生化检验实验室基本知识.

（三）实验误差的表示方法
1.平均误差 是指一组测定值中，测定值 与均值之差的平均值。即算术平均偏差，用 dm表示。 di X－X
dm n n
2.标准差 是方差的平方根值，用S表示。 是表示精密度的较好指标。
S
X－X
n－1
2

X X －
2
2 2 di
n
n－1
3. 质控物质 用生物活性介质制成，用 原级或次级参考物质为标准，采用参考方法 定值，用于常规室内、室间质控。
四、实验方法选择的原则
选择方法需考虑下列三个方面的性能 1. 方法学特性 是指提供最好性能的 那些根本因素，常与反应的灵敏度及特异 性有关。包括化学反应原理、最适反应条 件、标化方法及分析操作的严密性等。
第三节 实验方法的选择
一、方法选择的目的和意义 目的：选择精密度和准确度符合临床要 求，快速，操作简便，成本低的检测手段。
意义：分析方法的选择是生化检验质控 的基础，而方法学评价是方法选择的依据， 由此可见，方法的选择与评价是全面质控工 作中必不可少的重要环节。
试验方法的选择和评价过程示意图
方法选择 ↓ 实验 ↓ 方法评价 ↓ 常规应用 ↓ 统计质控
重金属（mg/L）
＜0.01
＜0.01
＜0.01
NCCLS、CAP规定的等级纯水的用途
级别 用 途
NCCLS Ⅰ 原子吸收、火焰光度、电解质、荧光、酶、高灵敏度层析、
电泳、参比液、缓冲液 Ⅱ 一般实验检验、玻璃器皿冲洗
Ⅲ
CAP Ⅰ
玻璃器皿洗涤、要求不高的定性实验
原子吸收、火焰光度、电解质、血气及pH 、酶、缓冲液、 无机元素、参比液
2. 准确度 指测定值与真值之间的符 合程度。一般用偏差和偏差系数表示。准 确度没有度量指标，往往以不准确度来衡 量，即重复测定的均值与真值之差。准确 度主要受系统误差支配，也受随机误差的 影响。评价准确度的方法由于回收试验、 干扰实验、对比试验。
4.评价后实验 进行临床相关研究，包括参考 值确定和特殊病人标本的测定等。 5.方法应用 建立质控系统，培训操作者，引 入常规工作等。
三、方法评价指标
1. 精密度 是指对同一样品多次测定， 每次测定结果与均值的符合程度。是表示 测定结果中随机误差大小的指标。精密度 有批内、天内和天与天之间的精密度之分， 表示精密度的指标有标准差（ s）、变异系 数（ CV）、标准误、平均偏差等。评价精 密度的方法有平行试验和重复性试验。
测定值－真值 相对误差＝ 100% 真值 测定值－测定均值 相对偏差＝ 100% 测定均值
5.变异系数（CV） 是样本标准差与 样本均数的百分比值。用于比较各组数据 间的变异情况，不受单位影响，CV值越大， 说明测定值离散度越大，精密度越差。
S CV % ＝ 100 X
二、方法评价的基本内容和步骤
2. 量器类玻璃仪器 如吸量管、滴定管、 容量瓶等。使用后应立即浸泡于凉水中，勿 使物质干涸；然后用流水冲洗，除去附着的 试剂、蛋白质等物质。晾干后浸泡在铬酸洗 液中4～6小时（或过夜），再用自来水充分 冲洗，最后用蒸馏水冲洗2～4次，晾干备用 。
使用过的玻璃仪器的清洗
3. 其它 具有传染性标本的容器，
4. 实验用纯水标准及用途 1976年，CAP 提出了实验用水的三级标准，1985年，NCCLS 又提出了新标准。
生化试剂及生化检验用水标准（CAP）
特性指标 pH Ⅰ级 6.0～7.0 Ⅱ级 6.0～7.0 ＜ 2.0 ＞0.5 ＜0.01 Ⅲ级 6.0～7.0 ＜5.0 ＞0.2 ＜0.01
电导率（μs/cm，25℃） ＜0.1 电阻率（MΩ/cm， 25℃ ） ＞10 硅酸盐（mg/L） ＜0.01
比例误差（PE）
回收实验
（二）方法评价步骤
1.评价前实验 研究候选方法的最适条件。包 括试剂浓度、缓冲液的种类、离子强度和pH值、 反应的温度和时间、检测波长等。 2.初步评价 包括批内和日内重复性试验、回 收试验、干扰试验等。
3.最后评价 包括日间重复性试验、方法比较 试验和总体判断方法是否可接受。
移液管和吸量管是用于准确量取一定体 积液体的量出式的玻璃量器。 移液管用于吸取固定量的溶液。最精确。 吸量管是具有分刻度的玻璃管，用于吸 取非固定量的溶液。 （四）自动加样器
俗称加样枪，有固定式和可调式两种。 其精密度和准确度高于吸量管。
二、普通玻璃仪器的清洗
初用玻璃仪器的清洗
新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的 碱性物质，可先用肥皂水（或去污粉）洗刷 再用自来水洗净，然后浸泡在l％～2％盐酸 溶液中过夜（不少于4小时），再用自来水 冲洗，最后用蒸馏水冲洗2～3次，在 100℃～130℃烘箱内烤干备用。
二、水的Βιβλιοθήκη Baidu度检查
水的纯度检查包括用电导仪测定其电导 率或电阻率，用特定试剂检测水中残留的 Ca2+、 Mg2+、 Cl－ 、 SO42 － 等成分，细菌培养 计数菌落。 1. 电阻率 用电导仪或兆欧表测定，用电 导仪测得的电导率，可与电阻率进行换算。 电导单位为西门子（s），电导是电阻的倒数， 即1s=1Ω－1；每cm长的电导为电导率（s· cm－ 1）。
（一）方法评价的基本内容
通过实验途径，测定并评价方法的精密 度和准确度。但在实验中实际测定的是不精 密度和不准确度，强调的是误差，评价实验 就是对误差的测定。
方法评价实验与实验误差类型的关系
分析误差的类型
评价实验
初步实验 最后实验 日间重复实验 方法比较实验
随机误差（RE） 批内重复实验 恒定误差（CE） 干扰实验
三、标准试剂的分级
标准试剂（标准品、参考物）是一种 物理或化学性质已充分确定用来校正仪器或 证实某种实验方法的物质。
1. 一级标准品（原级参考物） 是一种 已经确定的稳定而均一的物质。其数值已由 决定性方法确定，所有杂质均已定量，并附 由证书。
2. 二级标准品（次级参考物） 这类物 质包括纯物质（水或有机溶剂溶液）和生物 源性介质（透析后血清）中含有参考物质成 分的制品。用于常规方法的标化或质控物定 质。
发展
调整 ↑ 预防措施
结果报告
二、实验方法的分级
国际临床化学联合会（IFCC）根据分 析方法准确度和精密度的不同分为三级
（一）决定性方法：是指经过彻底研究 未发现任何不精密和不准确因素的测定方法。 测定结果最接近“真值”。主要是美国国家 标准局和英国的研究中心，用于评价参考方 法与标准品。
（二）参考方法：是指精密度和准确 度稍低于决定性方法，其各种轻微干扰因 素为已知的分析方法。用于鉴定常规方法。 （三）常规方法：这类方法的性能指 标符合临床或其它目的需要，有足够的灵 敏度，准确度和特异性。
如病毒、传染病患者的血清等动污过的
容器。应浸泡在杀菌剂（5％煤酚皂溶
液）中过夜，进行消毒后再清洗 。
清洁液的配制和使用
配制时，先将重铬酸钾溶于水中， 加热助溶，待冷。然后将粗浓硫酸缓慢加 人上液中，边加边搅拌，切勿过快，以免 产生高热使容器破裂。不要把重铬酸钾溶 液向硫酸中倾倒！！！配制时，根据用量 选用烧杯或陶瓷缸作容器。
第三章 生化检验实验室 基本知识
第一节
第三节 第四节 第五节
实验用纯水
实验方法的选择 实验方法的评价 实验的诊断
第二节 实验用玻璃仪器
性能评价
第一节 实验用纯水
水是常用的溶剂，天然水中含有许多杂 质，如悬浮物、胶体物质和溶解物质，必须经 处理去除杂质成为纯水，才能用于生物化学实 验。否则，将严重影响实验结果的准确度和精 密度。
第四节 实验方法的评价
实验方法评价的过程就是对实验误差的 测定。根据评价实验的结果和方法性能判断 的标准，决定该方法是否可以被接受。
一、实验误差
是指给出值（包括测定值和标称值）与 客观真值的不符合性。
（一）实验误差的来源
1.仪器误差
2.环境误差
3.人员误差 4.方法误差
（二）实验误差的分类
1. 系统误差：指一系列测定结果与真值 有同一倾向的偏离。由恒定的原因引起，具有 单向性，在一定条件下重复出现，可校正。 系统误差又分为恒定误差（ CE）和比例 误差（PE）。
一、普通玻璃仪器的使用
（一）量筒 用于不太精确的液体计量。不能用做反 应容器，不能装热的液体。
（二）容量瓶
用于把精确称量的物质配置成准确浓度 的溶液或是将准确容积及浓度的浓溶液稀释 成准确浓度及容积的稀溶液。 容量瓶与瓶塞要配套使用，使用时不要 一次性将溶液加至刻度。容量瓶不能烘烤。
（三）移液管、吸量管

n－1
3.绝对误差和绝对偏差 绝对误差是指 实验测定值与客观真值之差。
绝对误差＝测定值－真值
测定值与测定均值间的差异称为绝对偏 差。绝对偏差表示误差绝对值的大小，不能 表示测定误差之间的大小。
绝对偏差＝测定值（X）－测定均值（X）
－
4.相对误差和相对偏差 相对误差为 绝对误差与真值的百分比。相对偏差为绝 对偏差与测定均值的百分比。
恒定误差：是指由干扰物引起的使测定值 与真值存在恒定大小的误差。误差大小与被测 物浓度无关，而与干扰物浓度相关。 比例误差：是指相对于被测物浓度有相同 的百分比误差，误差的绝对量与被测物浓度呈 正比。
2. 偶然误差（随机误差）：是一类 不易测定的偏差，以偶然不可预料的方 式出现，没有一定的大小和方向，可正 可负，数据呈正态分布。不可避免，也 不可校正。 3. 过失误差：由于工作人员责任不 强，工作粗枝大叶，操作不正确所引起 的误差。
Ⅱ
Ⅲ
一般实验检验、血液学、血清、微生物检验等
普通定性测定、尿液检验、组织切片、寄生虫、器皿洗涤
第二节 实验用玻璃仪器
实验用玻璃仪器分为容器类和量器类。 容器类玻璃仪器为常温或加热条件下，物质 的反应容器和贮存容器，如试管、烧杯、锥 形瓶、试剂瓶等。量器类玻璃仪器用于计量 溶液体积，不能作为实验容器，如量筒、容 量瓶、移液管、吸量管、滴定管等。
一、纯水的制备方法
（一）蒸馏法
将自来水在蒸馏器中加热气化，然后冷凝 水蒸气即得蒸馏水，必要时可将蒸馏水再进行 蒸馏得双蒸水。蒸馏水在 25℃ 时的电阻率为 1×105Ω/cm左右。
（二）离子交换法
将自来水通过离子交换柱去除水中杂质 的方法。离子交换树脂是一种人工合成的带 有交换活性基团的多孔网状结构的高分子化 合物，在网状结构的骨架中，含有许多能溶 液中的离子起交换作用的“活性基团”。当 水通过阳离子交换树脂时，水中带正电荷的 阳离子与树脂中的 H+ 交换，而水中带负电荷 的阴离子则与树脂中的 OH－ 交换。离子交换 水在25℃时的电阻率为5×106Ω/cm左右。
2. 可溶性硅检验 定性方法：纯水 10ml 加 1% 的 钼 酸 溶 液 15 滴 ， 草 酸 与 硫 酸 的 混 合 液 （4%草酸1份，加4mol/L硫酸3份）8滴，混匀， 置室温10分钟，滴加1%硫酸亚铁溶液 5滴，摇 匀，以不显蓝色为合格（≤0..5mg/L）
3. 细菌菌落计数 按常规菌落计数法进行。
清洁液的配制和使用
清洁液的腐蚀性强，用时注意勿溅在皮 肤和衣服上。它的吸水性较强，故应加盖贮 存。如果清洁液的颜色逐渐变为绿色，表示 效力降低，再加人适量的重铬酸钾和浓硫酸， 还可继续使用；如已变成黑色，则不能再用。 清洁液适用于事先清洗过但未能洗净的玻璃 器皿，将水甩干后浸泡。未清洗或未消毒的 器皿不要直接浸泡于清洁液中，否则会使清 洁液迅速失效，减低洗涤能力。
2. 工作特性 是证明方法性能的那些 因素，包括分析测定范围（线性或工作范 围）、精密度、回收率、干扰、准确度及 检出限度等。 3. 应用特性 即实用性、成本费用、 标本来源与种类、样品用量、分析速度， 对设备条件与操作技术要求，方法的安全 性。
五、实验方法选择的步骤
（一）广泛查阅文献 根据方法选择的要 求对各种方法进行比较，了解各方法的科学依 据和使用价值。 （二）选定候选方法 根据本实验室的设 备条件、人员素质、工作量等具体情况，选择 合适的方法。 （三）候选方法的初步实验 包括：①标 准曲线和重复性；②质控血清和标本的重复试 验；③分析不同浓度标本，与参考方法的结果 对比。
二、普通玻璃仪器的清洗
使用过的玻璃仪器的清洗
1. 容器类玻璃仪器 如试管、烧杯、锥 形瓶等。先用自来水洗刷至无污物，再选用 大小合适的毛刷蘸取去污粉（掺入肥皂粉） 或浸入肥皂水内。将器皿内外（特别是内壁） 细心刷洗，用自来水冲洗干净后，蒸馏水冲 洗2～3次，烤干或倒置在清洁处，干后备用。
使用过的玻璃仪器的清洗