常见荧光定量PCR仪汇总讲解

四种常见PCR仪的区别及运用PCR扩增仪（俗称PCR仪）PCR：PCR（聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。

PCR仪实际就是一个温控设备，能在95℃，55℃，72℃之间很好地进行温度控制。

PCR扩增仪又称为PCR基因扩增仪、PCR核酸扩增仪、聚合酶链反应核酸扩增仪，是利用PCR(Polymerase chain reaction，聚合酶链反应)技术对特定DNA扩增的一种仪器设备，被广泛运用于医学、生物学实验室中，例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制以及亲子鉴定等。

根据DNA扩增的目的和检测的标准，可以将PCR仪分为普通PCR仪，梯度PCR 仪，原位PCR仪，实时荧光定量PCR仪四类。

1). 普通PCR仪（2万以下，赛默飞、伯乐、大龙，艾本德）一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪称作传统PCR仪，也叫普通PCR仪。

如果要做不同的退火温度需要多次运行。

主要是用于简单的、对目的基因退火温度的扩增。

该仪器主要应用于科学研究、教学、医学临床、检验检疫等机构。

如:启步BSW-2P,BSW-3P,BSW-6P-I/II ,ABI 2720型2). 梯度PCR仪（2万-8万，赛默飞、伯乐、大龙，艾本德）一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件（温度梯度，通常有12种温度梯度）的PCR仪称作梯度PCR仪。

因为被扩增的不同DNA片段，其最适退火温度是不同的，通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增，从而一次性PCR 扩增，就可以筛选出表达量高的最适退火温度，进行有效的扩增。

用于研究未知DNA退火温度的扩增，这样节约成本的同时也节约了时间。

PCR仪的种类1. 实时定量PCR仪实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction，简称实时定量PCR）是一种用于快速、敏感且准确测定DNA、RNA拷贝数目的方法。

实时定量PCR仪是进行实时定量PCR实验的关键设备之一。

实时定量PCR仪的主要特点是能够对PCR反应过程中产生的荧光信号进行即时检测和分析，从而实现实时监测PCR反应的进程，并测定样品中目标序列的拷贝数。

实时定量PCR仪的应用非常广泛，包括基因表达检测、病原体检测、单核苷酸多态性分析等。

其高灵敏度、高特异性以及广泛的应用领域使其成为现代分子生物学和遗传学研究的重要工具。

2. 普通PCR仪普通PCR仪是进行普通聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）实验的基本设备。

普通PCR仪可以进行常规PCR实验，即通过PCR反应在体外扩增目标DNA片段。

普通PCR仪的特点是温控系统可以实现快速、精确的温度调节，从而使PCR反应在不同温度下的环境条件得以满足。

普通PCR仪的操作简单、成本较低，适用于常规PCR 实验的需求。

普通PCR仪的应用广泛，包括基因克隆、DNA测序、基因检测等。

它已成为分子生物学、医学和生物技术等领域中的一种基础设备。

3. 数字PCR仪数字PCR仪是一种相对较新的PCR仪器，它采用数字分析的方法对PCR产物进行定量，具有极高的准确性和可靠性。

数字PCR仪的工作原理是将PCR反应体系分成数百、甚至上千个微小反应体，从而形成多个独立的PCR反应。

每个微小反应体内含有目标序列与参考序列，通过数百或数千个微小反应的计数结果进行定量分析。

这种方法可以极大地降低PCR反应中的误差，提高PCR反应的准确性。

数字PCR仪的应用主要集中在绝对定量PCR、稀释样品的精确定量、病原体检测等领域。

其高准确性和可靠性使其在遗传学研究和临床诊断中得到广泛应用。

罗氏荧光定量PCR仪器简介罗氏荧光定量PCR仪器（Roche Real-Time PCR System）是一种用于荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction）的仪器。

PCR技术是一种广泛应用于分子生物学领域的技术，可以在体外大量复制DNA序列。

荧光定量PCR通过荧光信号的强度来定量PCR反应产物的数量，具有高灵敏度、高准确性和高通量的特点，被广泛应用于生命科学研究、疾病诊断和药物研发等领域。

罗氏是一家全球领先的医药和诊断解决方案提供商，旗下的荧光定量PCR仪器采用先进的技术和设计，为用户提供可靠和精确的PCR分析结果。

主要特点1.高灵敏度：罗氏荧光定量PCR仪器采用先进的光学系统，能够检测和定量非常低浓度的荧光信号，提高了实验的灵敏度。

2.高准确性：仪器内置的精确温度控制系统和优化的PCR反应条件，保证了实验结果的准确性和可重复性。

3.高通量：罗氏荧光定量PCR仪器支持多样品同时进行PCR反应，大大提高了实验的通量，节省了时间和成本。

4.灵活性：仪器配备了多样的PCR试剂和芯片，可以适应不同实验需求的扩增反应。

5.友好的用户界面：仪器具有直观的用户界面和易于操作的软件，用户可以轻松设置实验参数、监控实时反应和分析数据结果。

主要应用罗氏荧光定量PCR仪器在各种领域都有广泛的应用，包括但不限于以下几个方面：1.基因表达分析：通过定量PCR技术，可以准确测量基因在不同组织、细胞或疾病状态下的表达水平，帮助科研人员了解基因的功能和调控机制。

2.微生物检测：罗氏荧光定量PCR仪器可以用于检测和定量微生物如细菌、病毒、真菌等的核酸序列，广泛应用于食品安全、临床微生物学和环境监测等领域。

3.病毒载量检测：病毒载量是评估病毒感染严重程度的重要指标，罗氏荧光定量PCR仪器可以定量分析病毒的核酸含量，用于临床病毒学研究和病毒感染诊断。

4.药物研发：罗氏荧光定量PCR仪器可以用于药物研发过程中的基因表达分析、药物代谢相关基因的筛选和药物安全性评估等方面，为药物研发提供有力支持。

PCR仪的几种分类及操作规程PCR仪的几种分类依据DNA扩增的目的和检测的标准可以将PCR仪分为一般PCR 仪，梯度PCR仪，原位PCR，实时荧光定量PCR仪等几类。

1、一般PCR仪一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪，称之为一般PCR仪。

假如要用它做不同的退火温度则需要多次运行。

紧要是用作简单的，对目的基因退火温度的扩增。

紧要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等。

2、梯度PCR仪一次性PCR扩增可以设臵一系列不同的退火温度条件（通常12种温度梯度）的称之为梯度PCR仪。

由于被扩增的不同的DNA片段其比较适合的退火温度不同，通过设臵一系列的梯度退火温度进行扩增，从而一次性PCR扩增就可以筛选出表达量高的比较适合退火温度进行有效的扩增。

紧要用于讨论未知DNA退火温度的扩增，这样既节省时间，也节省经费。

在不设臵梯度的情况下亦可当做一般的PCR用。

真正的梯度，是每一排管都有精准明确的加热控温探头，2023年为止只有美国ABI公司可以做到。

其他的都是从两头的热传递来设计控温。

梯度PCR仪多应用于科研、教学机构。

3、原位PCR仪（有些品牌的PCR仪具有一般PCR、梯度PCR、原位PCR的功能，通过替换模块进行多用途开展试验工作）是用于从细胞内靶DNA的定位分析的细胞内基因扩增仪。

如病原基因在细胞的位臵或目的基因在细胞内的作用位臵等。

可保持细胞或组织的完整性，使PCR反应体系渗透到组织和细胞中，在细胞的靶DNA所在的位臵进行基因扩增。

不但可以检测到靶DNA，还能标出靶序列在细胞内的位臵。

于分子和细胞水平上讨论疾病的发病机理和临床过程及病理的变化有侧重点的应用价值。

4、实时荧光定量PCR仪（fluorescencerquantitivepolymerasechainreaction,FQPCR）在一般PCR仪设计基础上加添荧光信号激发和采集系统和计算机分析处理系统，形成了具有荧光定量PCR功能的仪器。

双通道16孔荧光定量PCR仪一、仪器用途非洲猪瘟病毒检测是非洲猪瘟防控工作的紧要举措，意义重点。

为进一步提高非洲猪瘟病毒检测结果精准性，规范非洲猪瘟病毒诊断制品生产、经营和使用行为，2023年1月1日起，各有关部门和单位在动物检疫或疫病监测、诊断中，对生猪及其产品开展非洲猪瘟病毒检测，应当使用已取得农业农村部核发的产品批准文号的非洲猪瘟病毒诊断制品，确保检测结果精准。

竞道非洲猪瘟PCR检测仪（实时荧光定量PCR仪支持变温检测）用于运行病毒检测试验，并对试验数据进行分析；仪器既可在试验室内操作，又可用于野外科学试验，搭配相应试剂，对取自待检测样本的分析物或其他分析物中的目标核酸进行快速、精准的定性检测。

竞道非洲猪瘟检测仪配套非洲猪瘟病毒荧光pcr检测试剂盒、非洲猪瘟病毒荧光pcr核酸检测试剂盒均已经获得农业农村部产品批准，可以充足非洲猪瘟核酸现场快速检测需求。

可定量快速畜牧类疾病诊断如非洲猪瘟、q流感、猪瘟、猪蓝耳、伪狂犬等疾病，广泛应用于养殖场、屠宰场、食品加工厂、肉产品深加工企业、农业农村部、畜牧局、检验检疫单位使用。

试验员需要经过试验室技术和仪器、软件操作的专门培训，具备娴熟的相关操作技能。

二、仪器特点1.体积小，重量轻，易于携带。

轻松充足外出试验的需求。

2.内置7寸高清电容屏PDA，触屏操作，简便快捷。

3.Marlow高品质Peltier制冷片，结合德国g端PT1000温度传感器以及电性电阻加热补偿边缘的温度掌控模式，最大升温速度7℃，最大降温速度5℃，大大缩短试验时间。

4.整板3s快速采光模式，保证试验结果孔位一致性。

5.简洁直观的软件引导，轻松开启检测试验。

三、非洲猪瘟PCR检测仪应用领域□ 基础科学讨论□ 病原体检测□ 肉制品掺假□ 转基因检测□ 食品安全检测□ 药物开发及合理用药□ 基因表达□ 水体监测四、技术参数样品容量：16x0.2ml、支持8联管适用耗材：常见透亮PCR 耗材，8x0.2ml 排管，0.2ml 单管反应体系：5—120ul反应模式体系加热/制冷模块：高性能进口半导体热电模块温度掌控范围：4°C—99℃热盖温度：30℃—108℃（默认105℃，热盖温度可调）升温速率：3.5℃/s（MAX）降温速率：2.5℃/s（MAX）温控精度：0.1°C温度均匀性：0.25°C温度精准度：0.1℃温控区域数量：多点（2 点）梯度数：0 个梯度温度范围：无梯度孔数：无激发光源：大功率LED（免维护，寿命长）激发光波长范围：400—700nm检测部件：进口高灵敏度光电传感器激发和检测传播介质：耐高温专业导光光纤检测通道数：标配 2通道（FAM/VIC）适用染料和探针：FAM,SYBR GreenHEX,JOE,VIC软件功能：具多重qPCR数据分析功能，可同时检测2个检测通道扩增曲线，标准曲线定量、熔解曲线、支持HRM检测数据导出：可将试验结果以图形和表格的形式直接导出；认真的数据报告内容包括试验条件，数据坐标和表格，数据分析参数。

各款荧光定量PCR仪的性能比较本人从事荧光定量PCR检测试剂的开发工作，用过市场上主流的多款荧光定量PCR仪，如ABI5700，ABI7700，ABI7000，ABI7300，ABI7500，MJ opticon,MJ opticon2,bio-rad I Cycler,LightCycler1.5，roter-gene3000，Stratagene Mx3000P，line—gene等等。

这种仪器各有各的特点，但都存在不足之处。

ABI公司的荧光定量PCR仪产品比较多，成系列,但目前而言ABI5700和ABI7700不能实时在线地检测荧光，因而已经退出历史舞台，尤其是ABI7700，不但很贵，而且采用苹果机电脑，使用很不方便。

ABI7000目前也已经淘汰,我用的这台仪器老出问题,曲线极不光滑，但同样的反应体系在国产机杭州博日line-gene上曲线非常好，在ABI7500上曲线也很光滑，所以，本人估计是ABI7000设计上有不足之处.而且卤钨灯特别容易坏，在南方,我们实验室平均5个月换一个，配件容易坏,后续使用成本就会高一些。

现在市场上的ABI7300就是ABI7000的简单升级版,硬件设计上几乎没有改变，只是换过几个性能更好的配件，软件有所升级。

另外我个人感觉ABI7900（ABI公司第二代产品）有些华而不实，价格应该是所有荧光定量PCR仪中最贵的,硬件上跟ABI7700差不了太多，但性能指标还不如ABI7500(ABI公司第三代产品），硬件设计上也不如ABI7500合理。

所以这个型号的仪器，谁买了,用的时候会不呼上当.ABI7500是ABI公司最成功的产品，各方面性能都不错，虽然加热模块还是有一些边缘效应,但使用中央的孔位效果可以得到保证,在96孔板使用中间的48个孔位，结果都能得到保证。

总的来说，ABI公司在荧光定量领域上还是做出很多贡献的，其仪器在科研上还是可以用的，但由于硬件设计上的缺陷，需要额外的ROX染料进行校正，并且占用了一个检测通道。

ABI 7500荧光定量PCR
一、简介
7500型荧光定量PCR仪是特异性靶基因检测与定量的一体化平台。

7500型将PCR热循环，荧光检测和各种应用分析软件结合在一起，可实时定量观察PCR 每一循环各反应管中PCR扩增产物的情况。

PCR实验结束后即刻得到定量结果，无需凝胶电泳分析，无需纯化PCR产物，无需进行任何实验操作。

7500型实时荧光定量PCR仪具有节省时间，灵敏度高，准确性好和避免产物污染等优点。

二、主要技术参数
1. 样品孔数：96孔样品基座，
2. 温度范围：4.0-99.9℃
3. 温度显示：经计算机计算的实际样品温度，精确到0.1℃
4. 加热冷却速度：平均温度变化速度1℃/秒
5. 温度准确性：正负0.25℃，35－100℃范围
6. 升降温重现性：任意温度达到时间误差小于5秒
三、仪器性能:
1.电脑图表式PCR扩增方法，填表式PCR编程，程序运行可闪烁显示当前状态。

2.样品基座基本配置为可更换型96孔基座，可满足不同PCR反应管，不同孔数以及不同类型PCR实验的要求。

3.计算机计算不同样品体积的实际样品温度，控温精确，扩增效果重现性更好。

4.软件容量大，可储存100个完整的PCR方法，软件自动计算引物解链温度。

5.自动断电保护，恢复供电后自动执行未完成循环，保证扩增全过程安全运行。

四、主要功能
利用荧光染料和探针标记跟踪PCR产物，对反应进行实时监控；不仅可以对产物进行溶解曲线分析，而且可以通过加入已知浓度的标准样品做标准曲线，确定待测样品的浓度。

可应用于基因表达分析，突变检测；细菌、病毒等致病微生物的检测；食品卫生检疫等。

,§：：,AgilentTechnologies实时荧光定量PCR仪介绍|QPCR的国际标准一MIQE|联系我们仪器名称实时荧光定量PCR仪英文名称Real-TimeQPCRSystem国产/进口进口产地/品牌美国品牌，德国制造型号Mx3000P/Mx3005P实时荧光定量PCR仪【性能参数】美国安捷伦Stratagene公司实时荧光定量PCR仪Mx3000P/Mx3005PMx3000P系统性能指标：激发光源：石英卤鸨灯检测器：扫描光电倍增管(PMT)多重检测：四个光学通道，并提供用户选择的滤光系统加热系统：Peltier的热循环加热模块内置芯片在断电或连接中断时自动保存数据样品量：96孔高通量平台，反应体系10-100U1外形尺寸：33cm（宽）x46cm（长）x43cm（高），重量：20kgMx3000P系统参数配置：动力学范围：10个数量级激发光范围：350750nm发射光范围：350700nm温度均一性：+/-0.25C温度精确性：+/-0.25C升降温速率：2.5C/秒兼容所有常规荧光染料：FAM、SYBRGreenI、TexasRed、ROX、TET、Cy3、Cy5、HEX、JOE、VIC、TAMRA、ALEXAFluor350等标准配置的滤光片组为：Cy5,HEX,FAM,ROX具有快速QPCR功能（反应时间在50分钟内）Mx3000P软件功能：•分析功能强大：通过一台计算机可连接和控制6台QPCR仪;可同时分析12个独立的96孔板;也可以在同一块板上进行和分析不同的实验•设置和运行简单：根据实验目的和方法不同，可选择多种实验设置：（多重）绝对定量PCR、相对定量PCR、SybrGreen定量及熔解曲线分析、SNP分析、MolecularBeacon熔解曲线分析等使用简便：实验条件设置、反应过程监控、数据显示分析三大功能模块从同一界面链接，直观简便•实时观测和数据分析：反应过程中可实时监测和收集荧光信号，在实验还未结束的情况下便可对现有数据进行分析提供多种数据显示模式：用户可根据自己需要选择：扩增曲线模式、熔解曲线模式、标准曲线模式、原始荧光信号模式、最终定量结果模式等•多种数据传输格式：所有结果可以原始数据的形式显示，也可输出到Excel 中作进一步分析，曲线和表格等结果可直接用于PowerPoint、Text等文档中。

荧光定量P C R仪使用说明(总4页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除7500荧光定量PCR 仪使用说明注意事项：实验过程必须戴干净的一次性乳胶手套进行操作。

PCR 反应所用的96孔板、8联管或单管必须为ABI7500专用，凸盖PCR 管禁止使用。

使用8联管两侧需用空管支撑，使用单管四角需用空管支撑，以防止板槽受力不均。

实验数据用光盘刻录，禁止U 盘拷取，数据可暂存于本机电脑硬盘中，各实验室D 盘中有指定文件夹，中心外部人员数据存于FUWU 文件夹下的子文件夹中。

操作步骤➢ 开机依次打开电脑显示屏、主机，输入开机密码“7500”。

➢ 放入反应板注：关闭仪器托盘时，应按一个角度推压托盘的右侧。

！ 待电脑启动稳定后，按压7500仪器电源按扭，等待仪器启动（约30 s ）。

当仪器只显示Power 状态指示灯时，方可按压托盘以打开它。

（以下过程按字母顺序a→q进行操作）➢创建反应板文件➢为每个反应孔指定探针和任务➢为反应孔设置样品名g.选取探针相同的反应孔h.点击反应孔对应的探针。

i.单击 Task栏的下边指定探针任务。

j.选择Use （使用）。

k.单击Finish （完成）。

ghijkl.选取反应孔，直接输入相应样品名（也可右键，调出反Well Inspector对话框，在SampleName中进行修改）➢设定PCR循环参数、运行程序1.实验结束后关闭软件。

（确认反应板文件数据已保存）2.打开拖盘，将反应板取出，关闭拖盘。

3.按下7500仪器电源开关关闭机器。

4.关闭电脑及显示屏。

5.登记仪器使用情况。

请严格按照仪器使用说明进行操作，如有不明之处或遇其他情况请及时联系仪器负责人.谢谢配合！！。