谈谈固定液的使用
作者: liza3 (站内联系TA) 发布: 2013-01-11
当前，应用于固定试剂的种类较多，它们对于固定不同的组织成分起着不同的作用，因此我们在使用时应该了解不同固定剂的效能，才能合理的固定组织。根据Bencroft的分类法，将不同的固定剂分为四种类型：
Ⅰ类：醛类，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。
Ⅱ类：氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬酸钾等。
Ⅲ类：蛋白变性类，甲醇，乙醇，醋酸等。
Ⅳ类：其他，氯化汞，苦味酸等。
上述四种类型的固定剂，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技术方面中用到。下面根据使用的需要，将着重介绍几种常用的固定剂。
（1）甲醛
甲醛商品名为福尔马林，一般市售的含甲醛37—40%，由甲醛气体饱和于水而成，比重为1.12。它也可以稳定的固体形式存在，它的成分为高分子量的聚合体，称为多聚甲醛。
甲醛溶液较难纯化，在每批市售商品中，都含有不少的杂质如甲醇，这种在组织化学方法当中，能使酶钝化，影响其反应。甲酸，它可使固定液变酸，在陈列标本或长时间固定的组织，由于酸的作用，往往细胞核染色欠佳。
甲醛有效固定作用的要点是，在蛋白质末端基团之间形成交联链。参与甲醛固定蛋白质的基团，主要为氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环。甲醛与组织蛋白类的反应是多样和复杂的，因为它能和多种不同的功能基团结合，在多数情况下在其间形成桥键。甲醛有这种交联的功能，也是它的缺点，在用甲醛固定过的组织中，需要做免疫组化的，往往提倡用酶消化或热抗原修复法来使蛋白与甲醛交联的醛键断裂开，以利于后来的染色。
甲醛可配成简单的或混合的固定液，最简单和最容易掌握的方法，就是取10ml甲醛液，加水90ml，这就是10%的福尔马林.当然,现在使用的固定液要求较为严格些,最好是使用缓冲福尔马林固定液,这将有利于后来的免疫组化染色的需要.
从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:
1. 组织收缩较少,损伤少,保存固有物质好.
2. 固定均匀,穿透力强.
3. 能使组织硬化,增进组织弹性,有利于切片.
4. 能保存脂肪及脂类物质.
5. 成本较低.
虽然甲醛有上述的优点,但这都是相对而言,任何物质都不可能十全十美的,它也有许多缺点:
1. 杂质含量较多,如甲醇,可钝化酶类,影响反应.
2. 含有微量甲酸,导致固定液酸变,影响染色.
3. 可产生福尔马林色素,影响观察.
4. 不能固定尿酸和糖类物质.
5. 容易挥发,污染环境,可导致标本干涸.
6. 可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,但需要经过长时间的流水冲洗(24天的冲洗)方能除去.可见存在于组织上的甲醛是不可能除去的.因为临床活检不可能有这么长的时间来冲洗组
织.因此要特别指出的是,在其后的各种技术操作中,要特别注意到甲醛的存在,必须要想办法除去它,否则将会给各种染色造成影响,甚至导致失败。
应用甲醛,可以配成许多种固定液:
1. 10%缓冲福尔马林固定液
甲醛100ml
蒸馏水900ml
NaH2PO44g
Na2HPO4 6.5g
该固定液是当今流行的固定液,因它对组织固定较好,损伤较少,因对其后的各方面的研究都较好,尤其是对免疫组化的染色.
2、10%福尔马林固定液
甲醛100 ml
自来水900ml
这是一种最简单的固定液，适合于边远地区携带的固定液，但由于它的单一性，因此，只要有条件的单位都不要求使用这种固定液。
3、10%福尔马林盐固定液
甲醛100ml
自来水900ml
Nacl 9克
先将Nacl溶于水，再加入甲醛。这也是一种较为简单的固定液，但由于加入Nacl，它是一种重金属盐物质，加入了它可促进和改善染色，增加染色的强度。
4、Bouin氏固定液
苦味酸饱和水溶液75ml
甲醛2 ml
冰醋酸5 ml
该固定液中的冰醋酸，对胶原纤维等组织有膨胀作用。而甲醛对组织有收缩作用。两种试剂的混合使用，用以抵消彼此间的副作用。使组织固定达到优良的固定水平。
5．醛糖钙固定液
甲醛100ml
蔗糖300ml
乙酸钙20g
蒸镏水90ml
先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水，后加入甲醛。该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较好，组织固定后，做冰冻切片，再给予显示。
当前国内外基本上都还是要用甲醛来固定组织。从免疫组织化学的角度来说，甲醛固定的组织大部分都可以用免疫组化的手段来检测，据多人认为，它对IgA ，IgM，J链，K链和λ链的标记效果较好，且背景清晰。但美中不足的是：经它固定的组织，可与蛋白形成醛交联蛋白，这种醛键可封闭抗原。固此，在免疫组化实际检测中，应根据不同的要求和需要，采用酶消化或者其它抗原修复如微波、高压等的方法，以便破坏醛键重新暴露抗原。
（2）酒精：又称乙醇，为无色透明的液体，沸点是78度，工业酒精是95%。
酒精它有许多优点：
1、可保存尿酸结晶和糖原等物质。高浓度的酒精如95%，无水酒精可保存上述两种物质，因它们易溶于水，因此，要证明上述两种物质的存在，就不能用含水的固定液来固定组织。
2、能在任何比例的情况下与水混合，在病理技术中，酒精是一种十分重要的试剂，它起着关键的作用。如果没有酒精，将会无法完成必要的工作。如组织的脱水，切片染色前后都离不开酒精，在常规的工作中，通常都用95%的工业酒精来配成60%、70%、80%、90%等不同的浓度来使用。
3、可溶解苯类物质为染色步骤中的桥梁试剂。常规活检等切片上的石蜡必须除去，才能进行染色，能除去石蜡的物质有苯及汽油等，常用的有苯类试剂，苯不溶于水，但能溶于酒精，酒精在这里充担着除去苯和连接水的作用，为切片入水架起了桥梁，因此称它为桥梁试剂。
4、能除去切片上的水份，使切片无水化。切片经染色后，由于所用的试剂都为水溶液，因此在切片上含有大量的水份，这些水份经系列梯度酒精的置换吸附后，到无水酒精中已完全无水，这样处理对于切片的保存是有好处的，否则，切片将会褪色。
5、可用来保存标本。大体标本经福尔马林固定后，如为了陈列保存，必须取出冲冼。然后移入75%的酒精中。如果用福尔马林作陈列标本的固定液，则因为福尔马林含有杂质较多，液体容易酸化，时间一长，会逐渐变为微黄*色或淡黄*色，影响美观，影响陈列的效果。
6、可与其它试剂配成多种的混合固定液，有时为了加快固定，常采用酒精和其它试剂来配成混合固定液，这种固定液在固定的同时，兼有对组织脱水的作用。应用酒精配成的混合固定液有：
①Carnoy氏固定液
氯仿300ml
冰醋酸100 ml
95%酒精600 ml
该固定液固定组织快速，在固定的同时兼有脱水的作用。溶液中的氯仿和酒精，对组织的收缩较厉害，但应用了冰醋酸，这种现象便被中和去。
②AF固定液
甲醛100 ml
冰醋酸50 ml
95%酒精850 ml
这种固定液的作用与上液有相似之处，但要注意的是，凡使用含有醋酸的固定液，其脱水用具不能使用铜制的脱水盒，因冰醋酸跟铜离子起反应，生成醋酸铜，这种物质可沉淀于组织间，可破坏组织中的抗原，造成免疫组化检测的失败。应用时应多加注意。
酒精也有许多不足之处，它的缺点是：
1、可溶解脂类物质，凡要证明组织是否含有脂类和类脂物时，切不能用含有酒精的固定液去固定组织，也不能用石蜡切片，因为酒精可将它们溶解去，而石蜡切片组织中含有的脂类物质，则在组织脱水时被溶解去，只留下脂类或类脂物所占有的空间。
2、对组织收缩较大，不宜作单纯固定液。高浓度的酒精，对组织有显著的收缩作用，造成组织发硬易脆，难以切片等现象。因此，它不作为单纯的固定液。
3、渗透力不强。当用酒精固定组织时，组织表面很快就被固定，并形成了一层蛋白膜，这层膜可阻挡固定液向里渗透，造成了中间组织固定不佳的现象。
4、可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡经酒精固定的组织，核的染色都不好。
5、可脱去切片上已着染的各种颜色，切片经染色后，一是必须洗去多余的染液，二是必须脱去切片上的水。在用酒精洗切片时，必须仔细地掌握显微镜下观察，还要掌握酒精的浓度，低浓底的酒精脱色力强，稍不注意，便可脱去切片上大部分的颜色。切片脱水时，要较快地通过低浓度的酒精，以免使已着染的颜色被脱去。
6、价格较贵。从经济学的角度，应用酒精固定组织划不来，例如：一瓶500ml的甲醛，
可配成500ml的固定液，按每例标本需要100ml计，可固定50例标本，而一瓶500ml的酒精，即使配成80%
酒精，也只能固定6例标本，因此，若用酒精固定组织，其价格比用甲醛固定组织的要高8倍。
（3）冰醋酸。冰醋酸为无色透明的液体，易挥发，气味大，一打开瓶盖，整个文章都可闻其味道，纯醋酸在17℃时常为结晶状，因称为冰醋酸，在冬天使用时，可用微波炉进行解冻，再行使用，它的优点有：
1、能迅速固定染色质，助于染色，用醋酸配成的固定液，其作用快，固定效果均匀，对于染色质的固定快，因此，用其作固定的切片染色好，在配其它染色液如明矾苏木素和伊红时，常常需加入一定量的醋酸，以促进染色。
2、能使组织尤其是富含纤维的组织膨胀。
各种固定液对组织都有收缩的作用，尤其是对富含纤维的组织。而它不但不会使组织收缩，而且还会令许多组织发生膨胀的作用。根据这个特点，用它配成许多种不同的混合固定液，以达到固定好，收缩少，易切片，效果好等目的。用它配成的混合固定液有：（1）Zenker氏固定液：
重铬酸钾25G
升汞50G
蒸馏水1000ml
冰醋酸50ml
先将重铬酸钾和升汞溶于水中，尢其是重铬酸钾，应用热水或加温的方法将其溶解，然后过滤贮存于带盖的玻璃瓶中，如暴露于空气中，该溶液将会被慢慢氧化而便颜色加深，导致失效。临用时，取贮存液950ml，加入50ml的冰醋酸，即可使用。
应用该固定液固定的组织，一般不要超过24h，取出组织，流水冲冼12小时以上，然后保存于75%-80%的酒精中，在切片染色前，必须用碘除去汞盐的沉着。应用该固定液的组织，细胞核及细胞浆染色十分清晰，特别是要显示骨骼肌的横纹时，应用本液可获得满意的结果，但由于其含有醋酸，故不能用于保存细胞颗粒，红细胞及含铁血黄素。
（2）Flemming氏液
2%酸水溶液200ml
1%铬酸水溶液700ml
冰醋酸100ml
该液中的奥酸对脂肪组织既有固定作用，又有染色作用，对有髓神经纤维也有固定兼染髓鞘的作用。如果做HE的染色，该液不适合。应用该液固定的组织，切片不能太大过厚，一般1-2毫米厚固定时间1-3天，后经水洗，保存于80%酒精中，除上述两液体外，还有Bouin 氏液和Carnoy氏液等。冰醋酸也有许多不足之处：
1、不能作为单一的固定剂。冰醋酸在实际应用中，常被作为添加剂来使用，如许多种固定液，都加入了冰醋酸。另外，在苏木素和伊红染液中，也常加入了冰醋酸。
2、不能凝固蛋白质，不能保存白细胞颗粒，红细胞及含血铁黄素等。
3、价格较贵。
(4) 重铬酸钾是一种固体，粉末状，桔红色，具有毒性，较难溶解于凉水，因此在配制时用较高温度的水来溶解，也较易发生沉淀。它的优点是：
1、能固定脂肪及类脂物。
2、为髓鞘及嗜铬细胞优良的媒染剂。
3、可配成多种的混合固定液
（1）Helly氏液
重铬酸钾25g
升汞50g
蒸馏水1000ml
甲醛50ml
临用时加入甲醛，因其加入后于24小时后可发生沉淀而失效，因用时应特别注意。
该液是白细胞颗粒的优良固定剂，因此凡为白细胞或造血器官如骨髓，脾脏及患先天性梅毒之肝脏等，可用此液固定。
此液原配方要求加入硫酸钠，但据我们经验认为，硫酸钠在液中对组织无任何作用，故省去。
（2）Orth氏液
重铬酸钾20g
蒸馏水1000ml
甲醛100ml
该液固定组织较缓慢，不适合于作临床的活检固定液，4毫米厚的组织固定时间需36-72小时，该液对于染色质的固定好，显示清晰，但可溶解部分红细胞和含铁血黄素。
重铬酸钾的不足之处有：
1、不能沉淀蛋白质，它必须和醋酸配成混合固定液，方能发挥作用，产生铬酸，沉淀蛋白质。
2、具有毒性及产生高温。在配制液体时，如清洗剂，当加入硫酸时，可产生很高的温度，并挥发出刺鼻的气体，应特别注意。
3、它不能长期固定组织，经它固定的组织应充分水洗后保存于80%酒精中。
（六）氯化汞又称升汞，具有毒性。单独用于固定组织，对组织有较大的收缩力，故很少单独使用。它可使组织蛋白凝固，迅速硬化而形成白色硬膜，这是由于它穿透力极弱所致，因此它不适合固定较厚的组织。它常与其它的试剂配成混合固定液，彼此抵消各自存在的不足，使固定组织的效果非常好。应用升汞配成的固定液的优点有：
1、细胞核及细胞浆染色清晰。
2、对白细胞颗粒，造血器官如骨髓和脾脏等是优良的固定剂。
3、可配成许多混合固定液如：Zenker氏、Helly氏和Stieve氏等。
它的不足之处是：
1、容易产生汞盐沉淀。经升汞配成的混合固定液固定的组织，一是不能固定太长时间，经24h后冲水，然后保存于70%或80%的酒精中，二是在洗色前，都必须用碘除去汞盐的沉淀，以免由于汞盐沉淀在切片上而影响对切片的观察。
2、对组织有较大的收缩力且穿透力弱，用它不能固定过厚的组织，因穿透力弱，组织中间部分固定不好。
3、具有毒性。
（五）、微波辐射固定组织。
组织固定的结果是组织中的蛋白质凝固，以保存组织中原有的微细结构。常规固定用的是甲醛或酒精等。但是这些固定剂从某些方面来说其穿透力不很强，因而需要较长时间的固定，另者，临床上的冰冻切片，有的应用快速加热法预先固定组织，造成福尔马林的极度挥发，污染环境，影响人们的身体健康，因此寻找其它固定组织的方法就成为研究的重点。微波辐射固定组织，就是在这种情况下产生的。
微波是一种具有能量的电磁波，在其运动期间可产生瞬间热。由于微波的快速运动，也导致了物体内部极性分子的快速运动，产生了热量，致使组织蛋白凝固，因此，旧的叫法称微辐射固定组织。按实际的应称为微波辐射凝固蛋白。
1、组织固定温度和时间的选择。
究竟微波产生的热量需要多高，才级使蛋白凝固的呢：Masson氏等人的研究表明，700-90℃，对没有固定的蛋白可发生变性。Bernard经过一系列的研究后认为，肝、肾、肺的最佳固定温度是70℃，和77℃，因为各种组织的结构不同，成分不一，电子密度不一样，因而固定所需要的温度也不样。我们的实验认为，65℃左右的温度可适合于各种组织，条件是固定取小块材料，时间在截取3-4min。
2、微波炉档次的选择
目前市售微波炉品种繁多，要选用合适的微波炉，必须根据各人的使用习惯和爱好。微波炉一般分为高火、中火及低火。使用时要进行系列实验。例如多少ml的固定液需要多少时间达到多少温度，用的是哪一档次的火等。
3、微波辐射需固定液的选择
张素娟等应用临床活检新鲜组织如：甲状腺、乳腺和淋巴结，实验小鼠的肿瘤、肝脏、肾脏、心和肺等组织，分别用10%的福尔马林和生理盐水经微波辐射后，通过HE、网染、AB-PAS以及几种抗体如CEA、EMA和L26等的检测后发现，生理盐水的结果最好。
一提固定，以往总与福尔马林分不开，而经微波辐射后的固定效果，竟然比前者好，这就解决了一大难题，即快速石蜡切片及冰冻切片的组织固定，以往用加热固定的方法，其结果导致福尔马林蒸发，使整个房间都充满福尔马林气味，既污染了环境，也影响了身体的健康。虽然生理盐水用微波辐射后对组织有良好的固定效果，但是它只能适合于少量的快速制片和某些研究，绝不可能适合于大批量的活检。因为活检取材，现目前组织的制作，都基本上用机器来进行，而所用的脱水盒，有铜和不锈刚的金属物所制成，组织取材后，一个一个的盒子装着组织，如果除去金属来用微波固定，这是不现实的事情。另外，微波辐射，它的穿透力较弱，大量的组织块，其中间是达不到要求的。
常用固定液及其配制 固定液分单纯固定液和混合固定液。 1甲醛（formaldehyde） 是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37％～40％得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）。用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4％。 10％福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。 经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。 2 乙醇 无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。固定用一般是80%~95%浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水，因此核的着色不良。 3 中性甲醛液（混合固定液） 甲醛（浓）120ml，加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）4g，磷酸氢二纳（Na2HPO4）13g。此液固定效果比单纯10％福尔马林要好。 4 AF液（混合固定液） 95％乙醇90ml，甲醛(浓)10ml。也有配方是95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml，冰醋酸5ml。 此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水。 以上4种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为10％福尔马林，乙醇应尽量不用。 yzbai wrote: （1）10%甲醛：对组织渗透性强，固定均匀。对组织膨胀约5%，经酒精脱水时有较大的收缩。能保存脂肪，不能沉淀核蛋白及白蛋白，长期用其固定的组织使组织变为酸性，不利于染色，特别是细胞核的着色。经自来水冲洗6~24小时后，可以使其酸碱中和，并减少结晶。 （2）4%多聚甲醛：对组织穿透性好，组织收缩小，对大多数抗原物质保存较好，特别是对脂肪和各种酶的固定效果更好。固定的时间不宜太长，以24小时以内为宜，适用于免疫组织化学染色。
ICS 77.120. H 61 中华人民共和国有色行 YS/T XXX—XXXX 氟化镁 Magnesium Fluoride （预审稿） XXXX-XX-XX 发布 XXXX-XX-XX 实施 国家发展和改革委员会发布
前言 本标准是根据氟化盐工业多年来生产经验总结、生产技术成果和新技术的应用进行制定的，标准主要内容如下： 1 根据化学成分标准分为特级、一级两个级别。 2 附录A：氟化镁化学分析方法。 3 附录A为本标准的附录。 本标准由中国有色金属工业协会提出。 本标准由全国有色金属标准化技术委员会归口。 本标准由湖南湘铝有限责任公司负责起草。 本标准主要起草人： 本标准参加起草单位：焦作多氟多化工有限公司、白银氟化盐有限责任公司 本标准参加起草人： 本标准由全国有色金属标准化技术委员会负责解释。
氟化镁 1 范围 本标准规定了工业用氟化镁的要求、试验方法、检测规则、包装、标志、运输和贮存要求。 本标准氟化镁主要用于电解铝的添加剂、冶炼金属镁的助熔剂，也可用作光学透镜镀膜、钛颜料的涂饰剂、阴极射线屏的荧光材料。还可用于高级陶瓷、玻璃及氟化工原料等高技术领域。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款，通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注年代的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适应用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注年代的引用文件，其最新版本适应于本标准。 GB/T 1250 极限数值的表示方法和判定方法 3 要求 3.1氟化镁按化学成分分为一级、特级二个等级。 3.2氟化镁化学成分应符合表1的规定。 表1 氟化镁化学成分 3.3外观：氟化镁为白色、灰白色或粉红色。 3.4氟化镁中不得混入外来杂物。 4 试验方法 氟化镁的分析按附录A进行。 5 检验规则 5.1 检查与验收
一、企业环保组织机构图 1、责任和配置： 组长：（总经理）：企业环保工作第一负责人，负责企业环保和治理工作。 组员（人力部）：负责企业环保工作的日常监督管理，负责环保相关信息搜索、培训、宣传及执行；保卫科负责厂区环境安全卫生的日常维护。 组员（生产部经理）：负责车间生产环境卫生的控制，负责车间用电用水的控制。 组员（工程部）：负责相关环保设备设施的维护及正常运转。及污水处理站相关设备的运行和维护。 组员（采购部）：负责必要的环保设备的购置。 组员（行政部）：负责协助环保部门做好政府领导和相关业务合作单位领导的来访、参观等接待工作。 组员（财务部）：负责必要的环保设备成本核算及购置设备资金的支付等方面的业务工作。 副组长（EHS部）：负责制定公司的环保相关制度和执行，负责企业三废处理的运行管理。负责污泥等固体、危险废弃物外运及无公害化处理。
二、企业环境管理制度 1、建设单位设置专职的环境监督员，负责本公司的环境管理工作并健全相关环境管理制度，并在项目的运行期实施环境监控计划，应加强对环保处理设备的运行管理，确保污水、废气、噪声达标排放。作为企业的环境监督员，有如下的职责： 协助领导组织推动本企业的环境保护工作，贯彻执行环境保护的法律、法规、规章、标准及其他要求； 组织和协助相关部门制定或修订相关的环境保护规章制度和操作规程，并对其贯彻执行情况进行监督检查； 汇总和审查相关环保技术措施计划并督促有关部门或人员切实执行； 进行日常现场监督检查，发现问题及时协助解决，遇到特别环境污染事件，有权责令停止排污或者消减排污量，并立即报告领导研究处理；指导部门的环境监督员工作，充分发挥部门环境监督员的作用； 办理建设项目环境影响评价事项和“三同时”相关事项，参加环保设施验收和试运行工作； 参加环境污染事件调查和处理工作； 关部门研究解决本企业环境污染防治技术； 负责本企业应办理的所有环境保护事项。
组织固定液 【产品名称】 组织固定液 【包装规格】 货号：DF0111 装规格分别为：500ml、5000ml。 【预期用途】 用于新鲜组织标本的固定。 【检验原理】 固定的目的在于保护细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长，通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。本组织固定液主要由甲醛、磷酸盐组成，该固定液适合于绝大多数组织的固定，属于中性福尔马林固定液，pH接近于中性。 【主要组成成分】 试剂组成主要成分 组织固定液甲醛、磷酸盐 【储存条件及有效期】 5℃～35℃保存，原包装未开封固定液的有效期为24个月，在有效期内的已开封固定液建议在开封后6个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。 【样本要求】 组织尽量新鲜。 【检验方法】 l、一般标本固定时间控制在1～4小时/mm，大标本应适当延长固定时间； 2、固定好的组织，可在10%福尔马林固定液或70%乙醇中长期保存。 【检验方法的局限性】 仅限于病理组织内容物固定。 【注意事项】 l、避免过度延长固定时间，否则引起生物大分子过度交联，取材厚度不同，固定时间也不同。 2、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。
3、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。 4、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。 5、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效日期见包装。 6、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。 【基本信息】 备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司 住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房
北京吉美生物技术有限公司 Carnoy固定液 产品简介： 固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。 Jimei Carnoy固定液(Carnoy，s Fluid)又称卡诺氏固定液，主要由乙醇、乙酸等混合而成。适用于一般动物组织和细胞的固定，常用于动植物压片及石蜡切片等，有极快的渗透力，固定最多不超24h。其特点是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。推荐用于RNA和DNA染色的组织固定，亦用于糖原染色的组织固定，能够使糖原呈细微颗粒状。由于该液穿透力强，亦可固定外膜致密不宜渗透的组织。组织固定后暂时不用，可置于70%乙醇中保存。 操作步骤（仅供参考） 1、一般小块组织固定30~40min。稍大块组织2~4h。如果组织块大，可适当延长固 定时间，但不宜超过24h。 注意事项： 1、Carnoy固定液对人体有一定的损害，请小心操作，不宜用于固定脂类染色的组织。 2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同。 3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10：1。 4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。 5、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。 6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12个月有效。
公司环保工作概况 公司环保组织机构情况及管理制度 一、企业环保组织机构图 1、责任和配置： 1.1组长：（总经理）：企业环保工作第一负责人，负责企业环保和治理工 组长（副总） 副 组 长 副 组 长 副 组 长 副 组 长 成 员 成 员 成 员 成 员 成 员 成 员
作。 1.2副组长（人力部）：负责企业环保工作的日常监督管理，负责环保相关信息搜索、培训、宣传及执行；保卫科负责厂区环境安全卫生的日常维护。 1.3副组长（生产部经理）：负责车间生产环境卫生的控制，负责车间用电用水的控制。 1.4副组长（工程部）：负责相关环保设备设施的维护及正常运转。 污水处理站负责污水处理相关设备的运行和维护。 1.5副组长（采购部）：负责污泥等固体、危险废弃物外运及无公害化处理及负责必要的环保设备的购置。 二、企业环境管理制度 1、建设单位设置专职的环境监督员，负责本公司的环境管理工作并健全相关环境管理制度，并在项目的运行期实施环境监控计划，应加强对环保处理设备的运行管理，确保污水、废气、噪声达标排放。作为企业的环境监督员，有如下的职责： 1.11协助领导组织推动本企业的环境保护工作，贯彻执行环境保护的 法律、法规、规章、标准及其他要求； 1.12组织和协助相关部门制定或修订相关的环境保护规章制度和操 作规程，并对其贯彻执行情况进行监督检查； 1.13汇总和审查相关环保技术措施计划并督促有关部门或人员切实 执行； 1.14进行日常现场监督检查，发现问题及时协助解决，遇到特别环 境污染事件，有权责令停止排污或者消减排污量，并立即报告领导研究处理； 1.15指导部门的环境监督员工作，充分发挥部门环境监督员的作用； 1.16办理建设项目环境影响评价事项和“三同时”相关事项，参加环保 设施验收和试运行工作； 1.17参加环境污染事件调查和处理工作； 1.18关部门研究解决本企业环境污染防治技术；
【专题】组织细胞固定的原理、基本要求和注意事项等 在病理学中，组织只有经过固定，才能完成随后的一系列制作过程，直至切片的最后完成。每个医学研究者都能容易地把组织细胞固定起来，但是，要掌握组织固定的原理、过程及其意义是一件十分困难的事，下面我们将逐一阐述。 一、固定的作用组织经一系列的处理后，就必须进行固定，当然有的组织是先固定，再进行处理，然后再固定。固定的作用，从组织学的角度其简单的定义是，保持细胞、组织的固有形态和结构，使之尽量保持细胞、组织的固有形态和结构，而从免疫组化技术的角度，固定的作用不仅是使细胞内蛋白质凝固，尽量减少或终止外源性酶和内源性酶的反应；防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质；以保持组织的固有形态和结构；更重要的是保持组织或细胞的抗原性，不但要使抗原不导致失活，而且不使抗原发生弥散的现象，才能在免疫组化染色时，不产生过深的背景，影响对阳性物的判断。二、固定的目的1、能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。细菌无处不存在，它们随时都可污染腐蚀未经处理的组织。固定液可以固定任何蛋白质，凡有生命的东西，都由蛋白质组成，蛋白质被固定，生命就停止，细菌也就失去了活力。另者，在日常生活中，人们常可碰到这样的问题，一块肉不经处理放了几天后就会变质，这是为什么呢？除了细
菌参与外，其本身也是很重要的。因为组织离体后，供应这此组织的血液随之消失，细胞缺氧，细胞内溶酶体膜的结构受到破坏，破坏后释放出溶酶体酶，日常生活中常碰到的肉变质，就是细菌污染加组织自溶的结果。 2、保存细胞固有的物质，能凝固或沉淀细胞内或组织液，糖原等，使细胞或组织基本上保持与生活时的物质一样。细胞的固有物质，即细胞核、内质网、线粒体、高尔基器、溶酶体、过氧体，细胞骨架，组织液，抗原、糖元等。这些物质，如果不将其及时固定，是很容易丧失的，尤其是溶酶体，很容易受到破坏，因此应特别小心。 3、使组织硬化，便于切块。刚离体的组织，除了胃组织以外，都是柔软的组织，尤其是胃肠道的组织，如果在没有固定时就取材，效果就很差，不是取材不规整，就是厚薄不均，粘膜和肌层很容易分开，因此，要取得规整标致的材料，就必须将组织彻底固定，再行取材。 4、对某些具有传染性的标本，能防止疾病的扩散。病理标本、种类繁多，成份复杂，各种病例都有，具有传染性的病种也不少，如结核、肝炎、麻风、性病等等。对于此类标本，应进行彻底的固定后，再行取材，如结核球，固定时间应在3-5天。 5、保存好大体标本。对于有教学任务的医院病理科，除搞好疾病的诊断外，还有收集有价值的大体标本，有些大体标
Bouin固定液 Bouin Fixative Solution 编号名称规格单位 北京华越洋WG07113Bouin固定液250ml，500ml瓶 Bouin固定液说明： Bouin固定液是常用的混合型固定液，其渗透能力强，固定均匀，组织收缩小，不会使组织变硬变脆。适用于绝大部分组织，特别适用于睾丸活检组织的固定。固定时间一般需要12-24小时。 保存条件：4℃避光保存，有效期半年。 一般固定液固定时的注意事项： (1)固定液量：20倍于材料的体积，以免固定液被稀释。 (2)选择合适的固定液：渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中，又不使组织过度收缩或膨胀。 (3)固定的时间要合适： 与材料的大小和温度有关：材料大则时间长，材料小则时间短；温度高则时间短，温度低则时间长。 经固定的材料如不及时使用，可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时，再换入一次70%酒精，在0-4℃冰箱内可保存半年。经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次，效果较好。 一般固定液具有的特点： (1)迅速渗入组织，杀死原生质。在杀死的短时期中，细胞形态不致有所变化。 (2)必须具有渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。 (3)尽可能避免使组织膨胀或收缩。 (4)使细胞内的成分凝固或沉淀。 (5)增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。 (6)增加媒染作用和染色能力。
(7)使组织变硬，具有一定的硬度。 (8)固定以后能起到保存的作用。 (9)在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不致于因以后的处理而使固定的原生质变形。 华越洋Bouin固定液其他相关固定液： 通用组织细胞固定液 Champy固定液 Helly固定液 AAF固定液 Bouin固定液 戊二醛固定液 Zetterqvist固定液 B-5固定液 Bouin固定液 Dafano固定液 Gendre固定液 Methacarn固定液 A-F固定液
标准溶液的配制 盐酸标准溶液的配制和标定： 使用市售盐酸（密度为1.19g/ml，约含37%HCL）配制盐酸标准溶液，选用优基纯盐酸先以水配制成HCL（1+1），再以水稀释成所需浓度。 例如配制c（HCL）=0.10mol/L溶液，则需要吸取18mlHCL（1+1）溶液于100ml 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。这样配制的标准溶液必须进行标定。标定HCL溶液最常用的是无水碳酸钠和硼酸两种方法。 (1.）无水碳酸钠法标定。选用碳酸钠作基准物质，其优点是容易制得纯品，价格低廉，缺点是摩尔质量较小，易吸水。以甲基橙、甲基红或甲基橙——靛蓝二磺酸钠作指示剂，用HCL溶液滴定Na2CO3溶液，其化学反应式为： Na2CO3 +2HCL = 2NCL + H2O + CO2↑ 用此进行标定时应当注意： 1.）Na2CO3有强烈的吸水性，使用前必须在高温炉２７０——３０００Ｃ加热约１ｈ，然后置于干燥器中冷却备用。 ２.）计量点时PH值为3.9突跃范围PH值为5.0——5.3，可选用甲基橙作指示剂，选用甲基橙-靛蓝二磺酸钠作指示剂其变色点接近于计量点，终点更敏锐。 3.）选用甲基红作指示剂，滴定至终点时，应煮沸溶液2-3min，以消除CO2的影响。 （2）硼砂法标定。硼砂吸水性小，易制得纯品，摩尔质量大，是标定酸溶液较好的基准物质。硼砂在水中重结晶两次（结晶析出的温度在500C以下）可得到合乎要求的硼砂。由于硼砂含有结晶水。当空气中相对湿度小于39%时会明显风化形成水合物。所以，用作标定的硼砂应保存在相对湿度为60%左右的恒温中。用HCL滴定硼砂的计量点的产物为很弱的硼砂K a=5.7ⅹ10-10，PH=5.1.因此甲基红是适宜的指示剂，其滴定反应式为： B4O72-+2H++5H2O =4H3BO3 氢氧化钠标准溶液的配制与标定 氢氧化钠标准溶液的配制方法根据不同的要求有不同的方法，因氢氧化钠具有强烈的吸水性，且易吸收空气中的CO2.生成NaCO3，NaOH中常含有少量硫酸盐、氯化物和硅酸盐等，因此配制NaOH标准溶液只能用标定法。 不含CO32-的碱标准溶液通常有两种方法配制。一是称取一份NaOH置于带橡皮塞的试剂瓶中，加入一份H2O，搅拌溶解，配制NaOH（1+1）溶液，在这种浓碱溶液中，Na2CO3的溶解都很小，待Na2CO3沉淀完全，吸取上层澄清溶液，稀释成所需浓度的溶液。二是利用Ca(OH)2或BaCL2来沉淀溶液中的CO32-使之转化为Ca2CO3或BaCO3，由于Ca(OH)2在水溶液中溶解度相当的小。因此过量的Ca(OH)2将和Ca2CO3一起沉淀下来。若用BaCL2，则过量的BaCL2可加入少许Na2SO4使之与BaCO3一起沉淀，这样待完全沉淀后吸取上清液，稀释成所需浓度的溶液。 如果碱标准溶液中含有少许碳酸盐并无妨碍时，则可用简易的方法配制。称取较多的国体氢氧化钠，例如配制1L0.1mol/LNaOH溶液，可称取5——6g固体NaOH置于烧杯中，以水迅速洗涤2——3次，每次用少量水，倾去洗涤液，留下固体NaOH，再用水溶解，稀至1L用这种方法可以洗涤在固体NaOH表面上的大部分碳酸盐。 配制不含CO32-的碱标准溶液的用水均应预先除去其中的CO2，一般将水煮沸数分
动物组织各种固定液及优缺点 编 号 类别名字配方优缺点或备注 甲醛：从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:1. 组织收缩较少,损伤少,保存固有物质好.2. 固定均匀,穿透力强.3. 能使组织硬化,增进组织弹性,有利于切片.4. 能保存脂肪及脂类物质.5. 成本较低. 缺点:1. 杂质含量较多,如甲醇,可钝化酶类,影响反应.2. 含有微量甲酸,导致固定液酸变,影响染色.3. 可产生福尔马林色素,影响观察.4. 不能固定尿酸和糖类物质.5. 容易挥发,污染环境,可导致标本干涸.6. 可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,临床活检不用.因此要特别指出的是,在其后的各种技术操作中,要特别注意到甲醛的存在,必须要想办法除去它,否则将会给各种染色造成影响,甚至导致失败。 1 10%缓冲福尔马林固 定液甲醛100ml 蒸馏水900ml NaH2PO44g Na2HPO4 6.5g 该固定液是当今流行的固定液,因它对组织固 定较好,损伤较少,因对其后的各方面研究都较 好,尤其是对免疫组化的染色. 2 10%福尔马林固定液甲醛100 ml 自来水900ml 这是一种最简单的固定液，适合于边远地区携带的固定液，但由于它的单一性，因此，只要有条件的单位都不要求使用这种固定液。 3 10%福尔马林盐固定 液甲醛100ml 自来水900ml Nacl 9克 先将Nacl溶于水，再加入甲醛。这也是一种 较为简单的固定液，但由于加入Nacl，它是 一种重金属盐物质，加入了它可促进和改善染 色，增加染色的强度 4 Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液 75ml 甲醛 2 ml 冰醋酸 5 ml 该固定液中的冰醋酸，对胶原纤维等组织有膨胀作用。而甲醛对组织有收缩作用。两种试剂的混合使用，用以抵消彼此间的副作用。使组织固定达到优良的固定水平 5 醛糖钙固定液甲醛100ml 蔗糖300ml 乙酸钙20g 蒸镏水90ml 先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水，后加入甲醛。该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较好，组织固定后，做冰冻切片，再给予显示。 酒精：优点：1、可保存尿酸结晶和糖原等物质。2、能在任何比例的情况下与水混合，如组织的脱水，切片染色前后都离不开酒精，通常都用95%的工业酒精来配成60%、70%、80%、90%等不同的浓度来使用。 3、可溶解苯类物质为染色步骤中的桥梁试剂。常规活检等切片上的石蜡必须除去，才能进行染色，能除去石蜡的物质有苯及汽油等，因此称它为桥梁试剂。 4、能除去切片上的水份，使切片无水化。切片经染色后，到无水酒精中已完全无水，这样处理对于切片的保存是有好处的，否则，切片将会褪色。5，可与其它试剂配成多种的混合固定液，加快固定，它的缺点是：1、可溶解脂类物质，凡要证明组织是否含有脂类和类脂物时，切不能用含有酒精的固定液去固定组织，也不能用石蜡切片。2、对组织收缩较大，不宜作单纯固定液。3、渗透力不强。当用酒精固定组织时，组织表面很快就被固定，并形成了一层蛋白膜，这层膜可阻挡固定液向里渗透，造成了中间组织固定不佳的现象。4、可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡经酒精固定的组织，核的染色都不好。 5、可脱去切片上已着染的各种颜色，切片经染色后，一是必须洗去多余的染液，二是必须脱去切片上的水。在用酒精洗切片时，必须仔细地掌握显微镜下观察，还要掌握酒精的浓度，低浓底的酒精脱色力强，稍不注意，便可脱去切片上大部分的颜色。切片脱水时，要较快地通过低浓度的酒精，以免使已着染的颜色被脱去。
常用固定液的配制 1. 福尔马林-醋酸-酒精固定液(FAA) 50%或70%酒精90ml + 冰醋酸5ml + 福尔马林(37%~40%甲醛)5ml 可用作固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类,也不适宜作细胞学研究。幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，可防止材料收缩。若材料坚硬，可略减冰醋酸，略增福尔马林。若材料易收缩，可稍增加冰醋酸。久置时另加入5ml甘油以防蒸发和材料变硬。此液又可作保存液。固定时间最多10h。如果用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果较好：50%酒精89ml + 冰醋酸6ml + 福尔马林5ml 2. 福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA） 福尔马林5ml + 丙酸5ml + 70%酒精90ml 固定一般的植物组织，通常固定8~24h，可长久保存。 3. 酒精-醋酸-氯仿固定液（卡诺固定液，Carnoy fixative） 配方Ⅰ：纯酒精3份+ 乙酸1份 配方Ⅱ：纯酒精6份+乙酸1份+ 氯仿3份 配方Ⅲ：甲醇6份+乙酸1份+ 氯仿3份 适用于植物组织和细胞学材料，为研究细胞分裂和染色体的优良固定液。固定时间不宜过久。 4. 酒精-福尔马林固定液 福尔马林2~6（6~10）ml + 70%酒精100ml 固定植物一般组织，尤其适用于萌发的花粉管的固定。通常固定24h，亦可长久保存。 5. 酒精-福尔马林-甘油固定液 95%酒精150ml + 5%福尔马林100ml + 甘油50ml 此液也可长期储存材料。 6. 铬酸-醋酸固定液 根据固定对象的不同，可分为强、中、弱3种配方： （1）弱液配方：10%铬酸2.5ml + 10%醋酸5ml + 蒸馏水92.5ml （2）中液配方：10%铬酸7ml + 10%醋酸10ml + 蒸馏水83ml （3）强液配方：10%铬酸10ml + 10%醋酸30ml + 蒸馏水60ml 弱液配方用在固定较柔软的材料，如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。固定时间较短，一般为。1h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟至12~24h数小时，最长可固定 中液配方用于固定根尖、茎尖、未成熟子房和胚珠等。为了易于渗透，可在此液中加入2%的麦芽糖或尿素。固定时间12~24h。 强液配方用于固定木质根、茎、成熟子房等。为了易于渗透，可在此液中加入2%的麦芽糖或尿素。固定时间12~24h或更长。 7. 铬酸-醋酸-福尔马林混合液 这3种药品混合在一起所配成的各种固定液，通常称纳瓦申固定液（Nawashin fixative），简称Craf。配方见下表： 纳瓦申固定(ml) 桑弗利斯纳瓦 常备(ml)原(ml) Ⅰ40 40
苍南县昌顺石料有限公司环保组织机构图
环保岗位责任制 一、环保领导小组组长岗位职责 1、严格遵守并认真贯彻执行国家的有关法律法规和政策，是企业环保第一责任人，对企业的环保全面负责。 2、建立健全公司环保管理机构，督察成立部级以上环保主管部门，聘任专职环保管理人员，负责日常环保管理工作。 3、建立健全企业环保责任制，并督促审查、考核环保责任制的落实情况。 4、落实环保技术措施经费，保证环保工作投入。 5、定期组织召开环保会议，讨论解决环保工作中存在的问题。 二、环保领导小组副组长岗位职责 1、直接负责公司环保工作，协助总经理实现环保工作目标。 2、及时向组长汇报本公司环保工作情况及改进措施和意见。 3、每月组织一次环保工作大检查，并亲自参加，对查出的问题及隐患，提出整改措施并检查落实情况。 4、组织编制公司年度环保工作计划，主持制定环保规章制度、环保专业考核办法，并组织落实。 5、检查监督各分部门搞好环保工作。 6、检查指导有关部室领导职责范围内的环保工作。 7、每季召开一次环保工作会议，听取有关部门的汇报，研究解决环保工作的重大问题。 三、环保领导小组成员岗位职责 1、在分管副总的领导下，负责抓好岗位的环保工作。 2、认真执行上级环保法律法规、方针、政策及文件。 3、定期组织人员召开环保会议，及时传达上级的文件和指示。 4、经常深入现场，了解污染情况，提出整改措施。 5、负责本单位的环保宣传、教育、培训工作。 6、参加本单位范围内的污染事故调查、分析及处理工作。 7、负责本单位的环保达标验收组织及管理工作。 8、参加本单位各种建设项目环保设计审查、施工、监督及验收工作。 9、负责本单位的日常环保工作。
几种细胞固定方法 选择最佳固定液标准是： （1）最好地保持细胞和组织的形态结构； （2）最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液在免疫组化和细胞化学技术中是禁用的； （3）不要用可能带有自发荧光的固定剂，如带有苦味酸的固定剂，还有甲醛升汞固定液，会使上皮细胞产生非特异性荧光； （4）固定剂的选择、固定时间、温度和PH值都会影响实验结果。 单纯固定液 （1）4%中性甲醛固定液： 最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作（Job）。中性甲醛是以的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。 （2）乙醇固定液： 使用时以80%-95%的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，假如用于证实尿酸结晶和保存糖原，可用于100%乙醇固定组织。 （3）4%多聚甲醛固定液： 主要用于培养细胞的固定。 混合固定液 （1）乙醇-甲醛（乙醇-福尔马林，AF）固定液： 适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。 （2）B5（醋酸钠-升汞-甲醛）固定液： 多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。 （3）Bouin固定液： 非凡适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。 （4）Carnoy固定液： 穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，非凡适用于固定外膜致密的组织，也适用于糖原及尼氏小体的固定。 （5） Zenker固定液： 经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清楚，但成本较高且需非凡处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。
Step 1: 0.2M磷酸缓冲液的配制： --------------------- 磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O） 2.6克 磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O) 29克 双蒸馏水加至500毫升 pH调至7.4 Step 2: 戊二醛固定液的配制： --------------------- 25% 戊二醛1ml 双蒸馏水4ml 0.2mol/L磷酸缓冲液5ml 戊二醛最终浓度 2.5% pH值7.3-7.4 戊二醛固定剂的配方： （a）磷酸缓冲液的配方： A液：0.2M磷酸氢二钠贮备液： Na2HPO4·9H2O 17.81 克或：Na2HPO4·7H2O 26.83 克
或：Na2HPO4·7H2O 35.82克 加双蒸水至500毫升 B 液：0.2M磷酸二氢钠贮备液 NaH2PO4·H2O 13.8 克 或：NaH2PO4·2H2O 15.61 克 加双蒸水至600毫升 使用时将A液40.5毫升和B液9.5毫升混合成0.2M磷酸缓冲液。（PH7.4）（b） 2.5﹪戊二醛固定液的配方： 0.2M磷酸缓冲液50毫升 25﹪戊二醛溶液10毫升 加双蒸水至100毫升 具体步骤如下： 离心收集细胞，PBS漂洗两遍，双醛固定（2％多聚甲醛＋2.5％戊二醛。双醛固定对免疫电镜更加适合。）30min，PBS漂洗两遍，1％锇酸固定1h，PBS清洗3遍，用小的样品勺取出一点标本，置包埋板或小的离心管中，然后常规梯度脱水，浸透，包埋。 把细胞离心取沉淀细胞,,然后拿PBS液漂洗两遍后,倒去上清,直接加2.5%戊二醛固定后,送电镜室脱水、包埋、切片后置透射电镜下观察
津港高速公路工程（西外环■临港）第三标段项 目部 环境保护组织机构 施工单位：中铁十三局集团第一工程有限公司 日期：二O一三年四月七日 1. 环境保护组织机构 成立由项目经理任组长的施工环境保护领导小组，统筹安排,严
格执行国家颁布的环保、水保法规和建设单位的相关规定，安排有经验，责任心强的环保监察人员专门负责环保工作，在施工中全面规划，加强防范措施，减少施工对环境的污染、破坏，保护好生态环境，做好水土流失的保护措施。本着“三同时” 的原则与工程本体同步实施。 2. 环境保护岗位职责 1）项目经理全面负责本工程环境保护工作。定期组织环境保护的工作检查，确保环保及水保体系正常运转，是实现施工环保，水土保持目标的第一责任人。 贯彻执行国家及地方政府颁布的有关环境保护法规、方针和法令。 及时参加建设单位、当地政府环保部门组织的环保工作会议，配合建设单位做好环境保护工作。 2）项目副经理在项目经理领导下，在施工生产中组织实施项目经理部制定的环境保护措施。 组织安全质量部、施工管理部、物资设备部等部门，定期进行环境保护、水土保持工作检查。 3）总工程师 在项目经理领导下，负责组织施工管理部编制环境保护措施，负责环保设施、设备的落实 负责审核环境保护的各项措施以及检查施工中有关措施的具体落实、执行情况。
负责对施工可能造成的环境影响进行评估，并组织物资、施工管理部门对采用的环保设施和设备进行评估。 4）安质环保部 安质环保部是环境保护的主要职能部门，主要负责审批施工环保的各项措施，与建设单位环保主管部门、监理以及当地环保主管部门联系，为相关部门提供有关施工现场的各项环境保护、水土保持资料；随时检查施工现场的实施情况，有权制止破坏生态环境、水土保持的施工，并予以罚款。 5）工程技术部 在总工程师领导下，负责编制环境保护措施，负责按需申请配置环保设施及设备。根据综合管理部提供的资料编制施工组织设计，制定施工方案，并监督、检查施工执行情况。 6）物资设备部、中心料库负责施工机械噪声、尾气排放等影响环 境因素的治理工作。负责机械废弃物及包装物的回收和处理。 负责易燃、易爆物资及有毒化学品的采购、保管、贮存和领用，以预防其影响环境的潜在事故的发生。 负责环保装备的采购和保管。 负责配合综合管理部做好施工现场的宣传牌、警示牌等，并为施工环保提供必要的物资。 7）综合部及时分批、分时间段组织施工人员对施工环保的相关知 识和规定进行学习，并对施工中常用的保护方法进行培训。
安徽雷根生物技术有限公司 https://www.doczj.com/doc/9118043174.html, 组织固定液说明书 【产品名称】 组织固定液 【包装规格】 货号：DF0111 包装规格分别为：500ml、5000ml。 【预期用途】 用于新鲜组织标本的固定。 【检验原理】 固定的目的在于保护细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长，通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。 固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。本组织固定液主要由甲醛、磷酸盐组成，该固定液适合于绝大多数组织的固定，属于中性福尔马林固定液，pH接近于中性。 【主要组成成分】 试剂组成主要成分 组织固定液甲醛、磷酸盐【储存条件及有效期】 5℃～35℃保存，原包装未开封固定液的有效期为24个月，在有效期内的已开封固定液建议在开封后6个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。 【样本要求】 组织尽量新鲜。 【检验方法】 l、一般标本固定时间控制在1～4小时/mm，大标本应适当延长固定时间； 2、固定好的组织，可在10%福尔马林固定液或70%乙醇中长期保存。 【检验方法的局限性】 仅限于病理组织内容物固定。 【注意事项】 l、避免过度延长固定时间，否则引起生物大分子过度交联，取材厚度不同，固定时间也不同。 2、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。 3、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。 4、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。 5、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效 日期见包装。 6、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。 【基本信息】 备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司 住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房
实验一溶液的配制 【实验目的】 1. 掌握几种配制一定浓度溶液的方法和液体、固体试剂的取用方法。 2．熟悉量筒、容量瓶、托盘天平的正确使用方法。 3．了解溶液配制的一般原则。 【实验原理】 溶液浓度有几种不同的表示方法：物质的量浓度、质量浓度、质量摩尔浓度、质量分数、体积分数等等。 物质的量浓度＝溶质的物质的量/溶液体积； 质量浓度＝溶质质量/溶液体积； 质量摩尔浓度=溶质的物质的量/溶质的质量 质量分数＝溶质质量/溶液质量； 体积分数＝液体溶质的体积/溶液体积。 要配制一定浓度的溶液，首先要弄清楚是配制哪种类型浓度的溶液（根据浓度的单位判断），再根据所需配制溶液的浓度、体积与溶质的量三者的关系，计算出溶质的量。如果求出的是溶质的质量，则用天平称取溶质；如果求出的是溶质的体积，则用量筒量取溶质的体积。最后加水至所要求的溶液的质量或体积即可。 配制溶液还包括稀释溶液：根据溶液稀释前后溶质的量不变，首先利用稀释公式（如：c1V1＝c2V2）计算出浓溶液的体积，然后用量筒量取一定体积的浓溶液，再加蒸馏水稀至所需配制的稀溶液的体积，混合摇匀即可。 配制一般溶液（即溶液浓度准确度要求不高的溶液），可以用量筒、托盘天平等仪器进行配制；但如果要配制标准溶液（即溶液浓度准确度要求高的溶液），则应采用分析天平、移液管、容量瓶等精密仪器进行配制。 【仪器与试剂】
烧杯、洗瓶、容量瓶(100mL、250mL、1000mL各一个)、玻璃棒、胶头滴管、托盘天平、药匙、量筒（100mL）、电子天平。 NaCl固体（AR），95％酒精、40％甲醛溶液、碘、碘化钾、重铬酸钾固体（AR）、浓硫酸-重铬酸钾洗液、蒸馏水、ＮaOH固体（AR）。 【实验步骤】 一、移液管的洗涤 移液管和刻度吸量管一般采用橡皮吸耳球吸取铬酸洗涤液洗涤，沥尽洗涤液后，用自来水冲洗，再用蒸馏水洗涤干净。（具体步骤详见“实验四十六滴定分析基本操作”）。 二、容量瓶的准备与洗涤 1. 容量瓶的准备 使用前要检查是否漏水。检查方法是：往容量瓶中加入约1/3体积的水，盖好瓶塞，瓶外水珠用布或滤纸擦拭干净，左手按住瓶塞，右手拿住瓶底，将瓶倒立2 min，观察瓶塞周围是否有水渗出。如不漏水，将瓶直立，将瓶塞转动约180°后，再倒立试一次。 2. 容量瓶的洗涤 容量瓶一般不用刷子机械地刷洗，其内壁的污渍最好用浓硫酸-重铬酸钾洗液来清洗，小容量瓶可装满洗液浸泡一定时间；容量大的容量瓶则不必装满，注入约1/3体积洗液，塞紧瓶塞，摇动片刻，隔一些时间再摇动几次即可洗净。然后用水冲洗掉洗液，对着光亮检查一下是否已被洗净，内壁水膜是否均匀。如果发现仍有水珠，则应再用洗液浸泡后再检查，直到彻底洗净为止。最后用去离子水（或蒸馏水）洗去自来水。去离子水每次用量约为被洗仪器体积的1/3，一般洗2～3次。 三、溶液的配制 1. 配制250mL生理盐水（9g/L的NaCl溶液） （1）计算：所需NaCl的质量=0.25×9=2.25克。 （2）称量：在天平上称量约2.25克NaCl固体，并将它倒入小烧杯中。 （3）溶解：在盛有NaCl固体的小烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌，
蒙东锗业环保组织机构图 环保岗位责任制 一、环保领导小组组长岗位职责 1、严格遵守并认真贯彻执行国家的有关法律法规和政策，是企业环保第一责任人，对企业的环保全面负责。 2、建立健全公司环保管理机构，督察成立部级以上环保主管部门，聘任专职环保管理人员，负责日常环保管理工作。 3、建立健全企业环保责任制，并督促审查、考核环保责任制的落实情况。 4、落实环保技术措施经费，保证环保工作投入。 5、定期组织召开环保会议，讨论解决环保工作中存在的问题。 二、环保领导小组副组长岗位职责 1、直接负责公司环保工作，协助总经理实现环保工作目标。 2、及时向组长汇报本公司环保工作情况及改进措施和意见。 3、每月组织一次环保工作大检查，并亲自参加，对查出的问题及隐患，提出整改措施并检查落实情况。 4、组织编制公司年度环保工作计划，主持制定环保规章制度、环保专业考核办法，并组织落实。 5、检查监督各分车间搞好环保工作。 6、检查指导有关车间、部室领导职责范围内的环保工作。 7、每季召开一次环保工作会议，听取有关部门的汇报，研究解决环保工作的重大问题。 三、环保领导小组成员岗位职责 1、在分管副总的领导下，负责抓好本车间的环保工作。
2、认真执行上级环保法律法规、方针、政策及文件。 3、定期组织车间人员召开环保会议，及时传达上级的文件和指示。 4、经常深入现场，了解污染情况，提出整改措施。 5、负责本单位的环保宣传、教育、培训工作。 6、参加本单位范围内的污染事故调查、分析及处理工作。 7、负责本单位的环保达标验收组织及管理工作。 8、参加本单位各种建设项目环保设计审查、施工、监督及验收工作。 9、负责本单位的日常环保工作。
Carnoy固定液使用说明 货号：G2312 规格：100ml/500ml 保存：RT避光，有效期1年。 产品简介： 固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。Carnoy固定液(Carnoy's Fluid)又称卡诺氏固定液，主要由乙醇、乙酸等混合而成。适用于一般动植物组织和细胞的固定，常用于动植物压片及石蜡切片等，有极快的渗透力，固定最多不超24h。其特点是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。推荐用于RNA和DNA染色的组织固定，亦可用于糖原染色的组织固定，能够使糖原呈细微颗粒状。由于该液穿透力强，亦可固定外膜致密不宜渗透的组织。组织固定后暂时不用，可置于70%乙醇中保存。 操作步骤(仅供参考)： 一般小块组织固定30～40min。稍大块组织2～4h。如果组织块大，可适当延长固定时间，但不宜超过24h。 注意事项： 1、Carnoy固定液对人体有一定的损害，请小心操作。不宜用于固定脂类染色的组织。 2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同。 3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。
4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。 5、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。 6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
Gendre固定液 Gendre Fixative Solution 编号名称规格单位 北京华越洋WG03593Gendre固定液100ml，500ml瓶 Gendre固定液用途： 固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。 Gendre固定液(Gendre Fixative Solution)类似于Bouin's固定液，主要由PA、甲醛、乙醇、乙酸混合而成，PA可沉淀蛋白引起组织收缩，但不会使组织硬化，其与甲醛和乙酸混合后，穿透度加快，固定均匀，组织收缩轻微，对细胞的微细结构显示的很清晰，为一种良好的固定液。该固定液主要用于保存糖原，保存的糖原呈粗大颗粒状，小块组织细胞固定数小时至过夜后直接转入95%的乙醇脱水，其缺点是易把糖原推向细胞的一端，造成人为的“极化现象”。 Gendre固定液固定时的注意事项： 1、Gendre Fixative Solution对人体有一定的损害，请在通风好的环境下小心操作，避免吸入。 2、2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同，对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。常规活检组织比较适合的厚度为2~4mm，一般不超过6mm。 3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10：1。如果容积不够大，可以在固定期间更换1~3次固定液。 4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。 5、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。 Gendre固定液固定的条件： 1、一般需固定4h至整夜。如果组织块大，可适当延长固定时间，但不宜超过24h。 2、固定后，组织可稍微流水冲洗或不冲洗直接转入70%的乙醇脱水，经乙醇脱水时可除去大部分PA，组织留有一点黄色，对染色也无影响。 Gendre固定液保存条件：RT,避光。有效期半年。