碱性磷酸酶检测

碱性磷酸酶（ALP）测定（速率法）标准化操作程序文件1：概述碱性磷酸酶英文简称AKP或ALP，是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,。

它不是单一的酶，而是一组同功酶。

目前已发现有AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与AKP6 六种同功酶。

碱性磷酸酶（ALP）：是从牛肠粘膜或大肠杆菌中提取。

从大肠杆菌提取的AP分子量为80kD，酶作用的最适pH为8.0；用小牛肠黏膜提取的AP分子量为l00kD，最适pH为9.6.一般采用对硝基苯磷酸酯（p-NPP）作为底物。

它可制成片状试剂，使用方便。

产物为黄色的对硝基酚，在405nm有吸收峰。

用NaOH终止酶反应后，黄色可稳定一段时间。

2标本的收集新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。

血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。

样本在4摄氏度可稳定7天。

采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。

3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。

不建议采用血浆标本。

3：方法原理样本中的碱性磷酸酶催化水解磷酸对硝基苯酚，生成游离的对硝基苯酚和磷酸，引起405nm处的光吸收值升高，，通过检测405nm处光吸收值上升的速率，可以测定碱性磷酸酶的活力。

4剂来源，配置及储存试剂来源：迪瑞试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂，可直接使用。

启用后在2-8度可稳定30天。

若试剂混浊，或以蒸馏水为空白在405nm处的光吸收值低于0.8A,应予丢弃。

试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。

5分析仪器CS-600B全自动生化分析仪分析参数：样品量4 u/l 试剂量：第一试剂200 u/l（R1）；第二试剂50 u/l测光点23—38 测定模式：速率法正反应分析波长：405nm/505nm(主波长/副波长)6计算方法ALP(U/L)=( A/min*Tv*1000)(18.8*Sv*P)式中Tv=总反应体积Sv=样本体积18.8=NADH在405nm处的毫摩尔消光系数P=比色杯光径（cm）7 线性范围：本实验的线性范围：0----850U/L8 参考范围：男性：1---12岁《500 U/L12—15岁《750 U/L》25岁40--150 U/L女性：1---12岁《500 U/L》15岁40--150 U/L9 失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。

一、实验目的1. 掌握碱性磷酸酶（ALP）的测定原理和方法；2. 学习使用分光光度计测定酶活性；3. 了解ALP在不同组织中的含量差异。

二、实验原理碱性磷酸酶（ALP）是一种广泛存在于生物体内的酶，主要催化磷酸单酯的水解反应。

ALP在人体中具有重要的生理功能，如参与骨骼生长发育、肝脏疾病诊断等。

本实验采用连续监测法测定ALP活性，通过测定酶催化底物水解生成产物浓度的变化，计算出酶活性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）猪肝匀浆液；（2）鸡肝匀浆液；（3）兔肝匀浆液；（4）磷酸苯二钠；（5）0.1mol/L NaOH；（6）0.1mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）；（7）4-氨基安替比林；（8）铁氰化钾；（9）蒸馏水。

2. 实验仪器：（1）分光光度计；（2）恒温水浴箱；（3）移液器；（4）试管；（5）试管架。

四、实验步骤1. 配制试剂：根据实验要求，配制不同浓度的底物溶液、缓冲液、试剂等。

2. 样品处理：将猪肝、鸡肝、兔肝分别制成匀浆，测定其ALP活性。

3. 酶活性测定：（1）取试管一支，加入0.1mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）1.5mL；（2）加入底物溶液0.5mL；（3）加入酶液0.5mL；（4）立即放入恒温水浴箱中，在特定波长下测定吸光度；（5）记录吸光度变化，计算酶活性。

4. 数据处理：以酶活性为纵坐标，底物浓度为横坐标，绘制曲线，求出酶的最大反应速度（Vmax）和米氏常数（Km）。

五、实验结果与分析1. 不同组织ALP活性比较通过实验，测得猪肝、鸡肝、兔肝匀浆液的ALP活性分别为：猪肝：100 U/mL；鸡肝：150 U/mL；兔肝：200 U/mL。

由此可见，兔肝中的ALP活性最高，猪肝中的ALP活性最低。

2. ALP活性与底物浓度关系通过实验，绘制了ALP活性与底物浓度的曲线，求出Vmax和Km值。

结果表明，ALP活性随底物浓度增加而增加，但在一定范围内，ALP活性与底物浓度呈线性关系。

血清碱性磷酸酶ALP测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。

2 实验原理本试剂以国际临床化学会（IFCC）推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。

ALP对-硝基苯磷酸盐 + H2O ----------- 对硝基酚 + 磷酸在上述反应中，对-硝基苯酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比。

通过在405 nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活性。

3 标本采集与处理：3.1 病人准备：无特殊要求。

3.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清。

3.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。

避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。

3.4 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。

如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。

冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。

3.5 标本运输：常温条件下运输3.6 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。

4 实验材料：4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：乙酸镁3.0mmol/L硫酸锌 1.5mmol/LHEDTA 3.0mmol/LAMP缓冲液420mmol/L试剂2（R2）：对-硝基苯磷酸盐81.5mmol/LAMP缓冲液420mmol/LHEDTA5.0mmol/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。

试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。

4.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。

介绍一种检测成骨细胞的碱性磷酸酶的方法：
PNPP偶氮法
用吸管吸掉96孔板内的培养液，用PBS冲洗3遍，加入含25mmol/L二乙醇胺（试剂盒里的缓冲液EDA或AMP），1mmol/L氯化镁和6.7mmol/L PNPP的反应液,每孔150ul.37℃避光放置半小时,然后加0.1mol/L氢氧化钠100ul终止反应,用酶标仪于405nm波长下测定OD值.样品OD值在ALP 标准曲线上读取酶活性值(U/L).
ALP标准曲线的绘制:称取PNP0.0111克用三蒸水溶解后稀释至250ml,此时PNP的浓度为
320umol/L.依次倍比稀释成160umol/L,80umol/L,40umol/L,20umol/L,10umol/L和5mol/L.相当于ALP1280 U/L,640U/L,320U/L,160U/L,80U/L,40U/L和20U/L(活性值).用酶标仪于405nm波长下测定PNP的OD值.以ALP活性值作为自变量,对应的OD值作为应变量,求得直线回归方程.。

血清碱性磷酸酶（ALP）
一、检测原理
ALP水解磷酸对硝基苯酯（PNPP）形成硝基苯酚，硝基苯酚吸光度与ALP的活性成正比，加入2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）缓冲液维持反应的PH值10.3—10.4，AMP中镁离子及锌离子起激活、维持酶反应。

二、参考区间
血清：男性46—125U/L 女性35—135U/L
三、临床意义
1、各种肝内外胆管阻塞性疾病如胰头癌、胆道结石引起的胆管阻塞，原发性胆汁性肝硬化，肝内胆汁淤积等，碱性磷酸酶明显升高，并且与血清胆红素升高相平行。

2、用于鉴别黄疸的鉴别诊断，碱性磷酸酶转氨酶血清胆红素同时测定有助于黄疸的鉴别诊断。

3、骨骼疾病，纤维性骨炎，佝偻病，骨软化症，成骨细胞瘤及骨折愈合期，碱性磷酸酶升高，主要用于变形性骨炎，
原发性甲旁亢，骨质软化和佝偻病的诊断。

4、生长中的儿童，妊娠中晚期碱性磷酸酶生理性增高。

碱性磷酸酶(ALP)测定标准操作程序1.摘要碱性磷酸酶（ALP）存在于成骨细胞、干细胞、白细胞、肾、脾、胎盘、前列腺和小肠内。

测定血清或肝素化血浆中的碱性磷酸酶活力，做临床辅助诊断用。

2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中碱性磷酸酶（ALP）的活力。

3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定碱性磷酸酶（ALP）活力的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的碱性磷酸酶（ALP）试剂盒采用的是AMP缓冲液法。

5.原理在AMP的缓冲环境下，磷酸对硝基苯在碱性磷酸酶的作用下，可以水解成磷酸盐和对硝基苯酚。

在一定底物浓度范围内,磷酸对硝基苯的水解产物对硝基苯酚会引起405nm处吸光度的上升，其上升速率与血清中碱性磷酸酶的活力成正比。

−→−+OH−−磷酸盐对硝基苯酚磷酸对硝基苯碱性磷酸酶+26.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R1：AMP缓冲液（PH10.50）、乙酸镁；R2：AMP缓冲液（PH8.85）、磷酸对硝基苯、乙酸镁。

AMP：2-氨基-2-甲基-1-丙醇7.3试剂稳定性：试剂在2-8℃避光保存，有效期1年。

试剂工作液在2-8℃避光保存，可稳定4周，15-25℃可保存稳定4天。

7.4试剂准备：试剂为即用式。

8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。

每日在测定前做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

8碱性磷酸酶比活力测定概述碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）是一种广泛存在于动植物组织和微生物中的酶，其主要功能是催化磷酸盐基团的水解反应。

ALP的活性主要由酸碱度、温度、金属离子浓度等因素所影响。

ALP比活力测定可以用于快速筛选和检测酶的活性及其活性变化等。

本实验采用8碱性磷酸酶作为模型酶，采用间接比色法测定其比活力。

材料和试剂试剂：1. 空白对照：含有ALP缓冲液的管2. 标准对照：10μg/mL碱性磷酸酶溶液3. 涂板洗涤缓冲液：PBS液，pH 7.44. 反应底物：pNPP溶液5. 停止液：2mol/L NaOH溶液6. ALP缓冲液：0.1mol/L甘氨酸缓冲液，pH 9.6，含有1mmol/L MgCl2仪器：1. 组合式洗板机2. 酶标仪3. 加热器4. 温度计方法注意事项：1. 所有的样品和标准溶液都应在同一天制备，并测量前混匀。

2. 所有的试剂和材料都要神经否则可能影响实验结果。

实验操作：1. 取100μL标准对照和100μL空白对照，分别加入洗涤缓冲液中，洗涤3次。

2. 加入100μL标准对照和待测样品至96孔板中。

每个样品平行加入两个孔。

3. 加入50μL反应底物至每个孔中，将板密封，加热反应30min。

4. 加入50μL停止液，将板洗涤5次。

5. 测定吸光度值，波长为405nm。

数据处理1. 记录96孔板中每个孔的吸光度值。

2. 以标准对照为基准，计算每个孔的相对吸光度值。

3. 以样品组的平均相对吸光度值为y，以标准对照相对吸光度值为x，绘制标准曲线，计算标准曲线的斜率。

4. 计算样品的ALP比活力。

样品ALP比活力= (样品相对吸光度值/y) x 斜率。

结果与分析以标准曲线计算每个样品的ALP比活力，根据结果可以判断样品中ALP酶的比活力。

若ALP比活力高，说明该样品中ALP酶活性较强；若低，则说明其活性相对较弱。

总结。

碱性磷酸酶‎E L ISA‎方法实验原理：1. 在ELISA‎测定中，碱性磷酸酶‎的色原底物‎是对硝基苯‎磷酸盐(p-nitro‎p heny‎-phosa‎t e，pNPP)。

pNPP在‎碱性磷酸酶‎的作用下生‎成对硝基酚‎(pNP)，其在入＝405 nm处有最‎大吸收。

2. 由于较高浓‎度的无机磷‎可竞争性地‎抑制碱性磷‎酸酶的活性‎，所以用TB‎S体系，不能用含磷‎酸根丰富的‎P BS体系‎，否则会造成‎本底偏高。

3. 由于碱性条‎件下pNP‎的光吸收增‎强，并可使碱性‎磷酸酶失活‎，因而可使用‎氢氧化钠作‎为终止剂。

试剂：ELISA‎溶液体系：1XTBS‎1L体系H2O 定容至10‎00mlTris-HCl 6.06g 50mM 盐酸调PH 7.5 NaCl8.76g 150mM‎包被液：(pH9.6)。

过滤除菌，4℃贮存。

0.1M NaHCO‎3显色液：1. 0.1M glyci‎n e pH 10.4 + 1mM MgCl2‎+ 1mM ZnCl2‎配方：7.51g glyci‎n e + 203 mg MgCl2‎+ 136 mg ZnCl2‎+ 980 ml H2O，用浓NaO‎H溶液调至‎p H10.4，补水定容到‎1L。

2. 1 M dieth‎a nola‎m ine（二乙醇胺）pH 9.8+ 0.5mM MgCl2‎配方：97 ml of dieth‎a nola‎m ine +100 mg MgCl2‎+ 800 ml H2O，用浓HCl‎溶液调至p‎H9.8，补水定容到‎1L。

显色液中p‎N PP终浓‎度为1mg‎/ml。

终止液：配方：3M NaOH。

实验步骤：1. 包被：用包被液稀‎释靶分子，4℃过夜或者3‎7℃1h。

TBS洗3‎次。

2. 封闭：2%M-TBS 37℃1h。

TBS洗3‎次。

3. 结合：将表达菌用‎T B S重悬‎，超声后加入‎到孔中，37℃1h。

0.5%TBST洗‎3次。

碱性磷酸酶值测定实验报告一、实验目的碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，简称 ALP）是一种广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。

本次实验的目的是测定样本中碱性磷酸酶的活性，以评估相关生理或病理状态。

二、实验原理碱性磷酸酶在碱性环境下能够催化磷酸酯的水解反应，生成无机磷和醇。

通过测定生成的无机磷的量，可以间接反映碱性磷酸酶的活性。

本实验采用磷酸苯二钠法，磷酸苯二钠在碱性条件下被碱性磷酸酶水解生成苯酚和磷酸氢二钠。

苯酚与 4-氨基安替比林反应生成红色醌亚胺衍生物，在 510nm 波长处有最大吸收峰。

通过测定吸光度值，并与标准曲线对照，即可计算出碱性磷酸酶的活性。

三、实验材料与设备1、材料血清样本磷酸苯二钠溶液碳酸盐缓冲液（pH 100）4-氨基安替比林溶液铁氰化钾溶液酚标准液2、设备分光光度计恒温水浴锅移液器试管、刻度吸管等四、实验步骤1、标准曲线的绘制取 6 支干净试管，分别编号为 0、1、2、3、4、5。

按表 1 向各试管中加入试剂，混匀。

置于 37℃水浴中保温 15 分钟。

加入铁氰化钾溶液 30ml，立即混匀。

用分光光度计在 510nm 波长处，以 0 号管调零，读取各管的吸光度值。

以酚含量（μg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

表 1 标准曲线绘制的试剂加入量｜试管编号|0|1|2|3|4|5|｜｜｜｜｜｜｜｜｜酚标准液（ml）｜0|005|010|020|030|040|｜蒸馏水（ml）｜10|095|090|080|070|060|｜碳酸盐缓冲液（ml）｜30|30|30|30|30|30|｜4-氨基安替比林溶液（ml）｜10|10|10|10|10|10|｜铁氰化钾溶液（ml）｜30|30|30|30|30|30|2、样本测定取 3 支干净试管，分别编号为测定管、对照管和空白管。

按表 2 向各试管中加入试剂，混匀。

置于 37℃水浴中保温 15 分钟。

血清碱性磷酸酶ALP测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。

2 实验原理本试剂以国际临床化学会（IFCC）推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。

ALP对-硝基苯磷酸盐 + H2O ----------- 对硝基酚 + 磷酸在上述反应中，对-硝基苯酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比。

通过在405 nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活性。

3 标本采集与处理：3.1 病人准备：无特殊要求。

3.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清。

3.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。

避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。

3.4 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。

如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。

冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。

3.5 标本运输：常温条件下运输3.6 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。

4 实验材料：4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：乙酸镁3.0mmol/L硫酸锌 1.5mmol/LHEDTA 3.0mmol/LAMP缓冲液420mmol/L试剂2（R2）：对-硝基苯磷酸盐81.5mmol/LAMP缓冲液420mmol/LHEDTA5.0mmol/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。

试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。

4.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。

碱性磷酸酶的检测的原理
碱性磷酸酶是一种重要的酶，在生物体内发挥着重要的作用。

碱性磷酸酶可以加速细胞代谢中的一些反应，从而改变其物质组成和从而有助于调节代谢性状态。

它也可以抑制一些毒性物质，从而保护细胞免受损害。

碱性磷酸酶是一种活性很高的酶，由于它能够有效地对物质作用，因而在医学和农业上也具有重要的意义。

碱性磷酸酶的检测是临床检查和科学研究的一个重要方面。

碱性磷酸酶检测的原理是根据其氨基酸序列，通过化学或免疫反应来检测碱性磷酸酶的活性。

碱性磷酸酶主要由氨基酸组成，每种氨基酸有一定的氨基酸序列，这就是碱性磷酸酶的“氨基酸指纹”。

通过化学形式检测碱性磷酸酶，可以获得其“氨基酸指纹”，并
与标准进行比较。

如果“氨基酸指纹”与标准相同，则说明碱性磷酸酶的活性是足够的。

也可用免疫学方法来检测碱性磷酸酶，主要是根据碱性磷酸酶的特定抗原来识别。

通过使用抗体或抗原，可以识别该物质，从而确定其特异性，并进行活性检测。

此外，碱性磷酸酶可以用比色法或测光法进行检测，这种方法主要是根据碱性磷酸酶同酶原料反应而产生的磷酸酶产物，来检测碱性磷酸酶的活性。

综上所述，碱性磷酸酶的检测可以采用多种方法，包括识别氨基酸指纹的化学方法、免疫识别的免疫学方法和比色法、测光法等方法，
这些方法都可以有效地检测碱性磷酸酶的活性。

随着科学进步，碱性磷酸酶的检测技术也不断完善，有助于更好地了解和调节人体代谢状态，从而保护人体健康和抗病能力。

碱性磷酸酶km测定实验报告碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，简称ALP）是一种存在于人体组织和体液中的酶类，其活性的测定对于临床诊断和疾病监测具有重要意义。

本文将对碱性磷酸酶的KM测定实验进行详细介绍和分析。

一、实验目的本实验旨在测定碱性磷酸酶的KM值，以了解其底物浓度对酶活性的影响，并探讨酶底物的亲和力。

二、实验原理碱性磷酸酶是一种催化磷酸酯水解的酶，其底物为磷酸酯类物质。

当底物浓度较低时，酶活性会受到限制，因此，通过测定不同底物浓度下的酶活性，可以得到碱性磷酸酶的KM值。

KM值是酶与底物结合的亲和力指标，数值越小表示酶对底物的结合越紧密。

三、实验步骤1. 准备实验所需材料和试剂，包括碱性磷酸酶酶液、磷酸酯底物、缓冲液等。

2. 制备一系列不同浓度的磷酸酯底物溶液，如0.1 mM、0.2 mM、0.3 mM等。

3. 将不同浓度的磷酸酯底物溶液分别与碱性磷酸酶酶液混合，使其反应一定时间。

4. 停止反应，并加入一定量的酶抑制剂，以停止碱性磷酸酶的活性。

5. 使用特定的检测方法，如比色法或荧光法，测定反应液中产生的产物浓度。

6. 根据不同底物浓度下产物浓度的变化，绘制酶活性与底物浓度的曲线。

7. 通过曲线拟合，计算出碱性磷酸酶的KM值。

四、实验结果与分析根据实验数据绘制的酶活性与底物浓度曲线，可以观察到酶活性随着底物浓度的增加而逐渐增加，但增加速率逐渐减缓。

这是因为底物浓度增加，酶与底物的结合也增加，但当底物浓度达到一定程度时，酶的活性已经接近饱和状态，进一步增加底物浓度对酶活性的影响较小。

通过对曲线的拟合，可以计算出碱性磷酸酶的KM值。

KM值表示酶与底物结合的亲和力，数值越小表示酶对底物的结合越紧密。

在实验中，我们可以通过计算得到不同底物浓度下的KM值，从而了解碱性磷酸酶与底物之间的亲和力变化情况。

五、实验误差与改进在实验过程中，可能存在一些误差，如底物溶液的制备误差、酶活性的测定误差等。

碱性磷酸酶测定的标准规程【目的】体外检测血清中碱性磷酸酶（ALP ）的含量。

【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP ，室负责人监督落实。

2.本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h ，不饮酒24h 后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理本试剂方法学原理以IFCC 推荐的方法为基础。

该方法采用对-硝基苯磷酸盐为底物，在最适反应条件下，样本中的碱性磷酸酶（ALP ）催化下述转磷酸反应：磷酸硝基酚-对O H 硝基苯磷酸盐-对2++−−→−ALP在上述反应中，对-硝基酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比，通过在405nm 波长处测定吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活力1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒，为液体双试剂，其各组分如下：试剂1（R1）乙酸镁 3.0 mmol/L硫酸锌 1.5 mmol/LHEDTA 3.0 mmol/LAMP缓冲液420 mmol/L试剂2（R2）对 - 硝基苯磷酸盐 81.5 mmol/LAMP缓冲液420 mmol/LEDTA 5.0 mmol/L2.校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号：4490050/4590050）对测定进行校准。