AAF固定液

faa固定液配制方法FAA固定液是一种用于固定组织标本的液体。

它主要由甲醛和其他添加剂组成，能够防止组织变性、脱落和腐烂，保持组织的原始形态和结构。

FAA固定液的配制方法可以分为以下几个步骤。

准备所需的原料和器材。

配制FAA固定液需要甲醛、醋酸和乙醇等化学品，以及称量器、容器和搅拌棒等实验器材。

按照一定比例将甲醛、醋酸和乙醇等化学品加入容器中。

一般来说，FAA固定液的配制比例为40%甲醛、5%醋酸和50%乙醇。

在加入这些化学品时，需要注意安全操作，避免接触到皮肤和吸入有害气体。

然后，将容器中的化学品充分混合。

可以使用搅拌棒等工具进行搅拌，直到化学品完全溶解并均匀混合为止。

混合过程中需要注意避免溅出，以免对身体和环境造成伤害。

接下来，检查配制好的FAA固定液。

可以通过观察其颜色和澄清度来判断是否配制成功。

正常情况下，FAA固定液呈无色或微黄色，并且澄清透明。

如果出现明显的颜色变化或浑浊不清的情况，可能是配制比例不准确或化学品有问题，需要重新配制。

将配制好的FAA固定液存储在适当的容器中。

通常建议使用密封的玻璃瓶或塑料瓶进行存储，以防止挥发和泄露。

同时，需要将瓶子标记清楚，注明FAA固定液的成分和配制日期，方便使用和管理。

需要注意的是，FAA固定液是一种有毒化学品，使用时要注意安全。

在配制和使用过程中，应佩戴防护手套、口罩和护目镜等个人防护装备，避免接触到皮肤和吸入有害气体。

同时，配制和存储FAA固定液的场所应通风良好，避免有害气体积聚。

FAA固定液是一种重要的实验试剂，配制方法的正确与否直接影响到组织标本的质量。

通过按照一定比例混合甲醛、醋酸和乙醇等化学品，可以得到质量合格的FAA固定液。

在配制和使用过程中，要注意安全操作，保护好自己和实验环境。

常用固定液的配制1. 福尔马林-醋酸-酒精固定液(FAA)50%或70%酒精90ml + 冰醋酸5ml + 福尔马林(37%~40%甲醛)5ml可用作固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类,也不适宜作细胞学研究。

幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，可防止材料收缩。

若材料坚硬，可略减冰醋酸，略增福尔马林。

若材料易收缩，可稍增加冰醋酸。

久置时另加入5ml甘油以防蒸发和材料变硬。

此液又可作保存液。

固定时间最多10h。

如果用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果较好：50%酒精89ml + 冰醋酸6ml + 福尔马林5ml2. 福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA）福尔马林5ml + 丙酸5ml + 70%酒精90ml固定一般的植物组织，通常固定8~24h，可长久保存。

3. 酒精-醋酸-氯仿固定液（卡诺固定液，Carnoy fixative）配方Ⅰ：纯酒精3份+ 乙酸1份配方Ⅱ：纯酒精6份+乙酸1份+ 氯仿3份配方Ⅲ：甲醇6份+乙酸1份+ 氯仿3份适用于植物组织和细胞学材料，为研究细胞分裂和染色体的优良固定液。

固定时间不宜过久。

4. 酒精-福尔马林固定液福尔马林2~6（6~10）ml + 70%酒精100ml固定植物一般组织，尤其适用于萌发的花粉管的固定。

通常固定24h，亦可长久保存。

5. 酒精-福尔马林-甘油固定液95%酒精150ml + 5%福尔马林100ml + 甘油50ml此液也可长期储存材料。

6. 铬酸-醋酸固定液根据固定对象的不同，可分为强、中、弱3种配方：（1）弱液配方：10%铬酸2.5ml + 10%醋酸5ml + 蒸馏水92.5ml（2）中液配方：10%铬酸7ml + 10%醋酸10ml + 蒸馏水83ml（3）强液配方：10%铬酸10ml + 10%醋酸30ml + 蒸馏水60ml弱液配方用在固定较柔软的材料，如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。

固定时间较短，一般为。

1h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟至12~24h数小时，最长可固定中液配方用于固定根尖、茎尖、未成熟子房和胚珠等。

冰冻切片防止脱片的几种方法冰冻切片是将组织直接冰冻进行切片,是一种简便快速的方法,常常用于配合临床手术等在短时间内制出切片的病理急诊[1]。

由于冰冻切片组织不需经过酒精脱水、二甲苯透明和包埋等过程,脂肪、类脂质、抗原等化学物质成分不受影响,因此是临床上常用的制片方法。

我们通过实践摸索出对一些特定的标本:如乳腺组织、卵巢肿瘤、甲状腺组织、肺癌标本以及喉的切缘标本等在切片过程中总结了一些方法,防止了这些组织在冰冻切片染色过程中常常由于各种原因导致组织易于脱落的难题。

1 材料与方法1.1 仪器选用leicaCM1900冷冻切片机首选温度冷冻室20℃,冷冻头22℃。

1.2 固定液AAF固定液(70%或无水酒精85 ml 冰醋酸5 ml甲醛10 ml)。

1.3 烤箱202 OAB型电热恒温干燥箱,设定在70℃。

1.4 方法接到标本后(标本以乳腺组织、卵巢肿瘤组织、甲状腺组织、肺叶切除标本以及喉的切缘标本为例,含有脂肪组织的要尽量剔除脂肪组织)用冷冻头冷冻标本1 min左右开始切片,掌握冷冻的程度和适宜的切片时机是个较难的问题,因为不同组织所需冷冻切片的时间不同。

要在实践中取得经验。

组织冷冻至变白变硬时即可进行切削,新鲜组织冰冻切片时因组织本身的组织液等粘性物质就能粘贴牢固,但在某些特殊情况下如冷冻过度时的组织酥脆,切出的片子易碎有裂隙甚至呈粉末状。

此时应停止冷冻稍等片刻也可以带上一次性手套,用手掌或大拇指腹紧贴组织切片面3~5 s,利用手掌的温度使组织迅速升温,并且观察组织切面变化掌握好时机便能快捷切出完整的切片。

此时冰冻切片机转轮要用另只手固定或锁死,以防转轮转动手被切片刀刮伤。

有些组织如乳腺组织、卵巢囊肿的囊壁组织在切片后放入AAF固定液中,在固定至染色过程中常有因室内温度过低或载玻片不干净含有油腻或混入尘污等脏东西等原因使组织从载玻片上脱落现象,此时应换用经防脱胶APES处理后的载玻片进行粘片。

若无防脱胶玻片时, 用普通载玻片进行粘附后,可以将玻片放入恒温干燥箱内底板上,此时要使粘有组织的一面朝上,烤片10 s后拿出在室温中稍加冷却后放入AAF固定液中进行固定及染色,此时组织便可以牢牢地粘在载玻片上。

石蜡包埋的基本步骤和注意事项第一部分石蜡包埋的基本步骤一、脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。

此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。

一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。

但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。

因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。

第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。

如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。

但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。

经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。

用AAF固定液固定的组织可直接置于95％酒精开始脱水。

用醇性固定剂（如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸。

一般情况下，组织经过70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。

但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。

脱水时间应视组织种类，组织块大小，厚薄和固定剂的不同而异。

如脱钙的骨组织，实质性脏器等的脱水过程宜短，而疏松结缔组织，脂肪组织等，脱水过程则宜适当延长。

水分必须脱干净，脂肪必须溶去。

含有铬酸的固定剂固定的组织，脱水时间不宜过长，而镀银组织更应注意，脱水时间应比为镀银的同类组织要短。

脱水的基本原则：从低浓度酒精开始逐渐升到高浓度酒精，以保持组织中的水分完全脱净。

一些固定剂的配方及性能介绍固定，就是用某种方法以最快的速度将细胞杀死并保持组织及细胞原有的形态结构及其组成。

固定在组织制片中极为重要，因为机体死后血液循环停止，细胞逐渐死亡，如不立即处理，则细胞内的酶（水解酶）会使蛋白质分解为氨基酸渗出细胞，使细胞溶解破坏，组织变形，在无冰藏的条件下，更可因其病原微生物的迅速繁殖而腐败，组织结构破坏，不利于形态学的诊断。

组织固定的目的为1、迅速防止组织、细胞死后变化，防止自溶与腐败，以保持和细胞与正常生活时的形态相似；2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶解物质，以保持它原有的结构与生活时相仿；3、使组织中的各种物质沉淀和凝固起来而产生不同的折光率，造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察；4、固定剂兼有硬化作用，使组织硬化，增加组织硬度，便于制片；5、防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有的形态结构；经过固定的组织，能对染料产生不同的亲和力而着色清晰，便于辨认。

为了能够达到固定的目的，固定剂必须具备以下的性质和条件：1、迅速渗入组织而固定原生质，使短期解剖的组织细胞形态不至于有较大变化；2、固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定；3、使组织细胞中不至于因固定引起人为的改变；4、在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理，而使固定后的原生质变形；5、尽可能避免使组织膨胀或收缩（不致改变原生质原来的体积）；6、能使细胞内的成分（蛋白质）凝固或沉淀下来；7、增加细胞内含物的折光度，易于鉴别，增加媒染作用和染色作用；8、使细胞变硬，适于切片，但又不使材料太坚硬或松脆；9、使组织充分固定，便于保存。

[1][2]下面我们介绍中华医学会病理分会推荐的几种常用固定剂的性能[3]：1、4%中性甲醛（10%中性福尔马林）固定液配方：甲醛（40%）100ml，无水磷酸氢二钠6.5g，磷酸二氢钠4.0g，蒸馏水900ml。

固定液2010-03-15 12:55:52| 分类：实验小技术|字号订阅几种固定液：1. F.A.A固定液又称标准固定液,万能固定液.适用于一般根,茎,叶,花药,子房组织切片.在植物形态解剖研究上应用极广,此固定液最大优点是兼有保存剂作用,但对染色体的观察效果较差.配方:福尔马林(38%甲醛)5 ml: 冰醋酸5ml:70%酒精90 ml幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精,可防止材料收缩;还可加入5 ml甘油(丙三醇)以防蒸发和材料变硬.2. F.P.A固定液配制时用正丙酸代替冰醋酸,三种成分的比例同上液.效果比F.A.A好.3. 卡诺氏固定液(Carnoy's Fluid) 适用于一般植物组织和细胞的固定,常用于根尖,花药压片及子房石蜡切片等.有极快的渗透力,根尖材料固定15—20min即可,花药则需1h左右,此液固定最多不超过24h,固定后用95%酒精冲洗至不含冰醋酸为止;如果材料不马上用,需转入70%酒精中保存.配方:无水酒精3份:冰醋酸1份4.鲍因(Bouin)液：苦味酸饱和水溶液（0.9~1.2%）75 mL, 甲醛（37~40%）25 mL, 冰醋酸5 mL。

此液一般在临床用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。

5. 4%多聚甲醛固定液组织细胞中的大多数肽类激素、蛋白物质为水溶性，在进行免疫组织化学和免疫细胞化学研究之前必需固定。

由于肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。

在免疫组织化学和免疫细胞化学研究中，多聚甲醛（Paraformaldehyde）仍旧是实验室目前最常用的固定剂之一。

该固定剂较为温和，能很好地保存组织的抗原性和细微结构，适于组织标本和细胞片的较长期保存，非常适合组织和细胞的光镜免疫化学研究。

本产品为4%多聚甲醛的水溶液，广泛地用于免疫组织化学(IHC)和免疫细胞化学（ICC)实验中的组织和细胞的固定。

保存条件室温或4℃，密封保存，半年以上。

常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。

而大多数的组织固定剂是水溶液，随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水，一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。

由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精，因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称透明。

最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。

常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋，前一章中已述过固定。

第一节脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。

此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。

一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。

但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。

因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。

第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。

如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。

但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。

经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。

用AAF固定液固定的组织可直接置于95％酒精开始脱水。

用醇性固定剂（如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸。

一般情况下，组织经过70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。

免疫组化固定剂的选择（看到楼下有兄弟这个问题）(固定剂,免疫组化,固定液,抗原)相关疾病：脱水固定是免疫组化的第一步，很多人都忽视了这一步，认为用福尔马林就行，其实学问也挺大的用于免疫组织化学的固定剂种类较多，性能各异，在固定半稳定性抗原时，尤其重视固定剂的选择，介绍如下。

1．醛类固定剂双功能交联剂，其作用是使组织之间相互交联，保存抗原于原位，其特点是对组织穿透性强，收缩性小。

有人认为它对IgM、IgA、J链、K链和λ链的标记效果良好，背景清晰，是常用的固定剂。

关键词: 固定液固定剂抗原甲醛免疫组化冰醋酸戊二醛固定是免疫组化的第一步，很多人都忽视了这一步，认为用福尔马林就行，其实学问也挺大的用于免疫组织化学的固定剂种类较多，性能各异，在固定半稳定性抗原时，尤其重视固定剂的选择，介绍如下。

1．醛类固定剂双功能交联剂，其作用是使组织之间相互交联，保存抗原于原位，其特点是对组织穿透性强，收缩性小。

有人认为它对IgM、IgA、J链、K链和λ链的标记效果良好，背景清晰，是常用的固定剂。

（1）10%钙-福尔马林液（浓甲醛10ml，饱和碳酸钙90ml）。

（2）10%中性缓冲福尔马林液（浓甲醋10ml，0.01mol/l pH7.4 PBS 90ml）。

（3）4%多聚甲醛磷酸缓冲液pH7.4（多聚甲醛40g,0.1mol/L PBS液pH7.4500ml，两者混合加热至60℃，搅拌并滴加1n NaOH至清晰为止，冷却后加PBS液至总量1000ml）。

（4）戊二醛-甲醛液（戊二醛1ml，浓甲醛10ml，蒸馏水加至100ml）。

戊二醛是二醛基化合物，交联结合力比甲醛大，Bullock认为交联过强，可出现组织改变和空间遮蔽现象，影响组织的抗原性。

但McDonald等认为，该试剂用于PAP法免疫酶标记效果仍满意。

（5）甲醛升汞固定液（即B5固定液。

浓甲醛10ml，氯化汞6g,醋酸钠1.25g ,蒸馏水90ml）。

有人认为此固定液悬液是较理想的固定液，标记IgA、IgM、IgG等抗原效果良好。

石蜡包埋的基本步骤和注意事项第一部分石蜡包埋的基本步骤一、脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。

此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。

一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。

但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。

因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。

第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。

如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。

但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。

经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。

用AAF固定液固定的组织可直接置于95％酒精开始脱水。

用醇性固定剂（如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸。

一般情况下，组织经过70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。

但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。

脱水时间应视组织种类，组织块大小，厚薄和固定剂的不同而异。

如脱钙的骨组织，实质性脏器等的脱水过程宜短，而疏松结缔组织，脂肪组织等，脱水过程则宜适当延长。

水分必须脱干净，脂肪必须溶去。

含有铬酸的固定剂固定的组织，脱水时间不宜过长，而镀银组织更应注意，脱水时间应比为镀银的同类组织要短。

脱水的基本原则：从低浓度酒精开始逐渐升到高浓度酒精，以保持组织中的水分完全脱净。

磷酸缓冲中性福尔马林固定液济南百博生物技术股份有限公司【预期用途】磷酸缓冲中性福尔马林固定液主要用于适用于常规标本的组织固定。

福尔马林固定液作为一种样本处理液，主要是通过对组织标本的固定，以方便医院检验人员进行后续的染色、免疫组化等操作。

该固定液主要是用于对病人进行治疗的初步阶段，用于固定组织切片标本。

由于该种固定液是用于固定病理组织标本使用的，所以该种固定液的目标用户是各医院的手术室、病理科以及肿瘤医院等。

【检验原理】甲醛能与蛋白质的氨基结合，使蛋白质凝固，因此可做为检验时的组织固定剂。

【主要组成成份】甲醛、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠。

【适用范围】用于大多数组织标本的固定，能较好地保存组织的抗原性和细微结构，具有较强的渗透力和较好的固定效果，能满足常规HE及免疫组化、原位杂交等检测工作。

【使用方法】根据组织类型及试验目的选择合适的固定液浓度，按标本的5—10的用量将组织标本在室温条件下浸泡固定2-72h，（固定时间依组织块大小和实验目的而定）,自来水或缓冲液充分漂洗后即可用于组织切片。

【固定的作用】固定的作用，从组织学的角度讲是，使之尽量保持细胞、组织的固有形态和结构，而从免疫组化技术的角度，固定的作用不仅是使细胞内蛋白质凝固，尽量减少或终止外源性酶和内源性酶的反应；防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质；以保持组织的固有形态和结构；更重要的是保持组织或细胞的抗原性，不但要使抗原不导致失活，而且不使抗原发生弥散的现象，才能在免疫组化染色时，不产生过深的背景，影响对阳性物的判断。

【成分特点】1 .采用优质进口原料配制，确保产品质量优良2 .添加独特增固剂，增强组织固定效果3 .添加复合磷酸盐，形成一个中性缓冲环境（pH：7.0±0.2）4 .添加挥发抑制剂，减少甲醛挥发，气味小且安全5 .添加独特抗聚合反应成分，防止有效成分聚合【固定特点效果】1. 固定效果均匀，穿透力强，完整保存细胞组织形态结构2. 增进组织弹性，利于切片3. 完整保存组织细胞形态结构，特别适用于免疫组化染色的组织，能最大程度保存组织细胞的蛋白抗原和核酸分子，使抗原定位更加清晰，利于特殊染色、免疫组化染色及分子生物学检验4. 有效保存脂肪及脂类物质，使免疫组化的染色与鉴定效果更佳5. 适用于血红素与含铁血红素的固定，抑制福尔马林色素的生成6. 特別适用于黏多糖染色与鉴定。