线粒体活体染色及观察 许梦洋 201200140129

实验五 线粒体和液泡系的超活染色与观察

实 验 目 的

一、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。

二、学习一些细胞器的超活染色技术。

实 验 原 理

活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞舶死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学，，特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

实 验 用 品

一、器材

显微镜、 恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀、载玻片、凹面载玻片、表

面皿、吸管、牙签、吸水纸。

二、试剂

1．Ringer溶液

氯化钠 0.85g(变温动物用0.65g)

氯化钾 0.25g

细胞生物学实验四 液泡系和线粒体的活体染色

一、实验目的

通过荧光活体染色观察液泡系和线粒体的形态结构及特点。

二、实验原理

荧光活体染色法可以为我们提供高质量，高效率的细胞形态结构信息，其液泡系和线粒体都是细胞内非常重要的细胞器。

液泡系：是一种由膜包裹的小颗粒，由高度表达蛋白的外部囊泡和腺体细胞构成。液泡系有多种类型，包括突触小泡、内分泌小体和溶酶体等，它们在细胞内部扮演着很重要的角色。 液泡系具有在荧光显微镜下能够显现的一些特定特征，如大小、形状、亮度和分布等。活体染色可以提供很好的分辨率和细节，从而帮助我们更好地了解液泡系统的形态和功能。

线粒体：是一个直径约为1微米的双层膜结构，是细胞中的能量“发电厂”，在细胞内分解代谢物质，并生成ATP分子，以提供细胞各项生物学过程所需的能量。可见线粒体可以帮助我们了解线粒体的数量、大小、形状和位置等特征，这有助于我们了解其功能和代谢状态。

三、实验材料

激光共焦显微镜，激光荧光探针，放置在组织玻片上的细胞，PBS磷缓冲液，人工合成影响线粒体功能小分子等药物。

四、实验步骤

1. 将细胞悬液滴在组织玻片上。

2. 添加荧光探针，荧光探针可以帮助我们区分液泡系和线粒体。

3. 给细胞注射小分子化合物，如人工合成影响线粒体功能小分子等，以研究药物对细胞器的影响。

4. 用激光共焦显微镜观察荧光探针和小分子化合物的荧光信号。

5. 分析显示出的细胞器信息，记录液泡和线粒体的数量、大小、形状和位置等特征。

五、实验注意事项 1. 需要小心操作激光共焦显微镜，以避免损坏昂贵的设备或可能对人体存在危害的激光。

2. 荧光探针和小分子化合物需要在适当的浓度下添加，以避免对细胞的生长和存活产生不必要的影响。

3. 细胞的准确选择和应用荧光信号分析需要经验和技能支持，因此可能需要学习其他课程或培训活动，以便更好地完成任务。

线粒体活染色实验报告

实验目的

通过活染色技术观察和研究线粒体在细胞中的形态结构、数量和分布情况，进一步了解线粒体在细胞生物学过程中的功能和作用。

实验原理

活染色是一种通过活体显微镜观察染色物在细胞中的分布和变化情况。线粒体是细胞中重要的能量产生器，通过染色可以更直观地观察和研究线粒体的特征和状态。

本实验使用的线粒体活染色试剂为Mitotracker，它是一种荧光染料，可选择性地标记线粒体。Mitotracker可以通过细胞膜进入细胞内，随着线粒体的活动而移动，通过检测荧光信号的分布和强度，可以直接观察线粒体在细胞中的运动和分布情况。

实验步骤

1. 培养细胞：选择合适的细胞系，将其培养在含有适宜培养液的培养皿中，使细胞处于良好的生长状态。

2. 处理细胞：将培养好的细胞分为两组，一组为实验组，一组为对照组。实验组细胞加入适量的Mitotracker活染试剂，对照组细胞不添加Mitotracker。

3. 孵育：将培养皿放入恒温培养箱中，以37C恒温孵育2小时，使Mitotracker能充分进入细胞内，与线粒体结合。

4. 观察：将培养皿取出，用荧光显微镜观察细胞的荧光信号分布，并拍摄图像进行记录。

5. 分析：对实验组和对照组的观察结果进行比较分析，观察线粒体的数量、形态结构和分布情况变化。

实验结果

通过荧光显微镜观察，我们发现实验组细胞中线粒体呈现出强烈的红色荧光信号，分布均匀且较为集中。而对照组细胞中，没有观察到红色荧光信号，线粒体无特别明显的分布。

实验讨论

1. 通过荧光显微镜观察线粒体荧光信号的数量、分布和形态结构变化，我们可以初步推测线粒体的活动程度和数量是否发生变化。

2. 通过与对照组细胞的比较，我们可以更准确地判断线粒体的特征和状态是否发生了变化。

3. 本实验结果表明，线粒体活染色技术可以用于研究线粒体在细胞功能和生物学过程中的作用和功能。

实验总结

线粒体活染色技术是一种快速、准确的观察线粒体形态和特征的方法。通过该方法，可以更详细地了解线粒体在细胞生物学过程中的功能和作用。实验结果表明，Mitotracker活染试剂能够有效地将线粒体染色，并通过荧光显微镜观察线粒体的形态、数量和分布情况。本实验为进一步研究线粒体的功能和作用提供了重要的实验基础。

实验四 线粒体的超活染色

1、材料：口腔上皮细胞、洋葱表皮临时装片

一、原理：詹姆斯绿染料是专一性用于线粒体染色的活细胞染液，

可以将线粒体染成蓝绿色，而线粒体周围的细胞质中的詹姆斯绿被还

原成无色状态，从而显示线粒体。

二、实验材料与试剂

1、材料：人的口腔上皮细胞、洋葱内表皮

2、器具：显微镜，载玻片，盖玻片，消毒牙签，吸水纸，镊子；

3、试剂的配制：

（1）Ringer液（复合生理盐水）：

0.25g kcl+0.85gNacl+0.03gCacl 加入100ml水）

（2）1%詹姆斯绿染液（原液）

50mg 詹姆斯绿溶解于5ml Ringer液。稍加热（30-40℃）使之

溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。

（3）詹姆斯绿染液（应用液）

取1%詹姆斯绿1ml，加入49ml Ringer液，混匀装入棕色瓶备用。

现用现配。

三、步骤

1.观察人口腔上皮细胞线粒体

(1)把清洁的载玻片平放在桌上，滴几滴健那绿绿染液于载玻片中

央。

(2)用消毒牙签的钝端在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取口腔上皮

细胞，均匀地涂到载玻片的染液中。盖上盖玻片，四周溢出的染液用

吸水纸吸干。

(3) 10分钟后用高倍镜或油镜观察，可以看到在接近无色的口腔

上皮细胞的细胞质中，特别是在细胞核周围，散布着许多被染成蓝绿

色的短棒状或颗粒状结构，即为线粒体。 2.观察洋葱鳞茎表皮细胞线粒体

(1)撕取5×5毫米一块新鲜洋葱鳞茎内表皮，展平在洁净载玻片

中央。

(2)滴几滴健那绿绿染液，染色10分钟，盖上盖玻片，用吸水纸

吸去周围溢出的染液。

(3)在高倍镜或油镜下可以观察到细胞质中的线粒体被染成蓝绿

色，呈条状或颗粒状。

四、注意事项

1、詹姆斯绿染液浓度不宜过高，染色时间不宜太长，否则细胞质

会重新氧化成有色状态而不能充分还原染料成无色状态。

2、配制时间：詹姆斯绿染液宜在使用时配制新鲜液，不可久存。

3、如果观察发现染色不足，在盖玻片一侧滴加健那绿液，另一侧用