下载文档原格式
应用高效液相色谱法测定食品中3种防腐剂的含量摘要：近年食品抽检中发现食品防腐剂超标使用，因此了解常见食品中防腐剂含量，可为食品安全监管提供参考。
采用高效液相色谱法对糖果、中式糕点及酱卤肉制品中苯甲酸、山梨酸及脱氢乙酸含量进行测定分析。
结果表明，中式糕点均含有苯甲酸，属于违法添加苯甲酸类防腐剂的食品；酱卤肉制品山梨酸含量超过国家标准规定的限值；其他食品的苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸含量均符合国家标准规定。
可见，苯甲酸、山梨酸存在超标使用问题，需要加强抽样检查监督管理力度，增加食品安全水平。
关键词：苯甲酸；山梨酸；脱氢乙酸；高效液相色谱随着经济水平的发展和科技水平的提高，市场上不断出现各式各样、色彩鲜明、可口美味、形状各式的食品，而多数食品易受微生物影响发生腐败变质，但为了到达更好的贮藏效果，会人为的在食品中适量添加如苯甲酸、山梨酸、脱氧乙酸等常用的食品防腐剂已达到增加食品储存时间的目的。
在国家发布的GB2760《食品添加剂使用标准》中就对所有类型的防腐剂在各种食品中的最多用量设定了严苛的要求，在规定范围内添加可以有效保证食品安全问题，但化学防腐剂长期且大量被人体摄入则可能会对人体有影响，如诱发癌症、导致畸变、引起中毒及其他影响人体健康的潜在危害[1,2]。
因此通过合适的方法检测食品中防腐剂的含量对我们来说是非常必要的。
目前国家标准或地方标准中很少有能够同时检测苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的方法，即使有同时检测的方法但检测过程过于复杂。
本文应用高效液相色谱法对6种食品中苯甲酸、山梨酸、脱氧乙酸3种防腐剂的含量进行测定。
1材料与方法1.1 仪器与试剂本次实验所用样品均采集于本市各镇商场超市、门店，实验所用主要仪器为QC系列超纯水机、离心机、数控超声波清洗器、涡旋混匀仪、电子天平；试验条件是高效液相色谱；试剂为甲醇、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸。
1.2 实验方法1.2.1 苯甲酸、山梨酸及脱氢乙酸标准溶液配制依次从不同标准储备液中提取出一定数量的溶液，将其掺杂搅拌制作成混合标准液，其浓度是100μg/mL；接着，置于0-4℃环境内贮存备用，用水分别进行稀释，使其变成1μg/mL、5μg/mL、10μg/L、20μg/mL以及50μg/mL的混合标准工作溶液。
食品防腐剂的测定方法随着食品工业的发展，食品防腐剂已成为加工食品不可缺少的物质。
同时，食品防腐剂的安全性问题也成为公众关心的社会热点，有效的检测方法是对其进行监测控制的必要手段。
现代社会对于检测方法的要求是有效、便捷、快速，并且有较高的灵敏度和良好的重现性。
科技的发展，使得越来越多的仪器被用于防腐剂的检测。
如高效液相色谱、气相色潜、毛细管电泳、离子色谱及近年来发展迅速的液相色谱串联质谱。
理想的防腐剂的检测方法必须能够在各式各样复杂的食品基质中准确检测出防腐剂的种类和含量；其中最为理想的方法应该能够同时对多种防腐剂进行检测。
科标检测根据多年的检测经验，先进的检测技术，并利用色谱、光谱、质谱相结合的高精端检测方法，为客户提供权威，专业，高效，快速的检测服务。
对防腐剂的使用必须控制一定的使用量，而且应具备以下特点：⑴凡加入食品中的防腐剂，首先是对人体无毒、无害、无副作用的；⑵长期使用添加防腐剂的食品，不应该使机体组织产生任何的病变，更不能影响第二代发育、生长；⑶加入防腐剂之后，对食品的质量不能有任何的影响和分解；⑷食品加入防腐剂之后，不能掩蔽劣质食品的质量或改变任何感官性状。
我国允许使用的防腐剂有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟基苯甲酸乙酯及丙酯等。
其中前两种应用广泛。
苯甲酸及其盐类使用范围：酱油、醋、果汁类、果酱类、葡萄糖、罐头，最大使用剂量1g／公斤；汽酒、汽水、低盐酱菜、面酱类、蜜饯类、山楂糕、果味露，每公斤最多使用0.5g。
山梨酸及其盐类在酱油、醋、果酱类中，每公斤最多允许使用1g；对低盐酱菜类、面酱类、蜜饯类等使用0.5g/㎏。
苯甲酸随食品进入体内时与甘氨酸结合成马尿酸，从尿液中排出体外，不再刺激肾脏；山梨酸进入机体后参与新陈代谢，最后生成CO2和H2O，被排出体外，由于山梨酸及其盐类价格贵一般不常用，多数用在出口食品中。
苯甲酸又名安息香酸，为白色有丝光的鳞片或针状结晶，熔点122℃，沸点249.2℃，100℃开始升华。
实验9.3 食品中防腐剂苯甲酸(钠和山梨酸(钾的测定薄层色谱法一、实验目的掌握薄层色谱定性和斑点面积半定量测定法。
学会制备聚酰胺薄层板。
二、仪器吹风机层析缸玻璃板10 ×18cm 玻璃板50×80 cm 微量注射器10μL喷雾器三、试剂与试样聚酰胺粉200目乙醚可溶淀粉无水硫酸钠盐酸溶液6mol ? L-14%氯化钠酸性溶液于4%氯化风俗溶液中加入少量mol ? L-1 盐酸溶液展开剂:(1 正丁醇:氨水:无水乙醇=7:1:2(2异丙醇:氨水:无水乙醇=7:1:2显色剂:0.04%溴甲酚紫的50%乙醇溶液用0.1mol ? L-1氢氧化钠调至PH=8苯甲酸标准溶液:精密称取苯甲酸0.2000g ,用少量乙醇溶解后移入100mL 容量瓶中,并用乙醇稀释至刻度摇匀,此溶液每亳升相当于2mg苯甲酸。
山梨酸标准溶液:精密称取山梨酸0.2000g ,用少量乙醇溶解后移入100mL 容量瓶中,并用乙醇稀释至刻度摇匀,此溶液每亳升相当于2mg 山梨酸试样酱油、水果汁、果酱等四、实验步骤1、试样提取—试样溶液的制备称取 2.5g 混合均匀的试样,置于25mL 带塞量筒中,加0.5mL , 6 mol? L-1盐酸酸化,用乙醚提取两次(15mL 、10mL 每次振摇1min , 将上层乙醚提取液吸入另一25mL 带塞量筒中, 合并乙醚提取液。
用3mL4%氯化钠酸性溶液洗涤两次,静置15min ,乙醚层通过无水硫酸钠脱水后过滤于25mL 容量瓶中。
加乙醚稀释至刻度, 摇匀。
吸取10.00mL 乙醚提取液分两次置于10mL 离心管中, 在约40℃水浴上除去乙醚, 加入0.1mL 乙醇溶解残渣,制成试样测定液备用。
2、聚酰胺粉板的制备称取 1.6g 聚酰胺粉,加4g 可溶性淀粉,加15mL 水,研磨3~5min,使其均匀即可涂10×18cm 厚度0.3mm 的薄层板两块。
涂好的薄层板置于水平大玻璃板上, 于室温干燥后, 于80℃ 干燥1h 取出,置于干燥器中保存。
三种食品防腐剂的抑菌效果研究一、本文概述本文旨在探讨三种常见食品防腐剂——山梨酸钾、苯甲酸钠和尼泊金乙酯的抑菌效果。
食品防腐剂在延长食品保质期、防止食品腐败和保障食品安全方面起着至关重要的作用。
然而，不同类型的防腐剂对不同种类的微生物具有不同的抑菌效果，因此，选择适合的防腐剂对确保食品质量和安全至关重要。
本文将通过实验室研究，比较这三种食品防腐剂在不同浓度下对几种常见食品腐败菌（如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和霉菌等）的抑菌效果。
研究将采用定量和定性分析方法，评估防腐剂的抑菌效能，包括最小抑菌浓度（MIC）的测定和抑菌圈的形成等。
通过本文的研究，期望能够为食品工业提供更准确、科学的防腐剂选择依据，以优化食品加工工艺，提高食品质量，保障消费者健康。
本文还将为食品防腐剂的研发和应用提供理论支持，推动食品科技的发展和进步。
二、实验材料与方法本实验选取了三种常见的食品防腐剂，分别为防腐剂A（具体名称）、防腐剂B（具体名称）和防腐剂C（具体名称）。
同时，选择了五种常见的食品腐败菌，包括细菌（具体名称）、细菌Y（具体名称）、霉菌Z（具体名称）、霉菌M（具体名称）和霉菌N（具体名称），以评估防腐剂的抑菌效果。
分别将五种食品腐败菌接种至相应的培养基中，于恒温摇床中培养至对数生长期，制备成菌悬液。
按照生产商推荐的浓度，分别将三种防腐剂溶解于无菌水中，制备成不同浓度的防腐剂溶液。
采用平板计数法，将不同浓度的防腐剂溶液与菌悬液混合，涂布于相应培养基的平板上，于恒温培养箱中培养一定时间后，观察菌落生长情况。
以未加防腐剂的菌液作为对照组。
统计各平板上的菌落数，计算各防腐剂对五种食品腐败菌的抑菌率。
利用统计软件对数据进行处理，分析不同浓度防腐剂对菌株生长的影响，并比较三种防腐剂的抑菌效果。
通过以上实验方法，我们将评估三种食品防腐剂在不同浓度下对五种食品腐败菌的抑菌效果，为食品工业选择合适的防腐剂提供参考依据。
三、实验结果与分析本研究采用了三种不同的食品防腐剂——A、B和C，并通过标准的抑菌实验方法，测定了它们在不同浓度下对三种常见食品腐败菌（菌种菌种2和菌种3）的抑菌效果。
食品及化妆品中防腐剂的测定姓名：祖广权专业：应化班级：101 学号： 2010014032 实验日期：2013年 06 月25日成绩：摘要：为了防止食品在储存、运输过程中发生腐败、变质，常在食品中添加少量防腐剂。
防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一。
由于食品中防腐剂用量很少，GB2760-2011 规定0.2-1.5g/kg，并且食品样品中其它的成分也可能对防腐剂的测定具有干扰作用，因此本实验采用溶剂萃取法，先用HCl 酸化样品，再用乙醚从样品中萃取出苯甲酸；萃取物经过碱性溶液（NaHCO3）溶解，用乙醚稀释后进行紫外光谱检测。
经测试，样品中苯甲酸的含量符合国家标准。
关键词：苯甲酸分光光度计食品防腐剂酱油1引言酱油常用的防腐剂是苯甲酸及其钠盐，山梨酸及其钾盐，其中苯甲酸钠在酱油中使用日益广泛。
用分光光度计可以测定其最佳吸收波长下的吸光度，从而判定所选物质中的防腐剂含量。
苯甲酸又称为安息香酸，故苯甲酸钠又称安息香酸钠。
苯甲酸在常温下难溶于水，在空气（特别是热空气）中微挥发，有吸湿性，大约常温下0.34g/100ml；但溶于热水；也溶于乙醇、氯仿和非挥发性油。
在使用中多选用苯甲酸钠；苯甲酸和苯甲酸钠的性状和防腐性能都差不多。
苯甲酸钠大多为白色颗粒，无臭或微带安息香气味，味微甜，有收敛性；易溶于水（常温）53.0g/100ml左右，pH在8左右；苯甲酸钠也是酸性防腐剂，在碱性介质中无杀菌、抑菌作用；其防腐最佳pH是2.5-4.0，在pH5.0时5%的溶液杀菌效果也不是很好。
苯甲酸钠亲油性较大，易穿透细胞膜进入细胞体内，干扰细胞膜的通透性，抑制细胞膜对氨基酸的吸收；进入细胞体内电离酸化细胞内的碱储，并抑制细胞的呼吸酶系的活性，阻止乙酰辅酶A缩合反应，使无氧呼吸中磷酸果糖激酶催化的反应速率下降95％，从而起到食品防腐的目的。
[1]苯甲酸／苯甲酸盐天然存在于蓝莓、蔓越莓、梅干、肉桂和丁香中。
食品中防腐剂的使用安全性评估研究食品中的防腐剂是保证食品安全和延长保质期的重要手段。
然而，在这其中，防腐剂的使用安全性引起了广泛关注。
因此，对食品中防腐剂的使用安全性进行评估研究变得至关重要。
一、食品中防腐剂的作用和种类防腐剂是一种可以抑制食品中微生物生长和腐败的化学物质。
食品中常用的防腐剂包括亚硝酸盐、脱氧醋酸、对羟基苯甲酸酯等。
不同类型的食品需要使用不同的防腐剂来保持其质量和新鲜度。
二、食品中防腐剂的安全性评估方法为了确保食品中防腐剂的使用安全，需要对其进行安全性评估。
安全性评估的方法主要包括实验室研究、动物实验和人体试验。
实验室研究通过分析防腐剂对微生物生长的抑制效果来评估其安全性。
动物实验可以评估防腐剂对动物体内毒性和致癌性的影响。
人体试验是最直接的评估防腐剂安全性的方式，通过观察人体对防腐剂的反应来评估其毒性和过敏性。
三、食品中防腐剂的安全性问题尽管食品中的防腐剂在维护食品安全方面发挥了重要作用，但其使用也存在一些安全性问题。
首先，一些防腐剂可能会对人体健康产生潜在危害。
例如，亚硝酸盐被怀疑与癌症发生有关，长期摄入过多可能增加患癌症的风险。
其次，某些防腐剂可能引发过敏反应，导致过敏性疾病，如哮喘和皮肤病。
此外，防腐剂的滥用和过量使用也会对人体健康造成潜在威胁。
四、防腐剂的使用安全性评估研究进展为了解决食品中防腐剂的安全性问题，科学家们进行了大量的研究。
目前，他们正在开展防腐剂的毒性机制研究，以了解它们对人体健康的具体影响机制。
此外，新的防腐剂正在研发中，希望可以找到更安全和有效的替代品。
五、提高公众对食品中防腐剂安全性的认知提高公众对食品中防腐剂安全性的认知是保障食品安全的重要环节。
应加强公众教育，引导消费者正确了解食品中防腐剂的使用情况以及其对人体健康的影响。
同时，食品厂商也应当注重产品标签上对防腐剂使用的明示，增加消费者对食品的选择权。
六、加强监管与管理政府和监管机构应加强对食品中防腐剂的监管与管理。
常用食品用防腐剂对微生物防腐效果测定公共卫生学院预防医学专业2008级本科一班尹绘权
1 研究背景
食品腐败是影响食品安全的主要因素之一，进食污染微生物的食品而引起的食源性疾病已成为世界范围内的一个重要公共卫生问题。
保证食品的品质、延长保存期限、防止食品及原材料的腐败变质、避免损失是食品工业的重要任务。
一方面，目前为止尚未研制出对微生物侵染有抵抗力的食品品种，食品中微生物的污染仍将在今后相当长的一段时间内继续对人类健康造成威胁；另一方面，食品生产、加工、流通、制作方式的改变以及食品销售的异地化等对食品保质期的要求越来越高，因此食品的保鲜与防腐已成为食品加工生产面临的首要问题，而对食品防腐剂的选择和防腐效力的检测与评价已成为社会关注的热点。
2 实验目的
本次实验设计以测定食品中常用的食品防腐剂对不同微生物的防腐效果为目的，确定防腐剂抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。
菌落生长被完全抑制的最低防腐剂浓度为该样品对受试菌的MIC。
根据受试菌的MIC的大小来确定食物中常用防腐剂对该种微生物的防腐效果。
3 实验原理
食品含有丰富的蛋白质、碳水化合物和脂肪等营养物质，在物理、化学和有害微生物等因素的作用下可腐败变质，其中有害微生物是导致食品腐败变质的主要原因。
这些微生物包括：细菌，主要类群有金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肠炎沙门菌等；酵母，如白色假丝酵母等；丝状真菌，主要类群有黑曲霉、黄曲霉、白地霉、岛青霉和圆弧青霉等。
在食品中常添加的防腐剂有；酸性防腐剂，如苯甲酸、山梨酸和丙酸(及其盐)；酯型防腐剂，无机防腐剂等。
其应用范围和针对的微生物类群都不尽相同。
本实验以山梨酸为实验用模式防腐剂，以细菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肠炎沙门菌)、酵母(白色假丝酵母)、丝状真菌(黑曲霉、黄曲霉、白地霉、岛青霉和圆弧青霉)为模式微生物，为模式微生物进行试验。
山梨酸又名花揪酸，生活中常使用山梨酸钾作为防腐剂对食物进行防腐处理，其对细菌、真菌均抑制作用的机理大致是：在溶液中，弱酸随pH不同在解
离和未解离状态间存在动态平衡。
在低pH值情况下该类防腐剂有最大抑菌活性，因为此时分子多数处于未电离状态，未电离的有机弱酸分子是亲脂性的，因此可自由透过原生质膜，进入细胞内后，在细胞内接近中性的pH环境下，分子解离成带电质子和阴离子，不易透过膜而在细胞内蓄积。
防腐剂分子不断扩散进入细胞直到达到平衡，引起细胞内H +的失控，改变细胞内pH状态及蓄积毒性阴离子，抑制细胞的基础代谢反应，最终达到抑菌目的。
4 实验材料
4.1 菌株
本实验选择易导致食品腐败变质的致病细菌和真菌标准菌株，在此基础上，通过预测和既往资料，增加了对食品卫生质量影响较大、并易引起食品污染和食源性疾患的代表性微生物为实验用菌。
1.G+细菌金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus )
2.G-细菌大肠杆菌( Escherichia coli)、肠炎沙门菌( Salmonella enteritidis )
3.酵母白色假丝酵母/白色念珠菌( Candidalbicans)
4.丝状真菌黑曲霉(Aspergillus niger)、黄曲霉(A. flavas)、白地霉( Geotrichum
candidum)、岛青霉( Penicillium islandicum)、圆弧青霉( P. cyclopium)
4.2培养基
营养琼脂培养基，马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(P otato Dextrose Agar，PDA) 4.3 试剂
1.灭菌生理盐水
2.防腐剂：选择食品加工业中最常用的山梨酸为模式防腐剂
4.4 实验器具
生物安全柜，微量移液枪，37摄氏度恒温箱，27摄氏度恒温箱等。
5试验方法
本试验采用琼脂稀释法将不同浓度的防腐剂混合溶解在琼脂培养基中，然后点种细菌，通过细菌的生长与否，确定防腐剂抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。
菌落生长被完全抑制的最低防腐剂浓度为该样品对受试菌的MIC。
菌落生长被完全抑制的最低防腐剂浓度为该样品对受试菌的MIC。
5.1 防腐剂溶液的配制
以无菌操作取山梨酸钾10g，分别加入到90 ml 灭菌磷酸盐缓冲液中，充分振荡溶解，配制成10%均匀分散的溶液或悬浊液，并用灭菌磷酸盐缓冲液依次稀释成质量百分浓度为2%，1.5%，1.2%，1%，0.9%，0.8%，0.7%，0.6%，0.5%，0.4%，0.3%，0.2%，0.1%，0.09%，0.08% ，0.07% ，0.06% ，0.05% ，0.04% ，0.03% ，0.02% ，0.01% ，0.005%的稀释液（该浓度可以通过预先实验测得），置45～50 ℃水浴备用。
5.2 培养基的配制
分别配制单倍浓度和双倍浓度MH 琼脂培养基（细菌用）和SDA 培养基（真菌用）。
5.3 含防腐剂培养基的配制
分别取10 ml 5.1节中稀释的防腐剂溶液加入平皿内，将双倍浓度MH 琼脂10 ml 加入平皿内，边加边摇晃平板，使防腐剂溶液和培养基充分混匀；再分别取10 ml 5.1 节中稀释的防腐剂溶液加入平皿内，将双倍浓度SDA 培养基10 ml 加入平皿内，边加边摇晃平板，使防腐剂溶液和培养基充分混匀。
配制好的培养基中含防腐剂浓度分别为10.00、7.50、6.00、5.00、4.50 、4 .00、3.50 、3.00、2.50 、2.00、1.50、1.00 、0.50 、0.45、0.40、0.35 、0.30 、0.25 、0.20、0.15 、0.10、0.05、0.025 mg/m。
5.4 加样
用微量移液器取 2 μl（含菌量约为107cfu/ml）菌悬液点种于含防腐剂培养基的平板上，接种后所形成的菌液圈直径约5～8 mm。
以同样方法接种不含防腐剂的单倍浓度的MH琼脂平板和SDA 平板，作为阳性对照。
5.5 培养
将接种后的细菌平板放置37 ℃培养箱中，倒置培养24 h，观察结果；真菌平板放置28 ℃培养箱中，倒置培养48 h，观察结果。
6预期结果
列表比较各种微生物的MIC值的大小单位（mg/ml）
根据文献所查结果可知：山梨酸无论是对细菌还是真菌均有较强的抑制作用，而且山梨酸对细菌的抑制作用强于丝状真菌和酵母。
故细菌的MIC值应该小于酵母和丝状真菌。
7 结果讨论与分析
7.1 实验用菌种
在食品防腐剂防腐效果评价时微生物的选择至关重要，一般应包括革兰阴性细菌、革兰阳性细菌、霉菌和酵母中的至少一种。
本次试验分别选择了革兰阳性细菌、革兰阴性细菌、丝状真菌和酵母中的代表性菌种为受试微生物，这一组合基本满足了防腐剂效果评价对微生物的综合要求。
其中金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黑曲霉和白色念珠菌，是食品中常见的腐败微生物，具有明显的实验意义。
此外还增加了从食品中分离、易导致食品腐败变质的其他细菌和真菌，从而使对防腐剂防腐效果的评价更接近现实。
7.2 受试微生物浓度的选择
每种防腐剂均有一定的抑菌范围，且其抑菌效果与食品中污染的微生物种类和污染程度密切相关。
食品染菌情况愈重，防腐效果就越差，如果食品已腐败变质，任何防腐剂都无济于事。
因此受试微生物的浓度是影响食品防腐剂防腐作用的重要因素。
经文献查知，大多数研究以细菌培养24h、真菌培养5～7天、酵母菌培养24～48h 的培养物稀释到10- 4(约相当于105cfu/ml)为实验用菌浓度。
这一稀释度有一定的科学性，但不够准确。
为此若需改进此点，较为合理的方法可以使用分光光度计测定细菌浓度后再进行试验。
7.3 实验用防腐剂及其浓度的选择
对于不同的食品，由于其基质成分、来源、属性、加工方式不同，因此污染的优势微生物类别各异。
各种食品防腐剂对不同类别微生物的抑制或杀灭能力差别较大，因此实际工作中对具体使用的食品防腐剂种类和浓度的选择应根据食品
属性、工艺条件、防腐剂性质、防腐剂间的相互作用等特点来确定。
本实验选用食品加工业中最常用的山梨酸为模式防腐剂，实验用浓度均在《食品添加剂使用卫生标准G B 276022007》中规定的各类食品使用范围内，从而使实验结果更接近实际，有利于对实验设计的合理性和正确性进行科学评估。
参考文献
1. 李凤琴，李玉伟，王晔茹，董银萍，罗雪云，王竹天，食品用防腐剂防腐
效果测定和评价程序研究，卫生研究杂志2009.11
2. 郑萍，陈西平,化妆品中污染微生物对常用防腐剂的抵抗性,环境与健康杂
志2009.8
3. 孟哲，刘荣琴，于玲,食品防腐剂及其作用机理的研究进展，形态学院学报
2009.6
4. 李妍，宁正祥，微生物对食品防腐剂的抗性研究进展，广州食品工业科技
杂志2004.7
5. 曾锋，张立彦，曾庆孝微生物对食品防腐剂的抗性研究进展及应对措施，
现代食品科技杂志2004.11
6. 国家标准化管理委员会. G B 276022007 食品添加剂使用卫生标准[ S] . 北
京:中国标准出版社, 2007.。
