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概述
•副溶血性弧菌是一种嗜盐性细菌。
副溶血性弧菌食物中毒，是进食含有该菌的食物所致，主要来自海产品，如墨鱼、海鱼、海虾、海蟹、海蜇，以及含盐分较高的腌制食品，如咸菜、腌肉等。
•临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。
本病多在夏秋季发生于沿海地区，常造成集体发病。
病原学特征
•副溶血弧菌系弧菌科弧菌属，革兰染色阴性，兼性厌氧菌，为多形态杆菌或稍弯曲弧菌。
•本菌嗜盐畏酸，对酸较敏感，当pH6以下即不能生长，在普通食醋中l一3min即死亡。
•在3%一3．5%含盐水中繁殖迅速，每8～9min为一周期。
对高温抵抗力小，50℃20 min；65℃
5 min 或80℃1 min 即可被杀死。
本菌对常用消毒剂抵抗力很弱，可被低浓度的酚和煤酚皂溶液杀灭。
致病机制
•吞服10万个以上活菌即可发病，个别可呈败血症表现。
该菌有侵袭作用，其产生的TDH和TRH的抗原性和免疫性相似，皆有溶血活性和肠毒素作用，可引致肠袢肿胀、充血和肠液潴留，引起腹泻。
TDH对心脏有特异性心脏毒，可引起心房纤维性颤动、期前收缩或心肌损害。
治疗措施
•及时对脱水患者输入生理盐水及葡萄盐水，或口服补液盐，以纠正失水。
血压下降者，除被补充知容量，纠正酸中毒等外，可酌用血管活性药。
•抗菌药物轻者患者可不用抗菌药物，较重者可给复方新诺明或庆大霉素、阿米卡星和诺氟沙星等喹诺酮类抗菌药物。
•发生中毒后要立即停止食用可疑中毒食品，并到医院医治。
副溶血性弧菌对氯霉素敏感。
呕吐、腹泻严重者要补充水和盐。
副溶血性弧菌标准
副溶血性弧菌是一种常见的细菌，主要存在于海水和淡水中，也可以在一些动
物体内生长繁殖。
这种细菌在水产养殖业中被广泛关注，因为它可以对养殖动物和人类健康造成严重威胁。
副溶血性弧菌属于革兰氏阴性菌，其形态为短小的弧形杆菌。
它具有一定的耐
盐性和耐热性，能够在不同的环境中存活和繁殖。
在水产养殖业中，副溶血性弧菌常常引起养殖动物的疾病，如虾、蟹等。
同时，人类如果摄入感染了副溶血性弧菌的海产品，也会引起食物中毒和感染。
为了有效防控副溶血性弧菌的危害，制定了一系列的标准措施。
首先，对于水
产养殖业来说，要严格控制水质，避免水体富营养化和污染，减少细菌的滋生环境。
其次，需要加强对养殖动物的管理和监测，及时发现和隔离感染动物，防止疾病传播。
此外，对于加工和销售海产品的环节，也需要进行严格的卫生监管，确保产品的安全性和卫生质量。
除了在养殖业中的防控措施，对于消费者来说，也应该注意一些食品安全的常识。
在购买和食用海产品时，应选择正规渠道和有品牌保障的产品，避免购买来源不明或质量存疑的海产品。
在食用海产品时，要保证烹饪熟透，避免生吃或半生食，以免感染副溶血性弧菌和其他细菌。
总的来说，副溶血性弧菌的危害是不可忽视的，对于水产养殖业和消费者来说
都需要引起足够的重视。
只有通过严格的管理和监测，以及消费者的自我保护意识，才能有效预防和控制副溶血性弧菌的危害，确保水产品的安全和卫生。
希望相关部门和个人都能加强对这一问题的关注，共同维护水产品的质量和消费者的健康。
副溶血性弧菌副溶血性弧菌是一种嗜盐性弧菌。
常存在于近海岸海水、海产品及盐渍食品中。
它是我国沿海地区最常见的食物中毒病原菌。
1.生物学特性（1）形态染色：革兰阴性菌，随培养基不同菌体形态差异较大，有卵圆形、棒状、球杆状、梨状、弧形等多种形态。
两极浓染。
菌体一端有单鞭毛，运动活泼。
无芽胞、无荚膜。
（2）培养特性：需氧，营养要求不高，在普通培养基中加入适量NaCl即能生长。
NaCl最适浓度为35g／L，在无盐培养基中不生长。
本菌不耐热，不耐冷，不耐酸，对常用消毒剂抵抗力弱。
生长所需pH为7. 0～9.5，最适pH为7.7.在液体培养基表面形成菌膜。
在35g／L NaCl琼脂平板上呈蔓延生长，菌落边缘不整齐，凸起、光滑湿润，不透明；在副溶血性弧菌专用选择培养基上形成1～2.5mm，稍隆起、混浊、无粘性、绿色菌落；在SS平板上不生长或长出1～2mm扁平无色半透明的菌落，不易挑起，挑起时呈粘丝状。
在羊血琼脂平板上，形成2～3mm、圆形、隆起、湿润、灰白色菌落，某些菌株可形成β溶血或α溶血。
在TCBS琼脂上不发酵蔗糖，菌落绿色。
（与霍乱弧菌相区别）（3）生化反应：本菌在30g／L NaCl和 70g／L NaCl培养基中生长，在无盐或100g／L NaCl培养基中不生长。
神奈川试验是致病菌株能使人或兔红细胞发生溶血，对马红细胞不溶血，称神奈川试验阳性。
2.微生物学检验1）标本采集：主要是患者的粪便、可疑食物、炊事用具的洗涤液等。
2）检验方法及鉴定：①增菌培养：取标本0.5～1ml接种40g／L N aCl蛋白胨水中，37℃培养，若有本菌存在，一般数小时即出现明显混浊，即可分离培养；②分离培养：将标本或增菌培养物接种副溶血弧菌选择培养基35℃培养18～24h观察结果。
菌落湿润、混浊无粘性，呈绿色；③鉴定：根据其形态、染色、多形性、活泼动力等特点，以及在选择培养基上的菌落特征，结合氧化酶试验阳性，在KIA上K/A，H2S （-）。
一、关于副溶血性弧菌副溶血性弧菌(又称嗜盐菌 Vibrio Parahaemolyticus)是革兰氏阴性多形态杆菌或稍弯曲弧菌。
该菌嗜盐畏酸，在无盐培养基上，不能生长，3%～6%食盐水繁殖迅速，每8～9分钟为1周期，低于0.5%或高于8%盐水中停止生长。
在食醋中1～3分钟即死亡，加热56℃5～10分钟灭活，在1%盐酸中5分钟死亡。
副溶血性弧菌分布极广，主要分布在海水和水产品中，我国华东地区沿岸的海水的副溶血性弧菌检出率为47.5%～66.5%，海产鱼虾的平均带菌率为45.6%～48.7%，夏季可高达90%以上。
海水是副溶血性弧菌的污染源。
海水弧菌包括很多种，主要分为5群：副溶血性弧菌，溶藻性弧菌(V.alginolyticus)，伤口弧菌(V.vulnificus)，梅契尼柯夫弧菌(V.Mechnikov)(CDC肠群16)，F群弧菌(CDC EF-6)。
副溶血性弧菌是胃肠炎的致病菌之一，但很少引起软组织感染和败血症。
上述5群嗜盐性弧菌生活于海水和海洋鱼、蟹、贝壳和甲壳类动物中，通常引起胃肠道感染，也可引起肠道外感染。
最近证明，这些弧菌能直接通过皮肤破口侵入引起软组织感染或经血液循环(败血症)播散至软组织而引起坏死性感染。
各种弧菌对人和动物均有较强的毒力，其致病物质主要有分子量42000的致热性溶血素(TDH)和分子量48000的类似溶血毒(TRH)，具有溶血活性、肠毒素和致死作用。
该菌有侵袭作用，其产生的TDH和TRH的抗原性和免疫性相似，皆有溶血活性和肠毒素作用，可引致肠袢肿胀、充血和肠液潴留，引起腹泻。
TDH对心脏有特异性心脏毒，可引起心房纤维性颤动、期前收缩或心肌损害。
主要病理变化为空肠及回肠有轻度糜烂，胃粘膜炎、内脏(肝、脾、肺)淤血等。
二、由副溶血性弧菌引起的对虾偷死病的症状事实证明，2010年爆发的对虾“偷死病”是由副溶血性弧菌引起。
在养殖池塘中，随虾苗或其它传染途径带入的高耐药性副溶血弧菌附着在饲料、残饵、有机碎屑、死藻上不断繁殖，对虾吃食后出现了副溶血性弧菌食物中毒，其症状：对虾少量进食或不进食，肠胃空无食物，肝胰脏明显萎缩，虾体不红（变得更透明）。
本标准规定了食品中副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的检验方法。
本标准适用于食品中副溶血性弧菌的检验。
2设备和材料设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
2.1恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。
2.2冰箱：2 ℃～5 ℃、7 ℃～10 ℃。
2.3恒温水浴箱：36 ℃±1 ℃。
2.4均质器或无菌乳钵。
2.5天平：感量0.1 g。
2.6无菌试管：18 mm×180 mm、15 mm×100 mm。
2.7无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。
2.8无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL、1000 mL。
2.9无菌培养皿：直径90 mm。
2.10全自动微生物生化鉴定系统。
2.11无菌手术剪、镊子。
3培养基和试剂
3.13％氯化钠碱性蛋白胨水：见附录A中A.1。
3.2硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂：见附录A中A.2。
3.33％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂：见附录A中A.3。
3.43％氯化钠三糖铁琼脂：见附录A中A.4。
3.5嗜盐性试验培养基：见附录A中A.5。
3.63％氯化钠甘露醇试验培养基：见附录A中A.6。
3.73％氯化钠赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录A中A.7。
3.83％氯化钠MR-VP培养基：见附录A中A.8。
3.93％氯化钠溶液：见附录A中A.9。
3.10我妻氏血琼脂：见附录A中A.10。
3.11氧化酶试剂：见附录A中A.11。
3.12革兰氏染色液：见附录A中A.12。
3.13ONPG试剂：见附录A中A.13。
3.14Voges-Proskauer（V-P）试剂：见附录A中A.14。
3.15弧菌显色培养基。
3.16生化鉴定试剂盒。
4检验程序
副溶血性弧菌检验程序见图1。
5操作步骤
5.1样品制备
5.1.1非冷冻样品采集后应立即置7℃～10℃冰箱保存，尽可能及早检验；冷冻样品应在45 ℃以下不超过15 min或在2℃～5℃不超过18 h解冻。
5.1.2鱼类和头足类动物取表面组织、肠或鳃。
贝类取全部内容物，包括贝肉和体液；甲壳类取整个动物，或者动物的中心部分，包括肠和鳃。
如为带壳贝类或甲壳类，则应先在自来水中洗刷外壳并甩干表面水分，然后以无菌操作打开外壳，按上述要求取相应部分。
5.1.3以无菌操作取样品25 g（mL），加入3％氯化钠碱性蛋白胨水225 mL，用旋转刀片式均质器以8 000 r/min均质1 min，或拍击式均质器拍击2 min，制备成1:10的样品匀液。
如无均质器，则将样品放入无菌乳钵，自225 mL 3％氯化钠碱性蛋白胨水中取少量稀释液加入无菌乳钵，样品磨碎后放入500 mL无菌锥形瓶，再用少量稀释液冲洗乳钵中的残留样
的样品匀液。
5.2增菌
5.2.1定性检测
将上述1:10样品匀液于36 ℃±1 ℃培养8 h～18 h。
2.2.2定量检测
5.2.2.1 用无菌吸管吸取1:10样品匀液1 mL，注入含有9 mL 3％氯化钠碱性蛋白胨水的试管内，振摇试管混匀，制备1:100的样品匀液。
5.2.2.2 另取1 mL无菌吸管，按5.2.2.1操作程序，依次制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释一次，换用一支1 mL无菌吸管。
5.2.2.3 根据对检样污染情况的估计，选择三个连续的适宜稀释度，每个稀释度接种三支含有9 mL 3％氯化钠碱性蛋白胨水的试管，每管接种1 mL。
置36 ℃±1 ℃恒温箱内，培养8 h～18 h。
5.3分离
5.3.1对所有显示生长的增菌液，用接种环在距离液面以下1 cm内沾取一环增菌液，于TCBS 平板或弧菌显色培养基平板上划线分离。
一支试管划线一块平板。
于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
5.3.2典型的副溶血性弧菌在TCBS上呈圆形、半透明、表面光滑的绿色菌落，用接种环轻触，有类似口香糖的质感，直径2 mm～3 mm。
从培养箱取出TCBS平板后，应尽快（不超过1 h）挑取菌落或标记要挑取的菌落。
典型的副溶血性弧菌在弧菌显色培养基上的特征按照产品说明进行判定。
5.4纯培养
挑取三个或以上可疑菌落，划线接种3％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
5.5初步鉴定
5.5.1氧化酶试验：挑选纯培养的单个菌落进行氧化酶试验，副溶血性弧菌为氧化酶阳性。
5.5.2涂片镜检：将可疑菌落涂片，进行革兰氏染色，镜检观察形态。
副溶血性弧菌为革兰氏阴性，呈棒状、弧状、卵圆状等多形态，无芽胞，有鞭毛。
5.5.3挑取纯培养的单个可疑菌落，转种3％氯化钠三糖铁琼脂斜面并穿刺底层，36 ℃±1 ℃培养24 h观察结果。
副溶血性弧菌在3％氯化钠三糖铁琼脂中的反应为底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加深，有动力。
5.5.4嗜盐性试验：挑取纯培养的单个可疑菌落，分别接种0％、6％、8％和10％不同氯化钠浓度的胰胨水，36 ℃±1 ℃培养24 h，观察液体混浊情况。
副溶血性弧菌在无氯化钠和10％氯化钠的胰胨水中不生长或微弱生长，在6％氯化钠和8％氯化钠的胰胨水中生长旺盛。
5.6确定鉴定
5.6.1生化试验：取纯培养物分别接种含3％氯化钠的甘露醇试验培养基、赖氨酸脱羧酶试验培养基、MR-VP培养基，36 ℃±1 ℃培养24 h～48 h后观察结果；3％氯化钠三糖铁琼脂隔夜培养物进行ONPG试验。
可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。
5.7报告
如果进行定量检测，根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数，查最可能数（MPN）检索表，报告每g（mL）副溶血性弧菌的MPN值。
副溶血性弧菌主要性状与其他弧菌的鉴别见表2 表1 副溶血性弧菌的生化性状
表2 副溶血性弧菌主要性状与其他弧菌的鉴别
6血清学分型（可选择项）
6.1制备：接种两管3％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂试管斜面，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
用含3％氯化钠的5％甘油溶液冲洗3％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂斜面培养物，获得浓厚的菌悬液。
6.2 K抗原的鉴定：取一管上述制备好的菌悬液，首先用多价K抗血清进行检测，出现凝集反应时再用单个的抗血清进行检测。
用蜡笔在一张玻片上划出适当数量的间隔和一个对照间隔。
在每个间隔内各滴加一滴菌悬液，并对应加入一滴K抗血清。
在对照间隔内加一滴3％氯化钠溶液。
轻微倾斜玻片，使各成分相混合，再前后倾动玻片1 min。
阳性凝集反应应可以立即观察到。
6.3 O抗原的鉴定：将另外一管的菌悬液转移到离心管内，121 ℃灭菌1 h。
灭菌后4 000 r/min 离心15 min，弃去上层液体，沉淀用生理盐水洗三次，每次4 000 r/min离心15 min，最后一次离心后留少许上层液体，混匀制成菌悬液。
用蜡笔将玻片划分成相等的间隔。
在每个间隔内加入一滴菌悬液，将O群血清分别加一滴到间隔内，最后一个间隔加一滴生理盐水作为自凝对照。
轻微倾斜玻片，使各成分相混合，再前后倾动玻片1 min。
阳性凝集反应应可以立即观察到。
如果未见到与O群血清的凝集反应，将菌悬液121 ℃再次高压1 h后，重新检测。
如果仍旧为阴性，则培养物的O抗原属于未知。
根据表3报告血清学分型结果。
表3 副溶血性弧菌的抗原
7 神奈川试验（可选择项）
神奈川试验是在我妻氏琼脂上测试是否存在特定溶血素。
神奈川试验阳性结果与副溶血性弧
菌分离株的致病性显著相关。
用接种环将测试菌株的3％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂18 h培养物点种表面干燥的我妻氏血琼脂平板。
每个平板上可以环状点种几个菌。
36 ℃±1 ℃培养不超过24 h，并立即观察。
阳性结果为菌落周围呈半透明环的β溶血。
