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分析与检测高效液相色谱仪测定食品中苏丹红□王晓琴广东省惠州市食品药品检验所摘要：苏丹红属于工业的氮质燃料，对人的身体具有一定的侵害，相关研究表明苏丹红在很大程度上具有致癌性，尤其是在辣味食品中添加苏丹红的问题比较严重，已经有许多媒体对其进行了披露。
这种问题的严重性就在于商家牟取暴 利的行为给消费者的身体健康带来极大的损害，因而该种类型的食品安全问题受到了国内外舆论界关注。
关键词：高效液相色谱仪；苏丹红；测定高效液相色谱法优点显著，有着非 常广泛的用途，在环境监测领域、临 床化学领域、药物研究领域、食品检 验领域、石油化学领域以及生命科学 领域等都有_定的应用。
而当前国内 外对于苏丹红的测定基本上采用的是 高效液相色谱仪，笔者在本文中选用 LC5500高效液相色谱仪对于食品中的 苏丹红进行测定研究，该种液相色谱 仪具有灵敏度高、稳定性能好的特点，其最低检测浓度可以达到O.OlUg/kg，测定苏丹红的保留时间的标准偏差为 0.85%~2.95%，峰面积相对标准差为 0.95%~1.65%;梯度洗脱基线平直，无漂移，噪声低，样品回收率能够达 到 80%~95%。
1材料与方法1.1试剂正己烷A.R.、丙酮色谱纯、甲酸 A.R.、乙腈色谱纯、三氧化二铝、纯水 重蒸馏水、苏丹红丨、丨丨、丨丨丨、IV。
苏丹红丨为指示剂，苏丹红丨丨、丨丨丨、IV为A.R.，苏丹红丨、丨丨、丨丨丨、IV标 准储备液。
1.2仪器LC5500高效液相色谱仪、254nm 紫外检测器、多孔硅胶型键合相YW G _(：叱颗粒度1〇11、微量注射器、？-101高压泵（双泵)、恒温柱箱、超声 波清洗器。
1.3色谱条件检测器：紫外-可见光检测器、色谱柱M18柱、5.6mm X480mm，l〇Hm，流动相A液（B泵），0.1%甲酸- 乙腈+丙酮，B液(A泵）0.1%甲酸- 水+乙腈。
梯度洗脱程序如下。
开始Om in时，B液85%,A液 35%;15min时，B液 85%,A 液35%;33min时，B 液 150%, A 液0%; 40min时，B液 150%，A液 0%;45min时，B 液 85%,A 液 35%;50min 时，B液 85%，A液 35%。
高效液相色谱法快速测定鸭肉和鸭蛋中苏丹红染料吴银良1,3 李存2 刘勇军3 姜艳彬3 刘兴国3 沈建忠311(中国农业大学动物医学院,北京100094) 2(河北工程大学农学院动物医学系,邯郸056038)3(中国动物疫病预防控制中心,北京100026)摘 要 建立了一种快速测定鸭肉和鸭蛋中苏丹红染料的高效液相色谱分析方法。
样品经乙腈提取后浓缩至干,最后用乙腈定容;采用Zorbax S B 2C 18柱,以乙腈2水为流动相等度洗脱,进行高效液相色谱分离,二极管阵列检测器检测,外标法定量。
6种苏丹红染料标准曲线的线性回归系数均在0.999以上;线性范围为30～1000μg/L;检出限在4～13μg/kg 之间。
同时在40、80和200μg/kg 3个添加浓度水平下添加回收率为8513%～96.6%;相对标准偏差在1.8%～5.2%之间。
本方法具有快速、灵敏的特点。
关键词 鸭肉,鸭蛋,高效液相色谱,苏丹红染料 2007208216收稿;2007210226接受3E 2mail:sjz@cau .edu .cn1 引 言苏丹红染料是非生物合成的亲脂性偶氮化合物,一般不溶于水,易溶于有机溶剂,常用于汽油、机油、鞋油和汽车蜡等工业产品的着色[1]。
苏丹红Ⅰ号在1995年就被确认为致癌物,苏丹红Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ也怀疑具有致癌性。
中国和欧盟等全球多数国家都禁止其用于食品生产,但有不少食品生产企业为改善色泽、降低成本仍将其作为食用色素。
有关食品中苏丹红色素测定方法的报道较多[2～15],但其分析对象通常为辣椒制品,而针对动物组织及蛋中苏丹红多组分分析方法的报道较少[7,13],考虑到动物组织和蛋中苏丹红染料的含量较低和样品基质的特殊性,有必要建立快速准确可靠的鸭肉和鸭蛋中苏丹红染料检测方法。
食品中苏丹红染料分析方法有高效液相色谱法[2～7]和液相色谱质谱法[9～12],气相色谱质谱法[13,14]和流动注射分析方法[17]。
食品中苏丹红检测方法探讨中国质量新闻网 2008-11-26 15:17:25摘要本文介绍了食品中苏丹红检测方法的研究进展，主要包括高效液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱(LC-MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、薄层层析法等。
关键词苏丹红高效液相色谱液相色谱-质谱气相色谱-质谱联用薄层层析近年来，一些国家和地区不断发生食品污染等恶性事件。
特别是随着科技的发展，一些原来认为无害的食品添加剂，发现存在慢性或致癌作用,原来检测不出的有害物质被查出等。
苏丹红是偶氮苯类人工色素，属于工业染料，主要用于油、蜡、鞋等的增光着色。
由于苏丹红I、II、III、IV及其代谢产物具有致癌性，国家禁止作为色素添加剂在食品中使用。
苏丹红I、II、III、IV的检测方法有高效液相色谱法[1]、液相色谱-质谱法[2]、气相色谱-质谱联用法[3]、薄层层析法[4]等。
1. 高效液相色谱法对食品中苏丹红的检测高效液相色谱法是一种以液体为流动相的现代色谱柱分离分析方法，它是在经典液相色谱的基础上，引入气相色谱的理论和技术发展起来的[5]。
原则上讲，只要能溶解在流动相中的物质都可以用高效液相色谱法分析。
在目前已知的有机化合物中，有80%的有机化合物能用高效液相色谱法分析[6]。
高效液相色谱法主要有以下几种：1.1 欧洲委员会推荐的液相色谱法[7]该方法是将样品经匀浆化或粉碎后，加入乙睛(苏丹红III、IV加入氯仿)提取，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析。
苏丹红I、苏丹红II的检测波长为478nm，苏丹红III、苏丹红IV则为520nm。
苏丹I的检测限是0.013μg/ml、最低浓度为0.106μg/ml、在辣椒粉样品中的添加回收率高于90%。
1.2 国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会发布的高效液相色谱法该方法在欧洲委员会公布的检验方法的基础上作了改进。
苏丹红检测方法国家标准采用了简单的正相吸附固相萃取原理，一次性去除了样品中红辣椒和番茄中的干扰成分，使用目前国内已广泛应用的高效液相色谱仪就可准确完成4种苏丹红染料的检测。
如何区分食品中的合法与非法添加物在日常生活中，我们每天都要接触各种各样的食品。
然而，食品中的添加物却常常让我们感到困惑和担忧，不知道哪些是合法的，哪些是非法的。
这不仅关系到我们的饮食安全，也影响着我们的健康。
那么，如何才能准确地区分食品中的合法与非法添加物呢？首先，我们需要了解什么是食品添加物。
食品添加物是指为改善食品品质和色、香、味，以及为防腐、保鲜和加工工艺的需要而加入食品中的人工合成或者天然物质。
合法的食品添加物在规定的使用范围和用量内，是经过严格的科学评估和审批程序，被认为是安全可靠的。
而非法添加物则是指那些未经国家批准，不允许添加到食品中的物质。
要区分合法与非法添加物，我们可以从以下几个方面入手。
第一，查看食品标签和说明书。
正规生产的食品都会有详细的标签和说明书，上面会标明所使用的添加物名称、用量和使用范围。
我们可以通过仔细阅读这些信息，了解食品中添加了哪些物质。
如果标签上没有明确标注添加物的相关信息，或者标注的内容模糊不清，那么这样的食品就需要引起我们的警惕。
第二，了解常见的合法食品添加物。
常见的合法食品添加物包括防腐剂（如苯甲酸、山梨酸）、抗氧化剂（如维生素 C、维生素 E）、着色剂（如胭脂红、柠檬黄）、甜味剂（如蔗糖、木糖醇）、增稠剂（如明胶、卡拉胶）等。
我们可以通过学习和了解这些常见的添加物，来判断食品中添加的物质是否属于合法范畴。
第三，关注国家相关部门的公告和通知。
国家食品药品监督管理部门会定期发布关于食品中非法添加物的公告和通知，告知公众哪些物质是不允许添加到食品中的。
我们可以通过关注这些信息，及时了解食品中非法添加物的情况。
第四，从食品的外观、气味和口感来判断。
一般来说，合法添加物使用得当，不会对食品的外观、气味和口感产生异常的影响。
如果食品的颜色过于鲜艳、气味过于浓烈、口感过于独特，超出了正常的范围，那么就有可能存在非法添加物的问题。
第五，选择正规渠道购买食品。
正规的超市、商场和农贸市场等销售的食品，通常经过了严格的质量检测和监管，其安全性相对更有保障。
浅谈HPLC法检测咸鸭蛋中非法添加苏丹红染料杨沫银内蒙古食品药品检验所（010020）摘要：目的：完善检测方法，更好的监控非法添加物。
方法：采用高效液相色谱法，改变提取溶剂。
结果：苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别在0μg/ml～2.56μg/ml范围呈良好线性关系，回收率在66%～80%之间，方法最低检出限在3.3μg/Kg～7.5μg/Kg（按蛋总重计算）之间。
结论：方法简便，结果准确。
关键词：咸鸭蛋高效液相色谱法苏丹红Abstract Objective: To perfect the method of measure method, Better monitoring of illegal additives. Method: Adopt HPLC to change the solvent extraction. Results: the calibration curve showed a good linearity with the range of 0μg/ml -2.56μg/ml for sudan , the range of recovery was 66%-80%, t he limit of detection was 3.3μg/kg-7.5μg/kg (According to calculation of the total egg). Conclusion: the methed is simple and the result is accurate.苏丹红属于化工染料，有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ号四种。
据文献报道[1]，该物质具有偶氮结构，对人体的肝、肾器官有明显的毒副作用。
经毒理学研究表明，苏丹红具有致突变性和致癌性，国家明令禁止添加于食品中。
本方法参照相关文献[2]，将其提取方法进行了修订，改进后的方法具有分离效果好、灵敏、准确等优点。
1.样品来源：市售。
2.仪器与试药：2.1 仪器美国安捷仑-1100高效液相色谱仪，紫外-可见检测器，离心机，旋转蒸发仪等。
高效液相色谱法测定禽蛋中苏丹红残留量作者：苗翠来源：《现代食品》 2018年第16期摘要：建立鸡蛋中苏丹红残留检测的高效液相色谱法，为保障食品安全提供技术支持。
样品经正己烷提取，过SPE 小柱净化，氮气吹干后乙腈复溶，进行HPLC 分析，以AthenaC18-WP 液相色谱柱 4.6×150 mm，5 μm 为分离柱，乙腈∶水（95 ∶ 5，V ∶ V) 为流动相，1.0 mL/min 流速等度洗脱，使用紫外检测器，波长为500 nm，柱温为35 ℃。
实验结果表明4 种苏丹红在10 ～ 1 000 μg/kg 添加浓度范围内线性关系良好，相关系数R ≥ 0.999 0，较高浓度时回收率范围为62.7% ～ 107.9%，定量下限（LLOQ）规定为添加回收试验中S/N ≥ 10 时的最低添加浓度，结果均小于0.5 μg/kg。
该方法专属性好，简便、准确、快速，适用于禽蛋中苏丹红的检测。
关键词：苏丹红；禽蛋；高效液相色谱法Abstract：This study has established the determination of Sudan red residue in eggs high-performanceliquid chromatography (HPLC), provide data support to ensure food safety. This experiment samples extractedby n-hexane, SPE column purification, the nitrogen after dry acetonitrile after dissolved, HPLC analysis, anofficer using C18-WP liquid chromatographic column 4.6 ×150 mm, 5 microns as the separation column,acetonitrile: water (95 ∶ 5, V ∶ V) as mobile phase, the 1.0 mL/minelution velocity and so on degree, usingUV detector, the wavelength of 500 nm, column temperature of 35 ℃ . Experimental results show that thefour (inclu ding Sudan red in 10 ～1000μg/kg add concentration range inside sex is good, the correlationcoefficient R of 0.9990 or higher, with high recovery range of 62.7% ～107.9%, quantitative limit (LLOQ)regulations for adding recycling experiment S/N of 10 or mor e add lowest concentration, the results are lessthan 0.5μg/kg. Good specificity, the method is simple, rapid, accurate and suitable for the detectionof Sudanred in the eggs.Key words：Sudan red; Eggs; HPLC中图分类号：TS207.3苏丹红是一种人工合成的偶氮类、油溶性化工染色剂，在食品中使用具有增色的作用。
超高效液相色谱法检测咸鸭蛋中苏丹红的含量胡勇;吕莹;胡倩;时明阳;徐纬【期刊名称】《湘南学院学报（医学版）》【年(卷),期】2018(020)004【摘要】目的构建一种超高效液相色谱法测定咸鸭蛋中苏丹红(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)含量的分析方法,为食品中苏丹红含量的检测提供依据.方法随机采集市售咸鸭蛋,参照GB/T 19681-2005的方法,样品经溶剂提取、固相萃取净化后,以BEHC18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)为色谱柱,乙腈-水为流动相,设定苏丹红Ⅰ检测波长478 nm,苏丹红Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ检测波长520 nm,流速均为0.4 mL/min进行检测;并评价本方法的最低检出限、线性范围、精密度和回收率.结果空白检品无干扰,苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ单标和混标均分离较好,且均在1.3 min内完全分离.本方法的最低检出限为3.28μg/kg,苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ在1.6 μg/mL～25.6 μg/mL内浓度与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均大于0.999;相对标准偏差在0.87％～1.97％;加标回收率在81.78％～88.32％.结论本方法具有快速、简便、准确度和灵敏度高等优点,适用于咸鸭蛋中苏丹红含量的检测.【总页数】5页(P16-20)【作者】胡勇;吕莹;胡倩;时明阳;徐纬【作者单位】贵州医科大学公共卫生学院,贵州贵阳550025;贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室,贵州贵阳550025;贵州医科大学公共卫生学院,贵州贵阳550025;贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室,贵州贵阳550025;贵州医科大学公共卫生学院,贵州贵阳550025;贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室,贵州贵阳550025;贵州医科大学公共卫生学院,贵州贵阳550025;贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室,贵州贵阳550025;贵州医科大学公共卫生学院,贵州贵阳550025;贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室,贵州贵阳550025【正文语种】中文【中图分类】R927【相关文献】1.高效液相色谱法快速检测食品中苏丹红的含量 [J], 曹丽芬;姚黎霞;何良兴;茹巧美2.欧盟法和国家标准法对辣椒酱中苏丹红Ⅰ号含量检测的比较 [J], 曾婧3.基质分散固相萃取-超高效液相色谱法检测辣椒制品中苏丹红染料 [J], 曾宪冬;柳洁;曾灼祥;孟楠4.三种专用固相萃取柱高效液相色谱法检测食品中苏丹红含量 [J], 冯寅洁; 周小清; 乔勇升; 冯成玉5.超高效液相色谱法测定饲料中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的含量 [J], 曹起灵;李锐;方忠意;刘素梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定禽蛋中苏丹红残留量
苗翠
【期刊名称】《粮食流通技术》
【年(卷),期】2018(000)016
【摘要】建立鸡蛋中苏丹红残留检测的高效液相色谱法,为保障食品安全提供技术支持.样品经正己烷提取,过SPE小柱净化,氮气吹干后乙腈复溶,进行HPLC分析,以Athena C18-WP液相色谱柱4.6×150 mm,5μm为分离柱,乙腈:水(95:5,V:V)为流动相,1.0 mL/min流速等度洗脱,使用紫外检测器,波长为500 nm,柱温为35℃.实验结果表明4种苏丹红在10～1000μg/kg添加浓度范围内线性关系良好,相关系数R≥0.9990,较高浓度时回收率范围为62.7％～107.9％,定量下限(LLOQ)规定为添加回收试验中S/N≥10时的最低添加浓度,结果均小于0.5μg/kg.该方法专属性好,简便、准确、快速,适用于禽蛋中苏丹红的检测.
【总页数】4页(P124-126,141)
【作者】苗翠
【作者单位】辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心,辽宁沈阳 110016
【正文语种】中文
【中图分类】TS207.3
【相关文献】
1.起高效液相色谱-质谱法测定禽蛋中苏丹红 [J], 宋永青;李莹莹;赵榕
2.高效液相色谱法测定禽蛋产品中苏丹红类染料 [J], 罗远宏;邱巍;李卫岗
3.固相萃取/超高效液相色谱-串联质谱法同时测定禽蛋中4种苏丹红染料残留量[J], 刘正才;杨方;尹太坤;钱疆
4.高效液相色谱法测定禽蛋中苏丹红染料的方法研究 [J], 张鑫;段晓然;李爱军;周鑫;肖琎;刘洋;杜瑞焕;齐彪;张立田;项爱丽
5.高效液相色谱法测定禽蛋中苏丹红残留量 [J], 苗翠
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方法：采用高效液相色谱法，改变提取溶剂。
结果：苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别在0μg/ml～2.56μg/ml范围呈良好线性关系，回收率在66%～80%之间，方法最低检出限在3.3μg/Kg～7.5μg/Kg（按蛋总重计算）之间。
结论：方法简便，结果准确。
关键词：咸鸭蛋高效液相色谱法苏丹红Abstract Objective: To perfect the method of measure method, Better monitoring of illegal additives. Method: Adopt HPLC to change the solvent extraction. Results: the calibration curve showed a good linearity with the range of 0μg/ml -2.56μg/ml for sudan , the range of recovery was 66%-80%, the limit of detection was 3.3μg/kg-7.5μg/kg (According to calculation of the total egg). Conclusion: the methed is simple and the result is accurate.苏丹红属于化工染料，有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ号四种。
据文献报道[1]，该物质具有偶氮结构，对人体的肝、肾器官有明显的毒副作用。
经毒理学研究表明，苏丹红具有致突变性和致癌性，国家明令禁止添加于食品中。
本方法参照相关文献[2]，将其提取方法进行了修订，改进后的方法具有分离效果好、灵敏、准确等优点。
1.样品来源：市售。
2.仪器与试药：2.1 仪器美国安捷仑-1100高效液相色谱仪，紫外-可见检测器，离心机，旋转蒸发仪等。
2.2 试剂乙睛、丙酮、甲酸、为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。
2.3 对照品苏丹红由D-86199 Augsburg,Gemany提供苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ纯度≥85%。
2.4层析用氧化铝（中性100目～200目）：105℃干燥2h，于干燥器中冷却至室温，每100g中加入2ml水降活，混匀密封，放置12h后使用。
2.5氧化铝层析柱：在层析柱管（1cm×5cm的注射器管）底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，轻敲实后加一薄层脱脂棉，用10ml正己烷预淋洗，洗净柱中杂质后，备用。
3.色谱条件：3.1 色谱柱：Agilent ZORBAX SB- C18 3.5μm4.6mm×150mm3.2 流动相：A：0.1%甲酸的水溶液∶乙睛（85∶15）B：0.1%甲酸的乙睛溶液∶丙酮（80∶20）流速：1ml/min；柱温：30℃；检测波长478nm；进样量：10μl。
梯度条件见表1表1 梯度条件时间（min）流动相A% B%0 25 7510.0 25 7525.0 0 10032.0 0 10035.0 25 7540.0 25 754.方法学考察4.1 溶液制备4.1.1 对照品溶液的制备分别精密称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ各10.0mg（按实际含量折算），置250ml量瓶中，加乙醚溶适量使溶解，加正己烷稀释至刻度，摇匀，作为标准储备液。
精密吸取标准储备液0.0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6ml，置25ml量瓶中，加丙酮稀释至刻度，即得。
此标准系列浓度为0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56μg/ml。
4.1.2 供试品溶液的制备称取粉碎样品2g～4g（准确至0.01g），置50ml离心管中，加入水3m，l匀浆1min将其分散成糊状，加入正己烷∶丙酮（3∶1）6ml，充分匀浆5min，3000rpm离心10min，吸出正己烷液，于下层再加入次正己烷（4ml、4ml），匀浆，离心，合并3次正己烷液，加入无水硫酸钠1g脱水，滤过，滤液置旋转蒸发仪蒸干并保持5分钟，用正己烷溶解并缓缓转移至已处理氧化铝层析柱上，用正己烷少量多次冲洗浓缩瓶，一并注入层析柱，用40ml正己烷洗脱至流出液无色，蒸干，残渣用丙酮适量使溶解并定容至2ml，过微孔滤膜（0.45μm），即得。
4.2含量计算按公式（1）计算苏丹红含量C×VR = ───── (1)MR：样品中苏丹红含量，单位为mg/Kg；C：由标准曲线得出的样液中苏丹红的浓度，单位为μg/ml；V：样液定容体积，单位为m l；M：样品质量，单位为g。
4.3线性关系的考察分别精密称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ各10 mg（按实际含量折算），置250ml量瓶中，加乙醚适量使溶解，加正己烷稀释至刻度，摇匀。
精密吸取0ml、0.1ml、0.2 ml、0.4 ml、0.8 ml、1.6ml，置25ml量瓶中，加丙酮稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl进样，按上述色谱条件测定。
以峰面积对进样量进行回归分析，绘制标准曲线。
结果见表2表2 标准曲线测定结果序号 1 2 3 4 5 6 苏丹红Ⅰ浓度（μg/ml）0 0.1608 0.3216 0.6433 1.2867 2.5735峰面积积分值平均值0 7.00485 14.21628 28.25115 54.9508 110.3807 回归方程（苏丹红Ⅰ）y=42.78x+0.2488 r=0.9999苏丹红Ⅱ浓度（μg/ml）0 0.1671 0.3342 0.6684 1.3368 2.6736峰面积积分值平均值0 7.0934 14.10284 29.97735 58.42848 117.8936 回归方程（苏丹红Ⅱ）y=44.132x-0.1852 r=0.9999苏丹红Ⅲ浓度（μg/ml）0 0.1599 0.3198 0.6396 1.2792 2.5585峰面积积分值平均值0 6.783685 13.03387 27.85217 54.41752 110.2893 回归方程（苏丹红Ⅲ）y=43.122x-0.2311 r=0.9999苏丹红Ⅳ浓度（μg/ml）0 0.1609 0.3218 0.6436 1.2872 2.5745峰面积积分值平均值0 5.946615 11.76104 24.9113 48.44117 99.15771 回归方程（苏丹红Ⅳ）y=38.504x-0.3077 r=0.99994.4 回收率试验取已知不含添加剂的空白样品2份，分别精密加入苏丹红对照品适量，按拟订的含量测定方法制备供试品溶液，测定每份样品中苏丹红的含量，计算回收率。
结果见表3表3 回收率试验结果编号取样量（g）对照品加入量（μg）样品含量（μg）回收率（%）1 苏丹红Ⅰ2.3111.2867 0.9173 71.28 苏丹红Ⅱ 1.3368 0.9890 73.98 苏丹红Ⅲ 1.2792 0.8536 66.72 苏丹红Ⅳ 1.2872 1.0326 80.212苏丹红Ⅰ2.8811.2867 0.9982 77.57苏丹红Ⅱ 1.3368 0.9688 72.47苏丹红Ⅲ 1.2792 0.8881 69.42苏丹红Ⅳ 1.2872 1.0057 78.134.5方法最低检出限试验取已知不含添加剂的空白样品，分别精密加入苏丹红对照品适量，按拟订的含量测定方法制备供试品溶液，测定每份样品中苏丹红的含量，计算最低检出限。
结果见表4表4 最低检出限测定结果苏丹红Ⅰ苏丹红Ⅱ苏丹红Ⅲ苏丹红Ⅳ按总蛋重计算（μg/Kg） 3.3 7.1 7.1 7.5按蛋黄重计算（μg/Kg）9.4 20.4 20.4 21.55.实验结果在选定的条件下，苏丹红（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）与样品中其他组分色谱峰可基线分离，分离度均大于1.5，且苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ色谱峰之间基线分离，分离度均大于 1.5；按苏丹红（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）峰计算，理论板数（N）均在10000以上。
对照品、供试品、加样回收试验、最低检出限试验的HPLC图谱见图1～4。
6.讨论6.1层析用氧化铝活化程度的考察不同厂家和不同批号氧化铝的活度有差异，须根据具体购置的氧化铝产品略作调整，活度的调整采用标准溶液过柱，将1μg/ml的苏丹红的混合标准溶液1ml加到柱中，用5%丙酮正己烷溶液60ml完全洗脱，4种苏丹红在层析柱上的流出顺序为苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅲ，可根据每种苏丹红的回收率作出判断。
苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ的回收率较低表明氧化铝活性偏低，苏丹红Ⅲ的回收率偏低时表明活性偏高。
为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，控制氧化铝表层吸附的色素带宽宜小于0.5cm。
6.2溶解对照品溶剂的考察：文献[2]中，对照品用乙醚溶解后，用正己烷定容，其中苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ色谱峰峰形较好，但苏丹红Ⅲ色谱峰峰形较差，改用丙酮定容后，苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ色谱峰峰形均较好，理论板数均达到10000以上，故确定对照品定容溶剂为丙酮。
6.3提取方法的考察：采用欧洲标准[3]方法，加样回收试验中，杂质峰较多，对照品色谱峰与样品中其他组分色谱峰不能基线分离，故未采用其方法；文献[2]中，在洗脱样品时采用10ml～30ml正己烷淋洗氧化铝层析柱，直至流出液无色。
弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60ml洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5ml，经0.45μm有机滤膜过滤后待测。
但实际加样回收试验中发现正己烷淋洗液中含有绝大部分对照品，而含5%丙酮的正己烷洗脱液中几乎无对照品，故将方法改为：在洗脱样品时用约40ml正己烷洗脱氧化铝层析柱，直至流出液无色，收集、蒸干后，用丙酮转移并定容至2ml，经0.45μm有机滤膜过滤后待测，加样回收试验结果为回收率在66%～80%之间，结果较好，采用改进方法。
参考文献[1] 夏宁苏丹红的种类及其对人类的危害内肛科技2005年第四期[2] 中华人民共和国国家标准GB/T1961-2005[3] 欧洲健康与消费者保护综合委员会第四分委员会——生产与流通环节的食品安全第三部——物理化学危害监督新方法声明：03/99（辣椒粉以及辣椒为主要成分的产品中苏丹红和胭脂树橙的含量分析）图1 苏丹红对照品色谱图图2 供试品色谱图图3 加样回收试验色谱图图4 最低检出限试验色谱图。
