医学-临床生物化学检验常用技术

临床生物化学检验的常用技术探析临床生物化学检测基于生物化学原理，对人体生理产物和提取物进行定性定量的生物化学分析，下面是为大家的一篇探究临床生物化学检验常用技术的，欢送阅读查看。

1.1 生物化学生物化学是研究在生命体发生的化学反响和生命体化学组成的学科，是生物与化学的穿插专业，属于生物学的一个分支。

生物化学研究的主要对象是组成生物体的一些成分，如蛋白质、核酸、糖和无机物，从离子反响到酶促反映，从物质代谢到遗传变异，都属于生物化学的研究范畴。

生物化学能够对生命体的化学本质进行阐述，因此对疾病的检验治疗具有重要意义。

1.2 临床生物化学检验生物化学能够对生命体内的生物化学反响进行较为明确的研究，因此迅速被应用到医疗行业，临床生物化学检验就是利用生物化学的知识构建起的对有关生理和疾病的化学成分进行研究分析的方法。

通常，临床生物化学检验是采集人体的体液，对体液中的特定物质进行定性定量的分析，以判断人体生理状况和疾病状况。

临床生物化学检验在现代医学中扮演了重要角色，对大多数疾病的诊断和观察，都有不可替代的作用。

生物化学检验在临床上的应用，从传统的化学实验室方法，到现在的生化自动化体外检测，再到未来的生物芯片技术，开展历程是从定性到定量，从人工到自动，从缓慢到高通量，从人工数据分析到计算机信号分析，其在临床中与影像学检验扮演了医学诊断最核心的两个手段[1].目前为止，生物化学检验的领域大多在疾病的检测和相关生理数据的监控上，在蛋白质等大分子和无机离子层面得到广泛应用。

2.1 光谱分析技术光谱技术是现代物理中有效测定物质组成和含量的方法，该方法在物理学，考古学等领域都有极大的运用，而将其利用到临床，也能开展出一套完善的物质检测技术。

光谱分析技术是临床生物化学检验最常用的技术。

该技术主要是利用物质对特定的光谱具有吸收或者发射或者散射的能力，来通过检测光谱对物质的种类和含量进行分析。

按照物质发射光谱的能力进行临床检验的方法有火焰光度法、原子发射光谱法和荧光光谱法，分别检验特定物质发射的光谱来确定该物质的种类和量，其中火焰分析法，利用物质被电弧或者火花的作用，产生高温气态时变成等离子体，检测其激发的光谱，来确定物质组分和含量。

生物化学检验常见考点总结一、临床化学基本概念临床化学是化学、生物化学和临床医学的结合，有其独特的研究领域、性质和作用，它是一门理论和实践性均较强的，并以化学和医学为主要基础的边缘性应用学科，也是检验医学中一个独立的主干学科。

二、临床化学检验及其在疾病诊断中的应用1.技术方面：达到了微量、自动化、高精密度。

2.内容方面：能检测人体血液、尿液及体液中的各种成分，包括糖、蛋白质、脂肪、酶、电解质、微量元素、内分泌激素等，也包含肝、肾、心、胰等器官功能的检查内容。

为疾病的诊断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防等各个方面提供理论和试验依据，也促进了临床医学的发展。

第一章糖代谢检查一、糖的无氧酵解途径（糖酵解途径）★概念：在无氧情况下，葡萄糖分解生成乳酸的过程。

1、关键酶：己糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶2、三步不可逆反应：①葡萄糖磷酸化成为葡萄糖-6-磷酸，由己糖激酶催化。

为不可逆的磷酸化反应，消耗1分子ATP。

②果糖-6-磷酸磷酸化，转变为1,6-果糖二磷酸，由磷酸果糖激酶催化，消耗1分子ATP。

是第二个不可逆的磷酸化反应。

③磷酸烯醇式丙酮酸经丙酮酸激酶催化将高能磷酸键转移给ADP，生成丙酮酸和ATP，为不可逆反应。

3、两次底物水平磷酸化（产生ATP）：①1,3-二磷酸甘油酸→3-磷酸甘油酸②磷酸烯醇式丙酮酸→丙酮酸4、1分子的葡萄糖通过无氧酵解可净生成2个分子ATP，糖原可净生成3分子ATP，这一过程全部在胞浆中完成。

5、生理意义：（1）是机体在缺氧/无氧状态获得能量的有效措施。

（2）机体在应激状态下产生能量，满足机体生理需要的重要途径。

（3）糖酵解的某些中间产物是脂类、氨基酸等的合成前体，并与其他代谢途径相联系。

依赖糖酵解获得能量的组织细胞有：红细胞、视网膜、角膜、晶状体、睾丸等。

二、糖的有氧氧化★概念：葡萄糖在有氧条件下彻底氧化成水和二氧化碳的过程，是糖氧化的主要方式。

1、四个阶段：①葡萄糖或糖原经糖酵解途径转变为丙酮酸；②丙酮酸从胞浆进入线粒体，氧化脱羧生成乙酰辅酶A；③乙酰辅酶A进入三羧酸循环，共进行四次脱氢氧化产生2分子CO2，脱下的4对氢；④经氧化脱下的氢进入呼吸链，进行氧化磷酸化，生成H2O和ATP。

第二章临床生物化学实验技术一、光谱检验技术利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征，以此来确定物质性质、结构或含量。

在临床生物化学检验中，光谱分析是一类十分重要的技术，应用极为广泛。

它既可以研究物质的结构分析，也可以对特定物质进行定性或定量的分析根据物质对光谱响应特征的不同，可把光谱检验技术分为发射光谱分析技术、吸收光谱分析技术和散射光谱分析技术三大类。

可见-紫外光分光光度法利用朗伯－比尔定律作为化学反应定量的基础，应重点掌握该定律的应用、使用条件和各个变量间的关系，从而根据已有的结果计算需要的变量。

吸光系数是表示物质特性的常数，是物质鉴定的基础，根据物质的吸光系数可以进行定量测定，但应注意其使用的条件。

在化学反应中尽量选择吸光系数大的物质，可以提高测定的灵敏度。

在分光光度法的建立中，应掌握波长的选择、双波长测定的原理和抗干扰的原理。

在可能的情况下应选择灵敏度高、选择性好的显色剂，同时需要应用适当的校准方式和计算方程式。

在定量分析中，大量使用分光光度计。

该类仪器属于比较精密的分析计器，使用要求比较严格。

其中单色光的纯度和波长的准确性直接影响到测定结果的准确性和精密度。

在使用前和使用过程中应进行光源的检查和波长的校正。

原子吸收分光光度法是基于光源辐射出具有待测元素特征谱线的光，通过原子化器，被其中待测元素的基态原子所吸收，根据吸收而导致辐射特征谱线光被减弱的程度来测定待测元素的含量。

与其它分析方法比较，它具有灵敏、准确、分析速度快、干扰少、无需化学反应和测量元素含量范围较广等优点。

由于其检测灵敏度较高，操作环节比较多，而且每种元素需要一种的光源灯，因此在临床实验室一般较少应用于常规分析。

荧光分析法是利用某些物质吸收了一定波长的光能后，分子从基态跃迁到激发态，此类电子经与同类分子或它种分子相互碰撞，消耗相当，而下降至第一电子激发态的最低振动能阶。

最低能阶下降到基态，同时发射出比原来所吸收的频率较低，波长较长的光能，称为荧光。

自动生化分析仪实际K值测定实际K值：理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度，尤其是ε的影响。

ε在波长和温度等不同时有所不同，故有必要获得用户所用分析仪的实际ε，再计算K值，此为~。

一、340nm波长实际K值测定【实验原理】：通过有NAD+（NADP+）参与的反应途径，用NADH或NADPH标准液来校正仪器。

用己糖激酶（HK）方法测定葡萄糖时，葡萄糖的消耗与NADH的生成呈等摩尔关系。

葡萄糖有标准纯品，当反应达到终点时，NADH的摩尔数等于标准的葡萄糖摩尔数。

在需要校正的仪器上测其A即可求得实际摩尔吸光系数，计算出实际K值。

【注意事项】1．减少偶然误差重复测定10次，当CV>5％时，则重新测定10次。

2．减少系统误差使用实际K值计算酶活性。

3．如果实际ε值与理论ε值偏差过大，需对仪器检修和校正。

二、405nm波长实际K值测定【实验原理】：许多酶活性测定时，以人工“色素原”为底物，经酶作用后可释放出在405nm 波长具有吸收峰有色的反应产物，如对硝基苯酚(4-NP)、对硝基苯胺(4-NA)、对硝基-5-氨基苯甲酸(ANBA)。

他们在405nm波长时的理论ε分别为18 700、9 870、9 490。

可使用其相应的纯标准品在需要校正的仪器上测其A即可求得实际ε，计算出实际K值。

以ALP实验(产物为4-NP) 为例测定实际K值。

【注意事项】1．4-NP标准品纯度要求较高，必要时需纯化。

2．其他注意事项参见340nm K值校正。

三、如何校正K值在理论K值或实际K值得情况下，测定某标准品的含量，若测得的结果偏低，则需要把测得的结果调整至原标准品的含量，此时调整的数值称为校正因子，则校正K值=理论（实际）K值×校正因子=理论（实际）K值×校准值÷实测值NADH正负向反应测定酶活性一、血清乳酸脱氢酶测定LD催化反应式为：L-乳酸+ NAD+（LD）→丙酮酸+ NADH + H+在反应过程中，乳酸被氧化生成丙酮酸，同时NAD+还原为NADH。

临床生物化学检验技术
临床生物化学检验技术是医学检验技术专业的一门核心课程，它涉及到应用生物化学原理和技术来分析人体样本（如血液、尿液等），以诊断疾病、监测治疗效果、评估健康状况等。

这门课程的内容通常包括以下几个方面：
1.蛋白质和蛋白质组学：研究蛋白质的生理功能、结构性质以及在疾病状态下的变化，包括血浆蛋白如白蛋白、球蛋白等的检测。

2.酶学检测：酶在生物体内的代谢过程中扮演着关键角色，酶学检测可以用来诊断特定的疾病，如肝功能、心肌损伤等。

3.代谢物检测：分析血液或尿液中的代谢物，如葡萄糖、血脂、电解质等，以评估代谢异常。

4.酸碱平衡检测：通过测定血液pH来评估体内的酸碱平衡状态，这对诊断和监测某些疾病（如肾脏疾病、呼吸系统疾病）非常重要。

5.激素检测：检测血液中的激素水平，如甲状腺激素、胰岛素等，对于内分泌疾病的诊断和治疗至关重要。

6.血栓与止血检测：包括凝血因子活性、血小板功能等的检测，对于血栓性疾病和出血性疾病的诊断与治疗具有重要作用。

7.免疫学检测：利用免疫学技术检测血液中的抗体、抗原、细胞因子等，以诊断感染性疾病、自身免疫性疾病等。

8.遗传性疾病检测：通过分析DNA或RNA来诊断遗传性疾病，这在现代医学中越来越重要。

临床生物化学检验技术的目的是培养学生具有独立完成临床生
化检验项目的工作能力，包括理解检验的原理、操作技术、结果解释等。

此外，该课程还会涉及到实验室质量控制、临床应用评价等方面，以确保检验结果的准确性和临床有效性。

通过本课程的学习，学生将能够为未来的职业生涯做好准备，包括在医院、诊所、科研机构或体外诊断公司等领域的工作。

临床生物化学检验：既是一门研究人体健康和疾病时的医学基础理论学科，又是一门应用各种技术和方法检验机体健康和疾病的医学应用学科。

量值溯源：用参考测量程序或参考物质建立或验证常规检验结果的准确性。

实验室信息管理系统：是对实验室日常工作、科室管理、学科建设和实验发展等方面所产生及所需求的信息，通过计算机收集、处理、存储、输送和应用的系统。

临床诊断试验：是指临床上用于确定或排除疾病的方法或项目。

临床生物化学诊断试验：是指临床生物化学实验室中用于疾病诊断、筛查和监测的方法或项目。

参考值区间：指所有参考值剔除离群值并补充数据后在95%的分布范围。

金标准：指当前为临床医学界公认的诊断某种疾病最可靠的诊断方法，可通过活检、尸检、外科手术、随访等所作出的决定性诊断，又称确诊试验。

临界值：指划分诊断试验结果正常与异常的界值，又称阈值、分界值等。

医学决定水平：临床上按照不同病情给予不同处理的指标阈值。

ROC曲线：以真阳性率为纵坐标，假阴性率为横坐标，将相对应的各临界值连接起来的折线图。

国际单位（IU）:是指在特定条件下，将1min 内能转化1umol底物的酶量定为一个国际单位。

定时法：是将酶与底物在特定条件下孵育一定时间后，用终止夜终止反应，通过化学或生物化学的方法测出底物或产物的总变化量，除以时间后，计算出底物消耗速度或产物生成速度。

连续监测法：是将酶与底物在特定条件下孵育，每隔一定时间连续测定酶促反应过程中某一底物或产物的特征信号的变化，从而计算出每分钟的信号变化速率。

最适条件：是指能满足酶发挥最大催化效率所需的条件。

代谢物酶法分析技术：是指用酶法分析的方法来测定人体内的代谢物或代谢产物的技术。

酶法分析：是以酶为试剂测定酶促反应的底物、辅酶、辅基、激活剂或抑制剂，以及利用酶偶联法测定酶活性的一类方法。

肿瘤标志物：是指在恶性肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌的或是由机体对肿瘤反应而异常产生和升高的，反映肿瘤存在和生长的一类物质。

生物化学检验常用技术生物化学检验是医学领域中非常重要的一个环节，它通过对人体体液、组织和细胞中的化学成分进行分析和测定，为疾病的诊断、治疗和预防提供重要的依据。

在生物化学检验中，有许多常用的技术，下面我们就来一一介绍。

一、光谱分析技术光谱分析技术是利用物质对不同波长的光的吸收、发射或散射特性来进行分析的方法。

其中，最常见的是分光光度法。

分光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法。

它通过测量物质在特定波长下的吸光度，来计算物质的浓度。

这种方法操作简单、快速、灵敏度较高，广泛应用于测定蛋白质、核酸、糖类、酶等生物大分子的含量。

另外，原子吸收光谱法也是光谱分析技术中的一种重要方法。

它主要用于测定金属元素的含量，在生物化学检验中常用于检测血液、尿液等样本中的微量元素，如铁、锌、铜等。

二、电化学分析技术电化学分析技术是基于物质在溶液中的电化学性质而建立的分析方法。

其中，电位分析法是一种常见的电化学分析技术。

电位分析法通过测量电极电位来确定溶液中物质的浓度。

例如，在pH 测定中，使用玻璃电极和参比电极组成电池，根据测量的电位值计算溶液的 pH 值。

此外，电导分析法通过测量溶液的电导来确定物质的含量。

这种方法常用于水质分析和电解质浓度的测定。

三、色谱分析技术色谱分析技术是一种分离和分析混合物中各组分的有效方法。

常见的色谱技术包括气相色谱法和液相色谱法。

气相色谱法适用于分析挥发性和热稳定性较好的化合物。

在生物化学检验中，可用于检测血液中的药物浓度、脂肪酸组成等。

液相色谱法则适用于分析热不稳定、不易挥发的大分子化合物，如蛋白质、核酸等。

高效液相色谱法（HPLC）具有分离效率高、灵敏度高、分析速度快等优点，广泛应用于生物化学检验中的药物分析、激素测定等领域。

四、免疫分析技术免疫分析技术是利用抗原与抗体的特异性结合反应来进行检测的方法。

常见的免疫分析技术包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫分析（RIA）和化学发光免疫分析（CLIA）等。