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常见的生物化学实验方法生物化学实验是研究生物分子结构、功能和相互作用的重要手段，广泛应用于生物医学研究、药物开发和环境保护等领域。
本文将介绍一些常见的生物化学实验方法。
一、色谱技术色谱技术是一种分离和分析物质的方法，根据分子的化学性质和大小差异，将混合物分离成各个组分。
常见的色谱技术包括气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和薄层色谱（TLC）等。
在生物化学实验中，色谱技术常用于对生物样品中的分子进行纯化和分析。
例如，气相色谱可用于分析氨基酸和脂肪酸等小分子化合物，液相色谱则可以用于分离蛋白质、核酸和多糖等生物大分子。
二、电泳技术电泳技术是利用电场作用下物质的电荷和大小差异，将混合物分离成各个组分的方法。
常见的电泳技术包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和凝胶过滤电泳等。
在生物化学实验中，电泳技术常用于分离和检测蛋白质和核酸等生物大分子。
例如，聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分离和测定蛋白质分子量，SDS-PAGE则可以用于检测蛋白质的纯度。
三、质谱技术质谱技术是利用质量分析仪器对物质的质量和结构进行分析的方法。
常见的质谱技术包括质谱仪、飞行时间质谱（TOF-MS）和液相色谱质谱联用（LC-MS）等。
在生物化学实验中，质谱技术常用于鉴定和定量生物分子。
例如，利用质谱仪可以对蛋白质进行鉴定，通过测定样品中蛋白质的质量和碎片离子的质量谱图，确定蛋白质的氨基酸序列。
四、核酸杂交技术核酸杂交技术是利用互补的DNA或RNA序列进行结合，从而检测目标序列的方法。
常见的核酸杂交技术包括Southern blot、Northernblot和in situ hybridization等。
在生物化学实验中，核酸杂交技术常用于检测和定量特定DNA或RNA序列的存在。
例如，Southern blot可用于检测DNA片段在基因组中的分布和拷贝数，Northern blot则可用于检测特定mRNA的表达水平。
第五章 常用生物化学检验技术临床生化检验常用的分析技术有光谱分析技术、电化学分析技术、电泳分析技术、层析和离心分析技术及自动化分析技术。
其中光谱分析技术是最基本和最常用的技术，它具有灵敏、准确、快速、简便、选择性好等特点而被广泛应用。
第一节 光谱分析技术光谱技术是根据物质吸收或发射辐射能而建立起来的一类分析方法，因不同分子的原子团和原子，其发射光谱和吸收光谱不同，而相同的物质在一定条件下，其发射光谱和吸收光谱的强度与该物质的含量成正比关系。
因此可对物质进行定性和定量分析，此类技术称为光谱技术。
是一种最常用的生化检验测定技术，它主要包括吸收光谱（可见紫外、红外原子吸收光谱法）、发射光谱（荧光法、火焰发射光谱法）和散射光谱（比浊法）。
光是一种高速传播的电磁辐射，具有波、粒二象性，光的波长（λ）的常用单位纳米（nm ），可见光波长400～760nm ，＜400nm 称为紫外光，＞760nm 称为红外光，波长愈短，能量愈大。
可见，紫外吸收光谱是由于多原子分子的价电子在电磁辐射的作用下，由基态跃迁到激发态，这种因物质分子对辐射的选择性吸收而得到的光谱称为吸收光谱。
处于高能态的分子（激发态分子）是不稳定的，当返回基态时，便发射出相应的光谱，称为发射光谱。
可见，紫外吸收光谱用于定量分析的依据是光的吸收定律，即Lambert-Beer 是律，它是吸收光谱法的基本定律。
一、分光光度法的基本原理（一）吸光度与透光度当光线通过均匀、透明的溶液时，一部分光被散射，一部分光被吸收，另一部分光透过溶液。
设入射光强度为Io ，透射光强度为It ，It 与Io 之比称为透光度（T ），即IoIt =T ）透光度（T 常用百分数表示（T%），也称为百分透光度。
透光度的负对数称为吸光度（A ），又称为消光度（E ），光密度（OD ），即It Io lg =IoIt lg －=T lg －=A 吸光度与透光度的换算：T lg －100lg =T1lg=T lg －=A 如透光度=10％时 A = lg100－lg10 = 2－1 = 1透光度=20％时A = lg100－lg20 = 2－1.3 = 0.7（二）Lambert-Beer 定律1. Lambert 定律 当一束强度为Io 的单色光透过某种吸光溶液后，由于溶液吸收了一部分光，则透过的光线为It 。
生物化学检验常用技术生物化学检验是医学领域中非常重要的一个环节，它通过对人体体液、组织和细胞中的化学成分进行分析和测定，为疾病的诊断、治疗和预防提供重要的依据。
在生物化学检验中，有许多常用的技术，下面我们就来一一介绍。
一、光谱分析技术光谱分析技术是利用物质对不同波长的光的吸收、发射或散射特性来进行分析的方法。
其中，最常见的是分光光度法。
分光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法。
它通过测量物质在特定波长下的吸光度，来计算物质的浓度。
这种方法操作简单、快速、灵敏度较高，广泛应用于测定蛋白质、核酸、糖类、酶等生物大分子的含量。
另外，原子吸收光谱法也是光谱分析技术中的一种重要方法。
它主要用于测定金属元素的含量，在生物化学检验中常用于检测血液、尿液等样本中的微量元素，如铁、锌、铜等。
二、电化学分析技术电化学分析技术是基于物质在溶液中的电化学性质而建立的分析方法。
其中，电位分析法是一种常见的电化学分析技术。
电位分析法通过测量电极电位来确定溶液中物质的浓度。
例如，在pH 测定中，使用玻璃电极和参比电极组成电池，根据测量的电位值计算溶液的 pH 值。
此外，电导分析法通过测量溶液的电导来确定物质的含量。
这种方法常用于水质分析和电解质浓度的测定。
三、色谱分析技术色谱分析技术是一种分离和分析混合物中各组分的有效方法。
常见的色谱技术包括气相色谱法和液相色谱法。
气相色谱法适用于分析挥发性和热稳定性较好的化合物。
在生物化学检验中，可用于检测血液中的药物浓度、脂肪酸组成等。
液相色谱法则适用于分析热不稳定、不易挥发的大分子化合物，如蛋白质、核酸等。
高效液相色谱法（HPLC）具有分离效率高、灵敏度高、分析速度快等优点，广泛应用于生物化学检验中的药物分析、激素测定等领域。
四、免疫分析技术免疫分析技术是利用抗原与抗体的特异性结合反应来进行检测的方法。
常见的免疫分析技术包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫分析（RIA）和化学发光免疫分析（CLIA）等。
Ⅰ生物化学基本实验技术一、分光光度法（一）原理光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。
肉眼可见的彩色光称为可见光，波长范围在400—760nm。
短于400nm的光线称为紫外线（200—400nm为紫外光区），短于200nm 的叫远紫外线，再短的就是X射线和γ射线了。
长于760nm的光线称为红外线（760—500000nm为红外区），再长的就是无线电波了。
可见光区的电磁波，因波长不同而呈现不同的颜色，这些不同颜色的电磁波称为单色光，单色光并非单一波长的光，而是一定波长范围内的光，太阳及钨丝灯发出的白光，是各种单色光的混合光，利用棱镜可将白光分成按波长顺序排列的各种单色光，即红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等，这就是光谱。
当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过，因此光线射出溶液之后，部分光波减少。
例如，可见光通过有色溶液后，或红外线通过多种气体后，部分光波被吸收。
不同的物质由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同，因此每种物质都具有其特异的吸收光谱，在一定条件下，其吸收程度与该物质浓度成正比，故可利用各种物质的不同的吸收光谱特征及其强度对不同物质进行定性和定量的分析。
在可见光范围内，利用溶液的颜色深浅来测定溶液中物质含量的方法，称为比色法。
采用适当的光源、棱镜和适当的光源接受器，可使溶质浓度的测定范围不仅仅局限于可见光，尚可扩大到紫外光区和红外光区。
这就是分光光度法。
分光光度法是生物化学中最有价值的测定方法之一。
通过测定紫外、可见或红外的特征吸收光谱可以鉴定未知化合物；通过测量在某一波长的光吸收可以测定溶液中未知化合物的浓度。
分光光度法所依据的原理是Lambert和Beer定律。
1．Lambert定律一束单色光通过透明溶液时，一部分波长的光波被吸收，被吸收光波的量与溶液厚度有一定的比例关系。
即：e-al (1)I=I为入射光强度式中II为通过溶液后的光强度l为溶液的厚度e为自然对数的底2.718a为溶液的吸光率（1）式可改写为：/I= al (2)ln I将（2）式换算成常用对数式，即：/I = 0.4343.allg I令 k=0.4343.a则/I = kl (3)lg I此处以k为吸光率。
