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动物组织石蜡切片制作
动物学教研室 顾 勇
实验目的
• 制作实验动物的组织切片并染色，掌握动 物组织制片技术
实验用品
1．动物的组织。 2．器材和仪器：切片机、展片仪、毛笔、载
玻片、盖玻片、烤箱、显微镜。 3．试剂：60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%
乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、石蜡、 中性树胶。
Hale Waihona Puke • 【切片制作过程】 以使用旋转式切片机石蜡切片为例： 1．将切片刀装在刀架上，后将蜡块装在切片机固定装置上。调整蜡块与刀 至合适位置（刀刃与蜡块切面呈5°夹角）旋转式切片机切取组织，是由下 向上切，为得到完整的切片，防止组织出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的 部分放在上端（如皮肤组织，应将表皮部分向上。而胃肠等组织，应将浆膜 面朝上）。 2．左手执手笔，右手旋转切片机旋转轮。先粗切标本，直到暴露出组织最 大切面（但对小标本不要修切得太多，以免将整个组织块修切掉）。再连续 旋转切出蜡带，左手持毛笔将蜡片带下端轻轻托起，右手用镊子夹起蜡带上 端，正面向上放入展片仪水盒内，展片温度根据使用的石蜡熔点进行调整， 一般水温为45℃左右，待蜡片带中的组织展平后，即可进行分片和捞片。对 于展片困难的切片经30%的乙醇初展后，再用载玻片捞起蜡带放人展片仪水 盒内可使切片更易展平。在夏季切片时可用冰块冷却切片刀和组织块，减少 切片刀与组织块在切片过程中产生的热时，使石蜡保持合适的硬度以利于切 片。 3．捞起切片后，写上编号。捞片时注意切片的位置，一般切片的中心位于 载物片右侧1/3与2/3交界处为佳，并注意整齐美观。 4．烤箱60℃左右烘烤切片30min，对血凝块和皮肤组织应及时烤片，烤片温 度应稍低；脑组织切片捞出后直立晾干，再烤片，否则产生气泡。
方案一:病理石蜡切片的制作
（一）石蜡组织块制作 1．取材。 2．固定。 3．脱水、透明及浸蜡（具体步骤见表）。 4．包埋
步
骤
操作 项 目
（1）60%醇乙
（2）70%醇乙
（3）80%醇乙
（4）90%醇乙 95%乙
小大家
鼠鼠兔
15 20 30 mmm iii nnn
15 20 30 mmm iii nnn
实验1 石蜡切片的制做技术
• 70％酒精2－4小时。 85％酒精2－4小时。 95％酒精（Ⅰ）2－3小时。 95％酒精（Ⅱ）1－2小时。 100％酒精（Ⅰ）1－2小时。 100％酒精（Ⅱ）0.5－1小时。 100％酒精：二甲苯（1：1）0.5－1小时。 二甲苯（Ⅰ）20—30分钟。 二甲苯（Ⅱ）10—20分钟。 浸蜡（Ⅰ）40分钟。 浸蜡（Ⅱ）40分钟。 组织包埋。 蜡块整修。切片。贴好的切片置于60℃恒温箱内 干燥2小时。
方案二 石蜡切片的制作
四、贴片： 1、将单张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起， 铺于恒温水中（光亮的一面朝下）立即用毛笔轻 轻拉展以切片无皱褶为最好。 2、待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片 垂直插入水中轻靠切片，随即将玻片直立提起， 拨正切片位置。 3、用铅笔在玻片的毛玻璃上写上标本编号，字要 写得小而清楚、端正。 4、贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时，蛋 白质凝固后即可染色。
（二）石蜡切片制作
• 用切片机将石蜡包埋的组织块（蜡块）制成适宜厚度的切 片，是目前在病理学科中最常用的一种制片方法。切片厚 度为一般4~6μm。 【切片前的准备】 1、修切蜡块 切片前应先修块，即切去组织周围过多的 石蜡，一般留下约2mm宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留 得太窄，在切片时易损坏组织；蜡边不能留得太多，否则 影响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却 一定时间。 2、切片用品准备 （1）切片刀：预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一 次性切片。 （2）载物片：载物片经清洁液、95%乙醇处理后备用。 （3）展片仪：加入温水，接通电源，调整温度。 （4）其他用品：准备好毛笔、记号笔、镊子、冰块等。
方案二 石蜡切片的制作
二、切片的步骤： 1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内， 2、调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋 紧刀架 3、根据需要调整切片厚度。 4、修整切片，直到切出完整的最大组织切 面后，再行切制。 5、切下的切片带，用毛笔从刀口向上挑起， 拉下切片带
方案二 石蜡切片的制作
三、切片的注意事项 1、切片质量的好坏，与技术熟练程度和切片机、 切片刀的好坏有关外。 2、切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产 生震动。 3、在摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过 重过猛，否则造成切片厚薄不均。或空洞现象。 4、在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却， 可保持石蜡的硬度，减少切片的褶皱。
实验1 石蜡切片的制做技术
• 试剂与器材：甲醛，酒精，二甲苯，苏木精，伊 红，中性树胶，双面刀片，蜡板，镊子，滤纸， 200ml容量瓶（广口）、玻璃标本缸，载玻片，盖 玻片，染色缸，毛笔，新鲜鸡蛋，甘油 空闲时间：参观冰冻切片的制做 石蜡切片的制做程序（详细过程请查看讲义） 组织取材2毫米厚度，固定于福尔马林2小时。 组织流水冲洗1－2小时。
20 30 40 mmm iii nnn
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注意事项
• 一般实质性脏器的组织及肿瘤组织应把最大切面朝下包埋；食管、胃、 肠等组织须将管壁横断面朝下包埋，若在同一蜡块中包埋数块管壁组 织时，应平行横埋且黏膜面（内膜）的方向应一致，以便切片及观察。 △同一蜡块包埋多个组织块时，组织的性质应相同，方向要一致，不 能把大小、厚薄差别悬殊的组织包埋在一起，组织块间的距离不能太 大。 △皮肤、骨等难切组织及需要连续切片的组织都应单独包埋。 △神经、脊髓及需要定向包埋的组织应注意组织块的相互关系。 △包埋（尤其在室温较低的情况下）操作应迅速，防止组织块变凉、 蜡液凝结及出现气泡，组织块与蜡液不能很好凝固定在一起，导致组 织与蜡分离。 △遇有管腔或空洞标本与小标本同埋一个蜡块时，不能将小标本放入 其他标本的管腔或空洞内。
方案二 石蜡切片的制作
1—6微米。制作大批的或是连续的切片。长期保存。 一、切片前的准备： 1、恒温水浴锅首先预热至35℃—40℃。 2、蜡块整修，暴露组织并修平，减少刀的磨。 3．载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象。涂粘片
剂。 4、将锋利的刀片，调整角度和位置，以20°-30°为佳。 5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。