第三章 常用生物化学检验技术PPT课件
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生物化学检验ppt课件
酶类CK-MB,α-AMY等。
底物/代谢产物类：包括TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA， UREA，Cr，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，NH4+,CO2 等。
无机离子类：包括Ca，P，Mg，Cl 等。
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
吸收曲线
波长从200nm-400nm 的电磁波，称为紫外光，波长从400nm-760nm 的电磁波，称为可见光。以波长(λ)为横坐标，以吸光度为纵坐标而绘 制出的一条曲线称为吸收曲线，在一段波长范围内，有最大吸收波长 λmax 和最小吸收波长λmin，在最大吸收波长处测定可获得最大的测 定灵敏度。
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
二、连续监测法
连续监测法属于动态法检测的一种，适用于酶活性测 定和代谢物检测，多有酶的参与。该法是通过适当的 仪器，连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物 的浓度随时间变化的情况。原理是：在酶反应的最适 条件下，用物理、化学或酶促反应的分析方法，在反 应速度恒定期（零级反应期）来连续观察和记录一定 时间内底物或产物量的变化，以单位时间酶反应初速 度计算出酶活力大小代谢物的浓度。计算方法有：1） 绝对法：酶活力（U/L）=△A×（反应液体积/样品体 积）×（1000/消光系数）；2）相对法：酶活力 （U/L）=〔 △A （测定）/ △A （标准） 〕标准物的 活力或浓度。
两点终点法
两点终点法也称因定时间法，它可以用一种试剂或两 种试剂。这种方法是近年来，可加双试剂的生化分析 仪问世后，才被广泛应用。优点是可以消除样品、试 剂的颜色、浊度，以及一些干扰物对测定的干扰。原 理是：加入样品→试剂1 →读取A1 →试剂2 →读取 A2，其中要读取两次吸光度值，第一次相当于读出样 品空白的值，加入试剂2至第二次读数才是实际呈色 反应，因此A=A1-A2。比浊法也是一种终点法，不过 是一种浊度测定，而不是比色测定。比浊法可分为化 学比浊法与免疫比浊法，免疫比浊法又分为透射比浊 法和散射比浊法。免疫比浊法目前主要用于血清特种 蛋白的测定，如载脂蛋白(apoAI,apoB 等)、补体类(C3、
底物/代谢产物类：包括TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA， UREA，Cr，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，NH4+,CO2 等。
无机离子类：包括Ca，P，Mg，Cl 等。
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
吸收曲线
波长从200nm-400nm 的电磁波，称为紫外光，波长从400nm-760nm 的电磁波，称为可见光。以波长(λ)为横坐标，以吸光度为纵坐标而绘 制出的一条曲线称为吸收曲线，在一段波长范围内，有最大吸收波长 λmax 和最小吸收波长λmin，在最大吸收波长处测定可获得最大的测 定灵敏度。
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
二、连续监测法
连续监测法属于动态法检测的一种，适用于酶活性测 定和代谢物检测，多有酶的参与。该法是通过适当的 仪器，连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物 的浓度随时间变化的情况。原理是：在酶反应的最适 条件下，用物理、化学或酶促反应的分析方法，在反 应速度恒定期（零级反应期）来连续观察和记录一定 时间内底物或产物量的变化，以单位时间酶反应初速 度计算出酶活力大小代谢物的浓度。计算方法有：1） 绝对法：酶活力（U/L）=△A×（反应液体积/样品体 积）×（1000/消光系数）；2）相对法：酶活力 （U/L）=〔 △A （测定）/ △A （标准） 〕标准物的 活力或浓度。
两点终点法
两点终点法也称因定时间法，它可以用一种试剂或两 种试剂。这种方法是近年来，可加双试剂的生化分析 仪问世后，才被广泛应用。优点是可以消除样品、试 剂的颜色、浊度，以及一些干扰物对测定的干扰。原 理是：加入样品→试剂1 →读取A1 →试剂2 →读取 A2，其中要读取两次吸光度值，第一次相当于读出样 品空白的值，加入试剂2至第二次读数才是实际呈色 反应，因此A=A1-A2。比浊法也是一种终点法，不过 是一种浊度测定，而不是比色测定。比浊法可分为化 学比浊法与免疫比浊法，免疫比浊法又分为透射比浊 法和散射比浊法。免疫比浊法目前主要用于血清特种 蛋白的测定，如载脂蛋白(apoAI,apoB 等)、补体类(C3、
生物化学检验常用分析技术PPT
第一节光谱分析技术
光谱分析（分光光度技术）：利用各种化学物质所具有的发射、吸收或散射光谱 谱系的特征，来确定其性质、结构或含量的技术，称为光谱分析技术。 特点：灵敏、快速、简便。是生物化学分析中最常用的分析技术。
光谱分析技术分类
一、吸收光谱分析法
吸光度与透光度 光照射到物质可发生折射、反射和透射,一部分光会被物质吸收，一部分光被溶液透 过，另一部分光被散射。 设入射光强度为I0，透射光强度为I，透射光强度与入射光强度的比值称为透光度，也 叫透ห้องสมุดไป่ตู้率，以T表示。
二、 发射光谱分析法 （一）火焰光度法 1、火焰光度法的定义 火焰光度法是利用火焰中激发态原子回降至基态时发射的光谱强度进行含量分 析的方法,用光电检测系统测量被测元素所发射的辐射强度来进行定量分析的方法。 它是一种简化的发射光谱分析法。
样品中待测元素激发态原子的发射光强度Ⅰ与该元素浓度C呈正比例关系， 即Ⅰ＝aC，式中a为常数，与样品组成、蒸发和激发过程有关。
I kbc T 10 I0
在光谱分析中，常常用吸光度表示溶液对入射光的吸收程度。吸光度与透光度的关系 是：吸光度等于透光度的负对数，用A表示吸光度，有下列公式关系。
I I0 1 A lg T lg lg lg kbc I0 I T
I I0 1 A lg T lg lg lg kbc I0 I T
物质呈现各种各样颜色，就是它们对可见光 中某些特定波长的光线选择吸收的结果。
待测管 2 待测管 1 标准管 试剂空白管
物质颜色和吸收光颜色的关系
吸 物质颜色 颜
黄 黄 绿 紫 蓝
收 波
400 ~ 450 450 ~ 480
光 长(nm)
光谱分析（分光光度技术）：利用各种化学物质所具有的发射、吸收或散射光谱 谱系的特征，来确定其性质、结构或含量的技术，称为光谱分析技术。 特点：灵敏、快速、简便。是生物化学分析中最常用的分析技术。
光谱分析技术分类
一、吸收光谱分析法
吸光度与透光度 光照射到物质可发生折射、反射和透射,一部分光会被物质吸收，一部分光被溶液透 过，另一部分光被散射。 设入射光强度为I0，透射光强度为I，透射光强度与入射光强度的比值称为透光度，也 叫透ห้องสมุดไป่ตู้率，以T表示。
二、 发射光谱分析法 （一）火焰光度法 1、火焰光度法的定义 火焰光度法是利用火焰中激发态原子回降至基态时发射的光谱强度进行含量分 析的方法,用光电检测系统测量被测元素所发射的辐射强度来进行定量分析的方法。 它是一种简化的发射光谱分析法。
样品中待测元素激发态原子的发射光强度Ⅰ与该元素浓度C呈正比例关系， 即Ⅰ＝aC，式中a为常数，与样品组成、蒸发和激发过程有关。
I kbc T 10 I0
在光谱分析中，常常用吸光度表示溶液对入射光的吸收程度。吸光度与透光度的关系 是：吸光度等于透光度的负对数，用A表示吸光度，有下列公式关系。
I I0 1 A lg T lg lg lg kbc I0 I T
I I0 1 A lg T lg lg lg kbc I0 I T
物质呈现各种各样颜色，就是它们对可见光 中某些特定波长的光线选择吸收的结果。
待测管 2 待测管 1 标准管 试剂空白管
物质颜色和吸收光颜色的关系
吸 物质颜色 颜
黄 黄 绿 紫 蓝
收 波
400 ~ 450 450 ~ 480
光 长(nm)
生物化学实验技术PPT课件
特定DNA片段
农业生物学实验教学中心
耐热DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus)
(%)
100
酶 80 活 性 60
40
20
40 50 60 70 80 90 100
温度(℃)
Saiki（1988）将耐热DNA聚合酶引入PCR，使利用热变性解链DNA模板可行。
PCR反应循环
Taq
P2
Mg2+
2021/3/12
P1
dATP dCTP
dTTP
dGTP
农业生物学实验教学中心
PCR反应条件
1）PCR反应成分
（1）模板 单、双链DNA均可。 不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂、DNA
结合蛋白类。 DNA模板一般100ng /100L。 模板浓度过高会导致反应的非特异性增加。
5’ 3’
SG SG SG
Emission
3’ 5’
SG
农业生物学实验教学中心
梯度PCR仪
实时荧光定量PCR仪
普通PCR仪
2021/3/12
农业生物学实验教学中心
一、实验目的
PCR示例
学习PCR分析的原理与技术。
2021/3/12
农业生物学实验教学中心
二、实验材料、仪器和试剂
1、材料：含1Kb插入片段的克隆载体
基因组DNA结构功能的研究
农业生物学实验教学中心
低浓度引物
高浓度引物
2)反向PCR (reverse PCR)
用反向的互补引物来扩增两引物以外的DNA片段， 对某个已知DNA片段两侧的未知序列进行扩增。
未知序列
已知序列
生化检验讲课课件
生化检验讲课课件一、教学内容本节课选自《临床生物化学检验》教材第三章《血液生化指标的测定》，详细内容主要包括：血糖、血脂、肝功能、肾功能等指标的测定原理、方法及其临床意义。
二、教学目标1. 理解并掌握血糖、血脂、肝功能、肾功能等生化指标的基本概念和临床意义。
2. 学习并掌握相关生化检验方法的基本原理和操作步骤。
3. 能够运用所学知识，分析并解决实际临床检验中遇到的问题。
三、教学难点与重点教学难点：生化检验方法的原理和操作步骤，尤其是误差分析和质量控制。
教学重点：血糖、血脂、肝功能、肾功能等生化指标的临床意义及其测定方法。
四、教具与学具准备1. 教具：PPT课件、生化检验操作视频、案例讨论素材。
五、教学过程1. 导入：通过一个临床案例，引发学生对生化检验在实际诊断中作用的思考。
2. 理论讲解：a. 血糖、血脂、肝功能、肾功能等生化指标的基本概念。
b. 各项指标的临床意义和测定原理。
3. 实践操作：a. 演示生化检验操作流程，讲解注意事项。
b. 学生分组讨论，分析实验过程中可能出现的误差及其原因。
4. 例题讲解：通过典型例题，让学生更好地理解和运用所学知识。
5. 随堂练习：设计相关题目，检验学生对知识点的掌握程度。
六、板书设计1. 生化检验概述a. 定义b. 分类2. 常见生化指标a. 血糖b. 血脂c. 肝功能d. 肾功能3. 生化检验方法a. 原理b. 操作步骤c. 质量控制七、作业设计1. 作业题目：a. 解释血糖、血脂、肝功能、肾功能等生化指标的临床意义。
b. 列出生化检验操作流程，并分析可能出现的误差。
2. 答案：a. 血糖、血脂、肝功能、肾功能等生化指标的临床意义见教材。
b. 生化检验操作流程及误差分析见教材和课堂讲解。
八、课后反思及拓展延伸1. 反思：本节课的教学效果，学生的掌握程度，教学方法的适用性。
2. 拓展延伸：a. 了解生化检验新技术、新方法。
b. 探讨生化检验在临床诊断中的发展趋势。
临床常用生物化学检查ppt课件
Lp(a)。 病理情况下，上述Lp组成及其在血清中的含量都会
发生变化。
〔一〕总胆固醇测定
• 〔一〕总胆固醇测定 • 胆固醇〔cholesterol,CHO〕是脂质的组成成分之
一，人体含胆固醇约140g，广泛分布于全身各组 织中，血液中的CHO仅有10%～20%是直接从食 物中摄取，其他主要由肝和肾上腺等组织本身合 成。CHO主要经胆汁随粪便排出体外。CHO是合 成胆汁酸、肾上腺皮质激素、性激素及维生素D 等的重要原料，也是构成细胞膜的主要成分之一。
• 【参考值】 荧光法或酶法为0.56～1.7mmol/L；
≤1.70mmol/L为适宜程度，＞1.70mmol/L为升高。
• 【临床意义】 • 1.增高 见于①动脉粥样硬化性心脏病；②原发性高脂血症、
动脉硬化症、肥胖症、阻塞性黄疸、糖尿病、脂肪肝、肾病 综合征、妊娠、高脂饮食和酗酒等。
• 2.降低 见于甲状腺功能减退、肾上腺功能减低及严重肝衰竭
• 4.低血糖景象 肝源性低血糖，空腹血糖常低于正常，口服
糖后血糖顶峰提早出现并超越正常，2小时后不能降至正常， 尿糖出现阳性。功能性低血糖患者，空腹血糖正常，服糖后 血糖顶峰也在正常范围内，但服糖后2～3小时可发生低血糖
三、血清胰岛素检测和胰岛素释放实验
• 在作OGTT时分别测定进葡萄糖〔或馒头〕
动脉粥样硬化、冠心病、甲状腺功能减退症、阻 塞性黄疸及某些肝脏疾病〔如慢性肝炎、脂肪肝〕 等，长期高脂饮食亦可使血清脂蛋白升高。
〔二〕高密度脂蛋白胆固醇测定
• 〔二〕高密度脂蛋白胆固醇测定 高密度脂蛋白
〔HDL〕是颗粒最小，密度最大的脂蛋白，主要 由肝脏和小肠合成。HDL的组成中，蛋白质 〔ApoA1、ApoA2为主，占90%〕与脂质各占 50%，脂质中胆固醇占20%。HDL的功能之一是 运输内源性胆固醇至肝脏处置，故有抗动脉粥样 硬化作用。脂蛋白电泳时，HDL位于α-脂蛋白处。 根据密度的大小，HDL又可分为HDL1、HDL2和 HDL3三种亚型。常规检查中，经过HDL中胆固醇 〔HDL-C〕的含量间接反映HDL的程度。
发生变化。
〔一〕总胆固醇测定
• 〔一〕总胆固醇测定 • 胆固醇〔cholesterol,CHO〕是脂质的组成成分之
一，人体含胆固醇约140g，广泛分布于全身各组 织中，血液中的CHO仅有10%～20%是直接从食 物中摄取，其他主要由肝和肾上腺等组织本身合 成。CHO主要经胆汁随粪便排出体外。CHO是合 成胆汁酸、肾上腺皮质激素、性激素及维生素D 等的重要原料，也是构成细胞膜的主要成分之一。
• 【参考值】 荧光法或酶法为0.56～1.7mmol/L；
≤1.70mmol/L为适宜程度，＞1.70mmol/L为升高。
• 【临床意义】 • 1.增高 见于①动脉粥样硬化性心脏病；②原发性高脂血症、
动脉硬化症、肥胖症、阻塞性黄疸、糖尿病、脂肪肝、肾病 综合征、妊娠、高脂饮食和酗酒等。
• 2.降低 见于甲状腺功能减退、肾上腺功能减低及严重肝衰竭
• 4.低血糖景象 肝源性低血糖，空腹血糖常低于正常，口服
糖后血糖顶峰提早出现并超越正常，2小时后不能降至正常， 尿糖出现阳性。功能性低血糖患者，空腹血糖正常，服糖后 血糖顶峰也在正常范围内，但服糖后2～3小时可发生低血糖
三、血清胰岛素检测和胰岛素释放实验
• 在作OGTT时分别测定进葡萄糖〔或馒头〕
动脉粥样硬化、冠心病、甲状腺功能减退症、阻 塞性黄疸及某些肝脏疾病〔如慢性肝炎、脂肪肝〕 等，长期高脂饮食亦可使血清脂蛋白升高。
〔二〕高密度脂蛋白胆固醇测定
• 〔二〕高密度脂蛋白胆固醇测定 高密度脂蛋白
〔HDL〕是颗粒最小，密度最大的脂蛋白，主要 由肝脏和小肠合成。HDL的组成中，蛋白质 〔ApoA1、ApoA2为主，占90%〕与脂质各占 50%，脂质中胆固醇占20%。HDL的功能之一是 运输内源性胆固醇至肝脏处置，故有抗动脉粥样 硬化作用。脂蛋白电泳时，HDL位于α-脂蛋白处。 根据密度的大小，HDL又可分为HDL1、HDL2和 HDL3三种亚型。常规检查中，经过HDL中胆固醇 〔HDL-C〕的含量间接反映HDL的程度。
临床常用生物化学检验ppt课件
3、噻嗪类利尿剂、大剂量糖皮质激素等
4、胰腺病变、妊娠呕吐、脱水
血糖降低
生理性 饥饿或剧烈运动时 病理性 1、 用量过多或降糖药过量，胰岛ß 细胞瘤 等胰岛素过多 2、缺乏抗胰岛素的激素、肾上腺糖皮质激 素、生长激素等 3、肝糖原贮存缺乏性疾病：重症肝炎、肝 硬化等 4、长期营养不良、不能进食等
2、口服葡萄糖耐量试验
二、血糖检查
1、空腹葡萄糖测定
2、口服葡萄糖耐量试验
1、空腹葡萄糖测定
原理ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
标本采集方法
注意事项
8h内禁饮食、吸烟，停用胰岛素和降糖药，避免精神紧张、剧烈运动， 避免溶血，立即送检
正常参考值
3.9～6.2mmol/L
临床意义 血糖增高
生理性 餐后、高糖饮食、情绪激动 病理性 1、DM、皮质增醇多症、甲亢等 2、颅脑损伤、心肌梗死等应激状态
2、血清钠测定
标本采集方法与注意事项同血清钾测定 正常参考值
135～145mmol/L
临床意义
血清钠减低
摄取不足：长期低盐饮食、营养不良、饥饿 胃肠道失钠失水：幽门梗阻、呕吐、腹泻、肠胆胰瘘 肾失钠：肾小管病变、反复使用利尿剂、肾上腺皮质功能 减退、糖尿病酮症酸中毒等 皮肤性失钠：大面积烧伤、大量出汗只补水不补钠等 大量引流浆膜腔积液、酸中毒
临床意义
血清钾减低
摄取不足：胃肠功能紊乱、长期无钾饮食、 术后长期禁食等 丢失过多：严重呕吐、长期腹泻、瘘管引流 长期使用强利尿剂、肾上腺皮质 功能亢进等 钾向细胞内转移：碱中毒、胰岛素治疗、周 期性麻痹
高钾血症：血清K﹥5.5mmol/L 临床症状：神经肌肉症状，如肌肉酸痛、苍白和
肢体湿冷等缺血现象，严重者心跳可
第3章生物化学检验实验室基本知识湖北中医学院
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第3章生物化学检验实验室基本知识 湖北中医学院
•二、化学试剂的配制
•直接配制法：适用于校准液和一般试剂的配制。
配制方法：
•间接配制法：适用于不易恒重的固体试剂和含 •量不准的液体试剂，即先配制大概浓度，然后 •再用校准液标定出准确浓度。
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第3章生物化学检验实验室基本知识 湖北中医学院
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第3章生物化学检验实验室基本知识 湖北中医学院
• （二）试剂盒的评价
•1.初步检查
➢完整牢固的内外包装 ➢详尽明确的说明书 ➢优良的试剂外观
•2.性能指标评价（根据国家卫生部颁发的试剂盒质量检定标准）
➢准确度 ➢精密度 ➢干扰 ➢线性范围 ➢稳定性 ➢反应时间曲线
注意事项：
①固体试剂恒重后准确称量 ②液体试剂取量时选择合适的量器准确吸取要求的体积 ③试剂配制的溶剂一般为蒸馏水或去离子水，应注意对蒸馏水 的要求，若需其他溶剂则需注明清楚。 ④各类试剂分别溶解后按要求顺序混合，最后稀释至刻度。 ⑤配制好的试剂应在其容器上注明名称、浓度以及配制时间。
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第3章生物化学检验实验室基本知识 湖北中医学院
➢优点: 除了可去除杂质离子以外兼具吸附电中性杂质和过滤颗 粒杂质的作用。 ➢缺点: 1、设备较复杂，成本较高；（目前实验室应用普遍）
2、由于离于交换为可逆反应，故去离子水并非绝对不含离子
➢纯度： 5MΩ·cm（ 25℃）以上的去离子水DW
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第3章生物化学检验实验室基本知识 湖北中医学院
电渗透法评价
➢优点:
1、不需要消耗化学药品，设备简单，操作方便。
•2、对于含盐量高的海水等用此法比用离子交换法更为经济．
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❖ ⑤应用范围窄：主要用于碱金属和部分碱土 金属的测定。
仪器装置（1）
FP640火焰光度计
火焰光度法分析示意图
1.光源系统2.光学系统3.检测系统
（一）、基本原理
❖ 火焰光度法的定量原理与发射光谱相同。 即：试样受激发后发射的谱线强度 I 与试样 浓度C成正比，
200— ------ 400—---------760 —---1000nm
紫外谱光
可见光谱
红外光谱
❖ 光谱分析技术： ❖ 利用物质的吸收光谱、发射光谱、散射
光谱特征对物质进行定性、定量分析的技术。
吸收光谱（absorption spectrum）即物 质对不同波长光的吸收程度不同而产生的 光谱。
发射光谱是由物质分子或原子吸收了外来 的能量后发生分子或原子间的能级跃迁而 产生的光谱。
分类
❖ 吸收光谱分析法：
❖ 1、可见分光光度法、 测定有色物质
❖ 2、紫外分光光度法、 测定无色物质
❖ 3、红外分光光度法、 测定物质结构
❖ 发射光谱分析法
❖ 1、火焰光度法、
测定离子
❖ 2、荧光法
❖ 散射光谱分析法
（五）显示器
是将光电管或光电倍增管放大的电流通过仪表显示出来的 装置。
❖ 721 可见分光光度计
❖ 722系列 可见分光光度计
❖ SP-756P紫外可见分光光度计
❖ TENSOR系列红外光谱仪
四、分光光度技术的定量测定方法
测定原理
1.物质对光线有选择性吸收作用。 2.每种物质都具有其特征性的吸收光谱。 3.在一定条件下，物质对光的吸收程度与该物质
❖ 比浊法
❖ 彩虹，又称天虹，简称虹，是气象中的一种 光学现象，当太阳光照射到半空中的水滴， 光线被折射及反射，在天空上形成拱形的七 彩的光谱，彩虹的七彩颜色究竟是哪七种有 不同的说法，东亚、中国对於七色光来说最 普遍的说法是（从外至内）：红、橙、黄、 绿、青、蓝、紫或红、橙、黄、绿、蓝、靛、 紫，而西方常用的排色则为后者去掉靛色而 成为六色。
❖ 火焰光度法的定义
❖ 火焰光度法是以火焰为激发光源， 用光电检测系统测量被测元素所 发射的辐射强度来进行定量分析 的方法。
❖ 它是一种简化的发射光谱分析法。
火焰光度分析法
❖ 火焰光度法是以火焰为激发光源，用光 电检测系统测量被测元素所发射的辐射 强度来进行定量分析的方法。
❖ 它是一种简化的发射光谱分析法。
故上二式可写成： A标准/A样品= ε标准C标准/ ε样品C样品 C样品=A样品/A标准 × C标准
（2）标准曲线法
配制一系列已知不同浓度的测定物溶液，按测定管 同样方法处理显色，分别读取各管吸光度。
以溶液浓度为横座标，吸光度为纵座标，在方格座 标纸上作图得标准曲线，根据测得吸光度值从标准曲线 上读得测定物的浓度。
特点
①快速：试样溶液于数分钟内可完成测定。 ②准确：火焰光源稳定性高，干扰少，误差 为2％~5％，可用于微量分析和常量分析。 ③灵敏：分析碱金属与碱土金属，绝对灵敏 度可达0．1～10×10－6 g。
❖ ④设备简单：被测试样易被火焰激发，产生 的谱线较简单，且均在可见光区，故使谱线 分离和测量的设备简单。
一、分光光度技术的基本原理
❖ （一）、光的吸收现象和吸收曲线 互补色光：
两种颜色的光，按适当的强度、比例混合 后可成为白色的光，这两种色光成为互补色 光。
（二）、光吸收定律
☺ 朗伯-比尔定律：
T
I
10kbc
I0
Alg TlgI lgI0lg1kbc I0 I T
I0
I
I0：入射光强度
C:溶液浓度
第三章 常用生物化学检验技术
第一节 光谱分析技术
分光光度技术的基本原理 分光光度计的基本结构 分光光度计的操作方法 分光光度技术的定性和定量方法
按波长区域分
1、紫外光谱： 波长范围：200—400nm 2、可见光谱： 波长范围：400—760nm 3、红外光谱： 波长范围：760—1000nm
b:液层厚度
I:透射光强度
T:透光度
A:吸光度
k:吸光系数
b
三、分光光度计的基本结构
最常用的是可见分光光度计和紫外-可见光分光光度计
结构： 五大部份
光源 单色器 比色杯 检测器 显示器
（一）光源
光源定义：
指一种可以发射出供溶液或吸收物质选择性吸收的光。光源 应在一定光谱区域内发射出连续光谱，并有足够的强度和良好 的稳定性，在整个光谱区域内光的强度不应随波长有明显的变 化。
的浓度成正比。
（一）对比法（标准对照法）
实际测定过程中，用一已知浓度的测定物按测定管同 样处理显色，读出吸光度，再根据前式计算。
A标准=ε标准C标准L标准 A样品=ε样品C样品L样品 A：吸光度；ε ：摩尔吸光度；C：溶液浓度；L：液层厚度
因标准液和样品液中溶质为同一物质， ε样品= ε标准
因盛标准液和测定液的比色杯径长相同 L样品=L标准
② 选择波长：最大吸收波长，因为a.灵敏；b.避免杂质干 扰
③ 参比溶液（空白管）：消除背景效应，应包含除待测溶 质以外所有的成分。
空白管：
测量过程中，因比色皿本身和溶剂也会产生一定的光 吸收，故设置一个空白管，即其中除了待测溶质以外，其 它的成分完全相同。
测量时，首先以空白管对准光路对仪器调零，既消除比色 皿本身对光的吸收，又消除了非待测物对光的吸收，所测 值即为待测物造成的光吸收。
光源种类：
可见光分光光度计常用光源是钨灯或卤钨灯。
紫外光光度计常用氢灯作为光源。
（二）单色器
定义：
将来自光源的复合光分散为单色光的装置称为分 光系统或单色器。
种类：
滤光片
棱镜
光栅
（三）比色杯
又称为吸收池或比色皿
材料： 常用无色透明、耐腐蚀和耐酸碱的玻璃或石英材料做成
（四）检测器
检测器是将透过溶液的光信号转换为电信号，并将电信号 放大的装置。常用的检测器为光电管和光电准曲线范围在测定浓度的一半到二倍之间。 ②吸光度在0.05-1.0范围内。 ③所作标准曲线仅供短期使用。 ④标准曲线制作与测定管测定应在同一台仪器上进
行，避免误差产生。
应用中注意的问题
① Lambert-beer’s law的偏离：该定律只适应于一定浓 度范围，稀溶液能很好的服从该定律，A宜在0.05～1.0 之间，超过该范围→偏离→计算结果与实际浓度不相符
仪器装置（1）
FP640火焰光度计
火焰光度法分析示意图
1.光源系统2.光学系统3.检测系统
（一）、基本原理
❖ 火焰光度法的定量原理与发射光谱相同。 即：试样受激发后发射的谱线强度 I 与试样 浓度C成正比，
200— ------ 400—---------760 —---1000nm
紫外谱光
可见光谱
红外光谱
❖ 光谱分析技术： ❖ 利用物质的吸收光谱、发射光谱、散射
光谱特征对物质进行定性、定量分析的技术。
吸收光谱（absorption spectrum）即物 质对不同波长光的吸收程度不同而产生的 光谱。
发射光谱是由物质分子或原子吸收了外来 的能量后发生分子或原子间的能级跃迁而 产生的光谱。
分类
❖ 吸收光谱分析法：
❖ 1、可见分光光度法、 测定有色物质
❖ 2、紫外分光光度法、 测定无色物质
❖ 3、红外分光光度法、 测定物质结构
❖ 发射光谱分析法
❖ 1、火焰光度法、
测定离子
❖ 2、荧光法
❖ 散射光谱分析法
（五）显示器
是将光电管或光电倍增管放大的电流通过仪表显示出来的 装置。
❖ 721 可见分光光度计
❖ 722系列 可见分光光度计
❖ SP-756P紫外可见分光光度计
❖ TENSOR系列红外光谱仪
四、分光光度技术的定量测定方法
测定原理
1.物质对光线有选择性吸收作用。 2.每种物质都具有其特征性的吸收光谱。 3.在一定条件下，物质对光的吸收程度与该物质
❖ 比浊法
❖ 彩虹，又称天虹，简称虹，是气象中的一种 光学现象，当太阳光照射到半空中的水滴， 光线被折射及反射，在天空上形成拱形的七 彩的光谱，彩虹的七彩颜色究竟是哪七种有 不同的说法，东亚、中国对於七色光来说最 普遍的说法是（从外至内）：红、橙、黄、 绿、青、蓝、紫或红、橙、黄、绿、蓝、靛、 紫，而西方常用的排色则为后者去掉靛色而 成为六色。
❖ 火焰光度法的定义
❖ 火焰光度法是以火焰为激发光源， 用光电检测系统测量被测元素所 发射的辐射强度来进行定量分析 的方法。
❖ 它是一种简化的发射光谱分析法。
火焰光度分析法
❖ 火焰光度法是以火焰为激发光源，用光 电检测系统测量被测元素所发射的辐射 强度来进行定量分析的方法。
❖ 它是一种简化的发射光谱分析法。
故上二式可写成： A标准/A样品= ε标准C标准/ ε样品C样品 C样品=A样品/A标准 × C标准
（2）标准曲线法
配制一系列已知不同浓度的测定物溶液，按测定管 同样方法处理显色，分别读取各管吸光度。
以溶液浓度为横座标，吸光度为纵座标，在方格座 标纸上作图得标准曲线，根据测得吸光度值从标准曲线 上读得测定物的浓度。
特点
①快速：试样溶液于数分钟内可完成测定。 ②准确：火焰光源稳定性高，干扰少，误差 为2％~5％，可用于微量分析和常量分析。 ③灵敏：分析碱金属与碱土金属，绝对灵敏 度可达0．1～10×10－6 g。
❖ ④设备简单：被测试样易被火焰激发，产生 的谱线较简单，且均在可见光区，故使谱线 分离和测量的设备简单。
一、分光光度技术的基本原理
❖ （一）、光的吸收现象和吸收曲线 互补色光：
两种颜色的光，按适当的强度、比例混合 后可成为白色的光，这两种色光成为互补色 光。
（二）、光吸收定律
☺ 朗伯-比尔定律：
T
I
10kbc
I0
Alg TlgI lgI0lg1kbc I0 I T
I0
I
I0：入射光强度
C:溶液浓度
第三章 常用生物化学检验技术
第一节 光谱分析技术
分光光度技术的基本原理 分光光度计的基本结构 分光光度计的操作方法 分光光度技术的定性和定量方法
按波长区域分
1、紫外光谱： 波长范围：200—400nm 2、可见光谱： 波长范围：400—760nm 3、红外光谱： 波长范围：760—1000nm
b:液层厚度
I:透射光强度
T:透光度
A:吸光度
k:吸光系数
b
三、分光光度计的基本结构
最常用的是可见分光光度计和紫外-可见光分光光度计
结构： 五大部份
光源 单色器 比色杯 检测器 显示器
（一）光源
光源定义：
指一种可以发射出供溶液或吸收物质选择性吸收的光。光源 应在一定光谱区域内发射出连续光谱，并有足够的强度和良好 的稳定性，在整个光谱区域内光的强度不应随波长有明显的变 化。
的浓度成正比。
（一）对比法（标准对照法）
实际测定过程中，用一已知浓度的测定物按测定管同 样处理显色，读出吸光度，再根据前式计算。
A标准=ε标准C标准L标准 A样品=ε样品C样品L样品 A：吸光度；ε ：摩尔吸光度；C：溶液浓度；L：液层厚度
因标准液和样品液中溶质为同一物质， ε样品= ε标准
因盛标准液和测定液的比色杯径长相同 L样品=L标准
② 选择波长：最大吸收波长，因为a.灵敏；b.避免杂质干 扰
③ 参比溶液（空白管）：消除背景效应，应包含除待测溶 质以外所有的成分。
空白管：
测量过程中，因比色皿本身和溶剂也会产生一定的光 吸收，故设置一个空白管，即其中除了待测溶质以外，其 它的成分完全相同。
测量时，首先以空白管对准光路对仪器调零，既消除比色 皿本身对光的吸收，又消除了非待测物对光的吸收，所测 值即为待测物造成的光吸收。
光源种类：
可见光分光光度计常用光源是钨灯或卤钨灯。
紫外光光度计常用氢灯作为光源。
（二）单色器
定义：
将来自光源的复合光分散为单色光的装置称为分 光系统或单色器。
种类：
滤光片
棱镜
光栅
（三）比色杯
又称为吸收池或比色皿
材料： 常用无色透明、耐腐蚀和耐酸碱的玻璃或石英材料做成
（四）检测器
检测器是将透过溶液的光信号转换为电信号，并将电信号 放大的装置。常用的检测器为光电管和光电准曲线范围在测定浓度的一半到二倍之间。 ②吸光度在0.05-1.0范围内。 ③所作标准曲线仅供短期使用。 ④标准曲线制作与测定管测定应在同一台仪器上进
行，避免误差产生。
应用中注意的问题
① Lambert-beer’s law的偏离：该定律只适应于一定浓 度范围，稀溶液能很好的服从该定律，A宜在0.05～1.0 之间，超过该范围→偏离→计算结果与实际浓度不相符