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甲状腺乳头状癌Survivin、p53表达与临床病理特征（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的探讨新的凋亡抑制基因survivin和抑癌基因p53在甲状腺乳头状癌组织中的表达与甲状腺乳头状癌发生发展、临床病理特征之间的关系。
方法应用免疫组织化学(SP法)，检测survivin、p53在102例甲状腺乳头状癌组织及10例结节性甲状腺肿组织中的表达。
结果102例甲状腺乳头状癌组织中survivin、突变型p53（mt-p53）基因的阳性表达率分别为66.7%和81.4％。
与良性病变组survivin、p53的阳性表达率30％、O％相比较二者差异有显著的统计学意义(P0.05)。
甲状腺乳头状癌组织中突变型p53及survivin 阳性表达率在不同性别、不同年龄、肿瘤大小，WHO大体分类及组织学分级间差异无显著性(P0.05)。
伴有淋巴结转移的甲状腺乳头癌组织中survivin的阳性表达率为79.5％，不伴有淋巴结转移者，survivin的阳性率为57.1%，二者差别有显著性(P0.05)。
突变型p53在甲状腺乳头状癌组织中表达的阳性率与淋巴结转移无关(P0.05)。
结论Survivin与mt-p53在甲状腺乳头状癌组织中表达上调。
Survivin表达与淋巴结转移有关,突变型p53表达与淋巴结转移无关。
【关键词】甲状腺乳头状癌survivinp53基因免疫组织化学遗传学研究表明甲状腺癌是多基因相关肿瘤，基因水平的变化可能在甲状腺癌的发生和发展过程中起到一个关键的作用[1]，survivin是凋亡抑制蛋白(IAP)家族的成员，survivin可对抗G2／M 期诱导的凋亡，在癌组织中过度表达克服凋亡检测点，通过有丝分裂促进转化细胞的异常增殖[2]。
P53为抑癌基因,survivin及mt-p53在大部分肿瘤组织中过表达与肿瘤细胞死亡缺陷关联密切。
・３９２・广东医学２０１０年２月第３ｌ卷第３期ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌＦｅｂ．２０１０。
ｖ０１．３１。
Ｎｏ．３Ｓｕｒｖｉｖｉｎ与ｐ５３相关性研究进展赵伟珠，王季茎△辽宁医学院附属第一医院肿瘤科（辽宁锦州１２１０００）肿瘤的发生和发展是一个多因素、多阶段、多基因参与的复杂过程，涉及多个癌基因的异常。
新近发现的凋亡抑制因子Ｓｕｒｖｉｖｉｎ和抑癌基因ｐ５３的过度表达与肿瘤的发生、发展和预后的关系成为研究的热点。
本文就Ｓｕｒｖｉｖｉｎ与ｐ５３相关性研究作一综述。
ｌＳｕｒｖｉｖｉｎ与ｐ５３的分子结构１．１Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的分子结构１９９７年。
耶鲁大学的ＡＭＢＲＯＳＩ．ＮＩ等…首次利用效应细胞蛋白酶受体一ｌ（ｃｅｌｌｐｒｏｔｅａｓｅｌ＇ｅ．－ｃｅｐｔｏｒ—ｌ，ＥＰＲ—１）ｃＤＮＡ在人类基因组库中筛选克隆出Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因。
人Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因位于１７ｑ２５染色体，全长１４７００ｂｐ，由４个外显子和３个内合子组成。
Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因上游２５６０～２９２０ｂｐ是Ｓｕｒｖｉｖｉｎ启动子区，缺少ＴＡＴＡ盒，而含有一个典型的ＣｐＧ岛，在读码框上游大约２００ｎｔ舍丰富的ＧＣ区，启动子区含２个ＡＰ２位点，３个ＮＦ一（Ｂ位点和１个ｓｐｌ住点，该区还有３个细胞周期依赖性元件（ｃｅｌｌ—ｃｙ．ｃｌｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｌｅｍｅｎｔ。
ＣＤＥ）。
１个细胞周期调控基因同源区（ｃｅｌｌｅｙｃｌｅｇｅｎｅｓｈｏｍｏｌｏｇｙｒｅｇｉｏｎ，ＣＨＲ）。
Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因编码产生一个由１４２个氨基酸组成的相对分子量为１６．５ｋＤ的蛋白，它以同源二聚体形式存在。
它是凋亡抑帝ｌ因子家族中分子量最小的成员，仅有一个Ｎ端的ＢＩＢ结构域和一个长的Ｃ端ｑ螺旋结构，其ＢＩＢ结构被认为在Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的抗凋亡功能中起重要作用，Ｃ端的卷曲结构可能和结合微管结构有关ｔ２１。
Ｓｕｒｖｉｖｉｎ分子包括３个互相分离的不同化学特性的表位，分别为ＢＩＢ结构中的酸性和碱性区域，ｄ螺旋结构表面的高疏水性区域，这种结构域符合蛋白间相互作用的需要【３１。
１．２ｐ５３的分子结构ｐ５３基因位于１７号染色体短臂１７ｑ１３．１，其ＤＮＡ全长１６～２０Ｋｂ，由１１个外显子和１０个内含子组成，外显子２．４、５、７、８编码５个进化高度保守的ｍＲＮＡ结构区，其蛋白质产物定位于细胞核，为一种含３９３个氨基酸的核蛋白，分子量约为５３ｋＤ。
在一级结构顺序分析的基础上，将ｐ５３蛋白分成了３个区：（１）氨基端，为酸性区，有１～８０位氨基酸残基，具高活性，易形成ａ螺旋结构，能与腺病毒ＥｌＢ蛋白、ＭＤＭ２蛋白、转录因子，ｒＢＰ结合；（２）富舍脯氨酸区域；（３）羧基端为碱性区，有３１９～３９３位氨基酸残基，为高活性的关键区域，易形成（Ｉｔ螺旋和转角结构，具有调节ＤＮＡ连接功能和寡聚体的作用。
正常的ｐ５３蛋白在细胞中易水解，半衰期为２０ｍｉｎ左右，而突变型ｐ５３蛋白构型发生改变，稳定性增加，导致半衰期的延长为２～１２ｈ，用免疫组织化学方法即可检测到，并且ｐ５３蛋白的异常表达与ｐ５３基因突变具有很好的相关性。
△通信作者。
Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｎｇｊｉｋ２００６＠１６３．ｃｏｍ２Ｓｕｒｖｉｖｉｎ与ｐ５３相互作用信号通路研究发现，在许多肿瘤中都存在Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因的过度表达和野生型ｐ５３基因的突变或缺失，因此，Ｓｕｒｖｉｖｉｎ与ｐ５３在肿瘤的发生发展过程中起着重要作用。
两者之间的关系密切，他们不仅通过直接信号通路，还通过ｐ２ｌ—Ｉｔｂ—Ｅ２Ｆ信号通路等相互作用，具体如下。
２．１Ｓｕｒｖｉｖｉｎ—ｐ５３信号通路ｐ５３诱导凋亡是对抗Ｓｕｒｖｉｖｉｎ蛋白抗凋亡的活性”Ｊ。
因此Ｓｎｒｖｉｖｉｎ基因是一个被野生型ｐ５３基因抑常】的基因，染色质免疫沉淀反应表明ｐ５３结合到Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因的启动子上，免疫结合实验表明这个结合住点与Ｅ２Ｆ转录因子的结合位点相重叠，并且与经典的ｐ５３反式激活元件稍微不同”Ｊ，并且ｐ５３结合Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的启动予是序列特异性的和有功能的，把ｐ５３与Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因的启动子结合能增加突变的ｐ５３基因上游启动子的活性。
通过对黑色素细胞ｓｉＲＮＡ介导的ｐ５３基因沉默没有影响到Ｒｂ的活性，这表明ｐ５３对Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的发挥作用是直接的№Ｊ。
有研究表明¨“１，野生型ｐ５３在体内可与Ｓｕｒｖｉｖｉｎ启动子结合，从而抑制Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因的转录和蛋白的表达。
过度表达的外源性Ｓｕｒｖｉｖｉｎ蛋白，可以明显抑制野生型ｐ５３诱导的细胞凋亡，而野生型ｐ５３相反也可以有效抑制Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因启动子的活性，在分子水平上提示了野生型ｐ５３对Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因转录的调节。
由此推测，由于ｐ５３基因的突变，丧失了时Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因转录的抑制作用，从而可以促进Ｓｕｖｉｖｉｎ基因的异常表达。
ＶＩＢＧＲＡＮ等【９１在人类乳腺癌的研究中发现Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的表达依赖ｐ５３的状况。
由突变型ｐ５３诱导的Ｓｕｒｖｉｖｉｎ表达上调可提高乳腺癌细胞在体内的生存并且桔抗治疗。
野生型ｐ５３在ｍＲＮＡ和蛋白水平抑制ＳｕｒｖｉｖｉｎＬ１０］，机制可能为（１）在Ｓｕｒｖｉｖｉｎ启动子上有ｐ５３结合位点，这个位点与Ｅ２Ｆ转录因子结合住点有部分重复，它提示我们ｐ５３对Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的抑制作用可能有部分是通过干扰Ｅ２Ｆ介导的反式激活Ｓｕｒｖｉｖｉｎ启动子而实现的，但它与ｐ５３反式激活元件有细微的不同，并且ｐ５３结合Ｓｕｒｖｉｖｉｎ启动子是序列特异性的。
Ｓｕｒｖｉｖｉｎ启动子荧光素酶报告基因分析显示，Ｓｕｒｖｉｖｉｎ启动子上ｐ５３结合位点明显位于２３０ｂｐ核心启动子区域；（２）转录激活因子Ｆ＿，２Ｆ也可结合到Ｓｕｒｖｉｖｉｎ启动子上，而ｐ５３对Ｆ２Ｆ具有亲和性，因此，ｐ５３和Ｅ２Ｆ也可能形成复合物来抑制Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因的表达；（３）ｐ５３与阻遏蛋白ＳｉＩｌ３及脱乙酰组蛋白（ＨＤＡＣ）形成ｐ５３一Ｓｉｎ３一ＨＤＡＣ复合物，结合到Ｓｕｒｖｉｖｉｎ启动子上，修改其染色体构型，导致转录因子Ｆ＿，２Ｆ转变为Ｅ２Ｆ—Ｒｂ复合物，从而抑制Ｓｕｒｖｉｖｉｎ异常表达【ｌ“。
ｐ５３与Ｓｕｒｖｉｖｉｎ启动子结合的这种差异性可能是ｐ５３基因的突变引起上游或下游存在各种各样的缺陷，这种缺陷使ｐ５３基因的功能折中甚至使ｐ５３突变的缺失。
２．２ｐ２１一助一Ｅ２Ｆ信号通路细胞周期有３个调控点，分万方数据广东医学２０１０年２月第３ｌ卷第３期ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌＦｅｂ．２０１０，Ｖ０１．３１，Ｎｏ．３别调控ＧＯ／Ｇ１、ＧＩ／Ｓ、Ｇ２／Ｍ。
Ｇ１期检查点，决定ＧＩ／Ｓ期转换，阻止受损ＤＮＡ进行复制；Ｇ２期检查点，决定Ｇ２／Ｍ期转换，阻止损伤的或不完全复制的ＤＮＡ进入有丝分裂。
Ｓｕｒ－ｖｉｖｉｎ在细胞Ｇ２／Ｍ集中表达，是细胞周期Ｇ２／Ｍ期的调节基因。
Ｓｕｒｖｉｖｉｎ端住启动子含有细胞周期依赖素（ＣＤＥ）和细胞周期同源区域（ＣＨＲ），这些区域与典型的Ｇ２／Ｍ期特征有通过阻断Ｇｌ期调节蛋白，进而抑制基本启动子而保持细胞周期连续性的作用。
ｐ５３主要通过阻滞Ｇｌ期和Ｇ２期采发挥作用。
ｐ５３通过调节其下游效应基因，如周期蛋白依赖性激酶相互作用蛋白一ｌ基因（ＣＤＫ—ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｎｌ，ＣＩＰＩ），野生型ｐ５３激活片段ｌ基因（Ｗｉｌｄ—ｔｙｐｅｐ５３一ａｃｔｉｖａｔｅｄｆｒａｇ－ｍｅｎｔ１．ＷＡＦｌ）以及生长阻滞和ＤＮＡ诱导损伤基因４５（ｇｒｏｗｔｈａｒｅｓｔａｎｄＤＮＡｄａｍａｇｅ—ｉｎｄｕｅ—ｔｉｏｎｇｅｎｅ４５．ＧＡＤＤ４５）等在ＤＮＡ损伤所致的Ｇ１／Ｓ停顿中起重要作用。
在ｐ５３调控的Ｇ２进入Ｍ期转换机制中，ｐ５３对细胞分裂周期基因２（ｃｅｌｌｄｉｖｉｓｉｏｎｃｙｃｌｅ，ｅｄｅ２）和细胞周期蛋白Ｂｌ（ｅｙｅ—ｌｉｎＢ１）的抑制使Ｇ２期发生阻滞。
另外，ｐ５３还可通过转录激活Ｂ９９基因¨引的表达引起Ｇ２期阻滞。
Ｓｕｒｖｉｖｉｎ蛋白是迄今发现的最强的凋亡抑制因子，通过与周期素依赖蛋白激酶一４（ｃｙｃｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ４，ＣＤＫ４）形成Ｓｕｒｖｉｖｉｎ／ＣＤＫ４复合体，导致ｐ２１从ｐ２Ｉ／ＣＤＫ４复合体中释放出来并作用于线粒体上的ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ一３，形成ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ一３／ｐ２１复合物，抑制ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ一３激活成活化的ｃａｓｐａｓｅ一３，从而阻止ｃａｓｐａｓｅ一３依赖的细胞凋亡途径；同时，ｐ２ｌ的解离使ＣＤＫ４活化，ＣＤＫ４可使Ｒｂ蛋白等抑癌物质磷酸化。
正常的Ｒｂ蛋白能和Ｅ２Ｆ结合形成复合物，使Ｅ２Ｆ丧失与ＤＮＡ的亲合性。
使Ｅ２Ｆ不能发挥转录功能，而磷酸化的ｌｉｂ蛋白则失去了此功能。
使细胞通过凋亡检查点进入Ｓ期。
继而带有ＤＮＡ损伤的细胞可以继续分裂，促进ＤＮＡ突变的积累嵋’１“。
同时ｐ２ｌ是ｐ５３下游的靶分子，ｐ２ｌ启动子有ｐ５３结合位点，ｐ２ｌ基因（ＷＡＦｌ／ＣＩＰｌ）转录被野生型ｐ５３活化，ｐ２ｌ是ｐ５３介导细胞周期停止所必需的。
ｐ５３蛋白可促进ｐ２１蛋白转录，ｐ２ｌ蛋白与线粒体Ｃａｓｐａｓｅ一３结合，抑制Ｃａｓｐａｓｅ活性，阻止细胞进入Ｓ期。
当ｐ５３基因突变时失去对ｐ２ｌ的调控使Ｓｕｒｖｉｖｉｎ蛋白更容易发挥这种作用。
因此ｐ５３的抑制作用涉及ｐ２ｌ／ｅｉｐｌ的级联反应，它抑制细胞周期依赖性激酶ｅｄｅ２，阻断Ｒｂ蛋白磷酸化，ｐＢＲ能同Ｅ２Ｆ家族转录因子形成复合物以抑制Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的表达¨“。
２．３ｐ５３一Ｍｄｍ２信号途径鼠双小蛋白２（Ｍｄｍ２）作为胱天蛋白酶（ｅ：ｔｌｓｐ鹊ｅ）的一个底物，同时Ｍｄｍ２是ｐ５３的转录靶基因，可在野生型ｐ５３基因的诱导下转录增强，细胞中Ｍｄｍ２蛋白水平增高，转而与ｐ５３结合，将ｐ５３从细胞核内转运到细胞浆中，诱导ｐ５３降解，或封闭ｐ５３转录活性，抑制ｐ５３诱导细胞周期停滞和细胞凋亡的功能，导致基因的不稳定及细胞增生，表现出癌基因蛋白作用，参与肿瘤形成¨引。
Ｓｕｒｖｉｖｉｎ通过抑制Ｃａｓｐａｓｅ对Ｍｄｍ２的剪切，减少其降解，以增加Ｍｄｍ２降解ｐ５３的机会，进而拮抗ｐ５３依赖的凋亡途径¨…。
ＷＡＮＧ等＂１用阿霉素处理ＢａＦ３和ＭＣＦ７细胞发现，Ｓｕｒｖｉｖｉｎ可以通过抑制胱天蛋白酶一３的活性。
在转录后水平使Ｍｄｍ２表达增高，从而使ｐ５３蛋白水平下降。
２．４ＣＤＣ２／ＣｙｃｌｉｎＢ１信号通路周期蛋白依赖性激酶ｌ・３９３・（ＣＤＣ２、ＣＤＫ２、ｃｙｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ—ｋｉｎａｓｅ）和Ｂ型细胞周期蛋白（ＣｙｅｌｉｎＢ１）的结合是细胞Ｍ期启动和进行的越要条件。
Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的结构中含有一个ｃｄｅ２／ｃｙｃｌｉｎＢ１特异性的磷酸化位点，它位于Ｓｕｒｖｉｖｉｎ１＇ｌｌｒ３４，这个位点对于Ｓｕｒｖｉｖｉｎ与多聚微管／有丝分裂纺锤体的相关性，以及在有丝分裂期Ｓｕｒｖｉｖｉｎ抑制ｅａｓｐａｓｅ一９的活性是必需的。
