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微波预处理-超声波辅助提取紫山药多糖及抑制α-葡萄糖苷酶活性研究WANG Yan-ping;CHEN Yue-ying;JIA Yan-jie;CAO Ya;XU Shi;LOU Fang-hui 【摘要】以紫山药粉为原料,对微波预处理-超声波提取紫山药多糖的工艺进行优化,并以α-葡萄糖苷酶抑制模型研究其对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用.通过单因素及正交试验确定最佳提取工艺为料液比1:40(g/mL)、微波功率300 W、微波时间30 s、超声功率270 W、超声时间30 min.在最佳工艺条件下,紫山药多糖平均得率为11.12％.醇沉后的紫山药多糖粉末中多糖的质量分数为45.80％.α-葡萄糖苷酶活性抑制试验中,紫山药多糖表现出明显的抑制作用,对α-葡萄糖苷酶抑制能力较阿卡波糖弱.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2019(040)014【总页数】6页(P7-12)【关键词】紫山药;多糖;微波预处理;超声波辅助提取;α-葡萄糖苷酶抑制【作者】WANG Yan-ping;CHEN Yue-ying;JIA Yan-jie;CAO Ya;XU Shi;LOU Fang-hui【作者单位】;;;;;【正文语种】中文紫山药多糖是紫山药细胞壁的结构成分，具有抗氧化[1]、免疫调节[2]、抗衰老[3-4]、降糖[5]、耐缺氧[6]等多种生物活性。
目前研究紫山药多糖的提取方法主要集中在热水浸提法[7]、超声波提取法[8]、微波提取法[9]和生物酶法提取[10]等，其中热水浸提法耗时长、温度高、得率低、纯度低，超声波法提取时间短、得率高，但长时间作用会破坏多糖活性[11]，微波法虽提取时间大为减少，但提取温度难以控制，亦会破坏多糖活性。
微波预处理-超声波辅助提取法首先采用微波对经水浸润的物料粉进行0.5 min～3 min 微波预处理，利用微波的热效应使生物细胞壁和细胞膜迅速破裂，然后进行20 min～60 min 超声波提取，利用超声波空化作用、机械作用和热效应进一步破坏生物细胞壁结构，加快多糖释放速度[12]。
青钱柳(Cyclocarya paliurus)为胡桃科青钱柳属植物，是我国特有的单属种植物。
养心草为景天科植物费菜（Sedum aizoon L.）的全草，为福建省药物志所收载。
临床研究发现它们具有降血糖、降血脂、降血压等多种保健功能[1]，其主要生物活性成分为多酚类及皂苷等。
但对于这两种中药多酚提取物的总多酚含量测定和α-葡萄糖苷酶抑制活性未见研究报道。
α-葡萄糖苷酶抑制剂可抑制小肠内α-葡萄糖苷酶的活性，延缓或抑制葡萄糖在肠道的吸收，从而有效降低餐后高血糖。
由于其独特的优势，α-葡萄糖苷酶抑制剂已被第3次亚太地区糖尿病治疗药物指南推荐为降餐后血糖的一线药物[2]。
德国拜耳公司研制的阿卡波糖和日本武田制药公司研制的伏格列波糖已经被广泛用于糖尿病及其并发症的防治。
本研究旨在利用已建立的α-葡萄糖苷酶体外抑制模型[3]，对闽产青钱柳和养心草的提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性进行研究，并测定其总多酚的含量，为今后闽产青钱柳和养心草的开发利用提供理论参考。
1材料与方法1.1仪器钱柳、养心草分别采于福建泉州永春县牛姆林自然保护区和龙岩连城兰花公司，经本院中药鉴定教研室鉴定；没食子酸（中国药品生物制品检定所，批号：0831-9501）；4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)（singa公司）；α-D-吡喃葡萄糖苷酶(α-D-Glucosidase，Sigma公司)；阿卡波糖片（拜耳医药保健有限公司，批号：119873）；Folin-Ciocalteu试剂（北京鼎国生物技术有限公司）；其余试剂均为国产分析纯。
UV-2100分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；ELX808酶标仪（美国宝特公司）。
1.2中药多酚提取物的制备称取青钱柳和养心草粗粉各200g，置2L圆底烧瓶中，加8倍量60%乙醇回流提取2次，每次0.5h，减压回收乙醇，制成浓度为0.5g/ml药液。
将药液分别以乙酸乙酯萃取及过聚酰胺柱纯化处理，干燥得到多酚提取物。
降糖中药的筛选蓝萍; 高英; 王亮; 黄文文; 柳明【期刊名称】《《吉林农业C版》》【年(卷),期】2010(000)005【总页数】2页(P138,143)【关键词】α-葡萄糖苷酶; 抑制剂; 高通量药物筛选; 中药【作者】蓝萍; 高英; 王亮; 黄文文; 柳明【作者单位】西南大学药学院药用资源研究所重庆 400716【正文语种】中文【中图分类】R977.1+5一、材料（一）药材实验药材购自北碚万和大药房, 经中药师王安珍鉴定）：知母、黄精、桔梗、熟地黄、生地黄、木香、麦芽、银耳、牛膝、肉桂、三七、女贞子、麦冬、泽泻、大黄、山药、赤芍、葫芦芭、淫羊藿、苍术、白芍（热）、黄芪、白术、丹参、人参、枇杷叶、五加皮、桑白皮、牛蒡子、菟丝子、石斛、夏枯草、葛根、枸杞、乌梅、地骨皮、黑芝麻、茯苓、牛膝、灵芝、仙茅、藕节、玉竹、薏苡仁、昆布、刺五加、刺五加，共计48种。
（二）主要试剂α-葡萄糖苷酶（实验室自制），还原型谷胱甘肽（Sigma公司），4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG) （Sigma公司）。
（三）主要实验仪器RE-52AA旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂;Hitachi U-1800型紫外分光光度计，日本Hitachi仪器公司;CS1013电热鼓风干燥箱，中国重庆实验设备厂，上海福玛实验设备有限公司。
二、实验方法（一）体外α-葡萄糖苷酶抑制活力的测定在Matsui法基础上进行改进：取pH6.8磷酸盐缓冲液2010uL，适待测样品溶液250uL, 3mmol/L的谷胱甘肽80uL和实验室提取的α-葡萄糖苷酶各80uL于4mL的离心管中，在37℃恒温水浴中反应10min后，将反应液倒入比色皿中，加入80uL硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（pNPG），于400nm处测定在酶的作用下释放出对硝基苯酚pNP的量，不加待测品溶液作为空白对照，每两分钟读一次吸光度值并记录。
每个样品同时做3个平行，取平均值，然后做吸光度随时间变化的关系曲线，可以发现吸光度与时间成正比例关系。
杨桃不同部位提取物抑制α-葡萄糖苷酶的作用廖彭莹李承曼黄志祥杨小妹唐丽娟（广西中医药大学，广西南宁530001）【摘要】目的：比较杨桃根、叶和果实三个部位不同极性溶剂提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。
方法：建立高效液相色谱法测定体外抑制α-葡萄糖苷酶作用，对杨桃不同部位提取物的抑制作用进行评价筛选。
结果：同等质量浓度下，杨桃根各提取物均对α-葡萄糖苷酶有抑制作用，杨桃叶乙醇冷浸提取物的抑制活性较强，而杨桃果实各提取物对α-葡萄糖苷酶抑制作用较差。
结论：杨桃根各提取物对α-葡萄糖苷酶均有较强抑制作用，其作为α-葡萄糖苷酶抑制剂具有潜在开发价值。
【关键词】杨桃；α-葡萄糖苷酶；抑制作用【中图分类号】R284.2【文献标识码】A【文章编号】1008-1151(2018)10-0036-02 α-Glucosidase Inhibitory Activities of the Extracts from DifferentParts of Averrhoa CarambolaAbstracts: Objectives: To study α-glucosidase inhibitory activities of the extracts from the roots, leaves and fruits part of Averrhoa carambola using different polar solvent.Methods:By establishing high-performance liquid chromatography method to evaluate α-glucosidase inhibitory activities in vitro, the activities of the extracts from different parts of Averrhoa carambola were screened. Results: All of the extracts from the root part of Averrhoa carambola showed inhibitory activities against α-glucosidase. The ethanol extracts obtained under room temperature showed stronger inhibitory activities of α-glucosidase. The extracts from fruit part showed very weak inhibitory activities against α-glucosidase. Conclusions:All of the extracts from the root part of Averrhoa carambola showed inhibitory activities against α-glucosidase, which showed a potent value to develop as α-glucosidase inhibitors.Key words: Averrhoa Carambola; α-glucosidase; inhibitory activitiesα-葡萄糖苷酶抑制剂是临床上治疗II 型糖尿病的主要药物之一，可减缓葡萄糖的生成和吸收，降低血糖水平[1]。
儿茶素EGCG对Caco—2细胞α—葡萄糖苷酶活性的抑制作用研究作者：刘淑媛艾仄宜陈玉琼倪德江来源：《湖北农业科学》2017年第13期摘要：试验对Caco-2细胞膜上蔗糖酶和麦芽糖酶这两种α-葡萄糖苷酶活性进行不同培养时间检测，并以儿茶素单体EGCG作为抑制剂，探究其对Caco-2来源的蔗糖酶和麦芽糖酶的抑制效果。
结果表明，Caco-2细胞培养18 d后膜表面具有较高活性的蔗糖酶和麦芽糖酶，可用于进行α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选。
儿茶素EGCG具有蔗糖酶和麦芽糖酶抑制活性，抑制IC50分别为31.08 μg/mL和36.44 μg/mL。
关键词：茶；EGCG；蔗糖酶；麦芽糖酶；Caco-2细胞中图分类号：S571.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）13-2479-03DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2017.13.020Alpha-glucosidase Inhibitory Activity of EGCG in Caco-2 CellsLIU Shu-yuan， AI Ze-yi， CHEN Yu-qiong， NI De-jiang（Key Laboratory of Horticultural Plant Biology， Ministry of Education/College of Horticulture and Forestry Sciences，Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070， China）Abstract： This research used the Caco-2 cell monolayer model in vitro to simulate the α-glucosidase activity at different culture days. EGCG was used as an inhibitor to investigate the inhibition activities on sucrase and maltase in Caco-2 cells. The results illustrated that Caco-2 could be used to estimate α-glucosidase inhibitory activity after 18 days with high sucrase and maltase activities. EGCG showed inhibitory effect on sucrase and maltase in Caco-2 cells， with the IC50 values of 31.08 μg/mL and 36.44 μg/m L， respectively.Key words： tea； EGCG； sucrase； maltase； Caco-2茶作为世界上三大饮品之一，其抗癌、抗氧化、降血糖、降血脂等健康功效已得到广泛证实[1-4]。
·基础研究·△［基金项目］ 国家重点研发计划项目（２０１７ＹＦＣ１７０２４００）［通信作者］ 陈志元，高级工程师，研究方向：中药现代化；Ｔｅｌ：（０７１４）３１８８７７９，Ｅ ｍａｉｌ：５７８０１３７＠ｑｑ ｃｏｍ桑不同药用部位总生物碱对α 葡萄糖苷酶活性的抑制作用△李名洁，孙代华，王泽霞，胡辉，成焕波，陈志元劲牌持正堂药业有限公司／湖北省中药配方颗粒工程技术研究中心，湖北 黄石 ４３５１００［摘要］ 目的：比较桑不同药用部位（桑叶、桑枝、桑白皮）总生物碱对α 葡萄糖苷酶活性的抑制作用。
方法：采用采用蒸发光散射检测器（ＥＬＳＤ） 高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定桑不同药用部位总生物碱中１ 脱氧野尻霉素（ＤＮＪ）含量；以半数抑制浓度（ＩＣ５０）为评价指标，以阿卡波糖为阳性对照，以对 硝基苯基 α Ｄ 吡喃葡萄糖苷为底物，采用体外抑制模型评价桑不同部位总生物碱对α 葡萄糖苷酶活性的抑制作用。
结果：桑不同药用部位总生物碱中ＤＮＪ质量分数为桑白皮生物碱（３０ １％）＞桑枝生物碱（２５ ８％）＞桑叶生物碱（２１ ４％）。
桑不同药用部位总生物碱对α 葡萄糖苷酶抑制作用强度为桑枝生物碱＞桑叶生物碱＞桑白皮生物碱＞阿卡波糖。
结论：在桑枝、桑叶、桑白皮总生物碱中，以桑枝总生物碱对α 葡萄糖苷酶活性抑制作用最强，为桑资源开发辅助降血糖的药品和保健食品提供依据。
［关键词］ 桑；药用部位；生物碱；１ 脱氧野尻霉素；α 葡萄糖苷酶［中图分类号］ Ｒ２８５ ［文献标识码］ Ａ ［文章编号］ １６７３ ４８９０（２０２１）０２ ０２９０ ０４ｄｏｉ：１０ １３３１３／ｊ ｉｓｓｎ １６７３ ４８９０ ２０２００３１１００１ＳｔｕｄｙｏｎＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙＥｆｆｅｃｔｏｆＡｌｋａｌｏｉｄｓｏｆＤｉｆｆｅｒｅｎｔＭｅｄｉｃｉｎａｌＰａｒｔｓｆｒｏｍＭｏｒｕｓａｌｂａｏｎＡｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆαＧｌｙｃｏｓｉｄａｓｅＬＩＭｉｎｇ ｊｉｅ，ＳＵＮＤａｉ ｈｕａ，ＷＡＮＧＺｅ ｘｉａ，ＨＵＨｕｉ，ＣＨＥＮＧＨｕａｎ ｂｏ，ＣＨＥＮＺｈｉ ｙｕａｎＪｉｎｇＢｒａｎｄＣｈｉｚｈｅｎｇｔａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏ ，Ｌｔｄ ，ＨｕｂｅｉＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＦｏｒｍｕｌａＧｒａｎｕｌｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ＆ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，Ｈｕａｎｇｓｈｉ４３５１００，Ｃｈｉｎａ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｍｐａｒｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｌｋａｌｏｉｄｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉｃｉｎａｌｐａｒｔｓｆｒｏｍＭｏｒｕｓａｌｂａ（ｌｅａｆ，ｒｏｏｔａｎｄｔｗｉｇ）ｏｎｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆα ｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆ１ ｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（ＤＮＪ）ｉｎｔｈｅｔｏｔａｌａｌｋａｌｏｉｄｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉｃｉｎａｌｐａｒｔｓｆｒｏｍＭ ａｌｂａｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅｌｉｇｈｔｓｃａｔｔｅｒｉｎｇｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＥＬＳＤ） ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）；Ｕｓｉｎｇｈａｌｆ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｖａｌｕｅ（ＩＣ５０）ａｓｅｖａｌｕａｔｉｏｎｉｎｄｅｘ，ａｃａｒｂｏｓｅａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ，ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｌｋａｌｏｉｄｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓｆｒｏｍＭ ａｌｂａｏｎｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆα ｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄｗｉｔｈｉｎｖｉｔｒｏｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｍｏｄｅｌ Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｍａｓｓｆｒａｃｔｉｏｎｏｆＤＮＪｉｎｔｏｔａｌａｌｋａｌｏｉｄｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉｃｉｎａｌｐａｒｔｓｆｒｏｍＭ ａｌｂａｉｓＭｏｒｉＣｏｒｔｅｘａｌｋａｌｏｉｄ（３０ １％）＞ＭｏｒｉＦｏｌｉｕｍａｌｋａｌｏｉｄ（２５ ８％）＞ＭｏｒｉＲａｍｕｌｕｓａｌｋａｌｏｉｄ（２１ ４％） Ｉｎｔｈｅα ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙｔｅｓｔ，ｔｈｅｏｒｄｅｒｏｆｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓＭｏｒｉＲａｍｕｌｕｓａｌｋａｌｏｉｄ＞ＭｏｒｉＦｏｌｉｕｍａｌｋａｌｏｉｄ＞ＭｏｒｉＣｏｒｔｅｘａｌｋａｌｏｉｄ＞ａｃａｒｂｏｓｅ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＡｍｏｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓｏｆＭ ａｌｂａｓｕｃｈａｓＭｏｒｉＦｏｌｉｕｍ，ＭｏｒｉＣｏｒｔｅｘａｎｄＭｏｒｉＲａｍｕｌｕｓ，ＭｏｒｉＲａｍｕｌｕｓａｌｋａｌｏｉｄｓｈｏｗｓｔｈｅｓｔｒｏｎｇｅｓｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｎｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆα ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ，ｗｈｉｃｈｈａｓｔｈｅｖａｌｕｅｏｆｂｅｉｎｇｄｅｖｅｌｏｐｅｄｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｄｉａｂｅｔｅｓｏｒｈｅａｌｔｈｆｏｏｄ［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＭｏｒｕｓａｌｂａＬ ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉｃｉｎａｌｐａｒｔ；ａｌｋａｌｏｉｄｓ；１ ｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ；α ｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅ糖尿病已成为严重危害人类健康的公共卫生问题，而我国是糖尿病患病率增长较快的国家之一。
鞭打绣球的化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究普晓云;高利斌;王韦;陈毅坚;陈林;李育逵;黄相中;李艳红【摘要】利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20等色谱法从鞭打绣球的95％乙醇提取物的乙酸乙酯部分中分离得到10个化合物.根据化合物的理化性质和1H NMR、13C NMR鉴定化合物为齐墩果酸(1),β-谷甾醇(2),紫丁香苷(3),苯基β-D-吡喃葡萄糖苷(4),苄基β-D-吡喃葡萄糖苷(5),熊果苷(6),草夹竹桃苷(7),反式肉桂酸(8),顺式肉桂酸(9),丁香醛(10).其中化合物3～7和10为首次从该植物中获得.通过体外α-葡萄糖苷酶抑制模型对以上化合物进行活性筛选,结果显示化合物1和10对α-葡萄糖苷酶活性具有一定的抑制作用,IC50值分别为(68.93±6.20)μmol/L、(71.77±6.46)μmol/L.【期刊名称】《云南民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(028)005【总页数】5页(P423-427)【关键词】鞭打绣球;化学成分;α-葡萄糖苷酶活性【作者】普晓云;高利斌;王韦;陈毅坚;陈林;李育逵;黄相中;李艳红【作者单位】云南民族大学民族药资源化学国家民族事务委员会-教育部重点实验室,云南昆明650504;云南民族大学民族药资源化学国家民族事务委员会-教育部重点实验室,云南昆明650504;云南民族大学民族药资源化学国家民族事务委员会-教育部重点实验室,云南昆明650504;云南民族大学民族药资源化学国家民族事务委员会-教育部重点实验室,云南昆明650504;云南民族大学民族药资源化学国家民族事务委员会-教育部重点实验室,云南昆明650504;云南民族大学民族药资源化学国家民族事务委员会-教育部重点实验室,云南昆明650504;云南民族大学民族药资源化学国家民族事务委员会-教育部重点实验室,云南昆明650504;云南民族大学民族药资源化学国家民族事务委员会-教育部重点实验室,云南昆明650504【正文语种】中文【中图分类】R284.1鞭打绣球(Hemiphragma heterophyllum)为玄参科(scrophulariaceae)的一种单种属植物，生长于气候温和且潮湿的地区, 主要分布在我国的云南、贵州、四川等地[1]. 鞭打绣球以全草入药, 主要用于治疗咳嗽吐血、神经衰弱、风湿腰疼、跌打损伤、经闭腹痛等，其作为彝族传统药用于治疗积食和腹胀，也是云南西部地区白族民间的常用药[2-4]. 文献[5-7]报道该植物中含有单萜苷、环烯醚萜苷、苯乙醇苷等化合物，具有一定的抗肿瘤、抗炎等多种生物活性, 但关于其α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究报道较少.α-葡萄糖苷酶, 又称α-D-葡萄糖苷水解酶, 是一类能够从含有α-糖苷键底物的非还原端催化水解葡萄糖基的酶总称[8], 研究表明控制和调节酶活性, 可以对由代谢紊乱引起的疾病、免疫反应、神经细胞的分化、肿瘤的转移以及病毒和细菌的感染进行防治[9]. α-葡萄糖苷酶抑制剂(α-glucose inhibitors，α-GI)可竞争性抑制葡萄糖苷水解酶, 进而抑制多糖及蔗糖的分解, 抑制碳水化合物在小肠上部的吸收, 减缓餐后血糖的升高, 预防因血糖波动引发的心血管疾病等[9]. 本课题组通过预实验, 发现鞭打绣球的乙醇提取物及其乙酸乙酯部分对α-葡萄糖苷酶活性有显著的抑制作用. 本实验从乙酸乙酯提取物中分离得到10个化合物, 通过理化常数和波谱数据分析鉴定化合物为齐墩果酸(1), β-谷甾醇 (2), 紫丁香苷(3), 苯基β-D-吡喃葡萄糖苷(4), 苄基β-D-吡喃葡萄糖苷 (5), 熊果苷 (6), 草夹竹桃苷 (7), 反式肉桂酸(8), 顺式肉桂酸 (9)，丁香醛 (10), 其中化合物 3～7 和 10 是首次从该植物中分离得到的, 其结构如图1所示.1 实验部分1.1 仪器与材料核磁共振Bruker AM-400型(布鲁克公司, TMS为内标)；UltraScan ESI-MS(布鲁克公司)；电子天平BS-BT系列(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；N-1100D-WD 型旋转蒸发仪 (上海爱郎博仪器有限公司)；SHZ-D (III)型真空泵 (巩义市予华仪器有限责任公司)；半制备型HPLC Agilent 1260型标准系列高效液相色谱仪(美国安捷伦科技公司)；薄层层析正相硅胶板(TLC)GF254型(青岛海洋化工厂生产)；正相硅胶100～200目(青岛海洋化工厂生产)；反相填充材料MCI gel (75～150μm, Toky, Japan)；羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20(Pharmacia公司生产)；色谱纯的甲醇(德国默克MERCK); 乙醇、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮等工业级溶剂均在减压蒸馏纯化后使用, 其他试剂均为分析纯, 水是超纯水. 显色剂为: 碘粉, FeCl3-EtOH溶液和5% H2SO4-EtOH溶液；磷酸二氢钾(天津市津东天正精细化学试剂厂)；α-葡萄糖苷酶(北京索莱宝科技有限公司)；4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(Sigma 公司)；阿卡波糖(北京索莱宝科技有限公司)；碳酸钠(天津市风船化学试剂科技有限公司).鞭打绣球全草于2016年6月21日采自云南楚雄，植物标本由云南民族大学杨青松副教授鉴定，现存放于云南民族大学民族医药学院资源药物化学重点实验室，标本号为TSY 20160621.1.2 提取与分离干燥的鞭打绣球全草20.0 kg, 经粉碎过筛后在室温下用95%乙醇提取3次 (50L×3)，每次浸泡24 h. 合并滤液浓缩, 得浸膏8.00 kg. 浸膏用两倍体积的水混匀,分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取, 得到乙酸乙酯萃取物(5.5 kg). 乙酸乙酯浸膏5.5 kg采用硅胶柱 (200～300目硅胶) 以V(氯仿)∶ V(甲醇)= (100∶1、80∶1、50∶1、20∶1、10∶1、1∶1、0∶1) 进行梯度洗脱, 用TLC对收集得到的浓缩液进行检测, 合并相似组分, 得到极性逐次递增的8个部分(A1～A8)，其中A4和A6部分表现出一定的α-葡萄糖苷酶活性.A4 (345.0 g) 采用硅胶柱 (200～300目) 以V(石油醚)∶V(丙酮)= (50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1、0∶1) 进行梯度洗脱后，划分为7个部分 A4.1～A4.7. 对A4.3 (17.0 g) 以V(氯仿)∶ V(甲醇)= (1∶0 ～0∶1) 进行梯度洗脱, 后利用 Sephadex LH-20 以V(氯仿)∶ V(甲醇)=1∶1 为洗脱体系对各段进一步纯化除杂. 最后采用半制备HPLC 进一步纯化从而得到以下单体化合物：化合物1 (50 mg)、化合物2 (42 mg)、化合物4 (10 mg)、化合物5 (18 mg).A6 V(氯仿)∶V(甲醇)=10∶1洗脱部分 (545.0 g) 经硅胶柱以V(氯仿)∶ V(丙酮)= (20∶1、15∶1、10∶1、5∶1、1∶1、0∶1) 进行梯度洗脱，划分为9个部分,A6.1～ A6.9. A6.2 (26.0 g) 经反相MCI柱层析甲醇水 (50%、70%、90%、100%) 分为4个部分, A6.2.1～ A6.2.4. A6.2.1以V(氯仿)∶ V(甲醇)= (50∶1、30∶1、20∶1、15∶1、10∶1、5∶1、1∶1、0∶1) 进行梯度洗脱, 划分为8个部分，A6.2.1.1～ A6.2.1.8. 将A6.2.1.2组分以64%甲醇/水(V/V)为流动性纯化得到单体化合物：化合物3 (6 mg). 对A6.2.1.4以Sephadex LH-20 V(氯仿)∶ V(甲醇)=1∶1为洗脱体系进行分离纯化得化合物6 (34 mg), 化合物7 (16 mg), 化合物8 (15 mg), 化合物9 (12 mg), 化合物10 (20 mg)1.3 α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定阿卡波糖(Acarbose)是临床常用的α-葡萄糖苷酶抑制剂, 是一种非胰岛素依赖型糖尿病(Ⅱ型糖尿病)的常用药, 能抑制小肠壁细胞刷状缘的α-糖苷酶活性，延缓肠道内多糖、寡糖或双糖的降解, 使来自碳水化合物的葡萄糖的降解和吸收入血速度变慢, 从而达到降低餐后血糖的效果[10]. 参照文献[11-12]中的方法略作改进. 具体操作如下：总的反应体积为150 μL. 其中, 包括 100 mmol/L 磷酸钾缓冲液(pH 6.8, PBS)50 μL、0.25 U/mL α-葡萄糖苷酶溶液20 μL和待测样品10 μL. 于37 ℃恒温反应5 min 后, 加入2.5 mmol pNPG底物20 μL接着在37 ℃下继续恒温反应15 min, 再加入0.2 mol/L 碳酸钠溶液50 μL 终止反应, 于波长为405 nm 处测定吸光度(A). 同时设定酶活性组(PBS+酶+底物)、酶空白组(酶+PBS)、样品组(酶+样品+底物)和样品对照组(PBS+样品), 实验过程中加PBS缓冲液补足总体积. 样品对酶活性的抑制率百分率(%) =1- (A样品-A样品对照)/(A酶活性-A酶空白)×100%.2 结构鉴定化合物1 该化合物在甲醇中易析出白色针状晶体, 经TLC分析(V(氯仿)∶ V(丙酮)=10∶1),Rf值为0.6, 7%浓硫酸/乙醇溶液加热显色为紫红色斑点. 在不同展开系统V(环己烷)∶ V(丙酮)、V(氯仿)∶ V(甲醇)中, 该化合物的斑点颜色、形状和Rf 值与齐墩果酸标准品一致, 确定该化合物为齐墩果酸.化合物2 该化合物在甲醇溶液中析出白色针状晶体, 经TLC分析(V(石油醚)∶ V(丙酮)=5∶1),Rf值为0.6, 7%浓硫酸/乙醇溶液加热显色为紫红色斑点. 在不同展开系统(石油醚/乙酸乙酯、氯仿/丙酮，)中, 该化合物的斑点颜色、形状和Rf值与β-谷甾醇标准品一致, 确定该化合物为β-谷甾醇.化合物3 白色粉末, ESI-MS (m/z): 373 [M+H]+, 分子式为: C16H22O8; 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δH 6.74 (2H, s, H-2、H-6), 6.56 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-7), 6.35 (1H, td, J = 16.2、10.8、5.8 Hz, H-8), 4.22 (2H, dd, J = 5.8、1.5 Hz, H-9), 3.70 (6H, s, -OCH3), 3.56～3.08 (6H, m, Glc-H); 13C NMR (100 MHz, CD3OD): δC 135.5 (C-1), 105.8 (C-2、C-6), 154.7 (C-3、C-5), 135.5 (C-4), 132.0 (C-7), 129.3 (C-8), 62.5 (C-9), 56.1 (C-3、C-5，-OCH3), 102.1 (C-1′),75.3 (C-2′), 78.1 (C-3′), 71.3 (C-4′), 78.1 (C-5′), 62.6 (C-6′). 该化合物的数据与文献[13]报道的数据基本一致, 故鉴定该化合物为紫丁香苷.化合物4 黄色油状液体, ESI-MS (m/z): 257 [M+H]+, 分子式为: C12H16O6; 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δH 7.04 (2H, d, J = 8.1 Hz, H-2、H-6), 7.22 (2H, t, J = 7.8 Hz, H-3、H-5), 6.95 (1H, t, J = 7.8 Hz, H-4), 5.05 (1H, s, H-1′), 3.88 (1H, m, H-6′), 3.33～3,56 (5H, m, H-Glc-2′,3′,4′,5′); 13C NMR (100 MHz,CD3OD): δC 169.2 (C-1), 130.4 (C-2), 117.7 (C-3), 123.3 (C-4), 117.7 (C-5), 130.4 (C-6), 36.5 (C-7), 102.3 (C-1′), 74.9 (C-2′), 78.01 (C-3′), 71.4 (C-4′), 78.1 (C-5′), 62.5 (C-6′). 该化合物的数据与文献[14]报道的数据基本一致，故鉴定该化合物为苯基β-D-吡喃葡萄糖苷.化合物5 黄色粉末, ESI-MS (m/z): 271 [M+H]+, 分子式为: C13H18O6; 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δH 7.28 (2H, d, J =7.4 Hz, H-2、H-6), 7.37 (2H, t, J = 7.4 Hz, H-3、H-5), 7.22 (1H, t, J = 7.3 Hz, H-4), 3.84 (1H, d, J = 12.0 Hz, Ha-6), 4.61 (1H, d, J = 12.0 Hz, Hb-6); 13C NMR (100 MHz, CD3OD): δC 139.2 (C-1), 129.3 (C-2), 129.2 (C-3), 128.6 (C-4), 129.2 (C-5), 129.3 (C-6), 71.7 (C-7), 103.3 (C-1′), 75.1 (C-2′), 78.1 (C-3′), 71.6 (C-4′), 78.0 (C-5′), 62.5 (C-6′). 该化合物的数据与文献[15]报道的数据基本一致，故鉴定该化合物为苄基β-D-吡喃葡萄糖苷.化合物6 无色液体, ESI-MS (m/z): 287 [M+H]+, 分子式为:C12H16O7; 1H NMR (400 MHz, CD3O D): δH 7.01 (1H, s, H-2), 6.82 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5), 6.76 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-6), 4.52 (1H, d, J=6.1, H-1′), 3.98 - 3.86 (2H, m, H-6′), 3.49 (1H, s, H-3′), 3.31 (1H, d, J = 15.5 Hz, H-5′), 3.26～ 3.14 (2H, m, H-2′,4′); 13C NMR (100 MHz, CD3OD): δC 151.4 (C-1), 118.8 (C-2,6), 111.7 (C-3,5), 150.2 (C-4), 100.2 (C-1′), 74.6 (C-2′), 77.9 (C-3′), 71.4 (C-4′), 78.5 (C-5′), 63.3(C-6′). 该化合物的数据与文献[16]报道的数据基本一致，故鉴定该化合物为熊果苷. 化合物7 无定型粉末, ESI-MS (m/z): 329 [M+H]+, 分子式为: C15H20O8. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δH 7.67 (1H, dd, J =8.4 Hz, H-6), 7.58 (1H, d, J = 7.4 Hz, H-2),7.24 (1H,d, J = 7.4 Hz, H-5), 3.91(3H, s, -OMe), 2.5(3H, s, H-8); 13C NMR (100 MHz, CD3OD): δC 133.0 (C-1), 112.4 (C-2), 150.7 (C-3), 152.6 (C-4), 116.2 (C-5), 124.6 (C-6), 199.8 (C-7), 56.7 (3-OMe), 101.9 (C-1′), 74.9 (C-2′), 78.0 (C-3′), 71.3 (C-4′), 78.5 (C-5′), 62.6 (C-6′), 23.9 (C-8). 该化合物的核磁数据与文献[17] 报道的数据一致，因此鉴定该化合物为草夹竹桃苷.化合物8 无色针状晶体(甲醇), ESI-MS (m/z): 148 [M]+, 分子式为：C9H8O2; 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δH 7.65 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7), 7.55 (2H, dd, J = 5.6、6.0Hz, H-2,6), 7.11 (3H, m, H-3,4,5), 6.78 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8); 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δC 135.6 (C-1), 129.2 (C-2,6), 129.0 (C-3,5), 130.0 (C-4), 146.5 (C-7), 119.3 (C-8), 170.3 (C-9), 该化合物的核磁数据与文献[18] 报道的数据一致，因此鉴定该化合物为反式肉桂酸.化合物9 无色针状晶体(甲醇), ESI-MS (m/z): 148 [M]+, 分子式为：C9H8O2; 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δH 7.60 (2H, dd, J = 5.6 Hz, 6.0Hz, H-2,6), 7.40 (2H, dd, J = 5.6 Hz, 6.0Hz, H-3,5), 7.35 (1H, d, J = 10.0 Hz, H-7), 7.33 (1H, d, J = 7.4 Hz, H-4), 5.98 (1H, d, J = 10.0 Hz, H-8); 13C NM R (100 MHz, CDCl3): δC 135.2 (C-1), 128.2 (C-2,6), 128.9 (C-3,5), 127.8 (C-4), 144.2 (C-7), 116.3 (C-8), 171.5 (C-9), 该化合物的核磁数据与文献[19] 报道的数据一致，因此鉴定该化合物为顺式肉桂酸.化合物10 白色固体, ESI-MS (m/z): 183 [M+H]+, 分子式为: C9H10O4; 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δH 9.67 (1H, s, H-7), 7.00 (2H, s, H-2,6), 3.83 (6H, s, 3,5-OMe); 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δC 128.6 (C-1), 106.9 (C-2,6), 147.6(C-3,5), 141.6 (C-4), 196.8 (C-7), 56.7 (3,5-OMe), 该化合物的核磁数据与文献[20] 报道的数据一致，因此鉴定该化合物为丁香醛.3 α-葡萄糖苷酶抑制活性测试通过体外α-葡萄糖苷酶抑制模型对鞭打绣球中分离得到的化合物进行活性筛选, 结果显示, 化合物1和10 表现出一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性, 其IC50分别为(68.93±6.20 )μmol/L、(71.77±6.46) μmol/L, 阿卡波糖作为阳性对照IC50=(285.12±8.55)μmol/L.4 结果与讨论利用多种色谱法和光谱分析技术, 对鞭打绣球的95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分进行化学成分研究, 共分离鉴定了10个化合物. 它们分别为：齐墩果酸(1), β-谷甾醇 (2), 紫丁香苷(3), 苯基β-D-吡喃葡萄糖苷(4), 苄基β-D-吡喃葡萄糖苷 (5), 熊果苷 (6), 草夹竹桃苷 (7), 反式肉桂酸(8), 顺式肉桂酸 (9)，丁香醛 (10). 其中化合物1和10具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性, 其IC50分别为(68.93 ± 6.20)、(71.77 ± 6.46) μmol/L. 文献报道鞭打绣球的主要成分是苯乙醇苷和环烯醚萜苷类化合物.所以，进一步明确鞭打绣球中α-葡萄糖苷酶抑制活性成分的研究工作还有待开展.参考文献:【相关文献】[1] 贵州省中医研究所.贵州草药[M]. 贵州: 贵州人民出版社，1970：80-82.[2] 云南省卫生局革命委员会.云南中草药[M]. 云南: 云南人民出版社, 1971: 868-869.[3] 何可群, 卢文芸, 杨琼,等. 鞭打绣球总黄酮含量的测定[J]. 安徽农业科学, 2012(30): 14703-14705.[4] 彭昌武. 鞭打绣球治疗关节扭伤[J]. 四川中医, 1986(6): 15.[5] 田亮, 周金云. 鞭打绣球的化学成分研究[J]. 中国中药杂志, 2004, 29(6): 528-530.[6] 马伟光, 李兴从, 刘玉青, 等.鞭打绣球中的苯丙素甙和环烯醚萜甙[J].云南植物研究, 1995, 17(1): 96-102.[7] 阳明福, 李玉元, 李伯刚, 等. 鞭打绣球中的一个新单萜苷[J]. 植物学报(英文版), 2004, 46(12): 1454-1457.[8] 屠洁, 李前龙. 天然产物中α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选研究进展[J]. 食品研究与开发, 2010,31(9): 206-210.[9] 于彩云, 高兆兰, 陈天姿,等. 天然产物中α-葡萄糖苷酶抑制剂的研究进展[J]. 食品工业科技, 2015, 36(22): 394-399.[10] 杨晓晖, 邓媛瑗, 董慧,等. 阿卡波糖不良反应国外最新研究进展[J]. 中国药物警戒, 2009, 6(1): 36-40.[11] 康文艺, 张丽, 宋艳丽. 茜草抑制α-葡萄糖苷酶活性成分研究[J]. 中国中药杂志, 2009, 34(9): 1104-1107.[12] 康文艺, 张丽, 宋艳丽. 滇丁香中抑制α-葡萄糖苷酶活性成分研究[J]. 中国中药杂志, 2009,34(4): 406-409.[13] XU Y L, XU Y J, SHI H X, et al. 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溶液配制
底物(pNPG)溶液：pH 值6.8 的0.1 mol/L 磷酸缓冲液配制成浓度为5 mmol/L (1.505mg/ml)
反应终止液：0.2 mol/L Na2CO3称取2.16g Na2CO3于烧杯中，加入适量蒸馏水溶解，并定容到100mL，4℃下保存，备用。
阳性对照药品阿卡波糖溶液:精密称取阿波卡糖样品，以磷酸缓冲液为溶剂溶解，配成10 mg/ml的浓度。
配制DNJ标准溶液（抑制剂）：精确称取0.0010g DNJ 标准品，用容量瓶准确定容到10mL，配制成1000μg/mL DNJ标准母液。
将母液分别稀释成、1、5、10、20、40、60μg/mL六个不同梯度的标准品溶液，备用。
α-葡萄糖苷酶的酶溶液：用磷酸缓冲液配制成0.26 U/ml α-葡萄糖苷酶的酶溶液。
OR 0.2 U/ml?
配制α-葡萄糖苷酶的酶溶液：将冻干酶粉（酶活力为14u/mg）用0.01mol/L磷酸缓冲液（pH为6.8）溶解，配制成2u/mL的母液。
再将酶液分别稀释，配制成0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0u/mL的酶溶液，备用。
样品组
（药物种类*浓度组数*3）
样品空白组
（药物种类*浓度组数）
对照组
空白组
50 μl 磷酸缓冲液 +20 μl 药液 +20 μl PNPG
阳性对照组 60 μl 磷酸缓冲液 +20 μl 药液 +20 μl PNPG
50 μl 磷酸缓冲液 +20 μl 药液 +20 μl PNPG 70 μl 磷酸缓冲液 +20 μl PNPG
80 μl 磷酸缓冲液 +20 μl PNPG
振荡使充分混匀 37 ℃水浴10 min
+100 μl 酶溶液 振荡使充分混匀 37 ℃水浴20 min
+ 150 μl 0.2 mol/L Na 2CO 3
在酶标仪405nm 处 测定吸光度
+100 μl 酶溶液 +100 μl 酶溶液。
