亚胺培南和美罗培南体外诱导铜绿假单胞菌耐药的实验研究的开题报告

耐亚胺培南铜绿假单胞菌β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因研究的开题报告一、研究背景及意义随着临床耐药菌株的不断出现，抗生素耐药性已成为全球性的公共卫生问题。

其中，铜绿假单胞菌是一种高度耐受多种抗菌药物的病原菌，对公共卫生和临床医学造成了严重的威胁。

耐亚胺培南铜绿假单胞菌β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因的研究，可以深入了解耐药机制，为耐药菌株的防控提供理论基础和实践指导。

二、研究内容1. 鉴定耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药相关基因通过测序技术分析分离的耐药菌株，确定耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药基因。

2. 基因突变与耐药性关系研究通过对同一菌株在不同抗菌药物条件下的基因表达情况进行对比分析，确定不同基因突变与不同抗菌药物耐受性之间的关系。

3. 耐药机制研究通过对耐药基因的功能特性进行研究，探索铜绿假单胞菌的耐药机制。

4. 实验验证通过构建突变体和恢复菌株，进行基因功能验证，揭示基因突变与耐药性之间的关系。

三、研究方法和技术路线1. 耐药菌株分离收集耐亚胺培南铜绿假单胞菌临床分离菌株，并分离耐药菌株。

2. 基因组测序对同一菌株在不同抗菌药物条件下的基因组进行测序，并通过生物信息学分析确定基因区域。

3. 基因表达分析通过qPCR技术对同一菌株在不同抗菌药物条件下的基因表达情况进行检测，并进行差异分析。

4. 基因功能验证构建突变体和恢复菌株，并通过对其生长状况、菌群代谢物和抗菌药物敏感性的检测，验证基因突变与耐药性之间的关系。

四、预期成果1. 确定耐亚胺培南铜绿假单胞菌β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因。

2. 揭示不同基因突变与不同抗菌药物耐受性之间的关系。

3. 探索铜绿假单胞菌的耐药机制。

4. 为临床医学实践提供理论基础和实践指导。

五、研究进展及计划目前正在进行耐药基因鉴定和基因突变与耐药性关系的研究，预计于2022年完成耐药机制和基因功能验证的研究。

研究过程中将不断总结实验结果和经验，完善工作方案，最终取得预期成果。

铜绿假单胞菌对抗菌药物交叉耐药的体外研究的开
题报告
1. 研究背景和意义
铜绿假单胞菌是一种常见的医院感染病原体，它会引起各种严重的
感染，包括肺炎、腹腔感染、泌尿道感染等。

尽管铜绿假单胞菌已知存
在多种抗菌药物敏感性的耐药性机制，但是随着广谱抗菌药物的广泛应用，已发现一些铜绿假单胞菌对多种抗菌药物出现交叉耐药现象，这使
得治疗铜绿假单胞菌感染变得更为困难和复杂。

因此，研究铜绿假单胞
菌的交叉耐药现象及其耐药机制，对于临床制定更有效的抗菌治疗方案，具有重要的意义。

2. 研究目的
本研究旨在评估铜绿假单胞菌对抗菌药物的交叉耐药性，并探讨其
耐药机制，为对抗这种细菌感染提供一定的理论依据，并为开发新的治
疗方案提供一定的参考意义。

3. 研究内容和方法
本研究选取了临床分离的铜绿假单胞菌菌株进行体外实验，通过采
用药物敏感试验和药物杀菌曲线法对抗菌药物的敏感性和交叉耐药性进
行评估。

并通过PCR检测和测序分析铜绿假单胞菌的耐药机制，包括β内酰胺酶、四环素酶、氨基糖苷酶等。

4. 预期结果
本研究预期结果是，可以确定铜绿假单胞菌对抗菌药物的敏感性和
交叉耐药性，并探讨其耐药机制。

同时可以为临床医生提供更合理的治
疗方案，减少铜绿假单胞菌感染的发生及传播。

5. 研究意义
本研究的主要意义在于，对铜绿假单胞菌的耐药机制及交叉耐药现象进行分析和评估，为临床提供更有效的治疗方案，最终有助于降低铜绿假单胞菌感染在医院中的传播，提高患者的治愈率和生存率。

同时，本研究也可为今后开发新的抗菌药物提供更具有针对性的目标及理论基础。

对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌药敏情况分析目的了解对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌的药敏情况。

方法细菌的鉴定及药敏试验均采用法国梅里埃公司的VITEK-2微生物鉴定与药敏系统，选择经VITEK-2测定对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌（耐药株）136株及对亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌（敏感株）134株，统计分析两者对丁胺卡那、庆大霉素、头孢他啶、头孢他啶/阿奇霉素、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦等几种临床上常用抗生素的药敏情况。

结果耐药株对以上6种抗生素的敏感率分别为：丁胺卡那20.6％、庆大霉素19.1％、头孢他啶/阿奇霉素70.6％、头孢他啶27.9％、哌拉西林63.2％、哌拉西林/他唑巴坦72.1％；而敏感株对此6种抗生素的敏感率则分别为32.8％、68.7％、92.5％、65.7％、88.1％和89.6％，明显高于耐药株。

经x2检验，除丁胺卡那两者比较差异无统计学意义（P＞0.05）外，对其余5种抗生素的敏感率两者比较差异有统计学意义（P均＜0.05）。

结论对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌引起的感染，头孢他啶/阿奇霉素、哌拉西林/他唑巴坦、哌拉西林是较好的选择，而丁胺卡那、庆大霉素及单独使用头孢他啶则不推荐。

标签：亚胺培南；铜绿假单胞菌；耐药；敏感Resistance analysis of pseudomonas aeruginosa resisting to imipenemLI?Xiaojing1??CHEN?Wujia2??ZHONG?Yanling31.Department of Clinical Laboratory, the Fourth Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University, Guangzhou 511447, China;2.Department of Clinical Laboratory, the Central Hospital of Panyu of Guangzhou City, Guangzhou 511400,China;3.Department of Clinical Laboratory, the Chronic Disease Prevention and Control Station of Guangzhou City, Guangzhou 511400, China[Abstract] Objective To investigate the medical resistance of pseudomonas aeruginosa resisting to imipenem. Methods 136 strains of pseudomonas aeruginosa resisting to imipenem were identified and performed the antibiotic sensitivity test by VITKE-2 system.The antibiotic included amikacin, gentamycin, ceftazidime ceftazidime/azithromycin piperacillin, piperacillin/tazobactam. To analyze the medical resistance of 134 strains of pseudomonas aeruginosa sensitive to imipenem in contrast. Results The rates of sensitivity to these six kinds of antibiotics were amikacin 20.6%, gentamycin 19.1%, ceftazidime/azithromycin 70.6%, ceftazidime 27.9%, piperacillin 63.2%, piperacillin/tazobactam 72.1% respectively. These sensitivity rates were apparently lower than the rates of the strains of pseudomonas aeruginosa sensitive to imipenem which were 32.8%,68.7%,92.5%,65.7%,88.1% and 89.6% respectively.There were significant differences during the five kinds of antibiotics (P＜0.05) except amikacin (P＞0.05) between two kinds of strains of pseudomonas aeruginosa. Conclusion Ceftazidime/azithromycin, piperacillin/tazobactam, and piperacillin would have better effect in treating the infection aroused by pseudomonas aeruginosa resisting to imipenem. But amikacin,gentamycin and ceftazidime are not recommended.[Key words] Imipenem;Pseudomonas aeruginosa;Antibiotics resistance;Antibiotic sensitivity铜绿假单胞菌是临床常见的条件致病菌，是医院感染的重要致病菌之一，尤其对于免疫力低下的重症病患者，常会引起院内获得性肺炎，铜绿假单胞菌引起的肺炎病死率可以高达30％以上[1]。

铜绿假单胞菌近7年的耐药性变迁及其抗生素应用
分析的开题报告
一、选题背景
近年来，铜绿假单胞菌的感染在临床医学中越来越常见。

铜绿假单胞菌常见于水、土壤及人体内，是一种革兰阴性杆菌。

它广泛存在于医院环境中，尤其是在ICU等重症监护区内，易引起严重感染，给患者带来了很大威胁。

铜绿假单胞菌的耐药性问题已成为世界范围内的重大问题。

该细菌对多种抗生素已经产生了耐药性，并对抗菌药物的应用产生了限制，给治疗带来了很大的困难。

因此，对于铜绿假单胞菌的耐药性变迁和抗菌药物的应用分析，有助于促进临床治疗的有效性和安全性。

二、研究内容
本研究的目的是调查近7年铜绿假单胞菌的耐药性变化情况，并分析抗菌药物的应用现状。

具体研究内容包括：
1. 收集近7年来国内外铜绿假单胞菌相关文献，整理耐药性变化趋势。

2. 调查目前临床上用于治疗铜绿假单胞菌感染的主要抗菌药物，收集相关数据并分析。

3. 探讨影响铜绿假单胞菌感染抗生素治疗效果的因素。

三、研究意义
铜绿假单胞菌的感染治疗已经成为临床医学中的难题。

本研究可以深入了解近7年来铜绿假单胞菌的耐药性变化情况，并分析当前临床用于治疗该病的主要抗菌药物，为临床医学提供指导。

同时，本研究可为临床医生提供更合理、更有效、更安全的药物治疗选择，从而优化抗菌药物的使用，减轻临床用药的负担，增加抗感染治疗效果，达到更好的治疗效果。

铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制研究的开题报
告
题目：铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制研究
研究背景：
铜绿假单胞菌是常见的医院感染病原菌之一，其对多种抗生素的耐药性日益增高，导致铜绿假单胞菌感染的治疗十分困难。

亚胺培南是目前用于治疗铜绿假单胞菌感染的重要抗生素之一，但铜绿假单胞菌对亚胺培南也出现了耐药现象。

因此，探究铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制，对于改善铜绿假单胞菌感染的治疗效果具有重要意义。

研究内容：
1.收集铜绿假单胞菌临床分离菌株，并对其进行药敏试验，筛选耐亚胺培南的菌株。

2.利用三明治酶联免疫吸附实验（ELISA）检测铜绿假单胞菌中β-内酰胺酶（β-lactamase）的含量。

3.使用荧光定量PCR检测铜绿假单胞菌的porin编码基因oprD的表达水平。

4.利用Western blotting技术检测铜绿假单胞菌中外膜蛋白(carbapenem-resistant outer membrane protein, CarO)的含量。

5.应用传递酶联免疫吸附实验（Transfer ELISA）检测药物外排泵（drug efflux pumps）在铜绿假单胞菌中的表达。

6.对得到的结果进行分析和比较，初步探究铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制。

研究意义：
通过对铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制的研究，可以为铜绿假
单胞菌感染的治疗提供科学依据，同时对开发新的抗生素也有借鉴意义。

耐亚胺培南的铜绿假单胞菌的研究铜绿假单胞菌是一种临床上常见的医院内的条件致病菌，本研究通过对耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药分析，了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药机制，以利于临床合理用药。

现报导如下。

1 资料与方式资料(1)菌株：搜集自200５年1至12月本院ＶＩＴＥＫ－３２仪检出的耐亚胺培南铜绿假单胞菌２２株。

铜绿假单胞菌标准菌株ATCC 27853一株；(2)药敏纸片：头孢塞肟、头孢曲松、头孢他定、亚胺培南；(3)OprD2基因扩增试剂盒：裂解液A、裂解液B、反映液、耐热酶、阳性模板；(4)其他：%（EDTA·K2+NA2HPO4），无菌生理盐水，M-H平板，血平板等。

方式(1)纸片扩散法初筛：将新分离的纯菌种配成密涂于M-H琼脂平板（Φ70mm）10min后于平板中央贴上EDTA纸片，纸片分2组：1组为头孢塞肟、头孢曲松，在距离EDTA纸片1cm处对称别离贴上头孢塞肟和头孢曲松。

另1组为头孢他定、亚胺培南，在距离EDTA纸片1cm处别离贴上头孢他定、亚胺培南。

35℃培育24h后观看结果。

结果判定：①显现协同现象可能为产金属酶；②不显现协同现象可能为膜通透障碍或既产金属酶又有膜通透障碍；(2)粗提酶（冻融裂解法）将新分离的纯菌种配成,取50μl于肉汤中35℃培育增菌24h后取1ml 于离心管（）中，-80℃反复冻融数次，培育无菌生长后于4℃离心机，以10000转/min离心25min，取上清液后-80℃保留待用；(3)改良三维实验［１］：将铜绿假单胞菌标准株ATCC27853配成密涂于M-H平板（Φ90mm）待干后于平板中央贴上亚胺培南纸片，距纸片2mm处别离成180°打2个宽1mm、长2cm的槽（标明①②），在①加酶粗提液20μl、②加酶粗提液+EDTA（9：1）35℃培育24h后判定结果结果判定：①有扩大生长、②抑菌圈滑腻完整那么为产金属酶；②有扩大生长、①抑菌圈滑腻完整那么为产金属酶之外的碳青酶烯酶；①、②抑菌圈均滑腻完整那么为膜通透性障碍；(4)PCR：菌株处置：挑取少量新分离的纯菌种置入内含无菌生理盐水（100μl）的离心管（），离心15000rmp5min，弃上清液，加裂解液A 50μl，裂解液B 2μl，混匀后置入55℃保温1h后置入95℃保温5min ，离心10000rpm30 min，上清液即为扩增的模板液。

比阿培南和亚胺培南、美罗培南对铜绿假单胞菌体外抗菌活性分析金浩;居会祥【摘要】@@ 铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)是一种常见的院内获得性感染的条件致病菌,该菌耐药性强,耐药谱广,对多种抗菌药物表现为天然或获得性耐药[1],故治疗时可供选择的抗菌药物甚少.碳青霉烯类抗生素(carbopenem-santi biotics,CA)是临床常用于治疗包括铜绿假单胞菌在内的对其他β-内酰胺类抗生素耐药的革兰阴性杆菌的抗生素,然而,近年来随着此类抗生素在临床上的广泛应用,对亚胺培南等碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌株逐年增多,且常呈多重耐药,甚至对常见抗生素全部耐药[2],使临床治疗变的极为棘手.【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2011(033)014【总页数】2页(P2205-2206)【关键词】比阿培南;铜绿假单胞菌;抗菌活性【作者】金浩;居会祥【作者单位】224001,江苏省盐城市第三人民医院检验科;224001,江苏省盐城市第三人民医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R97铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa，PA)是一种常见的院内获得性感染的条件致病菌，该菌耐药性强，耐药谱广，对多种抗菌药物表现为天然或获得性耐药［1］，故治疗时可供选择的抗菌药物甚少。

碳青霉烯类抗生素(carbopenem-santi biotics，CA)是临床常用于治疗包括铜绿假单胞菌在内的对其他β-内酰胺类抗生素耐药的革兰阴性杆菌的抗生素，然而，近年来随着此类抗生素在临床上的广泛应用，对亚胺培南等碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌株逐年增多，且常呈多重耐药，甚至对常见抗生素全部耐药［2］，使临床治疗变的极为棘手。

比阿培南(biapenem)是一种由日本Lederle公司和美国氰胺公司最初开发的新型注射用1β-甲基碳青霉烯类抗生素，具有超广谱的抗菌活性，尤其对铜绿假单胞菌具有强力抗菌活性，且对多种β-内酰胺酶稳定［3］。

铜绿假单胞菌对抗生素耐药机制的研究的开题报告
题目：铜绿假单胞菌对抗生素耐药机制的研究
背景和意义：
铜绿假单胞菌是一种常见的医院感染病原菌，对多种抗生素表现出不同程度的耐药性。

随着抗生素的广泛使用，铜绿假单胞菌的耐药性日益增强，严重威胁人类健康。

因此，研究铜绿假单胞菌的抗生素耐药机制对于制定有效的防治策略具有重要意义。

研究目标：
本研究旨在探究铜绿假单胞菌对抗生素的耐药机制，为进一步制定合理有效的预防和治疗策略提供理论基础。

研究内容和方法：
1. 收集铜绿假单胞菌的临床分离菌株，通过药敏试验筛选出多重耐药菌株。

2. 通过全基因组测序及生物信息学分析，获得多重耐药铜绿假单胞菌菌株的基因组信息，并进行比较分析。

3. 利用定量PCR、Western blot以及荧光定量实时PCR等方法，探究耐药菌株耐药与相应耐药基因表达水平的关系。

4. 利用透射电子显微镜对耐药菌株和非耐药菌株进行细胞学观察，比较其生长特性、细胞壁合成及代谢活性等方面的差异。

预期结果：
1. 确定铜绿假单胞菌的耐药机制和相关耐药基因；
2. 探究耐药菌株与非耐药菌株之间在细胞学特征上的差异；
3. 为铜绿假单胞菌的耐药特点及其机制的研究提供新的实验思路和方向。

研究意义：
本研究可以深入探究铜绿假单胞菌的耐药机制及其分子基础，为未来的耐药性研究提供新的思路和方向，同时为防治铜绿假单胞菌感染提供理论依据。