试验十食品中苏丹红染料的测定

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食品中苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测方法的研究

食品中苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测方法的研究刘向前;李明;季华国【摘要】目的在现用专项检测标准的基础上,优化一种合理、快速的基于高效液相色谱分离的测定苏丹红Ⅰ ～Ⅳ的方法.方法探讨了提取溶剂、吸附剂、洗脱溶剂等对苏丹红分离的影响.结果在相同流动相和测定波长下,改进后的方法标准曲线线性非常好,r大于0.999 99,RSD为1.3％～1.5％,样品加标回收率为94.5％～109.4％.结论可用于苏丹红Ⅰ～Ⅳ的检测,具有灵敏度高、重现性好的特点.【期刊名称】《食品安全导刊》【年(卷),期】2016(000)024【总页数】3页(P134-136)【关键词】食品;苏丹红Ⅰ～Ⅳ;高效液相色谱法【作者】刘向前;李明;季华国【作者单位】丽江市食品药品检验所;丽江市食品药品检验所;丽江市食品药品检验所【正文语种】中文苏丹红是一种人工合成的染料，广泛用于如溶剂、油、蜡和汽油的增色以及鞋、地板等的增光[1]，苏丹红是亲脂性偶氮苯化合物，主要包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ4种类型（见图1），由于具有潜在的致癌性，中国和欧盟都禁止将其作为食品添加剂[2]，但因苏丹红成本低、着色性好，仍被很多商家非法使用，食品中检测出苏丹红的报道时有发生，因此有必要建立简单、快速、高效的苏丹红分析检测方法，目前测定苏丹红的主要方法有高效液相色谱法、薄层色谱法、气质联用法、荧光光谱法等[3-7]。

现行检测标准是GB/T 19681-2005，对样品处理过程较比较复杂，分离效果不好，在实际操作中经反复实验，对此方法进行了改进，实验结果比较满意。

Agilent 1260液相色谱仪（配有二极管阵列检测器，美国），LabTech EV311旋转蒸发仪（北京莱伯科技有限公司），赛多利斯BT224S电子天平（德国）。

甲醇、乙腈、丙酮、正己烷（HPLC级，Fisher scientific）、甲酸（分析纯，天津市风船化学试剂科技有限公司）、层析柱管和层析用中性氧化铝（100～200目）。

食品中苏丹红的液相色谱三重串联四极杆质谱确认分析

子离子２９２为母离子，行子离子扫描。子离子扫描结果见４．进
仪器：高效液相色谱仪一质谱联用仪（ＣＭ／）包括美Ｌ／ＳＭＳ，国Ｗａｅ６５高效液相色谱仪，ｔｕｔｏＭｉｏｔｓ２９ｒＷａｒＱａｒｃ三重四极ｅｓｔｒ杆串联质谱仪，ｔｒＭｓｌｘ软件系统；ＷａｓａｓｎＩｅｙ４混合器，振荡器。试剂：乙腈（ｒｋＧｒｎ，谱纯）水（ｌｏｅＵ，Ｍｅ，ｅｍａｙ色ｃ，Ｍｉｐｒ，Ｓ超ｉ级纯）甲酸（ｅｉ，ＳＨＰＣ级）苏丹红１号、、，ＴｄａＵＡ，Ｌ，２号３号、４号标准品（ｒＥｒｎｔｒｒＧｒａｙ。Ｄ．ｈｅｓｆ，ｍｎ）ｏｅｅ样品：人送检、个市场监测的样品。
标准使用液：４种苏丹红１０ｇＬ的标准贮备液１０取０ｍ／．０
ｍＬ用乙腈定容到１０ｍＬ容量瓶中，合溶液浓度即为１０，０混．０
Ｉ／。ｌＬ１ｇ
１４样品前处理．
称取１．０样品于三角瓶中，００ｇ用量筒加入１０Ｌ乙腈，０ｍ在
Ｔｍ）０Ｔ；ｅｐ１０：脱溶剂温度（ｅｖｏｅｐ３０锥孔气流速ＤｓａｎＴｍ）５ｏｏｆｉＣ；
（ｏｅＧｓＦｏ５Ｌｈ脱溶剂气流速（ｅｏａｏｓＦｏＣｎａｌｗ）０／；ＤｓｌｔｎＧｌｖｉａｗ）
５０／。０Ｌｈ
特性，现在越来越受到国内外普遍关注。自２００３年４月印度出口的红辣椒制品中发现苏丹红１之日起，丹红事件便屡见号苏不鲜。据报道，辣椒（）鸡蛋、油、鸭蛋、化妆品、腐乳等多种样品中均检出苏丹红。２００４年１月，欧盟将辣椒制品的苏丹红检测范围扩大到苏丹红２号、苏丹红３号、苏丹红４号。食品安全体系中痕量违禁化合物分析面临严格的标准和法规要求，盟、欧美国、日本以及我国对进出口农副产品相继采取零风险保护措施。为了应对苏丹红事件，国在２０我０５年制订了苏丹红检测方法ｊ。我们利用Ｌ／／ＣＭＳＭＳ对食品中苏丹红１号、丹红２苏号、苏丹红３号、丹红４号进行确认分析。苏

苏丹红Ⅰ的单扫描极谱法测定

１２主要试剂．
・
５ＵＵ
－ＵＵ６
一ｏＵ［
－ｓ；ｔｕｔ
一ｕｗ
－ｌｕｗ
－ｕ１Ｉｕ
电压／ｍｖ
图Ｉ苏丹红Ｉ的二阶导数极谱波形图（．ｗ，ｍ）１ｏｅＬ／
Ｆｇ１ＴｅｐｌｒｇｍｆＳｄｎＩｉ．ｈｏａｏｒｎｏｕａ
１３实验方法．
佃
１３１标准曲线的绘制准确吸取０１０２．．．、．、０４０６０８１０１２１４１６．、．、．、．、．、．、．ｍＬ苏丹红Ｉ标准使用溶液于９支１ｍＬ比色管中，人４０Ｌ饱和０加．ｍ硼砂溶液，．ｍＬ无水乙醇，蒸馏水定容至刻１０用度。混匀，将溶液转入１ｍＬ小电解杯中，入三０插电极，始电位－１ｍ，电位－９ｍ弧ＳＥ处起５２ｙ峰７０Ｖ（Ｃ）测定，丹红Ｉ的二阶导数极谱波如图１所示。苏记录各浓度的平均峰电流，制标准曲线。绘
第２第ｌ０卷０期２００８年１Ｏ月
化学研究与应用
ＣｅｃｌＲｅｅｒｈａｄＡｐｌａｉｎｈｍｉａｓａｃｎｐｉｔｃｏ
Ｖｏ．０．１２Ｎｏ．１ＯＯＣ．．０ｔ２０８
文章编号：０４１５（０８１－３１４１０．６６２０）０１８－０
号（物染色剂，中国医药公司北京采购供应站）生０１０ｇ转入１０Ｌ容量瓶中，丙酮定容至刻．００，０ｍ用度处，即得到浓度为１ＯｇｍＬ的标准储备溶液。．ｍ／用时取１Ｏ。ｍＬ标准储备液至ｌＯＯｍＬ容量瓶中，用丙酮定容至刻度，到浓度为１１／得０ｇｍＬ的标准使ｘ＜／１Ｉ薅申用溶液。所用试剂皆为分析纯。

超高效液相色谱法测定番茄酱中4种苏丹红染料残留效果研究

缩短了检测时间。超高效液相色谱快速检测苏丹红染料的
１．２．３色谱条件。色谱柱：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＭＴＢＥＨＣ１８柱（２．１ｍｍ￣５０．０ｍｍ，１．７ｍ）；流动相：乙腈：水（ｖ／ｖ）＝８８：１２，等度洗脱；流速０Ｉ３ｍＬ／ｍｉｎ；柱温３０℃ ；进样量１ＯＬ；检测波长为
烷（ｖ／ｖ）＝５：９５洗脱，收集。５０℃氮吹至近干，用１ｍＬ流动相
溶解定容，过０．２２Ｉｘｍ滤膜，上机。
鲜、郁香的调味佳品。被大量用于意大利粉中，也可蘸炸鸡、炸鱼和薯条。国内对辣椒酱中苏丹红染料的检测有较多报道。但番茄酱较少。而国内已有文献报道检测苏丹红染料残留方法均为高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）［１－２，４１，但是方法普遍存在样品分析时间长、检出限高等缺点。而ＵＰＬＣ由于采用了１．７ｍ的小粒子填充柱，柱效提高，有更好的分离效率，
际癌症研究机构（ＩＡＲＣ）１９９５年确定。苏丹红属第三类致癌
柱、铁架台。
１．２试验方法
１．２．１样品的提取。称取１０ｇ（精确到０．０１ｇ）番茄酱于１００ｍＬ

食品中苏丹红检测方法的比较和优化

食品中苏丹红检测方法的比较和优化江晨舟;孙洁敏;张驰中;邵明华【摘要】采用GB19681-2005规定的高效液相色谱法（HPLC）对食品中的苏丹红含量进行检测，并对该方法进行前处理条件和色谱条件的优化。

实验研究结果表明，经优化的方法专用SPE小柱有较好的回收率，SPE过程简单直观，易于操作，色谱分析条件简单快速，流动相易于配制，回收率稳定在95.0%～98.0%，优于高效液相色谱法的回收率80%～90%，因此更适合于食品中苏丹红含量的检测。

%The high performance liquid chromatography(HPLC) stipulated in GB 19681-2005 was adopted to detect sudan red in foods. The detection method was optimized in pre-treatment conditions and chromatographic conditions. Compared with the HPLC, the experimental results showed that the dedicated SPE cartridges had good recovery, SPE process was simple and intuitive, easy to operate, chromatographic conditions were simpleand rapid, the mobile phase was easy to prepare, the recoveries was95.0%-98.0%, which was superior to the recovery of HPLC 80%-90%, so the optimized detection method is more suitable for detecting sudan red in foods.【期刊名称】《上海计量测试》【年(卷),期】2016(043)003【总页数】7页(P18-24)【关键词】HPLC;苏丹红;食品;光学诱导异构【作者】江晨舟;孙洁敏;张驰中;邵明华【作者单位】上海安谱实验科技股份有限公司;上海安谱实验科技股份有限公司;上海安谱实验科技股份有限公司;上海安谱实验科技股份有限公司【正文语种】中文苏丹红是一类人工合成的亲脂性、偶氮类染料，主要包括苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ四种类型，见图1。

紫外可见分光光度法检测蛋黄中微量苏丹红IV

分别取五个市售鸭蛋，按实验方法进行预处理，测试其苏丹红Ⅳ的含量，结果显示均不含苏丹红Ⅳ，对样品进行加标回收实验。对每个样品加标平行测定五次，计算其标准偏差。通过测定所得加标回收率在 97%~105%，相对标准偏差小于 3.5%，具体见表 1。此法准确性和精密度均较高，可应用于蛋黄中苏丹红 IV 的定量检测。
Technology 科技分析与检测
紫外可见分光光度法检测蛋黄中微量苏丹红 IV
□ 李锦城深圳市测达农产品检测有限公司
摘要：本实验建立了紫外可见分光光度法检测蛋黄中微量苏丹红Ⅳ的新方法，蛋黄样品经过预处理后利用紫外 - 可见光检测器测定吸光度，并用外标法分析定量。当苏丹红 IV 在 1~12 μg/mL 时，其特征峰的吸光值与苏丹红Ⅳ含量呈良好线性性关系。运用于蛋黄实际样品检测，其加标回收率为 97%~105%，检出限低至 0.05 μg/mL，测定结果与其他方法比对无显著差异。该方法具有简单、快速、准确度高等特点，能运用于蛋黄中微量苏丹红Ⅳ的快速测定。
3 结论
本文以紫外可见分光光度法实现了蛋黄中微量苏丹红Ⅳ的快速测定。此法设备简单、成本低、耗时短、精密度和准确度高，可应用于蛋黄中微量苏丹红Ⅳ的快速测定。
参考文献 [1]Stiborova M,Martinek V,
Rydlora H,et al.Sudan Ⅰ is a potentialcarcinogen for humans: Evidence for its metabolic activation and detoxication by human
图 1 吸收光谱曲线
注：1. 加标蛋黄提取液；2. 纯蛋黄提取液；3. 苏丹红Ⅳ标准液
表 1 苏丹红 IV 的加标回收率测定

苏丹红快速检测试剂

商品名称：苏丹红快速检测试剂规格：50批次/盒包装：苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各1瓶，层析纸，毛细管检测项目：鸡蛋、鸭蛋、咸鸭蛋、辣椒粉、辣椒酱等食品产品简介：本产品为苏丹红快速检测试剂，利用层析法来判断食品中是否含有苏丹红，整个检测过程中需要10-15分钟左右。

使用方法1.取1克样品于10mL具塞试管中，加入4mL提取剂，振摇提取1分钟，静置5分钟。

2.取一张层析纸，在端底向上1cm处、平行相隔1cm、用铅笔画出将要点样的五个“+”字线或点五个小点。

3.用四支毛细管（可重复使用）分别沾取苏丹红1、2、3、4号标准对照液少许，分别点在层析纸四个“+”字线上，另取一支毛细管沾取静置后样品溶液，将其点在层析纸第五个+字线上（溶液的颜色较浅时，可在每次点样斑点挥干后重复点样），斑点直径控制在5毫米以内。

4.向薄层层析缸加入约10mL展开剂（可重复使用），将层析纸（样品端朝下）插入展开剂中靠在杯壁上，待展开剂延层析纸向上平行展开至约 7厘米处时取出层析纸，观察结果。

5.结果判断：如果样品提取液为无色或显红色或橙红色以外的其他颜色，可排除被检样品含苏丹红。

如果样品在展开轨迹中出现斑点，其斑点展开（向上跑）的距离与某一对照液展开后的斑点距离相等、形状相同、颜色虽浅却相近时，即可判断样品中加入了这一色素。

注意事项1.本方法能够判定样品中是否加入了目视可见的苏丹红（1、2、3、4号），同时对判断样品中是否加入了其它非食用色素也有一定的参考价值，论据在于国家标准允许使用的辣椒红天然色素以及允许使用的合成色素在本方法展开过程中不会形成斑点，对出现异常斑点的样品，可用高效液相色谱仪进一步确正。

注意：国家允许使用的红曲天然色素在展开后的前沿顶端会形成斑点，需要时可用对照液作对比实验。

2.检测的样品数量较多时，不必每张层析纸上都点对照液，可一次点5个样品，当展开过程中出现斑点后，需要重复实验时再点对照液。

3.如果展开结束后顶端或点样原点出现斑点，可能是干扰物质。

液相色谱串联质谱法测定饲料中的苏丹红

检测分析
３４
饲料广￣ｏ２２１年第１期０
●
— —
Ｄｍａ１Ａ咖ｔ２ｎｉ０ｄ
液相色谱串联蔟谱法测定饲料中的苏丹红
贾涛
摘
要：于苏丹红添加于饲料中使用．禽蛋蛋黄由使
由于鸡蛋、蛋等蛋黄呈现红色很受广大消鸭
定量测定试样中苏丹红的含量与液相色谱串联
和其他的一些工业溶剂中．目的是使其增色，也
用于鞋、地板等的增光。别名：一基偶氮一一１苯２萘
酚；苏丹黄；．溶剂黄１；．１０５苏丹Ｉ一号ＣＩ．４ＣＩ２５；．；
呈现红色．消费者在食用这种红心蛋后会有致癌风险；本
费者的欢迎，致使不法养殖企业（体户）苏丹个将红添加于饲料中使用，使禽蛋蛋黄呈现红色：而不是提高饲料中营养价值使禽蛋蛋黄呈现红色由于苏丹红的致癌性．给消费者的身体与生命会
试样中苏丹红染料经正己烷振荡提取后．旋转蒸干浓缩，碱性氧化铝小柱净化，用最后液相色谱串联质谱仪中进行分离。用色谱检测器和质谱检＿器进行定性、２贝４
超纯水定容至ｌ００Ｌ容量瓶中，匀：０ｍ摇
贾涛：京市饲料监察所，北畜牧师，化检验室检验理员。量监督员。质

苏丹红快速检测试剂盒安全操作规定

苏丹红快速检测试剂盒安全操作规定1.背景苏丹红是一种在食品加工过程中使用的着色剂，但是苏丹红会对人体健康造成危害。

因此，在食品检测中苏丹红含量的检测就显得十分重要。

苏丹红快速检测试剂盒是一种常用的检测工具之一。

但是，使用苏丹红快速检测试剂盒的时候需要注意安全操作规定，以避免对自己和他人造成伤害或者污染环境。

2.操作人员准备在进行苏丹红快速检测试剂盒的操作之前，操作人员必须做好以下准备：1.阅读并了解产品手册，熟悉测试剂盒的型号、使用方法、处理方法、注意事项等内容；2.佩戴防护衣物、护目镜、手套等保护装备；3.检查测试剂盒的包装、颜色和生产日期，确保测试剂盒没有损坏或已过期；4.将测试剂盒放在干燥、避光、通风的地方存放，以避免受潮或受光影响。

3.开启测试剂盒在开始进行苏丹红快速检测试剂盒的测试之前，必须开启测试剂盒。

开启测试剂盒应该遵循以下原则：1.使用洁净的器具打开测试剂盒；2.将测试剂盒放在水平台上；3.在潮湿的环境中，应尽量缩短测试剂盒暴露的时间；4.在开启测试剂盒之后，应立刻将剩余的试剂密封存放，避免试剂失效。

4.安全操作流程在进行苏丹红快速检测试剂盒的测试之前，必须严格遵守下列安全操作流程：1.测试剂盒使用前应检查其是否存在破损、过期等情况；2.佩戴个人防护装备，包括手套、口罩、护目镜等；3.测试剂盒打开后，勿用手接触任何试剂；4.在试剂稀释、分液或倒液时，应佩戴手套和护目镜，以免皮肤接触试剂；5.尽量避免试剂的飞溅和散播，确保实验室的干净卫生；6.在进行试剂的混合或分液操作时，应立刻及时清洗液体和器具，避免对其造成腐蚀或污染。

5.事故处理在进行苏丹红快速检测试剂盒的过程中，如果出现以下事故，必须采取相应的措施：1.如果测试剂盒被打破，应迅速用盛有吸收剂的容器接收其中的液体，遵守生物安全等有关要求；2.如果试剂意外飞溅到皮肤上，应立刻用清水冲洗至少15分钟，并尽快就医；3.如果试剂入眼，应立刻用清水冲洗至少15分钟，并立刻就医。

高效液相色谱法测定辣椒油中苏丹红的含量

(VOL.45,No.04April.2020~l--------------------------------------------Grain science and technology and economy I粮食科技与经济丨101高效液相色谱法测定辣椒油中苏丹红的含量许秦，唐一秋,郑世妍（昆明市食品药品检验所，云南昆明650000）［摘要］本文对国家标准《食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法》（GB/T19681—2005）中利用高效液相色谱法测定辣椒油中苏丹红含量的方法进行优化,使方法更加简便快捷，且满足实验要求。

以正己烷为提取溶剂，提取液经ProElut SDH固相萃取柱净化，经高效液相色谱柱分离，外标法定量。

优化后的方法中，苏丹红I〜N在0.16~2.56g g/mL的浓度范围内线性关系良好，苏丹红I〜N的检出限分别为0.0107p g/kg、0.0111p g/kg、0.0119p g/kg、0.0110p g/kg,加标回收率为89.21%〜95.69%。

优化后的实验方法易于操作，能够缩短实验时间，有良好的回收率，更适合检测辣椒油中苏丹红的含量。

［关键词］高效液相色谱法;辣椒油；苏丹红中图分类号：0657.72;TS264文献标识码：A DOI：10.16465/431252ts.20200431苏丹红是亲脂性偶氮化合物，它的化学成分中含有一种叫萘的化合物,此物质具有偶氮结构，这种化学结构决定了它的致突变性和致癌性，对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用，在人类肝细胞研究中显现出可能致癌的特性。

苏丹红属于化工染色剂,主要用于石油、机油和其他一些工业溶剂中，目的是使其增色,在我国禁止应用于食品加工。

食品中苏丹红含量的检测方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、近红外光谱、凝胶渗透色谱、液相色谱-质谱联用法，该方法有机试剂用量大、操作过程烦琐、耗时长。

本文对此方法进行了优化，使操作过程简单直观,减少了有机试剂用量，缩短了实验时间，提高了实验效率，更适合用于辣椒油中苏丹红含量的检测［1-4］。

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❖ 称取10g ~ 20g (准确至0.01g)样品于离心管中，加 10mL ~20mL水将其分散成糊状，含增稠剂的样品多加水，加入30mL 正己烷：丙酮 =3 ：1，匀浆5min ， 3000 rpm离心10min，吸出正己烷层，于下层再加入 20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次正己烷，加入无水硫酸钠5g脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并保持5 分钟，用5mL 正己烷溶解残渣后，按1中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm有机滤膜过滤后待测”操作。
五、结果计算
❖ X= c*V/m
❖ 式中 X——样品中苏丹红含量（mg / kg）；
❖
c ——由标准曲线得出的样液中苏丹红
的浓度（μg / mL）；
❖
V——样液定容体积（mL）；
❖
m ——样品质量（g）。
苏丹红色素色谱分离图
❖ （一）试剂三、仪器与试剂
❖ 1、乙腈（色谱纯） ❖ 2、丙酮（色谱纯、分析纯） ❖ 3、甲酸（分析纯） ❖ 4、乙醚（分析纯） ❖ 5、正己烷（分析纯） ❖ 6、无水硫酸钠（分析纯） ❖ 7、层析柱管：1cm (内径)5cm (高)的注射器管。 ❖ 8、层析用氧化铝（中性 100目~200目） ❖ 9、氧化铝层析柱10、5%丙酮的正己烷溶液：吸取50mL 丙酮用
❖ 一、目的要求 ❖ 学习食品中苏丹红染料测定的原理和方法。
❖ 二、实验原理苏丹红色素是应用于油彩蜡、地板蜡
和香皂等化工产品中的一种非生物合成的着色剂，非食用色素，长期食用具有致癌致畸作用。苏丹红色素一般不溶于水易溶于有机溶剂，待测样品经有机溶剂提取，经浓缩及氧化铝柱层析萃取净化，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。
❖ 2、红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品
❖ 称取0.5g~2g（准确至0.001 g）样品于小烧杯中，加入约1mL ~ 10mL 正己烷溶解,难溶解的样品可于正己烷中加温溶解。然后按1中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm有机滤膜过滤后待测”操作。
❖ 3、辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品
正己烷定容至1L。 ❖ 11、标准物质：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；纯度
≥95%。 ❖ 12、标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏
丹红Ⅳ各10.0mg（按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。
（二）仪器
❖ 1、高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器） ❖ 2、分析天平：感量 0.1mg ❖ 3、旋转蒸发仪 ❖ 4、均质机或匀浆机 ❖ 5、粉碎机 ❖ 6、离心机 ❖ 7、0.45μm有机滤膜
四、实验步骤
（一）样品制备：将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需粉碎磨细。
（二）样品处理： ❖ 1、红辣椒粉等粉状样品 ❖ 称取1g ~ 2 g（准确至0.001 g）样品于三角瓶中，加入
10mL ~20mL 正己烷，超声处理5min，过滤，用10 mL 正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5 mL 以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。控制氧化铝表面吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂质的多少用10mL ~30mL 正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL 洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至 5mL，经0.45μm有机滤膜过滤后待测。
（三）测定
❖ 色谱检测条件
（1）色谱柱：Zorbax SB-C18 3.5μm 4.6mm150mm （或相当型号色谱柱）
（2）流动相：溶剂A 0.1%甲酸的水溶液：乙腈 = 85 ： 15；溶剂B 0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮 = 80 ：20红Ⅰ 478nm ；苏丹红Ⅱ、苏丹红 Ⅲ、苏丹红Ⅳ 520nm ；于苏丹红Ⅰ出峰后切换。
2、标准曲线制备
❖ 吸取标准贮备液0、0.1、0.2、0.4、0.8、 1.6mL ，用正己烷定容至25mL ，此标准系列浓度为0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56μg / mL ，各进样量10μL，绘制标准曲线。
❖ 3、样品测定：吸取10μL样品处理液，按标准曲线制备检测色谱条件对样品进行测定。与标样对照，根据峰保留时间定性以及相应峰面积定量。
❖ 4、香肠等肉制品
❖ 称取粉碎样品10g ~ 20g (准确至0.01g)于三角瓶中，加入60mL 正己烷充分匀浆5min，滤出清夜，再以20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次滤液，，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸至5mL以下，按1 中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm 有机滤膜过滤后待测”操作。