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超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红陈 英（周至县食品药品检验检测中心，陕西西安 710400）摘 要：运用超高效液相-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋、鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ。
通过优化萃取试剂、样品基质效应的消除、色谱及质谱条件等参数，检测方法的灵敏度和适用性。
在电喷雾离子源正离子模式下，多反应监测（MRM）方式检测，外标法定量。
苏丹红Ⅰ～Ⅳ线性关系良好，相关系数（r2）均大于0.999，苏丹红Ⅰ～Ⅳ在3个添加水平下，回收率范围为85.1%～104.9%，标准偏差（RSD）均小于6.2%，检出限和定量限为1.0～6.0μg/kg。
本方法处理过程简单、分析时间短、准确度高，适用于辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋和鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测，可用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。
关键词：超高效液相-串联质谱法；苏丹红；非法添加苏丹红共有4个组分，为苏丹红Ⅰ～Ⅳ，是一种红色颗粒或粉末状的红色染料常用于工业上色如鞋、地板等的增光，因为有致癌作用危害人体健康，我国和欧盟都禁止其用于食品生产[1]。
市面上有一些不法分子为了产品成色漂亮好出售，依然违法添加工业染料。
目前，苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测方法主要有薄层色谱法[2]、紫外可见分光光度法[3]、近红外显微成像光谱法[4]、液相色谱法[5-6]、液相色谱-质谱联用法[7-8]和化学发光分析法[9]，这些方法前处理复杂、试剂用量大、检测周期长、准确度不高，不适应实际工作中遇到的多种复杂基质中苏丹红的筛查测定。
本试验通过对色谱条件和质谱参数的研究、优化，建立了高效液相色谱-串联质谱同时分析苏丹红Ⅰ～Ⅳ的方法。
本方法前处理简单，7 min即可同时测出苏丹红Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速简单，结果准确，可以用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。
1 材料与方法1.1 仪器与试药液相色谱-串联质谱联用仪：Qtrap 5500三重四极杆串联质谱仪（美国AB SCIEX公司）；配有电喷雾离子源（ESI）；LC20A超高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；MS1003S电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司）；MFV-24智能氮吹仪（广州德泰仪器科技有限公司）。
苏丹红最新检测方法下载苏丹红检测套装：固相萃取柱：HiCapt Sudan苏丹红专用柱(500mg/3mL，订货号：22-05003)液相色谱柱：HiSep C18-T 150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm（订货号：0246150）苏丹红是偶氮苯类人工色素,由于苏丹红具有潜在的致癌性, 中国和欧盟等多数国家都禁止其作为色素添加剂在食品中使用。
然而, 仍有不少食品生产企业为了改善食品色泽、降低成本将其作为食用色素。
我国质量监督部门检出了包括几家知名企业生产的众多含有苏丹红的食品, 引起了整个社会的关注。
因此，建立快速可靠的检测方法至关重要。
目前报道的苏丹红的检测方法主要是采用液相色谱法。
由于辣椒油、辣椒粉等食品成分复杂,液相色谱分离困难,易导致假阳性结果。
国家标准的方法是采用正已烷作为萃取溶剂，用氧化铝固相萃取柱净化样品。
但该方法样品处理过程复杂，而且氧化铝的活性不易控制，方法回收率难以得到保证。
因此我们开发了HiCapt Sudan苏丹红专用固相萃取柱，建立了同时检测食品中四种苏丹红的高效液相色谱分析方法，较好地解决了这一问题。
方法的优势：∙专利创新的苏丹红专用萃取填料，有效去除食品中的天然色素和植物油等杂质干扰∙回收率稳定、重现，克服了传统方法中氧化铝活性不稳定的缺陷∙方法简单、快速、节省溶剂∙优化的色谱分离条件，有效去除杂质干扰1. 样品处理：1.1 样品提取：（参考国标GB/T 19681—2005）1.1.1辣椒粉等粉状样品称取0.5 g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入5mL正己烷，超声10min，5000 r/min离心5 min 后取上清液3 mL，待净化。
1.1.2辣椒油等油状样品称取0.5 g（准确至0.001g）样品于小烧杯中，加入3mL正己烷溶解，涡旋1分钟混匀，待净化。
1.1.3腊肠样品将腊肠切成小丁，称取3.0 g, 放入10 mL离心管中，加入5 mL正己烷，超声10分钟，然后步骤同辣椒粉样品。
实验十、食品中苏丹红染料的测定标准依据：GB/T19681-2005食品中苏丹红染料的测定（高效液相色谱法）一、目的要求学习食品中苏丹红染料测定的原理和方法。
二、实验原理苏丹红色素是应用于油彩蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成的着色剂，非食用色素，长期食用具有致癌致畸作用。
苏丹红色素一般不溶于水易溶于有机溶剂，待测样品经有机溶剂提取，经浓缩及氧化铝柱层析萃取净化，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。
三、仪器与试剂（一）试剂1、乙腈色谱纯2、丙酮色谱纯、分析纯3、甲酸分析纯4、乙醚分析纯5、正己烷分析纯6、无水硫酸钠分析纯7、层析柱管：1cm (内径) 5cm (高)的注射器管。
8、层析用氧化铝（中性100目~200目）：105℃干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL 水降活，均匀后密封，放置12h 后使用。
9、氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，经敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL 正己烷预淋洗，洗净柱杂质后，备用。
10、5%丙酮的正己烷溶液：吸取50mL 丙酮用正己烷定容至1L。
11、标准物质：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；纯度≥95%。
12、标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.0mg （按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250m L。
（二）仪器1、高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器）2、分析天平：感量0.1mg3、旋转蒸发仪4、均质机或匀浆机5、粉碎机6、离心机7、0.45μm有机滤膜四、实验步骤（一）样品制备：将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需粉碎磨细。
（二）样品处理：1、红辣椒粉等粉状样品称取1g ~ 2 g（准确至0.001 g）样品于三角瓶中，加入10mL ~20mL 正己烷，超声处理5min，过滤，用10 mL 正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5 mL 以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。
苏丹红检测方法一、高效液相色谱法1.高效液相色谱法目前国内已普及应用的高效液相色谱仪就可准确完成4种苏丹红染料的检测。
它采用了简单的正相吸附固相萃取原理，一次性去除了样品中红辣椒和番茄中的干扰成分，制定这项标准时确定了科学的方法流程，这一流程也是实际检测时应遵循的检测流程，即样品制备－称样－分散－提取－离心－分出上清－蒸干－正己烷溶解－固相萃取－洗脱－定容－上机。
据介绍，这种检测易于操作，只要配备了相应的仪器，关键是高效液相色谱仪，我国县级以上技术结构的检测人员均可以依据标准对食品中的苏丹红含量进行有效的检测。
它具有如下特点适用范围宽。
由于本方法具有高提取率、高纯化性能、高浓缩倍数，既可以用于检测含苏丹红量相对较多的食品，也可以检测含苏丹红量极少的食品。
无论何种基质的样品，都可以应用本标准对食品中的苏丹红进行检测。
高提取率。
对于纯油基的样品（像辣椒油）采用正己烷直接溶解，可保证提取率达95%。
对于水基的食品（像番茄沙司），经水和丙酮分散后采用正己烷提取，也可保证提取率在85%以上。
高纯化性能。
标准确定了中性氧化铝粉作固相萃取，利用了氧化铝对苏丹红的强吸附能力，并对油脂进行饱和性吸附。
在前处理时借助极性固相萃取填料一次性将干扰和污染物最大可能除掉，有助于将油性样品中的大量油脂在随后的清洗步骤中脱除。
实验表明，氧化铝可以有效脱除样品中的干扰成分，使液相谱图干净清晰。
高浓缩倍数。
实际检测中可以根据需要，任意地对目标化合物进行浓缩，目标化合物不因为被浓缩而影响其纯净度，可大大降低检出限，即不会对检测结果的准确性产生影响。
2.反相高效液相色谱法3.凝胶柱净化-高效液相色谱法4.固相萃取高效液相色谱法二、液相色谱发1.凝胶渗透——液相色谱法2.液相色谱-质谱/质谱检测方法3.LC-ESI/MS分析食品中4种苏丹红色素的方法。
三、气相色谱法气相色谱-质谱(GC-MS)选择离子检测法(SIM) 四、电化学分析方法极谱法。
