不同固定液对冷冻组织病理切片HE染色质量比较

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三种不同固定液和固定方法对脑组织冷冻切片的影响

临床与实验病理学杂志ＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏｌ２０１５Ｍａｙ；３１（５）
·５９３ ·
网络出版时间：２０１５—５—１８１１：１７网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０１５０５１８．１１１７．０３０．ｈｔｍｌ
选择适合染色机使用的染色程序和染色液：在染细胞核之前，加一道２％冰乙酸，因为２％冰乙酸水溶液ｐＨ值更接近Ｈａｒｒｉｓ苏木精染液，能有效保护苏木精染液Ｊ，有效减少ＨＥ染色细胞核发灰现象。染液尽可能选择弱氧化剂氧化的苏木精，延缓苏木精的过度氧化，从而延长使用时间。本科室采用英国Ｓｉｇｍａ—Ａｌｄｒｉｃｈ公司的Ｈａｒｉｓ苏木精，使用前进行过滤，作者经５年多的摸索实践发现，１周内无氧化膜产生，效果良好；同时保证染色室温处于常温状态，以免室温过低影响苏木精的染色效果。本组采用醇溶性伊红，使ＨＥ切片红蓝对比分明。（４）养成良好的定期保养习惯：每天使用后打扫清理，如染色机冲洗缸，其进出水孔眼较小，易被堵塞造成流水冲洗不净影响切片染色背景，滋生细菌或真菌污染。应定期检测机器下水道的畅通，因Ｌｅｉｃａ玻片染色机内有一液位感应器，如底水槽液体超过设定的高度，进水会停止，造成冲洗不充分。封片机应及时检查并清除装载槽、传动链、拾放模块、滑道及吸盘区域出现的玻璃碎片和残留附着物，同时定期用二甲苯清洗装载架上粘连的中性树胶保持装载畅通，以免封片不畅。（５）其他注意事项：每天结束工作时应观察封片机上装载二甲苯的小瓶，保证滴胶针头浸没，以免阻

4种固定液对快速冷冻切片的制片效果的影响

4种固定液对快速冷冻切片的制片效果的影响周君;谢明;彭茜茜;王养秀;刘正宇【摘要】目的通过研究固定液对冷冻切片质量的影响,筛选出理想的固定液,为寻找新型固定液提供新思路,从而提高快速冷冻切片成片质量.方法收集新鲜鸭肝组织30例,冷冻切片取材后用不同的固定液进行固定,然后进行HE染色,显微镜观察.结果经乙醚酒精固定的鸭肝组织和细胞结构清晰,核浆颜色对比度适宜,染色鲜艳.结论乙醚酒精最适宜用于快速冷冻切片的固定,进行HE染色.【期刊名称】《中国医学工程》【年(卷),期】2016(024)009【总页数】2页(P32-33)【关键词】固定液;快速冷冻切片;HE染色【作者】周君;谢明;彭茜茜;王养秀;刘正宇【作者单位】湘南学院病理学研究所湖南郴州423000;湘南学院病理学研究所湖南郴州423000;湘南学院临床系,湖南郴州423000;湘南学院临床系,湖南郴州423000;湘南学院临床系,湖南郴州423000【正文语种】中文【中图分类】R818.02冷冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法[1]。

冷冻切片是一种最省时最快速的制片方法，因此主要用于临床手术病理诊断。

其原理是：冷冻组织变硬代替石蜡做浸蜡。

将组织固定在标本拖上短时间内冻好进行切片。

术中确诊病变性质，决定手术范围，因此作出高质量的冷冻切片至关重要[2]。

冷冻切片染色前需要进行组织的固定，组织的固定是冷冻切片制造的一个非常重要的环节，本文主要选择了4种固定液对其进行研究，筛选出一种好的固定液。

1 材料与方法1.1 材料选用新鲜的鸭肝组织30例进行制片。

1.2 试剂4种固定液：①95%酒精；②AF液（乙醇，甲醛）；③AAF液（乙醇，乙酸，中性甲醛）；④乙醚酒精（乙醚：酒精=1：1）。

HE染色试剂：①苏木素；②尹红；③碳酸锂；④无水酒精。

1.3 方法1.3.1 取材及切片取材大小2cm×2cm，厚0.2～0.5cm的新鲜鸭肝组织30例，用普通胶水进行包埋后用德国莱卡CM1900恒温冷冻切片机和日本Feather一次性刀片在-18℃的温度下进行切片，厚度为5 μm，各切10张。

不同固定液对大鼠肝脏组织石蜡切片质量的影响

不同固定液对大鼠肝脏组织石蜡切片质量的影响
赵玉琼;陈华
【期刊名称】《实验动物与比较医学》
【年(卷),期】2014(034)006
【摘要】目的探讨不同固定液对大鼠肝脏组织石蜡切片HE染色效果.方法应用SD大鼠肝脏组织分别在动物空腹和空腹条件下,选择三种常规的固定液:体积分数10％甲醛固定液、Bouin's固定液和改良Davidson's固定液,对肝脏组织进行固定、石蜡包埋、切片和HE染色,观察动物空腹与未空腹条件下组织固定对切片质量的
影响,以及不同固定液对肝脏组织切片质量的影响.结果在未空腹的条件下,肝脏组
织结构显示不清晰,呈水样变性的形态改变;Bouin's固定液和改良Davidson's固定液固定的组织结构更清晰,但是切片色泽不如体积分数10％甲醛固定液的鲜亮.结论大鼠是否处于空腹状态对肝脏组织结构影响很大,三种固定方法对大鼠肝脏组织切
片质量影响差异不大.
【总页数】4页(P486-489)
【作者】赵玉琼;陈华
【作者单位】解放军总医院医学实验动物中心,北京100853;解放军总医院医学实
验动物中心,北京100853
【正文语种】中文
【中图分类】Q95-33
【相关文献】
1.不同温度和固定液对冰冻切片质量的影响 [J], 黄爱民
2.不同固定液固定淋巴结对切片质量的影响 [J], 沙音;巴艳;黄斌
3.不同固定液对冰冻切片质量的影响 [J], 黄柳明
4.三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量的影响 [J], 赵玉琼;李瑞生;陈华
5.取材厚度对脂肪组织石蜡切片质量的影响 [J], 袁潇
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快速冰冻切片组织的固定冻切与新鲜冻切的比较汇总

快速冰冻切片组织的固定冻切与新鲜冻切的比较【关键词】快速冰冻切片；固定冻切；新鲜冻切手术中快速病理诊断以往在没有冷刀设备，尤其是没有恒冷低温切片机的条件下，都采用先将送检组织固定而后冷冻切片方法。

近年来我们采用德国Leica冰冻切片机对50例送检标本分别进行加温煮沸固定冻切与新鲜冻切做快速切片作了比较。

1 方法取材与固定取材组织不能水洗，以免发生冰晶，取组织块 1 cm×1 cm×0.2 cm 2块。

放入三合一固定液(95%乙醇150 ml＋10%甲醛40 ml+冰醋酸10 ml，加热煮沸固定1 min左右，使组织迅速固定至白色变硬时，再用冷水冲洗后，用干纱布沾干。

1．2 速冻与切片将固定后的组织块与新鲜组织分别用甲基纤维素作包埋剂，置切片机箱内按下PE键10 min左右开始切片。

组织进行速冻是为避免组织因缓慢冷冻形成大的冰晶造成组织变性而产生人为假象。

固定后组织与新鲜组织冰冻切片温度-18℃~20℃。

切片时，进刀要慢，缓慢摇转使切片平整。

2 体会固定组织的冰冻切片，因组织的黏液性物质己凝固，需用蛋白甘油附贴烤片，否则染色时易脱落，所以浪费时间。

新鲜组织冰冻切片无需用蛋白甘油粘贴，组织本身的组织液等粘性物质就能粘贴牢固，而且不用烤干，仅在常温下就很快凝固。

不但节省时间，而且组织的物质成分很少受到影响，不易出现人为假象。

固定后的组织冷冻慢或混进水分等原因，易产生有害的粗大冰晶。

新鲜组织冰冻切片或切片融化后再行固定，则冰晶很小甚至无显著影响。

我们配制的三合一固定液用于冰冻切片可提高染色效果，但固定取材的组织块时，其穿透力，即固定的速度满足不了紧急的要求。

加温煮沸固定虽然可以加快固定速度，减少固定时间，但往往造成组织严重收缩和硬脆等人为改变。

所以，在条件有限的单位采用组织固定后冻切是非常必要的。

具备了恒冷低温切片机的单位应尽量采用新鲜组织直接冻切。

几种常用病理组织固定液的比较

用甲醛固定的组织．细胞结构清晰，且能保持与
生活时形态相似。甲醛为病理科组织固定的常规固
定液，这是因为其有以下优￣［１ｏ，１１１： ① 甲醛有较强的
分子生物学的发展．ＮＢＦ已经不能满足现代病理学组织渗透力； ②可以有效且均匀地固定标本； ③固的要求。最新的生物医学和病理学研究及诊断依赖定所引起的回缩力较小，对标本的形态保存较完整；
１单纯固定液分类及其优缺点
的发展，但是病理检测依然是诊断很多疾病的金标定液及复合固定液都已经被研发处理应用于临床，术要求的不断提高，组织固定效果越来越重要。这既
与疾病的病理学诊断息息相关．又直接关系到疾病后续的分子检测指标及治疗方式的选择圈。病理切片
癌物 ” 嘲。此外，利用甲醛进行长时间的组织固定将引起核酸的广泛降解．这既损害了核酸的完整性，又降嗜碱性强，细胞核染色深，组织收缩大，细胞形态与生活时相比明显缩小；混合固定液的固定速度较快，
制作技术的质量涉及多个环节．组织固定是最基本１．１交联固定液理切片及免疫组织化学技术的制作质量等级。
交联固定剂包含甲醛和戊二醛。它
最重要的一个步骤。组织固定的质量可直接评定病们通过与蛋白质的氨基酸，相邻蛋白质之间。氨基酸和核酸之间形成的亚甲基桥与组织相互作用。这种却阻碍了核固定指利用一些化学试剂处理组织以保存组织交联机制虽然保持了组织的良好形态，

冷甲醇固定时间与不同组织冷冻切片染色质量的相关性分析

Anita Gola, et al.
Nature. 2021 Jan;589(7840):131-136. doi: 10.1038/s41586-020-2977-2. Epub 2020 Nov 25.
腺肿物 19 例、肺部结节 14 例。根据冷甲醇固定
时间分为 A 组（40s）
、B 组（60s）
、C 组（80s）
，
A 组（n＝39 例）
：乳腺结节、卵巢肿物、甲状腺
肿物、肺部节结分别为 14 例、6 例、5 例、14 例；
B （n＝39）
：乳腺结节、卵巢肿物、甲状腺肿
物、肺部节结分别为 15 例、7 例、5 例、12 例；
有关。此外，切片质量还与其他环节有关，如切
片固定后使用冷风干燥可降低脱片概率。但也有
与之相反结论，认为无论冷风或热风均无法降低
脱片概率，且冷热风有损切片染色质量，尤其是
淋巴组织[5]。因此，本研究认为，冷甲醇固定时间
为 60s、80s 时，不同组织冷冻切片染色质量均较
优，但其对最终诊断结果的影响不显著。而最佳
预冷，制冷温度为-10℃~50℃，同时将术间取下组
织速冻，使用美国樱花 OCT 冷冻切片包埋剂（品
牌：美国樱花 SAKURA；货号：4583；产品规格：
118 ml/支），使用期间要清楚包埋剂所生成的气泡。
待组织物变硬后，使用切片机（英国 Campden
Instruments，型号：7000 smz /5100 mz）切片，
片质量达标，同一病理组织使用同一固定液后，
其病理分型固定时间基本接近。同时，本研究以
石蜡切片病理诊断结果为诊断金标准，A 组、B 组、
C 组乳腺结节、卵巢肿物及肺部节结节病理分型

三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量的影响

三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量的影响赵玉琼;李瑞生;陈华【摘要】Objective To compare the rat and mice intestine slides quality fixed with three different fixatives and embeded by paraffin.Methods Three kinds of conventional fixatives were selected for the test, they are 10% neutral buffered formalin,Bouin’s solution and modified Davidson’ s solution.SD rat’ s and KM mice’ s intestinal tissues were fixed with the three different fixatives, then embeded, sliced and stained with HE as routine rut.To observe the slides quality under microscope.Results Sheding and necrosis of intestine villus epithelia were observed in slides made from formalin fixed intestines, which is speculated due to the fixations.The phenomenon was not observed in Bouin's solution and modified Davidson’ s solution fixed tissues.And the tissue structure were more fine and clear in them.Conclusions The rat and mice intestine slides made from tissues fixed by Bouin's solution and modified Davidson's solution are better than from the 10%neutral buffered formalin fixed ones.%目的：对比三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量的影响，优选大、小鼠肠道组织切片固定液。

冷甲醇固定时间对不同组织冷冻切片染色效果的影响

组别
粤组月组悦组
表 2 各组标本病理分型分布
例数
良性增生
导管内癌
乳腺结节乳头状癌鳞癌
浸润性导管癌
腺癌
61
4
5
3
4
4
3
81
5
2
5
4
4
4
39
6
3
2
3
5
4
腺瘤 3 5 4
甲状腺肿物结节性甲状腺肿乳头状腺癌
3
4
3
2
3
3
组别
粤组月组悦组
例数
61 81 39
鳞癌 2 3 4
乳头状腺癌 2 2 1
以石蜡切片为对照，粤组卵巢肿物切片细胞形态完整，核无明显肿大，核膜清晰，染色质收缩不明显，核质对比良好。但乳腺结节、甲状腺肿物、肺部结节等组织切片细胞形态、结构不清晰，细胞核肿大，核膜模糊，染色质松散，核及核浆对比不明显。月组卵巢肿物切片染色质量较粤组差别不明显，细胞轮廓清晰，核无肿胀，核染色及核质对比好；乳腺结节、甲状腺肿物、肺部结节等组织切片较粤组明显改善，组织结构完整性好，细胞核及胞浆染色清晰，对比明显。悦组各组织切片质量与月组差别不明显。具体见表员。各组标本病理分型见表圆。 3讨论
尽管自动恒温冷冻切片机的技术日益精进，但减少冷冻切ห้องสมุดไป่ตู้的误诊、漏诊是永恒的话题。切片的
山西医药杂志 2019 年 2 月第 48 卷第 4 期 Shanxi Med J，February 2019，Vol. 48. No.4
窑 493 窑
组别粤组月组悦组 1）与粤组比较孕约园援园员
例数 61 81 39

根据6种固定溶液长时间固定对热冻切片制片效果影响

根据6种固定溶液长时间固定对热冻切片制片效果影响引言在生物医学研究中，热冻切片制片是非常重要的技术之一，可以用于观察细胞和组织的形态以及分析其结构和功能。

在进行热冻切片制片时，固定溶液的选择和固定时间的控制对于制备高质量的切片非常关键。

本文旨在探讨不同固定溶液在长时间固定过程中对热冻切片制片效果的影响。

方法在本研究中，我们使用了6种常用的细胞和组织固定溶液，包括A、B、C、D、E和F。

为了比较不同固定溶液的效果，我们选择相同类型的细胞和组织样本，并将其分别放置在不同的固定溶液中。

每个样本在不同固定溶液中固定的时间也有所不同，包括15分钟、30分钟、1小时、2小时和24小时。

在固定完成后，我们使用标准的热冻切片制片方法对每个样本进行制片。

这包括将固定样本处理为冰冻切片，利用切片机制备切片，并将切片染色以观察细胞和组织的结构。

我们对每组样本制备的切片进行了评估和比较，包括切片质量、组织结构的保留程度以及染色的均匀性等指标。

结果根据我们的实验结果，不同固定溶液在长时间固定过程中对热冻切片制片效果有显著影响。

以下是我们的主要发现：1. 对于样本A和B，固定时间的延长对切片制片效果没有显著影响。

无论固定时间为15分钟还是24小时，切片的质量都非常好，组织结构完整保留，染色均匀。

2. 对于样本C和D，固定时间的延长对切片制片效果有一定影响。

随着固定时间的延长，切片的质量稍有下降，组织结构的完整性略有损失，但染色效果仍然良好。

3. 对于样本E和F，固定时间的延长对切片制片效果有显著影响。

固定时间过长会导致切片质量明显下降，组织结构的完整性丧失，染色效果不均匀。

讨论在长时间固定过程中，选择合适的固定溶液对于热冻切片制片效果至关重要。

根据我们的实验结果，不同样本对固定溶液的敏感性也有所不同。

样本A和B对固定时间不敏感，而样本E和F对固定时间非常敏感。

根据本研究的结果，我们可以得出以下结论：1. 对于固定时间不敏感的样本，可以选择相对较长的固定时间以确保切片质量和组织结构完整性。

冷冻切片方法及注意事项

一、试验前预备清理试验台及仪器。

开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度〔- 15~-20 ℃*〕。

预备好处理好的载玻片、刀片、胶水以及药品。

二、取材解剖之后快速取出所需的颖组织，用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材〔24×24×2mm*〕,以防形成冰晶造成切片中形成外形不一的空泡,使细胞内构造移位。

〔注：取材中目的标本既要明确也要确保其构造的完整性，应避开不必要的脂肪及坏死组织附着;要尽量剔除毛发、硬骨或钙化物;保乳手术切缘由于脂肪组织较多,取材厚度最好不要超过3mm，厚者冰冻费时，大者难以切完整。

甲状腺及淋巴结组织要带全组织被膜并除去多余的脂肪组织。

〕三、冷冻切片1、取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片〔1~3 分种〕。

2、将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。

3、调好欲切的厚度，依据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10μm 间。

4、调好防卷板。

制作冰冻切片，关键在于防卷板的调整上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。

切片时，以切出完整、平滑的切片为准。

切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向略微用力轻轻一带,可避开组织摊片过程中皱折,保证组织构造的完整及切片的美观。

注：①包埋剂的选用：包埋剂是对冷冻切片质量一重要影响因素，包埋剂用量要适宜，过多或过少都会影响标本冷冻质量。

常用的有三种包埋剂OCT 剂、B 超藕合剂以及一般胶水。

B 超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,一般胶水或OCT 剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。

〔OCT 包埋剂骤冷时固化，其冷冻速度和软硬韧度与组织相近，其还具有水溶性，不影响染色等优点。

〕②组织块过小：先将少量胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,约30 秒钟左右待胶凝固时将小组织放上, 组织四周再加一些胶,再次置于冷冻机中冷冻,这样组织被垫高,就能快速切出高质量的切片。

固定液温度对冰冻切片质量的影响

固定液温度对冰冻切片质量的影响作者：邓江黎相照来源：《中国实用医药》2020年第22期【摘要】目的探討固定液温度对冰冻切片质量的影响。

方法选取南方医科大学南方医院冰冻新鲜肺组织20例、乳腺组织20例、肠组织20例、甲状腺组织20例和脑组织20例，每个病例取一块组织，每块组织连续切片4片，分成A组、B组、C组、D组，每组100片。

A组采用室温AA固定液中固定1 min;B组采用低温恒冷AA固定液中固定1 min;C组采用低温恒冷AA固定液中固定1 min，然后热风固定10 s;D组采用低温恒冷固定液中固定15 min;常规苏木精-伊红染色法（HE染色）进行HE切片染色，观察四组的细胞形态差异、细胞核和胞浆的染色效果。

结果 A、C组冰冻切片组织细胞轻微收缩， HE染色均匀，细胞核染色深蓝色，核浆对比度较好;B组冰冻切片细胞轻微肿胀，切面易发生裂隙， HE染色不均匀，细胞核染色灰白灰蓝色，核浆对比度较差;D组冰冻切片组织细胞局部轻微肿胀， HE染色局部不均匀，细胞核染色深蓝色或灰蓝色，核浆对比度较差。

A组固定液染色综合评分为（93.99±0.69）分， B组固定液染色综合评分为（85.95±1.16）分， C组固定液染色综合评分为（93.61±0.62）分， D组固定液染色综合评分为（91.85±0.57）分，四组固定液染色综合评分比较，差异有统计学意义（P<0.05）。

结论组织冰冻切片经室温AA固定液固定后，细胞形态自然， HE染色细胞核染色鲜艳，核浆对比度较好。

【关键词】组织冰冻切片;AA固定液;室温固定;低温恒冷固定DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2020.22.091Effect of fixation fluid temperature on the quality of frozen sections; ;DENG Jiang， LI Xiang-zhao. Department of Pathology，Second People’s Hospital of Longgang District， Shenzhen 518112， China【Abstract】 Objective; ;To discuss the effect of fixation fluid temperature on the quality of frozen sections. Methods; ;20 cases of frozen fresh lung tissue， 20 cases of breast tissue， 20 cases of intestinal tissue， 20 cases of liver tissue， 20 cases of thyroid tissue and 20 cases of brain tissue in Nanfang Hospital of Southern Medical University were selected. 1 piece of tissue was taken from each case， and each piece of tissue was cut into 4 pieces， which were divided into group A，group B， group C and group D， with 100 pieces in each group. Group A was fixed in room temperature AA fixation fluid for 1 min. Group B was fixed in low temperature and constant cooling AA fixation fluid for 1 min. Group C was fixed in low temperature and constant cold AA fixation fluid for 1 min， followed by hot air fixation for 10 s. Group D was fixed in low temperature and constant cooling fixation fluid for15 min. Hematoxylin eosin staining （HE staining） was used to observe the cell morphology，nuclear and cytoplasmic staining effect of the four groups. Results; ;In group A and C， the frozen section cells contracted slightly， the HE staining was evenly， the nuclear staining was dark blue，and the contrast of nuclear plasma was good. In group B， the cells in frozen section were slightly swollen， the section was easy to crack， the HE staining was uneven， the nucleus staining was gray and gray blue， and the nucleocytoplasmic contrast was poor. In group D， the frozen section tissue cells were slightly swollen， the HE staining was uneven， and the nuclear staining was dark blue or gray blue， and the nucleocytoplasmic contrast was poor. The comprehensive score of fixation fluid staining of group A was （93.99±0.69） points， which was （85.95±1.16） points in group B，（93.61±0.62） points in group C and （91.85±0.57） points in group D. There was statistically significant difference in comprehensive score of fixation fluid staining among the four groups （P<0.05）. Conclusion; ;After frozen tissue sections are fixed with room temperature AA fixation fluid， the morphology of the cells is natural， the nucleus stain with HE is stained brightly， and the nucleocytoplasmic contrast is good.【Key words】 Frozen tissue sections; AA fixation fluid; Room temperature fixation; Low temperature and constant cooling fixation冰冻切片是借助低温恒冷条件使组织迅速冻结达到一定硬度进行切片的一种方法，具有快速、方便的特点，而大范围用于临床手术中的快速病理诊断，因此做出高质量的冰冻切片是手术中确诊病变性质、决定手术范围的最重要的环节。

动物组织各种固定液及优缺点

可与其它试剂配成多种的混合固定液，加快固定，它的缺点是：1、
可溶解脂类物质，凡要证明组织是否含有脂类和类脂物时，切不能用含有酒精的固定液去固定组织，也不能用石蜡
切片。2、
对组织收缩较大，不宜作单纯固定液。3、
渗透力不强。当用酒精固定组织时，组织表面很快就被固定，并形成了一层蛋白膜，这层膜可阻挡固定液向里渗透
，造成了中间组织固定不佳的现象。4、
可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡经酒精固定的组织，核的染色都不好。5、
可脱去切片上已着染的各种颜色，切片经染色后，一是必须洗去多余的染液，二是必须脱去切片上的水。在用酒精
洗切片时，必须仔细地掌握显微镜下观察，还要掌握酒精的浓度，低浓底的酒精脱色力强，稍不注意，便可脱去切
、70%、80%、90%等不同的浓度来使用。
3、可溶解苯类物质为染色步骤中的桥梁试剂。常规活检等切片上的石蜡必须除去，才能进行染色，能除去石蜡的
物质有苯及汽油等，因此称它为桥梁试剂。4、
能除去切片上的水份，使切片无水化。切片经染色后，到无水酒精中已完全无水，这样处理对于切片的保存是有好
处的，否则，切片将会褪色。5，
重铬酸钾 25G 升汞 50G 蒸馏水 1000ml 冰醋酸 50ml
50ml的冰醋酸，即可使用。应用该固定液固定的组织，一般不要超过24h，取出组织，流水冲冼12小时以上，然后保存于75%80%的酒精中，在切片染色前，必须用碘除去汞盐的沉
着。应用该固定液的组织，细胞核及细胞浆染色十分
清晰，特别是要显示骨骼肌的横纹时，应用本液可获
动物组织各种固定液及优缺点
编号
名字
配方
优缺点或备注
甲醛：从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:1.

组织切片的染色—冷冻切片HE染色-完整版PPT课件

注意事项： 5.多例多块组织同时需做冰冻切片时，可各自放于不同的支承器上，
于冷冻台上冻起来，然后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费时也不会乱。
6.放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置，如果胡乱放置，就不能收到很好的效果。
注意事项： 7.组织块不须经各种固定液固定，尤其是含水的固定液。临床快速冰
5～10秒 2～5秒 1分钟 2～5秒 2～3秒 2～5秒
冷冻切片HE染色
操作流程： 7.促蓝液 8.流水冲洗 9.0.5%的伊红水溶液 10.水洗 11.80%的乙醇 12.பைடு நூலகம்5%的乙醇
2～5秒 5～10秒 2～5秒 1～2秒 1～2秒 1～2秒
冷冻切片HE染色
操作流程： 13.无水乙醇 14.苯酚二甲苯(1:3) 15.二甲苯(Ⅰ） 16.二甲苯(Ⅱ) 17.二甲苯(Ⅲ) 中性树胶封固
2～5秒 2～5秒 2～5秒 2～5秒 2～5秒
冷冻切片HE染色
染色结果：细胞核蓝色,细胞质和纤维红色。注意事项： 1.乙醚-乙醇液是由乙醚和95%的乙醇各50ml，再加冰醋酸5滴混匀而
成,应密封保存。 2.冷冻切片HE染色操作要求时间短，因此，各种试剂要经常更换新液。
注意事项： 3.如果使用 Harris苏木精染液，应尽可能用新液；如果使用改
良 Lillie-Mayer苏木精染液则需存放1周后才用。
4.防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净，需经常用毛笔挑除切片残余和用柔软的纸张擦。有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。。
当切片时如果发现冰冻过度时可将冰冻的组织连同支承器取出来在室温停留片刻再行切片或者用口中哈气或者用大拇指按压组织块以此来软化组织再行切片

不同修复方法改善因固定不良引起细胞核灰染的比较

不同修复方法改善因固定不良引起细胞核灰染的比较
丁诗情
【期刊名称】《实用医技杂志》
【年(卷),期】2024(31)3
【摘要】目的探索不同修复方法对改善因固定不良导致苏木精-伊红(HE)染色细胞核灰染的效果,提高HE染色质量。

方法收集7例因固定不良导致HE染色细胞核灰染的胃肠镜活检小组织,重新切片,用磷酸盐缓冲液(PBS)高温高压、水煮,柠檬酸盐修复液高温高压、水煮以及乙二胺四乙酸(EDTA)抗原修复液高温高压、水煮6种方法修复后行HE染色,以此设为对照,比较各种方法的染色效果。

结果6种方法都可以改善细胞核灰染的问题,同时使组织中幽门螺杆菌更易于观察,以PBS缓冲液和柠檬酸盐修复液高温高压修复效果较好,EDTA抗原修复液高温高压和水煮都有细胞核挤压变形,胞质被破坏的现象。

结论PBS缓冲液和柠檬酸盐修复液高温高压都可以较好地改善细胞核灰染问题,并使幽门螺杆菌更易于观察。

【总页数】4页(P210-212)
【作者】丁诗情
【作者单位】浙江大学医学院附属第四医院病理科
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.H-E染色切片灰染修复方法的比较
2.骨髓活检HE染色时细胞核灰染的处理方法比较
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5.HE染色细胞核灰染的处理方法比较研究
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不同固定液对冷冻组织病理切片
HE染色质量比较
发表时间：
2019-12-12T12:59:46.697Z 来源：《医药前沿》2019年32期作者：黄荣
[导读] 结论：新型的环保固定液的冷冻组织病理切片HE染色质量与常规固定液无较大差异，但图像清晰度较高。

（海门市第四人民医院
江苏海门 226141）

【摘要】目的：探讨不同固定液对冷冻组织病理切片HE染色的质量。方法：选取我院2016年1月—2018年12月检测的280例冷冻组织
病理切片，随机分成对照组和观察组各
140例。对照组用常规固定液做HE染色，观察组用新型固定液做HE染色，比较两组冷冻组织病理切
片
HE染色质量。结果：相较于对照组的HE染色质量，观察组的色彩、对比度和渗透力以及图像呈现速度比较无显著差异（P＞0.05）；但
观察组的
HE染色图像清晰度与对照组比较有差异，I级率和Ⅱ级率均比对照组高，差异显著（P＜0.05）。结论：新型的环保固定液的冷冻
组织病理切片
HE染色质量与常规固定液无较大差异，但图像清晰度较高。

【关键词】冷冻组织病理切片；不同固定液；HE染色质量

【中图分类号】R446.8 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）32-0228-02

近年临床上可使用的固定液较多，但均存在一定的局限性，同时HE染色的质量也存在不同，故而本次研究中采用不同固定液对280例
冷冻组织病理切片做
HE染色，旨在比较其HE染色质量以及相关情况。

1.
资料与方法
1.1
一般资料

选择的280例组织主要源自甲状腺和胃、乳腺以及肠、肺、脑、子宫、平滑肌等，均是患者活检、术后遗留的组织；资料源自我院
2016
年1月—2018年12月检测的280例冷冻组织病理切片，随机将280例对象分成对照组和观察组各140例：对照组男性患者83例和女性患
者
57例，年龄19～63岁、平均（35.8±5.6）岁；观察组男性患者81例和女性患者59例，年龄21～62岁、平均（35.2±5.4）岁。两组一般资
料比较无差异，
P＞0.05，有可比性。
1.2
方法

对照组：常规试剂采用的是二甲苯和无水乙醇、分化液、含汞苏木素以及伊红等，HE染色根据规定步骤进行。

观察组：新型试剂采用的是环保试剂，把140例患者的病理组织切片后，将其用无苯切片脱蜡液I和Ⅱ各处理5min，随后再用Ⅲ号脱蜡
液将其处理
10min；采用无水乙醇I将其处理1min，并用Ⅱ号再处理1min，随后以95%和85%的乙醇将其处理10s；将病理组织放在自来水
龙头下将其缓流清洗
1min，之后采用苏木素稳定剂将其再处理30s，再者是用苏木素染色液将其处理9min，用自来水将其再进行缓流冲洗
1min
；随即用0.5%分化液将其处理2s，并再次用自来水缓流清洗1min；再用返蓝染色液将其处理5s，并用自来水对其缓流清洗1min；用
伊红染色液将其处理
2min，再用自来水缓流清洗5s；以85%的乙醇将其处理5s，并用95%的乙醇将其再处理10s；随后再用无水乙醇I和Ⅱ
对标本各处理
10s；随后再用无苯切片透明液I对其进行20s的处理，Ⅱ号液体再处理1min，Ⅲ号液体再处理2min；上述各项操作完成后则
将标本湿封。
1.3
观察指标和评价标准

选取的280例患者病理组织标本均采用LED型光学显微镜进行观察，用MRNN型高清数字显微镜相机对CCD图像进行采集，观察病理
组织的色彩颜色及其渗透性、对比度和组织结构等情况。
HE染色质量等级划分标准参照[1]。

1.4
统计学方法

统计学软件选择SPSS24.0，性别占比和HE染色I级、Ⅱ级以及Ⅲ级资料用（%）表示，行χ2检验；年龄资料用（x-±s）表示，行t检
验；
P＜0.05时，表示差异有统计学意义。

2.
结果

相较于对照组的HE染色质量，观察组的色彩、对比度和渗透力以及图像呈现速度比较无差异（P＞0.05）；但观察组的HE染色图像清
晰度与对照组比较有差异，
I级率和Ⅱ级率均比对照组高，差异显著（P＜0.05）。

表两组冷冻组织病理切片HE染色质量比较（例）

3.
讨论

冷冻切片的质量与切片的固定有关，常用的固定液中主要含有乙醇、贡等物质，乙醇虽然能够去除切片上的水分，对切片的组织结构
保存有效，但会导致组织切片中的球蛋白和白蛋白等物质沉淀，这时核蛋白沉淀并会溶解在水中，造成着色异常或者不佳；贡会对人体组
织造成较大的破坏，极易造成切片组织出现黄色的氧化汞，从而影响组织病理诊断
[2]。

本次采用的新型环保固定液中不含汞，切片组织可以在短时间内着色，进行分化后则用流水冲洗，促使组织切片快速返蓝，缩短了组
织着色时间。由于是采用无汞固定液，病理组织不会被破坏，固定液的稳定性得到加强，消除了常规固定液的一些不足，确保了病理组织
的着色质量，同时新试剂更换时无需再做相关处理。固定液的改良，使得其中的有害物质均被分离，不会出现大量挥发或者生物降解的问
题，亦不会造成病理组织标本异常收缩，可以获得色彩良好且对比度佳的图像
[3]。

综上所述，新型试剂HR染色色彩对比度和渗透力以及图像呈现速度与常规试剂无较大差异，但其染色图像清晰度较高，这对病理组织
的快速诊断有着积极作用。

【参考文献】
[1]
陈杰，常秀青.质量永远是病理诊断的生命线[J].中华病理学杂志，2016，45(1):1.
[2]
周君，谢明，彭茜茜，等.4种固定液对快速冷冻切片的制片效果的影响[J].中国医学工程，2016，24(9):32-33.
[3]
林红.GS环保固定与传统固定染色在冷冻切片中应用[J].中国医药科学，2014，4(20):139-141.