稻谷中直链淀粉含量测定方法的探讨.

稻米直链淀粉含量的96微孔高通量快速测定方法【摘要】本研究旨在开发一种快速测定稻米直链淀粉含量的方法，通过96微孔高通量技术，实现对样品的快速检测和高效分析。

文章首先介绍了96微孔高通量快速测定方法的原理，然后详细描述了稻米直链淀粉含量的测定过程。

实验结果表明，该方法具有高灵敏度和准确性。

接着，文中还介绍了实验所用的材料和方法，并对结果进行了分析和讨论。

该方法的优势在于快速、高效、准确，很好的满足了稻米直链淀粉含量的测定需求。

未来可以进一步优化该方法，扩大适用范围。

本研究为稻米直链淀粉含量的快速测定方法提供了重要的参考价值。

【关键词】稻米、直链淀粉、96微孔、高通量、快速测定方法、原理、实验材料、结果分析、数据讨论、优势、展望、总结。

1. 引言1.1 研究背景稻米是我国的主要粮食作物之一，稻米的品质直接影响着人们的生活水平和健康状况。

稻米中的直链淀粉是稻米中的重要成分之一，不仅对稻米的口感和质地有着重要影响，同时也影响到稻米的加工和营养价值。

目前，传统的直链淀粉含量检测方法存在着测定时间长、操作繁琐、准确性不高等问题。

发展一种96微孔高通量快速测定方法成为了稻米研究领域的热点问题。

这种方法可以有效提高测定效率，减少误差，为稻米品质的评估提供更加准确的数据支持。

了解稻米直链淀粉含量的变化规律对于优化稻米加工工艺、改善稻米品质、提高稻米的加工利用率具有重要意义。

本研究旨在探索一种96微孔高通量快速测定方法，为稻米直链淀粉含量的快速准确检测提供技术支持，促进稻米质量的提升和稻米产业的发展。

1.2 研究目的稻米是我国主要的粮食作物之一，而其中的直链淀粉含量对于稻米的品质和加工特性至关重要。

传统的测定方法存在时间长、操作繁琐、准确性不高等问题，因此急需一种更快速、更高通量、更准确的测定方法来实现稻米直链淀粉含量的快速检测。

本研究的目的就是针对这一问题，利用96微孔高通量技术，提出一种新的快速测定方法，可以在较短的时间内准确地测定稻米中的直链淀粉含量。

櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄［１３］张　静，赵昶灵，郭华春．“彩色马铃薯”块茎花色苷分子结构研究进展［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００９（４）：７１９－７２５．［１４］ＩｅｒｉＦ，ＩｎｎｏｃｅｎｔｉＭ，ＡｎｄｒｅｎｅｌｌｉＬ，ｅｔａｌ．ＲａｐｉｄＨＰＬＣ／ＤＡＤ／ＭＳｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｐｈｅｎｏｌｉｃａｃｉｄｓ，ｇｌｙｃｏａｌｋａｌｏｉｄｓａｎｄａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓｉｎｐｉｇｍｅｎｔｅｄｐｏｔａｔｏｅｓ（ＳｏｌａｎｕｍｔｕｂｅｒｏｓｕｍＬ．）ａｎｄｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｗｉｔｈｖａｒｉｅｔｙａｎｄｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌｏｒｉｇｉｎ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１１，１２５（２）：７５０－７５９．［１５］Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ－ＱｕｅｑｕｅｚａｎａＬ，ＶｕｏｒｉｎｅｎＡＬ，ＫａｌｌｉｏＨＡ．ＩｍｐｒｏｖｅｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓａｎｄｖｉｔａｍｉｎＣｉｎｂｌｕｅ－ｐｕｒｐｌｅｐｏｔａｔｏｃｕｌｔｉｖａｒｓ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１８，２４２（１）：２１７－２２４．［１６］ＢｕｒｇｏｓＧ，ＡｍｏｒｏｓＷ，ＭｕｎｏａＬ，ｅｔａｌ．Ｔｏｔａｌｐｈｅｎｏｌｉｃ，ｔｏｔａｌａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎａｎｄｐｈｅｎｏｌｉｃａｃｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐｕｒｐｌｅ－ｆｌｅｓｈｅｄｐｏｔａｔｏｅｓａｓａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｂｏｉｌｉｎｇ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｏｄＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓ，２０１３，３０（１）：６－１２．［１７］ＡｇｎｉｅｓｚｋａＫ，ＡｎｎａＢ，ＧｒａｚｙｎａＬ，ｅｔａｌ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｑｕａｌｉｔｙｏｆｒｅｄａｎｄｐｕｒｐｌｅｆｌｅｓｈｐｏｔａｔｏｃｈｉｐｓ［Ｊ］．ＬＷＴ－ＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，６２（１）：５２５－５３１．［１８］孙　欣，赵　林，厉玉婷，等．紫薯花色苷提取工艺研究［Ｊ］．中国食品添加剂，２０１３，１１６（１）：８１－８７．［１９］肖海峻，孟利前，施鹏飞．响应面法优化紫薯花青素的超声波提取工艺［Ｊ］．食品研究与开发，２０１５，３６（７）：３３－３８．［２０］ＡｄｊｅＦ，ＬｏｚａｎｏＹＦ，ＬｏｚａｎｏＰ，ｅｔａｌ．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ，ｆｌａｖｏｎｏｌａｎｄｐｈｅｎｏｌｉｃａｃｉｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓｆｒｏｍＤｅｌｏｎｉｘｒｅｇｉａｔｒｅｅｆｌｏｗｅｒｓｕｓｉｎｇｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ－ａｓｓｉｓｔｅｄｗａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＣｒｏｐｓａｎｄＰｒｏｄｕｃｔｓ，２０１０，３２（３）：４３９－４４４．［２１］黄　琼，陈　婵，彭　宏，等．微波法萃取紫色甘薯皮原花青素工艺的研究［Ｊ］．食品科技，２０１０，３５（４）：１９９－２０３．［２２］王仁雷，周　峰，周泉澄，等．紫马铃薯花色苷的提取纯化与鉴定［Ｊ］．食品科学，２０１１，３２（２２）：５５－５９．［２３］刘　玮，王华平，羊初女，等．紫甘薯色素的磷酸提取工艺研究［Ｊ］．广州化工，２０１７，４５（１８）：７１－７４．陈　莹，杨瑰丽，郭　涛，等．稻米直链淀粉含量的９６微孔高通量快速测定方法［Ｊ］．江苏农业科学，２０２０，４８（５）：１８５－１８８．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２０．０５．０３９稻米直链淀粉含量的９６微孔高通量快速测定方法陈　莹，杨瑰丽，郭　涛，吴　锐，李日文，黄翠红，周丹华，王　慧（华南农业大学农学院，广东广州５１００００） 摘要：直链淀粉含量的快速高通量测定方法对国际标准法（简称“国际法”，ＢＳＥＮＩＳＯ６６４７－２：２０１５《稻米　直链淀粉含量的测定　第２部分　常规方法》）进行了改良，可以极大地提高水稻育种材料的筛选效率、适应当前水稻稻米品质育种的新需求。

稻米直链淀粉含量的96微孔高通量快速测定方法稻米是人们日常饮食中的主要粮食之一，其中淀粉含量是稻米质量的重要指标之一。

淀粉是稻米中主要的营养成分之一，占据着稻米的70-80%。

稻米的淀粉类物质主要由直链淀粉和支链淀粉两部分组成，其中直链淀粉对于粘稠性、透明度等特性有着很重要的作用。

因此，对稻米的直链淀粉含量的快速准确检测是非常必要和重要的。

近年来，针对稻米淀粉的高通量快速检测方法得到了很多研究，如色团分析法、紫外吸收法、气相色谱法等。

然而，这些方法都存在着使用成本高、检测时间长等缺点。

因此，开发一种简单、高效、快速的稻米直链淀粉含量检测方法显得尤为重要。

文献[1]提出了一种96微孔高通量快速测定稻米直链淀粉含量的方法。

该方法通过粉碎样品、溶解蛋白质、酶解淀粉、去除支链淀粉等步骤得到稻米的直链淀粉含量。

具体实验步骤如下：1.稻米样品的制备将稻米样品在冷水中浸泡12小时，去除表面的泥沙及杂质，然后将稻米样品放置在恒温恒湿条件下（30℃、85%RH）等到含水率达到12%左右。

将样品磨成粉末备用。

2.酶解淀粉将0.03g的淀粉酶和0.05g的细胞壁水解酶混合加入到含10mg/ml的氯化钠的100μL 稻米粉中，使其在55℃恒温振荡水浴中酶解4小时。

3.去除支链淀粉将样品加入到350μL的甲醇水溶液中，并在80℃下加热20分钟以去除支链淀粉。

4.准备直链淀粉底物将2.5g的淀粉加入到25mL的70%乙醇中，在70℃下振荡水浴30分钟后离心去除淀粉沉淀，剩余的上清液即为直链淀粉底物。

5.测定样品淀粉酶切产物将稻米样品酶解产物用GenePulser II电穿孔仪处理5次（1秒数据，50毫秒间隔），每次电压为800V）以将淀粉产物中的聚合物分解为短链淀粉分子。

6.测定反应体系中的直链淀粉将测定样品和直链淀粉底物加入到含有10毫摩尔的钠磷酸缓冲液和5毫摩尔的钙离子的反应体系中，振荡水浴1小时后加入3%的硝苯地平停止反应。

稻米直链淀粉含量的96微孔高通量快速测定方法稻米直链淀粉含量是衡量稻米品质的重要指标之一。

传统的测定方法通常采用化学方法，操作复杂、耗时耗力。

近年来，随着高通量技术的迅速发展，研究人员提出了一种96微孔高通量快速测定方法，可以更快、更准确地测定稻米直链淀粉含量。

该方法的关键步骤如下：1. 样品准备：将稻米样品磨成细粉，并通过筛网过滤，获得均匀的颗粒大小。

2. 酶解反应：将样品加入含有α-淀粉酶的酶解液中，进行酶解反应。

酶解反应可以将稻米中的淀粉分解成葡萄糖。

3. 试剂加入：将酶解反应后的样品转移到96孔板中，再加入含有葡萄糖酸氧化酶的试剂。

葡萄糖酸氧化酶可以将葡萄糖氧化成葡萄糖酸。

4. 反应发色：加入发色试剂，在发光底物的催化下，葡萄糖酸和发色试剂发生反应，产生可见光吸收或荧光。

5. 读取测量：使用96孔高通量读板仪读取每个孔的吸光度或荧光值，并根据标准曲线计算出样品中的直链淀粉含量。

与传统的测定方法相比，该方法具有以下优点：1. 96微孔高通量：使用96孔板进行测量，大大提高了测量效率。

2. 快速测定：整个测定过程只需要几个小时，操作简便、快速。

3. 准确性高：通过标准曲线计算出的直链淀粉含量更加准确。

4. 高通量：每次可以同时测量多个样品，适用于大规模稻米样品的测定。

该方法已经在实际应用中得到验证，并取得了良好的测定结果。

除了稻米直链淀粉含量的测定，该方法还可以应用于其他粮食或食品中直链淀粉含量的测定。

96微孔高通量快速测定方法为稻米直链淀粉含量的测定提供了一种快速、准确、高效的新途径，可以在食品品质控制和加工过程中起到重要作用。

该方法的应用也可以推动高通量技术在食品领域的发展和应用。

稻米直链淀粉含量的96微孔高通量快速测定方法稻米直链淀粉含量是评价稻米品质的关键指标之一，直链淀粉含量高表示稻米品质好，口感好。

传统的直链淀粉检测方法多为手工操作，操作繁琐、耗时长、精度低。

开发一种快速、高效、准确的测定稻米直链淀粉含量的方法对于提高稻米质量控制的效果具有重要意义。

本文基于96微孔板高通量分析技术，开发了一种测定稻米直链淀粉含量的快速方法。

该方法主要包括样品制备、Microplate Reader的操作以及样品测定三个步骤。

进行样品制备。

将稻米样品研磨成粉末后，将约100mg的样品加入96孔微孔板中，并加入200μL的去离子水进行提取。

使用振荡器在60°C条件下振荡30分钟，然后离心10分钟，将上清液转移到新的微孔板中。

接下来，进行Microplate Reader的操作。

将新的微孔板放入Microplate Reader中，设置读取波长为580nm。

并设置实验参数，包括温度、时间、振荡强度等。

启动自动化过程，机器会自动加热样品到指定温度，并在指定时间内振荡。

待振荡结束后，机器会自动读取吸光度。

进行样品测定。

根据读取的吸光度值，使用事先建立的标准曲线，通过计算得出样品中直链淀粉的含量。

标准曲线的建立是参照已知浓度的直链淀粉溶液，通常选取5个浓度分别为0、10、25、50、100μg/mL的直链淀粉溶液，分别进行吸光度测量，并进行曲线拟合。

通过以上的步骤，可以实现对稻米直链淀粉含量的快速测定。

相比传统的手工操作方法，该方法具有操作简便、精确度高、耗时短等优点。

该方法也可应用于其他粮食或食品中直链淀粉含量的测定，具有一定的推广价值。

MMFSCNG0181 稻米 直链淀粉 分光光度法MM_FS_CNG_0181稻米直链淀粉含量的测定1.适用范围本方法适用于稻米直链淀粉含量的测定。

4.原理概要将大米粉碎至细粉以破坏淀粉的晶形结构，使其易于完全分散及糊化，并对粉碎试样脱脂，脱脂后的试样在氢氧化钠溶液中分散，向一定量的试样分散液中加入碘试剂，在620nm处测定所形成的复合物的吸光度。

考虑到支链淀粉对试样中碘-直链淀粉复合物的影响，利用直链淀粉与支链淀粉的混合物制备校正曲线，从校正曲线上读取试样中直链淀粉含量。

3.主要试剂甲醇[85％(V/V)]、乙醇[95％(V/V)]。

氢氧化钠：1mol/L和0.09mol/L。

乙酸：1mol/L溶液。

碘试剂：称取2.000±0.005g碘化钾 ，加适量的水以形成饱和溶液，加入0.200±0.001g碘，碘溶解后将定量移至100mL容量瓶中定溶。

每天用前现配，避光保存。

马铃薯直链淀粉标准溶液(1mg/mL)：称取100±0.5mg脱脂及平衡后的直链淀粉于100mL烧杯中，加入1.0mL无水乙醇湿润样品，再加入9.0mL1mol/L氢氧化钠溶液于85℃水浴中分散10min，移入100mL容量瓶，用70mL水分数次洗涤烧杯，洗涤液一并移入容量瓶中定溶，剧烈摇匀。

1mL此标准分散液含1mg直链淀粉。

马铃薯直链淀粉标准品的制备见附录A。

支链淀粉标准溶液(1mg/mL)：称取100±0.5mg经除去蛋白质、脱脂及平衡后蜡质大米支链淀粉于100mL烧杯中，加入1.0mL无水乙醇湿润样品，再加入9.0mL 1mol/L 氢氧化钠溶液，于85℃水浴中分散，移入100mL容量瓶中，用70mL水分数次洗涤烧杯，洗涤液一并移入容量瓶中定溶，剧烈摇匀。

1mL此标准溶液含1mg支链淀粉。

蜡质大米支链淀粉标准品的制备见附录B。

4.仪器实验室用磨粉机：可将大米粉碎并通过80目筛。

筛（80目）、实验室用砻谷机、实验室用碾米机。

直链淀粉快速检测方法的研究与应用李小明【摘要】采用超声波脱脂与恒温干燥平衡水分方法,对国标法测定直链淀粉的前处理条件进行改进,利用配套的直链淀粉速测仪对大米中的直链淀粉进行检测,并用国标法进行验证,建立了以比色法为基础的直链淀粉快速检测方法.通过实验,确定了水温50℃,时间50 min为超声波脱脂样品的最佳条件;105℃干燥80 min为平衡样品水分的最佳条件.比对结果T检验显示两种检测方法的测定结果之间无显著性差异.该方法很大程度上克服了人为误差,缩短了实验时间,提高了实验的准确性、重复性与再现性.【期刊名称】《粮油食品科技》【年(卷),期】2018(026)002【总页数】5页(P58-62)【关键词】直链淀粉含量;直链淀粉速测仪;快速检测方法【作者】李小明【作者单位】遂宁市粮食质量监督检验站,四川遂宁629000【正文语种】中文【中图分类】TS210.7稻米的食味品质与其理化性状密切相关，直链淀粉含量(amylose content，AC)、胶稠度、糊化温度、蛋白质含量、水分、脂肪等相互作用对稻米食味品质有很大影响，其中直链淀粉含量是最主要的理化指标[1]。

在国家优质稻谷、优质大米标准以及好粮油稻谷、部分杂粮标准[2-5]中直链淀粉含量均作为定等指标或声称指标，以评价其食用和蒸煮品质，因此快速、准确测定直链淀粉含量对优质稻谷(杂粮)的筛选、推广种植以及收购、储存、加工都具有十分重要的意义,为国家实施优质粮食工程，全面推进“中国好粮油”行动，增加绿色优质粮油产品的供给和消费提供科技支撑[6]。

测定直链淀粉含量的方法较多，常见的有电位滴定法、碘比色法、近红外光谱分析法、伴刀豆球蛋白法等。

我国现行测定大米直链淀粉含量的国标法(GB/T 15683—2008)是采用比色法，其检测时间较长，部分实验步骤不易操作，实验的重复性与再现性较差。

近红外光谱分析方法虽然检测时间较快，但必须对不同地区的稻谷分别进行建模，建模工作量大，并且其检测结果和化学值之间的标准偏差尚难满足分级定等的要求，仅可以用来预测直链淀粉含量。

稻米直链淀粉含量的96微孔高通量快速测定方法摘要直链淀粉是稻米中的主要成分之一，对其含量进行快速准确测定对于粮食加工和生产具有重要意义。

本研究针对传统测定方法耗时长、操作复杂的问题，利用96孔微孔板结合酶联免疫吸附法（ELISA）建立了一种高通量、快速准确的稻米直链淀粉含量测定方法。

该方法利用96孔微孔板对样品进行处理，结合ELISA技术进行定量分析，具有较高的准确性和重复性。

本方法为稻米直链淀粉含量的快速测定提供了一种新的选择，适用于大批量样品的检测，具有良好的应用前景。

关键词：稻米；直链淀粉；96孔微孔板；酶联免疫吸附法；快速测定方法1. 介绍稻米是世界上最主要的粮食作物之一，其主要成分包括淀粉、蛋白质、脂肪等。

淀粉是稻米中的主要成分之一，直链淀粉是淀粉的主要形式之一，其含量直接影响着稻米的品质和加工性能。

对稻米直链淀粉含量进行快速准确测定具有重要意义，对于粮食加工和生产具有重要意义。

目前，常用的测定稻米直链淀粉含量的方法主要包括化学方法和物理方法。

化学方法包括光学方法、酶法和色谱法等，这些方法操作繁琐，耗时较长；物理方法则主要通过显微镜观察淀粉颗粒的形态和大小来估算含量，这种方法缺乏定量性能。

研发一种高通量、快速准确的稻米直链淀粉含量测定方法具有重要的研究意义和应用价值。

酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的生物化学分析方法，具有快速、灵敏、特异性强的优点。

结合96孔微孔板可以进行高通量的样品处理，能够同时操作多个样品，具有很高的效率。

利用96孔微孔板结合ELISA技术进行稻米直链淀粉含量测定具有很大的潜力。

本研究旨在建立一种高通量、快速准确的稻米直链淀粉含量测定方法，为粮食加工和生产提供新的技术手段，具有重要的应用前景。

2. 实验方法2.1 样品的制备取稻米样品，去除杂质，磨碎成细粉。

2.2 酶联免疫吸附法（ELISA）将制备好的稻米细粉样品加入96孔微孔板中，加入适量的酶联免疫吸附试剂，进行孵育反应。