碱性磷酸酶(AKP、ALP)的测定及医学意义

一、实验目的1. 掌握碱性磷酸酶（ALP）的测定原理和方法；2. 学习使用分光光度计测定酶活性；3. 了解ALP在不同组织中的含量差异。

二、实验原理碱性磷酸酶（ALP）是一种广泛存在于生物体内的酶，主要催化磷酸单酯的水解反应。

ALP在人体中具有重要的生理功能，如参与骨骼生长发育、肝脏疾病诊断等。

本实验采用连续监测法测定ALP活性，通过测定酶催化底物水解生成产物浓度的变化，计算出酶活性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）猪肝匀浆液；（2）鸡肝匀浆液；（3）兔肝匀浆液；（4）磷酸苯二钠；（5）0.1mol/L NaOH；（6）0.1mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）；（7）4-氨基安替比林；（8）铁氰化钾；（9）蒸馏水。

2. 实验仪器：（1）分光光度计；（2）恒温水浴箱；（3）移液器；（4）试管；（5）试管架。

四、实验步骤1. 配制试剂：根据实验要求，配制不同浓度的底物溶液、缓冲液、试剂等。

2. 样品处理：将猪肝、鸡肝、兔肝分别制成匀浆，测定其ALP活性。

3. 酶活性测定：（1）取试管一支，加入0.1mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）1.5mL；（2）加入底物溶液0.5mL；（3）加入酶液0.5mL；（4）立即放入恒温水浴箱中，在特定波长下测定吸光度；（5）记录吸光度变化，计算酶活性。

4. 数据处理：以酶活性为纵坐标，底物浓度为横坐标，绘制曲线，求出酶的最大反应速度（Vmax）和米氏常数（Km）。

五、实验结果与分析1. 不同组织ALP活性比较通过实验，测得猪肝、鸡肝、兔肝匀浆液的ALP活性分别为：猪肝：100 U/mL；鸡肝：150 U/mL；兔肝：200 U/mL。

由此可见，兔肝中的ALP活性最高，猪肝中的ALP活性最低。

2. ALP活性与底物浓度关系通过实验，绘制了ALP活性与底物浓度的曲线，求出Vmax和Km值。

结果表明，ALP活性随底物浓度增加而增加，但在一定范围内，ALP活性与底物浓度呈线性关系。

综述：碱性磷酸酶在临床诊断与治疗中的应用作者：陆双妙 201540007医学检验技术15级17班1组碱性磷酸酶在临床诊断与治疗中的应用陆双妙广西医科大学15级17班1组（广西南宁）前言：碱性磷酸酶（ALP或AKP）是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。

随着对其研究的深入发展，涉及的内容和应用范围越来越广泛。

本文综合概述了碱性磷酸酶主要在临床检验方面的应用。

摘要：碱性磷酸酶按分布部位的不同可分为骨碱性磷酸酶、血清碱性磷酸酶以及中性粒细胞碱性磷酸酶等，本文分别探讨及阐述了它们各自在临床诊断中的应用和价值。

关键词：碱性磷酸酶1.骨碱性磷酸酶在临床诊断中的应用①检测骨碱性磷酸酶含量对小儿佝偻病的早期诊断价值佝偻病是婴幼儿的常见病，也是我国重点防治的儿科疾病之一。

佝偻病是由于维生素D 摄入不足或吸收障碍导致机体内钙、磷代谢紊乱，继而使骨发育障碍。

佝偻病如果不及时发现并治疗，可能造成骨骼的畸形，对患儿生理和心理造成损害，严重的佝偻病还会对患儿的神经、肌肉等系统或组织造成损害，故早期对婴幼儿进行佝偻病的筛查十分重要。

佝偻病早期缺乏特异性症状，患儿常常出现易激惹、夜惊、多汗等，且目前临床上对于、佝偻病的早期筛查尚无较为有效的指标，而对于<2岁，尤其是<1岁的婴幼儿，其血生化、X 线的表现均不明显，故临床上早期诊断婴幼儿佝偻病的困难很大①。

虽然我国佝偻病的发病率近年来逐年下降，但仍然很高②。

佝偻病如果不及时治疗，很容易造成畸形，严重者甚至会损伤神经系统，故对佝偻病进行早期、有效的筛查十分重要。

BALP是由成骨细胞合成的一种生物酶，其含量与成骨细胞的活性成正比，佝偻病患儿在临床症状未出现之前，骨钙化受阻就已经发生，当骨钙化不足时，成骨细胞活性增强，BALP含量也随之升高。

通过研究，898.IC 得出的结果显示，观察组患儿血清中BALP含量显著高于对照组(P<0．05)，而观察组BALP≥200 U／L的阳性检出率高达91．5％，显著高于对照组的21．0％(P<O．05)，这说明在未出现明显临床症状时，成骨细胞已经开始活跃，验证了上述的观点，说明BALP对于骨钙化不足较为敏感。

北京华宇亿康生物工程技术有限公司Co-Health (Beijing )Laboratories Co., Ltd. 液体生化试剂使用说明书_碱性磷酸酶测定试剂（ALP/AKP ） （IFCC ，AMP 缓冲液）【注册产品标准】YZB/国 1959-2003 ◇ 【医疗器械注册证号】京药监械（准）字2005第2400405号本试剂适用于人血清或血浆中碱性磷酸酶活性的体外定量分析。

临床意义碱性磷酸酶存在于体内多种组织和器官，其病理性变化表现在：增加：（1） 肝脏疾病如胆汁淤积和肝硬化；（2） 骨骼疾病如软骨病、佝偻病、成骨肉瘤； （3） 恶性肿瘤。

减少：（1） 停止生长（克汀氏病、软骨发育不全）； （2） 先天性低磷酸酶血症。

方法学原理磷酸对硝基苯酚（4-NPP ）在碱性磷酸酶的作用下，将其磷酸基转移到2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP ）受体分子上，释放出的对硝基苯酚（4-NP ）在碱性溶液中分子重排形成黄色醌，可在405nm 下检测。

黄色醌形成速率与ALP 活力成正比。

ALP 4 -NPP + H 2O → 4 -NP + 磷酸 Mg 2+, 碱性 试剂组成试剂1（R 1） 试剂2（R 2）AMP 0.35mol/L 4 -NPP 80mmol/L MgCl 2 10.5mmol/L 稳定剂 适量 适用仪器ZYA-1003：适用于日立7060/7150、岛津7200/ 7300/8000全自动生化分析仪；ZYB-1003：适用于日立7170 A /7170、奥林巴斯AU400 /600/1000全自动生化分析；ZYC-1003：适用于日立7020全自动生化分析仪； ZYD-1003：适用于贝克曼CX 系列全自动生化分析仪；ZYE-1003：适用于东芝全自动生化分析仪；TYA-1003、TYB-1003、TYC-1003：适用于其它全自动生化分析仪及各类半自动生化分析仪。

试剂贮存及稳定性试剂自生产日期起2—8℃避光存放可稳定12个月；R 1、R 2按4:1比例混为工作液2—8℃避光可稳定4周。

碱性磷酸酶锁定医学容仅供参考，不能视作专业意见。

网上任何关于疾病的建议都不能替代执业医师的当面诊断。

碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织，。

这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P 末端转换成5’-OH末端。

但它不是单一的酶，而是一组同功酶。

目前已发现有 AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与 AKP6 六种同功酶。

其中第 1 、 2 、 6 种均来自肝脏，第 3 种来自骨细胞，第 4 种产生于胎盘及癌细胞，而第 5 种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。

血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。

生长期儿童血清的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞，少量来自肝。

1化学特征2有何影响3偏高的危害4升高5来源▪人体情况▪研究应用6测定方法7正常围8临床意义9药物意义10异常原因11抑制作用12肝胆疾病化学特征碱性磷酸酶名字alkaline phosphatase (ALP 或 AKP)细菌ALP二级结构现多用ALP系统名phosphate-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum)其他名称还有alkaline phosphomonoesterase; phosphomonoesterase;glycerophosphatase; alkaline phosphohydrolase; alkaline phenyl phosphatase;orthophosphoric-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum);basic phosphataseCAS 号: 9001-78-9碱性磷酸酶(AKP或ALP)属于同源二聚体蛋白，分子量为56KDa。

每个单体由449个氨基酸组成，完整的AKP分子呈现典型的α/β的拓扑结构，同时每个单体均具有一个活性中心，活性中心区域由Asp101-Ser102-Ala103三连体、Arg166、水分子、三个金属离子及其配体氨基酸组成。

碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP/ALP）活性测定试剂盒说明书分光光度法50管/24样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。

AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。

测定原理：在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510 nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。

自备仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。

标准品：液体×1支（EP管中），2 μ mol/mL酚标准液，4℃保存。

粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g离心10min，取上清液待测。

2. 细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 血液可直接测定，或者适当稀释后测定。

测定步骤：1. 分光光度计预热30min，调节波长到510 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。

3. 空白管：取EP管，加入20μL蒸馏水，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A空白管。

血清碱性磷酸酶ALP测定1.实验原理ALP对硝基酚磷酸盐+ H2O —————→磷酸+ 对硝基酚Mg2+在镁离子存在下, 对-硝基酚磷酸盐被ALP分解成磷酸和对-硝基酚,在405nm 的波长下, 对-硝基酚的吸光度增加与ALP的活性成正比。

2. 标本：2.1 病人准备：新鲜血清，采血后应及时分离，避免溶血。

2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。

3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。

4. 标本运输：冰冻条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血等存运输的标本。

6. 实验材料6.1 试剂：中生碱性磷酸酶试剂盒（试剂1＋试剂2）6.1.1 试剂组成6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂有效期为12个月。

试剂必需避光保存。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂空白吸光率A405nm(1.0cm)>1.0，或有混浊和可见颗粒时，请不要再使用。

6.1.5 注意事项：试剂请勿直接接触皮肤、眼睛，如有接触，请用大量清水清洗。

请勿吞服。

6.2 校准品：使用OLYMPUS提供的多项校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU640生化分析仪项目测定参数.SOP文件。

8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU640生化分析仪操作规程.SOP 文件。

9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以OLYMPUS校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以U/L报告。

碱性磷酸酶（AKP、ALP）的测定及医学意义
1．正常参考值：
①速率法
女性：
1～12岁：＜500 U/L
15岁以上：40～150 U/L
男性：
1～12岁：＜500 U/L
12～15岁：＜750 U/L
25岁以上：40～150 U/L
②比色法：
健康成年人：3-13 金氏单位
儿童：5-28 金氏单位
2．临床意义
碱性磷酸酶活力测定常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临床辅助诊断的指标。

血清碱性磷酸活力增高可见于下列疾病：
①肝胆疾病：阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸型肝炎、肝癌等。

②骨骼疾病：由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内所含高浓度的碱性磷酸酶释放入
血液中，引起血清碱性磷酸酶活力增高。

如纤维性骨炎、成骨不全症、佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈合期等。

碱性磷酸酶是什么指标
生命的意义在于健康，其中含有无限的奥秘。

通过查看碱性磷酸酶的指标可以反映人的健康情况，一旦在健康上发现了异常的情况，需要及时进行的治疗，能够帮助更好地恢复健康。

那么，碱性磷酸酶是什么指标？
碱性磷酸酶（ALP 或AKP ）是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。

因此，对碱性磷酸酶进行检测，能够更好地知道肝脏、骨骼、肠等器官的健康情况，如果器官有问题，碱性磷酸酶的指标就会发生变化的情况。

碱性磷酸酶的指标正常范围是1-12岁小于500U/L；大于15岁，40-150U/L；一般来说，低值要比高值少见。

碱性磷酸酶偏低有着实际临床意义，在临床上一般碱性磷酸酶偏高说明有肝胆系统疾病。

碱性磷酸酶指标低也可以见于慢性肾炎，贫血，甲状腺机能不全等。

经过临床试验研究表明，碱性磷酸酶是目前免疫诊断试剂产品最常用的标记酶之一。

主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。

通过检查，能够准确地查明病因，帮助鉴别。

时刻关注身体上的变化情况，定期进行身体检查，早发现早治疗，不耽误病情。

通过碱性磷酸酶的指标后发现器官有异常，要积极配合医生的治疗，服用相应的药物，培养积极乐观的心态面对，当身体的碱性磷酸酶发生异常时，以平静镇定的态度面对，这样生活才能越来朝着自己想要的轨迹发展。