琥珀酸含量试剂盒说明书

琥珀酸美托洛尔作用及用途β-肾上腺素受体拮抗剂欧盟药典化学名1-异丙氨基-3-[对-(2-甲氧乙基)苯氧基]-2-丙醇琥珀酸盐含量99.0%~101.0%（干燥品）性状外观白色或近白色结晶性粉末。

溶解性在水中易溶，在甲醇中溶解，微溶于乙醇，难溶于乙酸乙酯。

鉴别：红外吸收光谱法（2.2.24）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。

检查溶液S取样品0.500 g溶解于无CO2的水R中并稀释至25 mL。

溶液的外观溶液S所呈乳白色比对照混悬液Ⅱ（2.2.1）不得更深，应无色（2.2.2，方法Ⅱ）。

pH（2.2.3）溶液S pH介于7.0~7.6。

相关物质试验A. 薄层色谱法（2.2.27）供试品溶液称取琥珀酸美托洛尔0.50 g，用甲醇R溶解并稀释至10 mL。

对照品溶液量取供试品溶液1 mL，用甲醇R稀释至50 mL。

取上述溶液5 mL用甲醇R稀释至50 mL。

薄层板TLC硅胶板R。

展开剂配制甲醇：乙腈（20︰80）的混合液，倒入展开剂后再将两个盛有30 mL浓氨水R 的小烧杯置于层析缸底部。

体积10 µL展开展开缸至少饱和1 h，薄层板展开长度12 cm左右。

干燥在空气中晾干至少3 h。

检查将薄层板置于碘蒸气中至少15 h。

限度：—任何杂质：除主斑点以外的任一斑点，其颜色与对照溶液色谱图中的斑点相比不得更深（0.2%）。

—忽略起始线处的斑点。

试验B. 液相色谱法（2.2.29）供试品溶液称取样品20.0 mg用流动相溶解并稀释至10.0 mL。

对照品溶液（a）称取样品5.0 mg和美托洛尔杂质A CRS 3.0 mg，用流动相溶解并稀释至100.0 mL。

对照品溶液（b）量取供试品溶液1.0 mL，用流动相溶解并稀释至100.0 mL。

量取上述溶液1.0 mL，用流动相稀释至10.0 mL。

对照品溶液（c）如果该溶液需要（见下面），应在通风橱中配制。

该溶液只用于鉴别杂质C的峰。

取样品10 mg溶解于10 mL0.1 M盐酸中。

琥珀酸质,标准琥珀酸（包括盐类）可产生酸味、呈味，可用于豆酱、酱油、日本酒、调味料等。

琥珀酸钠具有贝类特殊滋味的白色结晶粉末，在食品工业中用于调味剂、酸味剂、缓冲剂，用于火腿、香肠、水产品、调味液等。

1 .硬脂酸锌是白色粉末，不溶于水。

主要用作苯乙烯树脂、酚醛树脂、胺基树脂的润滑剂和脱模剂。

同时在橡胶中还具有硫化活性剂，软化剂的功能2 .羟丙基环糊精，在医药中可以提高药物溶解度，使药剂的疗效增加或服用量减少，可以调整或控制药物的释放速度，降低药物毒副作用，增强药物的稳定性。

主要用于针剂、注射液等。

3 .氢化大豆油【性状】本品为白色至淡黄色的块状物或粉末，加热熔融后呈透明、淡黄色液体。

本品在二1甲W或甲苯中易溶，在水或乙醇中不溶4 .枸檬酸三乙酯本品为无毒增塑剂，广泛应用于纤维素树脂和乙烯基树脂的增塑剂，食品中作为膨松保型剂能很好地提高烘烤食品的发泡性能，改善膨松状态，作为抗氧剂用来稳定大豆油、色拉油、人造奶油、起酥油及其他食用油脂，作为增香剂可用于软饮料冷饮、糖果、焙烤食品中增加风味还被用作螯合剂和载体溶剂。

特别适用于油墨涂料,无毒PVC造粒，制药工业，儿童软质玩具，医用制品，调配香精香料，化妆品制造等行业。

5 .硫酸钠的结晶水合物有两种：一种是七水合硫酸钠Na2SO4∙7H2O,白色正六或四方晶体，24.4。

C时失水。

另一种是十水硫酸钠Na2SO4∙10H2O,俗名芒硝，元明粉，保险粉等。

无色单斜晶体、密度1.464g∕cm3,熔点32.38°C,IOOoC时失去结晶水变成无水硫酸钠,易溶于水，在干燥空气中易风化变成无水白色粉末6 .虫白蜡，中药名。

为介壳虫科昆虫白蜡虫EriCerUSPeIa （Chavannes）Guerin的雄虫群栖于木犀科植物白蜡树FraxinusChinensisRoxb女贞1igustrumIucidumAit.或女贞属他种植物枝干上分泌的蜡，经精制而成。

琥珀酸美托洛尔质量标准项目要求
外观无色结晶或结晶性粉末
比旋光度（25℃） -110°至-119°
溶解度在水中可溶、在乙醇中可溶，但在醚中几乎不可溶相关物质含量
美托洛尔≤1.0%
其他单一杂质≤0.1%
总杂质≤2.0%
水分≤0.5%
残留溶剂符合有关规定
重金属≤0.001%
微生物限度
菌落总数≤1000 CFU/g
霉菌≤100 CFU/g
大肠菌群不得检出
细菌限度符合有关规定
含量（以干燥品计） 99.0%至101.0%
残留农药符合有关规定
备注：
1. 本标准所述的美托洛尔为指代美托洛尔或其单一杂质的总量；
2. 满足其他国家或地区相关标准的要求，也可作为参考。

注意：
1. 制定本标准参考了相关国家或地区的药典标准及技术要求，仅供参考，并非用于法律和法规遵从性用途；
2. 生产厂商应根据实际情况和注册文件的要求，对其生产的琥珀酸美托洛尔制订严格的内部质量标准；
3. 生产过程中的原材料选择、生产设备、质量控制等应符合相关法规和标准的要求。

北京索莱宝科技有限公司
SDH/COX双染试剂盒说明书
货号：G2005
保存：-20℃避光，6个月
产品内容：
名称规格Storage
试剂A：COX染色液5ml-20℃避光
试剂B：SDH染色液5ml-20℃避光
产品说明：
SDH（琥珀酸脱氢酶）/COX（细胞色素氧化酶）双染试剂盒可用于显示COX阴性纤维。

COX阴性部位可能是SDH阳性。

COX13个亚单位中的3个由线粒体DNA编码，而SDH则由核DNA编码。

因此，SDH不受线粒体DNA突变的影响。

线粒体肌病破碎红纤维一般COX阴性。

操作步骤：
1、冷冻切片用电吹风风干载玻片上的水雾，将切片浸入COX孵育液，于37℃恒温水浴锅内孵育40min。

此时应将切片放在显微镜下观察并控制染色时间。

若孵育时间过长，会有沉淀产生，若孵育时间太短，结果显示比较弱，分型不明显，均影响结果的观察。

2、蒸馏水洗去COX孵育液。

3、将切片浸入SDH孵育液，于37℃恒温水浴锅内孵育1-2h。

显微镜下观察并控制染色时间。

蒸馏水稍洗。

4、10％甲醛钙固定10min。

5、流水冲洗3min。

6、甘油明胶封固。

染色结果：
COX阳性部位（线粒体COX阳性部位）棕红色
SDH阳性部位（线粒体COX阴性部位）蓝色
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㊃388 ㊃J o u r n a l o f H e n a n U n i v e r s i t y(M e d i c a l S c i e n c e )2020,39(6)文章编号:1672-7606(2020)06-0388-03H P L C 法测定琥珀酸美托洛尔的有关物质许笑笑1,孙 琳21.邓州市中心医院药械科,河南邓州474150;2.郑州大学第三附属医院,郑州450000摘 要: 目的 建立琥珀酸美托洛尔有关物质的H P L C 测定方法㊂ 方法 色谱柱为C 18(150mmˑ4.6mm ,5μm );流动相:醋酸铵3.9g ,用810m L 水溶解,加三乙胺2m L ㊁冰醋酸10m L ㊁磷酸3m L 和乙腈146m L ,混合均匀;流速:1.0m L ㊃m i n -1;柱温:25ħ;检测波长:280n m ;进样量:20μL ㊂结果 琥珀酸美托洛尔主峰与杂质A 分离度大于8,与其他杂质分离度符合规定;精密度试验结果R S D 为1.35%;最低检出浓度为0.2μg㊃m L -1(供试品溶液浓度的0.01%);供试品溶液在24h 内稳定㊂结论 该方法简便㊁准确㊁可靠,能满足琥珀酸美托洛尔有关物质的限度检测要求㊂关键词:琥珀酸美托洛尔;有关物质;H P L C中图分类号:R 927.2 文献标志码:A收稿日期:2020-06-11作者简介:许笑笑(1989-),女,硕士,主治医师㊂研究方向:天然活性成分研究及药物开发㊂D e t e r m i n a t i o n o f t h e r e l a t e d s u b s t a n c e s o f M e t o p r o l o l S u c c i n a t e b y HP L C X U X i a o x i a o 1 S U N L i n21 D e n g z h o u C e n t r a l H o s p i t a l D e n g z h o u 474150 C h i n a2 T h e T h i r d A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f Z h e n g z h o u U n i v e r s i t y Z h e n gz h o u 45000 C h i n a A b s t r a c t O b je c t i v e T o e s t a b l i s h H P L C m e t h o d t o d e t e r m i n e t h e r e l a t e d s u b s t a n c e s of M e t o p r o l o l S u c c i n a t e M e t h o d s C 18c o l u m n 150mmˑ4 6mm 5μma mm o n i u m a c e t a t eb u f f e r s o l u t i o n 3 9g ac e t i c a mm o n i ad i s s o l ve d i n 810m L w a t e r w i t h a n a d d i t i o n of 2 0m L t r i e t h y l a m i n e 10 0m L a c e t i c a c i d 3 0m L p h o s ph o r i c a c i d a d d e d 146m L a c e t o n i t r i l e a s m o b i l e p h a s e T h e f l o w r a t e w a s 1 0m L m i n -1T h e c o l u m n t e m p e r a t u r e w a s k e pt a t 25ħa n d t h e d e t e c t i o n w a v e l e n g t h w a s 280n m T h e s a m p l e s i z e w a s 20μL R e s u l t s T h e d e g r e e o f s e p a r a t i o n o f M e t o p r o l o l S u c c i n a t e a n d i m p u r i t y A p e a k s w a s g r e a t e r t h a n 8 t h e d e g r e e o f s e p a r a t i o n o f M e t o p r o l o l S u c c i n a t e a n d o t h e r i m p u r i t yp e a k s m e t t h e r e q u i r e m e n t s T h e p r e c i s i o n r e s u l t s R S D w a s 1 35% T h e d e t e c t i o n l i m i t w a s 0 2μgm L -1T h e s o l u t i o n w a s s t a b l e i n 24h C o n c l u s i o n T h e m e t h o d i s s i m pl e a c c u r a t e a n d r e l i a b l e f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f r e l a t e d s u b s t a n c e s o f M e t o pr o l o l S u c c i n a t e K e y wo r d s m e t o p r o l o l s u c c i n a t e r e l a t e d s u b s t a n c e s H P L C 琥珀酸美托洛尔为选择性β1受体阻滞剂,用于治疗高血压㊁冠心病㊁慢性心力衰竭和心律失常[1]㊂琥珀酸美托洛尔及其制剂在美国药典(U S P 34)和英国药典(E P 2011)[2-3]均有收载,我国药典暂未收载㊂我们参照英国药典(E P 2011)琥珀酸美托洛尔有关物质H P L C项下的方法,建立琥珀酸美托洛尔有关物质的H P L C 检测方法,并参照中国药典‘药品标准分析方法验证指导原则“[4]对本方法进行了验证㊂1 仪器与试剂A gi l e n t 1260高效液相色谱仪,A L 204电子分析天平㊂琥珀酸美托洛尔原料(自制),琥珀酸美托洛尔2020,39(6)河南大学学报(医学版)㊃389㊃杂质A(008E15)㊂乙腈㊁三乙胺为色谱纯;水为超纯水;其他试剂均为分析纯㊂2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:Z O R B O X-C18,150mmˑ4.6mm,5μm;流动相:醋酸铵3.9g,用810m L水溶解,加三乙胺2m L㊁冰醋酸10m L㊁磷酸3m L和乙腈146m L,混合均匀;流速:1.0m L㊃m i n-1;柱温:25ħ;检测波长:280n m;进样量:20μL㊂2.2溶液的制备2.2.1供试品溶液的制备取琥珀酸美托洛尔20m g,置10m L量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得㊂2.2.2对照溶液a的制备取琥珀酸美托洛尔5m g㊁琥珀酸美托洛尔杂质A3m g,置100m L量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得㊂2.2.3对照溶液b的制备精密量取供试品溶液1.0m L,置100m L量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀;精密量取1.0m L,置10m L量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得㊂2.2.4对照溶液c的制备取琥珀酸美托洛尔10m g,置10m L量瓶中,用0.1m o l㊃L-1盐酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀;将该溶液放置254n m波长的紫外灯下照射6h;精密量取1.0m L,置50m L量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得㊂如果供试品溶液中出现一个峰面积较对照溶液b峰面积大的且出峰时间为对照溶液b主峰0.3倍保留时间的峰,进样对照溶液c,该溶液仅用于鉴定杂质C的峰㊂2.2.5计算公式杂质C=供试品溶液中杂质C峰面积ˑ0.1对照溶液主峰面积ˑ1000ˑ100%,其他单杂=供试品溶液中单个杂质峰面积对照溶液主峰面积ˑ1000ˑ100%,总杂=供试品溶液中所有杂质含量的总和㊂2.3方法学考察2.3.1系统适用性按2.1项下色谱条件,量取对照溶液a20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图至琥珀酸美托洛尔主峰保留时间的3倍㊂杂质A与主峰分离度为8.85㊂2.3.2专属性1)空白试验㊂取流动相20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图至琥珀酸美托洛尔主峰保留时间的3倍㊂2)杂质C定位㊂量取对照溶液c20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图至琥珀酸美托洛尔主峰保留时间的3倍㊂3)降解试验㊂采用强酸(加6m o l㊃L-1盐酸0.5m L,60ħ水浴加热2h)㊁强碱(加6m o l㊃L-1氢氧化钠0.5m L,60ħ水浴加热2h)㊁强氧化(加体积分数为30%过氧化氢1.0m L,60ħ水浴加热1h)㊁高温(100ħ条件下加热1h)㊁强光(4500ʃ500)l x条件下照射24h方法对琥珀酸美托洛尔进行破坏,使其产生降解产物,同时制备空白降解溶液,按上述方法进行测定㊂本品在氧化降解杂质数量和杂质含量上增加明显,主峰与相邻杂质分离度分别为4.11和1.51㊂其他降解试验的降解产物较少,琥珀酸美托洛尔与相邻杂质的分离度均大于3㊂2.4最低检测限取对照溶液b20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图至琥珀酸美托洛尔主峰保留时间的3倍,量取琥珀酸美托洛尔峰高和基线噪音,计算琥珀酸美托洛尔的信噪比(S/N)为31.5㊂取琥珀酸美托洛尔对照溶液b用流动相稀释10倍,进样检测,记录色谱图,琥珀酸美托洛尔峰的信噪比为3.5,即最低检出浓度为0.2μg㊃m L-1(供试品溶液浓度的0.01%)㊂2.5精密度试验取琥珀酸美托洛尔对照溶液b20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图至琥珀酸美托洛尔主峰保留时间的3倍㊂连续进样6次,主峰峰面积的R S D为1.35%㊂2.6溶液稳定性取供试品溶液和对照品溶液b,室温条件下,分别于0㊁4㊁8㊁12㊁24h测定,杂质C㊁最大单杂和总杂含量的绝对偏差均不大于0.003%,说明琥珀酸美托洛尔供试品溶液在24h内稳定㊂2.7样品有关物质测定取琥珀酸美托洛尔样品3批,按前述方法检测,计算有关物质,结果见表1㊂㊃390㊃J o u r n a l o f H e n a n U n i v e r s i t y(M e d i c a l S c i e n c e)2020,39(6)表1样品含量测定结果批号最大单杂/%总杂/% 1205010.090.14 1205020.060.09 1205030.040.063讨论3.1方法的确定琥珀酸美托洛尔在美国药典(U S P34)中列出有琥珀酸美托洛尔杂质A㊁B㊁C㊁D四种杂质,英国药典(B P2011)中则列出有12种已知杂质;U S P采用分别用杂质对照品测定琥珀酸美托洛尔中杂质A㊁B㊁C㊁D的含量,对4种已知杂质测定结果准确,而其他杂质仍需用自身对照法测定㊂E P采用自身对照法结合杂质A和杂质C定位,加校正因子方法计算杂质C,不加校正因子计算杂质A和其他杂质,对杂质对照品要求相对较低㊂我们参照E P,经方法学验证,该方法简便㊁准确㊁可靠,能满足琥珀酸美托洛尔有关物质的限度检测要求㊂3.2耐用性将柱温分别设定为20㊁25㊁30ħ,其他按照前述色谱条件进行测定,琥珀酸美托洛尔和杂质A的分离度无显著差异,单杂和总杂的含量测定结果无显著变化㊂将流动相流速分别设定为0.9㊁1.0㊁1.1m L㊃m i n-1,其他按照前述色谱条件进行测定㊂琥珀酸美托洛尔和杂质A的分离度均大于8,单杂和总杂的含量测定结果无显著变化㊂配制流动相比例分别814ʒ156㊁824ʒ146㊁834ʒ136,其他按前述色谱条件进行测定,琥珀酸美托洛尔和杂质A的分离度分别为7.9㊁8.8㊁9.1,单杂和总杂的含量测定结果无显著变化㊂说明该方法耐用,色谱条件的轻微改变不影响该分析方法的测定结果㊂参考文献:[1]中华医学会心血管病学分会,中华心血管病杂志编辑委员会.β肾上腺素能受体阻滞剂在心血管疾病应用的专家共识[J].中华心血管病杂志,2009,37:195-209.[2]美国药典[S].2011:3508-3509.[3]英国药典[S].2011:1452-1454.[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典:四部[S].中国医药科技出版社,2015:105-109[责任编辑段金卯](上接第387页)参考文献:[1]唐哲,西娜.我院辅助用药合理管控的探索与实践[J].中国药房,2016,27(31):4396.[2]茹爱忠,刘静,蔡瑞君,等.建立辅助用药预警监控干预体系对合理用药及新医改控费的作用[J].中国药事, 2018,32(1):97-103.[3]韩爽,钟敏涛,李锦,等.我国辅助用药应用现状及管理对策初探[J].中国药学杂志,2016,51(8):678-682.[4]路丹,卢成华.我院2013-2015年辅助用药应用分析[J].中国药房,2017,28(8):1030-1033.[5]王笑妍,付秀娟,黄玉鑫,等.我院重点监控药品的药事管理模式探索[J].中国药房,2018,29(7):882-885.[6]王丽,蔡德芳,陈勇,等.辅助用药分类方法探索[J].中国药师杂志,2015,18(12):2156-2159.[7]马洁,王南,张四喜,等.以P D C A循环理论为基础的临床药师工作模式探讨[J].中国医院药学杂志,2018,38 (5):555-557.[8]徐婷,张妍,李莉,等.基于信息化手段探索建立医院辅助用药廉政风险防控预警体系[J].江苏卫生事业管理,2019,30(5):655-658.[9]徐敢,王冲.药占比在医院管理评价工作中的管制价值和社会效果分析[J].中国药房,2015,26(34):4762-4765.[责任编辑段金卯]。

尿酸（UA ）含量检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC1365规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体100mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体30mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×2瓶2-8℃保存试剂三粉剂×1瓶2-8℃保存试剂四粉剂×1瓶2-8℃保存试剂五粉剂×1瓶-20℃保存试剂六粉剂×1瓶-20℃保存标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入3mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂2-8℃保存。

2-8℃保存1周。

（1瓶粉剂溶解后可做100T ，为了延长使用时间，此产品多给1瓶粉剂）2、试剂三：临用前加入6mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂2-8℃可保存4周。

3、试剂四：临用前加入3mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂2-8℃可保存4周。

4、试剂五：粉剂置于试剂瓶内玻璃管中。

临用前加入6mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂-20℃分装保存，避免反复冻融。

-20℃可保存4周。

5、试剂六：粉剂置于试剂瓶内玻璃管中。

临用前加入6mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂-20℃保分装保存，避免反复冻融。

-20℃可保存4周。

6、标准品：5µmol/mL 尿酸溶液。

7、工作液A 的配制：用于样本测定管、空白管及标准管的检测，按照试剂二：试剂三：试剂四：试剂五：试剂六=1:1:1:1:2的比例配制，根据样本量现配现用，配后建议2小时内用完。

8、工作液B 的配制：用于样本对照管的检测，按照试剂二：试剂三：试剂四：试剂五：试剂一=1:1:1:1:2的比例配制，根据样本量现配现用，配后建议2小时内用完。

产品说明：尿酸为嘌呤代谢的终末产物，嘌呤代谢紊乱、能量代谢异常及肾脏对尿酸的排泄障碍等均可引起血浆尿酸水平升高或降低，进而导致多种疾病如通风、肾病、心血管疾病的发生，尿酸含量的测定在临床诊断中有着重要的指导意义。

羟脯氨酸（HYP ）含量检测试剂盒说明书微量法货号：BC0255规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体200 mL×1瓶（自备）常温保存试剂一液体8 mL×1瓶4℃保存试剂二液体8 mL×1瓶4℃保存标准品液体0.5 mL×1支4℃保存溶液的配制：1.提取液：自备6 mol/L 盐酸，提供一个125mL 空瓶。

6 mol/L 盐酸的配制：浓盐酸（37%）和H 2O 的体积比是1：1。

2.标准品：0.5 mg/mL 羟脯氨酸标准品。

产品说明：HYP 是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP 含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

样本经水解产生游离的HYP ，进一步被氯胺T 氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，在560nm 处有特征吸收峰。

通过测定样本水解液560nm 吸光值，可计算HYP 含量。

技术指标：最低检出限：0.057 μg/mL 线性范围：0.117-30 μg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：天平、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、6mol/L 盐酸和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：称取约0.2g 样本于玻璃管，将组织尽量剪碎以便消化，盖子稍松不密闭。

加入2mL 的提取液，煮沸或110℃烘箱2至6小时消化至没有可见大的团块，冷却后用10mol/L NaOH （约1mL ）调节pH 值至6-8范围内（不可过酸或过碱），再蒸馏水定容至4mL 。

最后16000rpm ，25℃，离心20min（若离心后仍有杂质，可通过过滤去除），取上清待测。

琥珀酸脱氢酶（SDH）测试盒说明书（货号：A02250T/48样）一、测定原理：琥珀酸脱氢酶（SDH）催化底物反应，FAD 是该反应的辅基，FAD 被还原成FADH，该反应与2,6-DPIP 的还原相偶联，测定2,6-DPIP 的还原速度可以推算出SDH 的活力。

二、试剂组成与配制：（50T/48样）试剂一：液体60ml×2瓶，4℃冷藏3个月；试剂二：液体6ml×1瓶，避光4℃冷藏3个月；试剂三：液体6ml×1瓶，避光4℃冷藏3个月；试剂四：液体6ml×2瓶，避光4℃冷藏3个月；试剂五：液体6ml×1瓶，避光-20℃冷藏3个月，如需分多次使用，建议老师将试剂五分装后冷冻保存，避免多次的反复冻融；试剂六：液体6ml×1瓶，4℃冷藏3个月。

工作液的配制:按试剂一:试剂二:试剂三:试剂四:试剂五:试剂六=2:0.1:0.1:0.2:0.1:0.1的比例进行配制,用多少配多少,现用现配,配好后一定要避光保存。

三、操作步骤：a 、将可见分光光度计于600nm 处,1cm 光径比色皿,以双蒸水调零(比色皿准备两只,一只用于调零,一只用于测定)。

b 、将工作液，37℃预温5分钟以上。

c、往相应编号的试管中加入100μl 待测样本，用5ml 移液器吸取2.6ml 工作液迅速冲入试管中，立即混匀并计时。

d、迅速倒入比色皿中在可见分光光度计600nm 处比色，5秒时读取吸光度值（A 1值）,在1分5秒时再次测定吸光度值（A 2值）；e、求出2次吸光度差值（△A=A 1-A 2）。

注意点：①、工作液一定要避光保存,测定过程中工作液同样要避光;②、比色皿必须用自来水冲洗干净，再用双蒸水洗2～3次后，才能对下一个样本进行检测;③、在比色皿中加完样后，下一步加试剂与按秒表需同步;④、在比色皿中加完试剂后，必须快速放入分光光度计的比色槽中;⑤、试剂二、试剂三、试剂四、试剂五必须避光冷藏;⑥、配好的混合试剂在测定前必须预温。

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS10017.1 v.A GENMED活体细胞线粒体损伤/氧化荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED活体细胞线粒体损伤/氧化荧光测定试剂是一种旨在通过特异性染色剂分析线粒体膜心磷脂的变化来定性或定量测定线粒体内含质量以及自由基、氧化物等对细胞线粒体的毒性与损伤作用的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。

产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。

技术背景心磷脂（Cardiolipin）是线粒体膜上的主要成分之一。

它对细胞氧化特别敏感。

线粒体脂类分解，致使心磷脂显著减少，最终造成线粒体的严重损害。

Nonyl-Acrydine Orange是一种可自由通过细胞膜的染色剂，特异性地染色线粒体上的心磷脂，并发出荧光。

一旦线粒体膜质量减少或受到损害以及被氧化，其荧光显著减弱。

产品内容GENMED清理液（Reagent A）毫升GENMED染色液（Reagent B）微升GENMED稀释液（Reagent C）毫升GENMED保存液（Reagent D） 毫升产品说明书 1份保存方式保存GENMED染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免光照，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证12月用户自备胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（GMS12052）：用于细胞操作所需的培养基毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器毫升离心管：用于细胞染色的容器血细胞计数仪：用于细胞计数台式离心机：用于沉淀细胞细胞流式仪：用于细胞荧光分析比色杯：用于细胞荧光分析的容器荧光显微镜：用于观察荧光细胞荧光分光光度仪或酶标仪：用于细胞荧光定量分析实验步骤一、 脱离或悬浮细胞分析实验开始前，将 ℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，GENMED稀释液（Reagent C）放进 ℃恒温水槽里预热。

琥珀酸脱氢酶（SDH ）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0950 规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称 规格 保存条件 试剂一 液体60 mL×1瓶 -20℃保存 试剂二 液体0.6 mL×1支 -20℃保存 试剂三 液体5 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂四 液体4mL×1瓶 2-8℃保存 试剂五液体3mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂二：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存； 产品说明：SDH （EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。

SDH 是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。

此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。

SDH 催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS ）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP ），并且在600nm 处具有特征吸收峰，通过600nm 吸光度的变化，测定2,6-DCPIP 的还原速度，代表SDH 酶活性。

Succinic Acid + FAD Fumaric Acid + FADHFADH + PMS FAD + PMSH 2PMSH 2 + Dichlorophenolindophenol (600nm) PMS + Reduced Dichlorophenolindophenol 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1. 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入1mL 试剂一和 10μL 试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃11000g 离心10min ，取上清，置冰上待测。