不同温度条件下副溶血性弧菌tdh基因表达及其代谢组响应

张俊鹏，刘文婷，石甜，等. 一株副溶血弧菌噬菌体生物学特性、全基因组特征及其在食品中的应用[J]. 食品工业科技，2024，45（1）：137−144. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023020018ZHANG Junpeng, LIU Wenting, SHI Tian, et al. Biological Characteristics, Genome-wide Characteristics of A Bacteriophage of Vibrio parahaemolyticus and Its Application in Food[J]. Science and Technology of Food Industry, 2024, 45(1): 137−144. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023020018· 生物工程 ·一株副溶血弧菌噬菌体生物学特性、全基因组特征及其在食品中的应用张俊鹏1，刘文婷1，石　甜1，王华娟1，王宏勋2，周　敏1, *（1.武汉轻工大学食品科学与工程学院，湖北武汉 430000；2.武汉轻工大学生命科学与技术学院，湖北武汉 430000）摘　要：目的：分析1株副溶血性弧菌噬菌体474x1的生物学特性、全基因组及在食品中的抑菌效果。

方法：以副溶血性弧菌474菌株为宿主菌，从海鲜市场基围虾分离噬菌体474x1，利用透射电镜观察其形态，并绘制一步生长曲线，分析474x1对温度及pH 的敏感性。

分析474x1全基因组序列，根据474x1末端酶大亚基构建系统进化树。

通过测定菌落总数评价噬菌体对虾肉中副溶血弧菌的抑制效果。

结果：分离到１株新型的副溶血弧菌噬菌体，命名为474x1，该噬菌体能够裂解23株副溶血弧菌中的19株（19/23=82.61%）。

3、多重PCR
结果显示，所有的V.p都扩增出tl基因，tl 基因是V.p特异的；54％的V.p扩增出tdh基因； 只有38.73％的V.p扩增出trh基因;该法灵敏度 38.73 V.p trh ; 高，能把10g牡蛎培养肉汤里10～100个V.p 检测出来。与其他常规生化方法相比，多重 PCR更快速，仅8h就能完成检测，结果更为准 确、可靠，而且还可改进成定量竞争PCR，对 标本中靶序列进行定量。
3、多重PCR
由于不是全部副溶血性弧菌都含有tdh基因 或trh基因，所以只针对tdh或trh的单一PCR， 有时会漏检。多重PCR(multiplex-PCR)能全 PCR(multiplex-PCR) 方位高效率地检测V.p。 Bej白等针对tl、tdh、trh设计不同的引物 对，在同一PCR反应体系内同时扩增tl、tdh、 trh。
总结
与传统方法相比较，PCR法更加快速、 灵敏，基本满足了快速检测的要求，但是其 技术含量较高，试剂费用都比较高，而且一 般检测时间也还是要6-8小时左右，离即时 检测的要求还有一定距离，随着分子生物学 和科技水平的不断提高，更加准确、可靠、 方便、快速、经济、安全的检测方法将是食 品安全检测的发展方向。
参考文献
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doi :10.3969/j.issn.1002-7386.2022.22.034·综述与讲座·副溶血性弧菌致病性和检测方法研究进展陈媛媛　王亚男　刘士朋项目来源:河北省医学研究重点课题(编号:20211149)作者单位:100029　北京市,中日友好医院(陈媛媛);河北省宁晋县医院(王亚男);河北医科大学公共卫生学院环境与人群健康重点实验室(刘士朋)通讯作者:刘士朋　E⁃mail:17100880@ 【摘要】　本文对副溶血性弧菌的生物学性状、致病性特点、污染食品规律、食物中毒事件、检测标准等进行综述,重点介绍了溶血毒素和检测方法,提出预防副溶血性弧菌食物中毒5要点和关键措施,以期更好地预防副溶血性弧菌食物中毒的发生。

【关键词】　副溶血性弧菌;食物中毒;耐热性溶血毒素;耐热性溶血毒素相关溶血毒素;检测标准【中图分类号】　R 378.3 【文献标识码】　A 【文章编号】　1002-7386(2022)22-3491-05Study on pathogenicity and detection method of Vibrio parahaemolyticus CHEN Yuanyuan ∗,WANG Yanan ,LIU Shipeng.∗China⁃Japan Friendship Hospital ,Beijing 100029,China【Abstract 】　This article systematically reviews related aspects in Vibrio parahaemolyticus (VP ),including biological characteristics ,pathogenic characteristics ,contaminated food conditions ,food Posisoning incidents detection standard ,etc.,focusing on hemolytic toxins and detection methods.Five key points for preventing VP⁃related food poisoning and treatment measures are proposed aiming to to better prevent the occurrence.【Key words 】　vibrio parahaemolyticus ;food poisoning ;thermostable direct hemolysin ;thermostable related hemolysin ;testing standards 副溶血性弧菌(vibrio parahaemolyticus)是一种常见的病原菌,主要栖息在海水中,存在于近海海水、海产品及盐渍食品中。

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确定鉴定:
➢生化试验：分别接种各类生化培养基，培养后观察结果。 或API 20E 生化鉴定试剂盒或VITEK全自动微生物检测系统鉴定。 生化性状符合下表要求时，为副溶血性弧菌 。
表 副溶血性弧菌的生化性状
项目 革兰氏染色镜检
氧化酶 动力 蔗糖
葡萄糖 甘露醇 分解葡萄糖产气
结果 阴性，无芽孢
第 七节、副溶血性弧菌检验
一、生物学特性 1、形态与染色
革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌或 稍弯曲弧菌 ，有时呈棒状、甚至球状、 丝状等。一般两极浓染。单端鞭毛， 长度约为菌体的2倍，运动活泼。无芽 胞、无荚膜。
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2、培养特性
➢本菌对营养要求不高，在普通的琼脂或蛋白胨水中均可 生长 ➢需氧特别强，在厌氧条件下生长非常缓慢 ➢嗜盐，在2~３%NaCL培养基中生长最好，无盐或食盐 >10%不能生长。 ➢最适温度36℃，pH7.5~7.8 ➢在肉汤、蛋白胨水等培养基中呈现浑浊，表面形成菌膜 ➢在固体培养基上菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光 滑，较湿润，边缘不整齐。 ➢在血平板上可见溶血环。
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项目 乳糖 硫化氢 赖氨酸脱梭酶 V-P ONPG
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结果 － － ＋ － －
报告： 定性检测：报告25g（ml）样品中是否检出副溶血性弧菌。 定量检测：根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数，查 MPN检索表，报告每克（毫升）副溶血性弧菌的MPN值。
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二、致病性
1、致病因素 ★侵袭力：活菌(105~107/g)，可使人致病 . ★产生溶血毒素：内毒素，成分是脂多糖，100℃30min不 被破坏。 2、媒介食品