⨯平均片重故：每片甲硝唑的量（g）=w式中，V：供试品溶液原始体积；D：稀释倍数；W：称取供试品的量（g）甲硝唑片占标识量的百分含量可按下式求得：A1⨯⨯V⨯D⨯平均片重标示量%=⨯100%w标示量四、注意事项1. 本次实验是用紫外分光法进行含量测定，故应选择可见—紫外分光光度计中的氢灯为光源，采用石英吸收池进行测定。
2. 测定步骤一般须经仪器预热、并调节各种开关至工作处；调拨测定所需波长；经校正仪器后，用与供试液相同的溶剂作空白测试，调其透光率为100%（吸收度为零）；再测定供试液的吸收度；关闭电路；计算（仪器的具体操作可详见各型号的说明书）。
3. 在仪器使用中，暂停测试时，应尽可能关闭光路闸门，以保护光电管，勿使受光过久而遭损坏。
4. 吸收池在测定前，应用被测试液冲洗2~3次，以保证溶液的浓度不变。
硝唑尼特片质量研究工作的试验资料参考《兽用化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则》进行了硝唑尼特片的质量研究工作。
1.试验样品样品名称：硝唑尼特片样品批号：P2006001；P2006002; P2006003规格：硝唑尼特500mg；研制厂家：青岛康地恩药业；中试车间：潍坊诺达药业硝唑尼特对照品：加拿大TRC生产，型号 N490100-100mg,含量99.98%2.性状试制三批样品，进行外观观察，批号：P2006001；P2006002; P2006003。
硝唑尼特原料药为淡黄色的粉末，辅料干淀粉、硬脂酸镁也均为白色的粉末，将辅料与硝唑尼特制成片后，颜色为淡黄色，制得的三批样品均为淡黄色的片剂，色泽均匀，外观完整光洁。
经过考察，最终规定硝唑尼特片的性状为淡黄色的片剂。
3.鉴别本品的含量测定主峰的保留时间应与对照品的一致。
参见硝唑尼特片分析方法研究。
取本品三批粉碎后的细粉适量，按照鉴别项下进行试验，结果保留时间与对照片保留时间基本一致。
见下表。
表11-2-1：三批供试品和对照品HPLC主峰保留时间4.检查由于硝唑尼特片成分简单，且主药含量占片剂质量的90%以上，因此我们根据中国兽药典中片剂通则，对硝唑尼特片的一些常规指标进行了检测。
4.1含量均匀度由于硝唑尼特片主药含量为500mg，且主药含量占片剂质量的90%以上，根据药典规定，不需要做含量均匀度检测。
4.2重量差异检查取三批硝唑尼特片各20片（批号P2006001；P2006002; P2006003），精密称定每一片重量，然后与标示片重比较。
结果重量差异限度在±5%以内，符合质量要求。
表11-2-2 片重结果（批号P2006001）表11-2-3片重结果（批号P2006002）表11-2-4 片重结果（批号P2006003）4.3崩解时间取批号P2006001；P2006002; P2006003三批硝唑尼特片各6片，置全智能崩解仪中，启动崩解仪进行检查，各片均在15分钟内崩解，符合质量要求。
硝唑尼特的合成研究徐玉茹，钟武*［摘要］目的优化硝唑尼特的合成工艺。
方法以乙酰水杨酸为原料，氯化亚砜为酰氯化试剂，反应生成乙酰水杨酰氯，再与2-氨基-5-硝基噻唑反应得到目标化合物。
粗产品采用乙酸乙酯和水的混合溶液初步纯化，然后使用活性炭脱色处理。
结果目标化合物的结构经过MS、1H NMR、13C NMR确证。
总收率为53.9%，HPLC纯度为99.83%（＞文献值92.8%～99.5%），其中2个杂质的含量分别为0.09%和0.08%。
结论优化后的工艺成本低廉，后处理操作简便，终产品的质量符合药物生产要求，适合工业化生产。
［关键词］硝唑尼特；合成；优化；纯化［中图分类号］R916［文献标志码］A［文章编号］1674-0440（2020）05-0357-05DOI：10.13220/ki.jipr.2020.05.006Research on the synthesis of nitazoxanideXU Yu-ru，ZHONG Wu*（Institute of Pharmacology and Toxicology，Academy of Military Medical Sciences，Academy of Military Sciences，Beijing100850，China）［Abstract］Objective To optimize the synthesis process of nitazoxanide.Methods Acetylsalicylic acid was used as raw ma⁃terial and thionyl chloride as acyl chloride reagent to produce acetylsalicylic chloride.Then the prepared intermediate was reacted with 2-amino-5-nitrothiazole to obtain the target compound.The crude product was initially purified by a mixed solution of ethyl acetate and water，and then decolorized by activated carbon.Results The structure of target compound was confirmed by MS，1H NMR and13C NMR.The total yield was53.9%.The purity by HPLC was99.83%，higher than the values of92.8%to99.5%in the literature，and the contents of two impurities were0.09%and0.08%，respectively.Conclusion The optimized process is of low cost and simple post-processing operation，and the quality of the final product meets the requirements of pharmaceutical production.Therefore it is suitable for industrial production.［Key words］nitazoxanide；synthesis；optimization；purification硝唑尼特（nitazoxanide），化学名为邻［N-（5-硝基噻唑-2-基）氨基甲酰］苯酚乙酸酯（3），由美国Ro⁃mark Laboratories公司研发，于2002年在美国上市，用于治疗＞12月龄的儿童和成年人由微小隐孢子虫和贾第鞭毛虫引起的腹泻［1-3］。
硝唑尼特片质量研究工作的试验资料参考《兽用化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则》进行了硝唑尼特片的质量研究工作。
1.试验样品样品名称：硝唑尼特片样品批号：P2006001；P2006002; P2006003规格：硝唑尼特500mg；研制厂家：青岛康地恩药业；中试车间：潍坊诺达药业硝唑尼特对照品：加拿大TRC生产，型号 N490100-100mg,含量99.98%2.性状试制三批样品，进行外观观察，批号：P2006001；P2006002; P2006003。
硝唑尼特原料药为淡黄色的粉末，辅料干淀粉、硬脂酸镁也均为白色的粉末，将辅料与硝唑尼特制成片后，颜色为淡黄色，制得的三批样品均为淡黄色的片剂，色泽均匀，外观完整光洁。
经过考察，最终规定硝唑尼特片的性状为淡黄色的片剂。
3.鉴别本品的含量测定主峰的保留时间应与对照品的一致。
参见硝唑尼特片分析方法研究。
取本品三批粉碎后的细粉适量，按照鉴别项下进行试验，结果保留时间与对照片保留时间基本一致。
见下表。
表11-2-1：三批供试品和对照品HPLC主峰保留时间4.检查由于硝唑尼特片成分简单，且主药含量占片剂质量的90%以上，因此我们根据中国兽药典中片剂通则，对硝唑尼特片的一些常规指标进行了检测。
4.1含量均匀度由于硝唑尼特片主药含量为500mg，且主药含量占片剂质量的90%以上，根据药典规定，不需要做含量均匀度检测。
4.2重量差异检查取三批硝唑尼特片各20片（批号P2006001；P2006002; P2006003），精密称定每一片重量，然后与标示片重比较。
结果重量差异限度在±5%以内，符合质量要求。
表11-2-2 片重结果（批号P2006001）表11-2-3片重结果（批号P2006002）表11-2-4 片重结果（批号P2006003）4.3崩解时间取批号P2006001；P2006002; P2006003三批硝唑尼特片各6片，置全智能崩解仪中，启动崩解仪进行检查，各片均在15分钟内崩解，符合质量要求。
测定结果见下表11-2-5：4.4脆碎度检查取批号为P2006001的硝唑尼特片13片，用吹风机吹去脱落的粉末，称其总重为6810mg，置圆筒中，转动100次，取出，同法除去粉末，精密称重，重量为6760mg，减失重量为0.73%，且试验中未发现断片裂片及粉碎片，符合质量要求。
同法取批号为P2006002、P2006003的硝唑尼特片各13片，用吹风机吹去脱落的粉末，称其总重分别为6925mg和6969mg，置圆筒中，转动100次，取出，同法除去粉末，精密称重，重量分别为6902mg和6911，减失重量分别为0.36%和0.83%，且试验中未发现断片裂片及粉碎片，符合质量要求。
5. 含量测定5.1 方法和依据参考文献报道的硝唑尼特含量检测方法，结合我们实验室自身的条件，我们进行了硝唑尼特片的含量测定方法学研究。
鉴于高效液相色谱法具有专属性好、重复性好、精密度高的特点，是当前含量检测的首选，所以参考文献资料，研究试制了本品【含量测定】的高效液相色谱法。
5.2 仪器与试药5.2.1 仪器 Agilent1100液相色谱仪二极管阵列检测器5.2.2 试药、试剂硝唑尼特对照品：购自加拿大TRC公司，含量为99.8％。
硝唑尼特片：青岛康地恩药业有限公司研制。
磷酸为分析纯；甲醇、乙腈为色谱纯；水为重蒸水。
用甲醇配制NTZ溶液，浓度约为20μg/mL，按分光光度法在190～820nm波长范围内扫描，结果见图8-1。
选最大吸收波长为346nm作为检测波长。
扫描空白辅料甲醇提取溶液，在此波长下无紫外吸收峰，不干扰含量测定。
图11-2-1 硝唑尼特紫外扫描图5.3 色谱条件色谱柱：Agilent C18柱（4.6×250，5μm Agilent公司）；流动相：0.2%磷酸水溶液:乙腈=50:50（V:V）；检测波长：346nm；流速1mL/min；进样量：10μL；柱温：30℃。
5.4 供试样品的制备将硝唑尼特片研细，精密称取适量（约相当于NTZ20mg），置50mL容量瓶中，加入乙腈超声处理15min，取出，放冷，乙腈稀释到刻度，再精密吸取2mL置10mL 容量瓶中，乙腈稀释至刻度，过0.45μm滤膜，弃去初滤液，吸取续滤液10μL 进样。
5.5 系统适用性试验按照供试样品的制备方法，配制6份同浓度的供试品样品进行分析，记录硝唑尼特的峰面积。
硝唑尼特主峰面积的相对标准偏差为0.23%，不大于2%，硝唑尼特保留时间的相对偏差为0.04%,小于1%，且理论塔板数均大于2000。
系统适用性试验表明，此色谱条件可以满足硝唑尼特片的分析需要。
表11-2-6：硝唑尼特含量检测系统适用性结果样品峰面积RSD 保留时间RSD 理论塔板数HPLC图1 999.840.23% 6.9670.04%10080 附图11-262 996.15 6.966 9875 附图11-275.6 辅料干扰性试验精密称取供试品适量，按照供试品样品制作方法配制供试品溶液，进样10µl ，记录色谱图，如图11.13；按照硝唑尼特片处方配制除硝唑尼特外的辅料供试品，称取适量（约22mg ），同样按供试品处理方法进行处理，进样10µl ，记录色谱图，如图11.14；由图可看出，空白辅料在346nm 处无紫外吸收，说明辅料不干扰本品的检测。
图11-2-2：硝唑尼特片HPLC 图图11-2-3：空白辅料HPLC 图5.7 专属性试验5.7.1 高温分解试验取硝唑尼特片，置于玻璃瓶内密封，置于105℃干燥箱中4h，冷却至室温，按照供试品处理方法制备样品(浓度约80μg/ml)，取10µl注入液相色谱仪中，记录色谱图11-2-4。
图11-2-4：硝唑尼特片高温试验HPLC图5.7.2 光照分解试验取硝唑尼特片，置于无色透明玻璃瓶内密封，置于光照试验箱中4500±500Lx光照10天，冷却至室温，按照供试品处理方法制备样品（浓度约80μg/ml），取10µl注入液相色谱仪中，记录色谱图11-2-5。
图11-2-5：硝唑尼特片光照射试验HPLC 图5.7.3 强酸破坏试验取片粉22mg ，加入1mol/l 盐酸2ml 破坏2h,加NaoH 调节pH 值至中性，将其全部转移至50mL 容量瓶中，加入乙腈超声处理15min ，取出，放冷，乙腈稀释到刻度，再精密吸取2mL 置10mL 容量瓶中，乙腈稀释至刻度，0.45μm 滤膜过滤，弃去初滤液，吸取续滤液10μL 进样，记录色谱图如下。
min246810mAU 020406080100DAD1 A, Sig=346,4 Ref =360,100 (LIUYUAN\10032205.D)6.9738.629图11-2-6：硝唑尼特片强酸破坏试验HPLC 图5.7.4 强碱破坏试验取片粉22mg ，加入1mol/lNaOH 溶液2ml 破坏2h,加HCl 调节pH 值至中性，将其全部转移至50mL容量瓶中，加入乙腈超声处理15min，取出，放冷，乙腈稀释到刻度，再精密吸取2mL置10mL容量瓶中，乙腈稀释至刻度，0.45μm滤膜过滤，弃去初滤液，吸取续滤液10μL进样，记录色谱图。
图11-2-7：硝唑尼特片强碱破坏试验HPLC图5.7.5 试验结果在给定的的色谱条件下，进行上述色谱分析，试验结果显示，在高温、强光、强酸和强碱的破坏性作用后，各种条件下均只出现了一个杂质峰，主峰与杂质峰均能达到基线分离，主峰与相邻杂质峰的分离度均大于2，表明此方法对硝唑尼特片含量测定有良好的专属性，对可能产生的有关物质有良好的分离度。
结果见表11-6。
表11-2-7：HPLC法含量测定专属性试验结果5.8标准曲线与线性关系及范围5.8.1线性关系的考察取干燥至恒重的NTZ对照品约10mg，精密称定，置50mL容量瓶中，加入适量乙腈超声处理10min，放冷至室温，乙腈稀释至刻度、摇匀，作为对照品溶液。
精密吸取1、2、3、4、5、6mL，分别置10mL容量瓶中，加乙腈稀释至刻度。
吸取10μL进样，以NTZ浓度（μg/mL）为纵坐标Y，峰面积积分值为横坐标X，进行线性回归，结果表明：NTZ浓度在20～120μg/mL范围内有良好的线性关系（分别见表8-1和图8-2）。
回归方程为：Y=0.0783X+2.0118，回归系数R2=0.9997。
图11-2-8 NTZ浓度-峰面积标准曲线图表11-2-8:线性关系表5.9 准确度验证（回收率试验）参考《兽用化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则》，在规定的线性范围内，选择三个不同的浓度，每个浓度各制备3个样品，共9个样品进行测定。
5.9.1高、中、低浓度的配制方法精密称取硝唑尼特对照品10mg置于50ml的量瓶中，按硝唑尼特片处方，加入处方量的辅料，加入乙腈超声处理15min，取出，放冷，乙腈稀释到刻度，再分别精密吸取1mL、4ml、6ml置10mL容量瓶中，乙腈稀释至刻度，0.45μm滤膜过滤，弃去初滤液，吸取10μL进样，记录色谱图，计算回收率，结果见表11-8。
结果低、中、高三种浓度的平均回收率分别为100.36%，100.02%和99.22%，9个回收率数据的RSD为0.59%（n=9），小于2.0%，表明此法准确度高，符合定量分析的要求。
表11-2-9：硝唑尼特片含量测定HPLC法回收率试验结果5.10 精密度试验5.10.1重复性按供试样品的制备方法，配制6份样品，各取10μl，注入液相色谱仪中，在上述色谱条件下进行测定，结果见表11-9，以硝唑尼特峰面积计，RSD为0.17%，小于2.0%，表明本方法的重复性良好。
表11-2-10：硝唑尼特片含量测定重复性试验结果5.10.2 中间精密度试验分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试。
按供试品的制备方法，配制6份样品，各取10 l，注入液相色谱仪中，在上述色谱条件下进行测定，结果见表11-10，以硝唑尼特峰面积计，所得12个数据的RSD为0.43%，小于2.0%，表明本方法的中间精密度良好。
表11-2-11 硝唑尼特片含量测定中间精密度试验结果5.11 定量限与检测限取干燥至恒重的NTZ对照品约10mg，精密称定，置50mL容量瓶中，加入适量乙腈超声处理10min，放冷至室温，乙腈稀释至刻度、摇匀，作为对照品溶液。
取硝唑尼特对照品溶液，采用逐步稀释法，用乙腈进行稀释。
当进样浓度为1µg/mL，连续测试2次，信噪比为10.8，接近10，色谱图见附图11-46、11-47。
因此，将硝唑尼特定量限定为1µg/mL。
稀释样品继续进样，当进样浓度为400ng/mL，连续测试2次，信噪比为3.8，接近3，色谱图见附图11-48、11-49。
