肺隐球菌病漏诊原因分析
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・６９６・ 临床与实验病理学杂志Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｐａｔｈｏｌ ２０１２ Ｊｕｎ；２８（６）
栉例４：冷冻切片和正式病理诊断皆由外院误诊为“结节病”并行相应治疗约２个月后，继发隐球菌性脑膜炎
２．２．２镜检７例肺组织检材皆现隐球菌病基本光镜病
变：（１）慢性炎症（纤维组织增生和多少不等的淋巴细胞、浆 细胞等浸润）背景中，含有数量不等的组织细 巨噬细胞／
泡沫细胞（有的位于肺泡腔内）并肉芽肿形成或形成趋势，
常为孤立的异物型、郎罕型多核巨细胞，有时胞质很淡，呈泡 沫状，病变中偶见结核样肉芽肿；（２）组织细胞／巨噬细胞／
泡沫细胞和多核巨细胞胞质内、细胞外间质中和细支气管、 肺泡腔内检见数量不等的隐球菌孢子，单个隐现至多个聚
集，当大量隐球菌聚集，菌体在组织内发生黏液变性时会形
成胶样病灶，大量的组织细胞、巨噬细胞沉浮于淡粉染的胶 样物质中，使之呈现出泡沫状；隐球菌孢子呈圆形或卵圆形，
微蓝染或空泡状，大小不等，直径５—２５ ｍ，围以透明折光 并呈ＰＡＳ、ＧＭＳ和ＡＢ染色阳性的荚膜（图３—５）；（３）冷冻
切片ＨＥ染色中可清晰显现隐球菌孢子（图６）；（４）各例 Ｚｉｅｈ１．Ｎｅｅｌｓｅｎ抗酸染色阳性菌均未检出。
２．３漏诊ＰＣ情况（１）７例ＰＣ有５例漏诊：３例（支气管
镜活检、肺穿刺活检）常规石蜡切片的初检分别为“脂质肉 芽肿”（例１）、“纤维肉芽组织”（例２）、“慢性炎症”（例３）；２
例术中冷冻切片分别诊为“结节病”（例４，冷冻后相应石蜡
切片仍误诊为“结节病”）和“考虑为结核病”（例５，冷冻后
相应石蜡切片改诊为“ＰＣ”）。（２）被病理漏诊的５例Ｐｃ中 除１例外，皆及时纠正，得以正确治疗；例４被误诊为“结节
病”并行相应治疗约２个月后继发隐球菌性脑膜炎（图７）。 （３）本文４例ＰＣ的术中冷冻切片有３例（例５—７）由同一组
病理医师经诊：其中被及时确诊的２例（例６、７）都发生在例 ５术中冷冻切片的误诊后（表１）。
３讨论
ＰＣ常发生于恶性肿瘤、白血病、淋巴瘤、艾滋病、糖尿 病、器官移植或长期应用大剂量糖皮质激素或化疗等免疫功
能低下患者，也可发生于免疫功能正常者，通常表现为呼吸 道感染。Ｐｃ的病变和临床表现与患者的免疫状态有关 Ｊ。
影像学无特征征象，难与肺癌区别ｄ据报道，约８５％的Ｐｃ
未能影像学及临床确诊：４６．３％误诊为肺癌，各有１９．４％分 别误诊为肺结核病和细菌性肺炎 。痰涂片镜检出隐球菌、
痰培养出隐球菌是诊断ＰＣ依据，但痰涂片和痰培养的阳性 率一般低于２５％。肺组织病理学检查仍然是目前确诊Ｐｃ
的主要方法，而在肺病变中检见隐球菌孢子是病理诊断Ｐｃ 的依据。
３．１ ＰＣ漏诊的原因（１）Ｐｃ属于肉芽肿性炎症。肉芽肿 具有特殊形态，辨识肉芽肿（典型、非典型）病变是病理医师
的重要基本功 。由于取材限制，尤其是小活检标本，常看
不到典型的肉芽肿病变，经验少的医师可能想不到从非典型
的肉芽肿性病变中寻找线索。本文漏诊ＰＣ的５例（例１～ ５）中，例１的初检病理医师见到慢性炎症背景中有较多的泡
沫细胞并且伴有多核巨细胞反应，往往此时的多核巨细胞的
胞质可能会很淡，呈泡沫状，很容易想到“脂质肉芽肿”；随 着病程的迁延，Ｐｃ的病变会呈现为纤维结缔组织病灶，但仔
细观察仍能见到隐球菌孢子，例２、３的初检病理医师见到慢
性炎症伴纤维组织增生性病变，就简单的诊断为“慢性炎症
或纤维肉芽组织”；例４的主检病理医师观察到无干酪样坏 死的散在的结节样肉芽肿性病变，并未仔细观察结节的组
成、大小与分布，而误诊为“结节病”，例５的主检医师则见 到结核样肉芽肿，并误将冷冻组织切片中的淡粉染的胶样物
质错判为干酪样坏死，遂术中诊断“考虑结核病”。以上病
例的诊断过程均提示不认识肉芽肿病变和未虑及肉芽肿病 变的形态多样性及其可能的病因相关性是本文漏诊ＰＣ的
首要原因。（２）ＰＣ虽较少见，但近年发病率趋升 Ｊ，应将Ｐｃ
列入肺检材的病理鉴别诊断思路。本文同一组病理医师对 于３例（例５—７）术中冷冻切片的诊断过程，先是将例５误
诊为“考虑结核病”；在其后经检例６、７时由于汲取了例５的
误诊经验、提高了对于Ｐｃ的警觉（考虑了Ｐｃ的可能性），在 术中快速病理诊断的急促情况下及时确诊ＰＣ，提示未将ＰＣ
列入病理鉴别诊断思路是本文漏诊Ｐｃ的重要原因。（３）仔 细观察镜下病变，发现并不注目、有诊断意义的微细病变是
病理诊断的基本环节。本文５例漏诊ＰＣ的病变中，巨噬细 胞、多核巨细胞胞质内（甚至间质中）皆含数量不等的空泡
（有的还具有折光性圆壳），推测有关病理医师可能未发现 或是未重视其病理诊断意义。观察镜下病变不仔细、忽视微
细病变的诊断提示意义是本文漏诊ＰＣ的另一重要原因。
对于肉芽肿病变，需用高倍镜（必要时用油镜）仔细观察有 否真菌之类病原体，尤其应注意在病灶边缘处和呈现泡沫状
病灶处易观察到隐球菌孢子，并以有关特殊染色进一步验 证。有报道隐球菌相关特殊染色阳性率达１００％［５１。本组７
例隐球菌相关特殊染色皆呈阳性。
３．２术中冷冻切片诊断ＰＣ的意义
复习本文４例ＰＣ的 ・６９８・ 临床与实验病理学杂志Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｐａｔｈｏｌ ２０１２ Ｊｕｎ；２８（６）
［３－Ｔｒｃｐ冷冻切片抗体应用于石蜡切片免疫组化染色的研究
李坤，侯宪芹，孙海娇，于晶功，胡波，周长江
摘要：目的探讨高压热修复后将Ｂ－Ｔｒｃｐ冷冻切片抗体应
用于石蜡切片的免疫组化技术。方法在常规免疫组化技
术的基础上，分别经０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－ＩＯ０／ＰＢＳ溶液及０．２
ｍｏＷＬ甘氨酸溶液浸泡后，ｐＨ ６．０柠檬酸盐抗原修复液进行
组织抗原高压热修复，观察Ｂ－Ｔｒｃｐ冷冻切片抗体应用于石
蜡切片的免疫反应性。结果经上述处理后，石蜡切片中出
现Ｂ—Ｔｒｃｐ冷冻切片抗体的阳性率为６３．３％（３８／６０），与１３一
Ｔｒｃｐ石蜡切片抗体的阳性率无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。结
论８一Ｔｒｃｐ冷冻切片抗体可经过处理后应用于石蜡切片免
疫组化。
关键词：抗原修复；抗体；免疫组织化学
中图分类号：Ｒ ４４６．６ 文献标志码：Ａ
文章编号：１００１—７３９９（２０１２）０６—０６９８—０２
目前，市场上存在一些抗原的免疫组化检测只有对应的
冷冻切片抗体，无石蜡切片抗体，不能满足实验中观察石蜡
切片中某种抗原的定性、定位研究的需要。因此探讨部分冷
冻切片抗体应用于石蜡切片的免疫组化染色对病理诊断及 相关研究有一定意义。
１材料与方法
１．１材料与试剂搜集２００６年６月一２００９年ｌ２月大连大
学附属新华医院存档的直肠癌组织蜡块６０例，所有组织均
经１０％福尔马林溶液固定，石蜡包埋，４ ｍ厚切片。同时也
搜集了２０１０年６月存档的冷冻直肠癌标本１Ｏ例，连续冷
冻，９ ｍ厚切片，冷丙酮（４℃冰箱中备用）固定。羊抗人ｐ．
Ｔｒｃｐ浓缩型多克隆抗体（编号ｓｃ－８８６２），购自美国Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ
公司。柠檬酸盐抗原修复液（ｐＨ ６．０），ＰＢＳ磷酸盐缓冲液 （ｐＨ ７．４—７．６），液体ＤＡＢ酶底物显色试剂盒，ＵｌｔｒａＳｅｎｓｉｔｉｖｅ
ｓＰ超敏试剂盒（羊）包括：试剂Ａ（内源性过氧化酶阻断剂）、
试剂Ｂ（动物非免疫血清）、试剂Ｃ（生物素标记的兔抗羊
收稿Ｅｌ期：２０１２—０２—０３ 作者单位：大连大学附属新华医院，大连１１６０２１
作者简介：李坤，女，硕士，医师。Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｋｕｎｄｌｄｘ＠１２６．ｃｏｒｎ 周长江，男，主任医师，通讯作者。Ｅ—ｍａｉｌ；ｅｎｄｏｚｈｏｕ＠ｓｉｎａ
ｃｏｍ ＩｇＧ）、试剂Ｄ（链霉菌抗生物素蛋白一过氧化酶）均购自福州
迈新公司。体积分数为０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ一１００／ＰＢＳ溶液，０．２
ｍｏ Ｌ甘氨酸溶液。
１．２ 方法１３．Ｔｒｃｐ冷冻切片抗体应用于石蜡切片免疫组化
染色：石蜡切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化后，入蒸馏水、
ＰＢＳ缓冲液各浸泡５ ｍｉｎ。体积分数为０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ一１００／
ＰＢＳ溶液于室温浸泡ｌ０～１５ ｍｉｎ，ＰＢＳ缓冲液洗１０ ｍｉｎ ｘ ３ 次。０．２ ｍｏＬ／Ｌ甘氨酸溶液于室温浸泡２ ｈ，ＰＢＳ洗３ ｒａｉｎ×３
次。高压热修复：取一定量（必须浸没整张切片）的柠檬酸
盐抗原修复液于压力锅中，大火加热至沸腾，将装有切片的 染色架放入沸腾的修复液中，继续加热，待压力锅喷气开始
计时１．５ ｍｉｎ后离开热源，室温状态下自然冷却，ＰＢＳ洗３
．ｍｉｎ×３次。每张切片加：１滴或５０ ｌ试剂Ａ，室温下孵育１０
ｒａｉｎ，ＰＢＳ洗３ ｍｉｎ×３次。每张切片加１滴或５０ ｌ试剂Ｂ， 室温孵育１０ ｍｉｎ。甩去试剂Ｂ，每张切片加１滴或５０ １ ｐ—
Ｔｒｃｐ抗体（工作浓度１：１００），４℃过夜，ＰＢＳ洗３ ｍｉｎ×３
次。每张切片加１滴或５Ｏ 试剂Ｃ，３７ ｏＣ温箱孵育１０ ｍｉｎ，
ＰＢＳ洗３ ｍｉｎ×３次。每张切片加１滴或５０ ｌ试剂Ｄ，室温
孵育１０ ｒａｉｎ，ＰＢＳ洗３ ｍｉｎ×３次。每张切片加２滴或１００ １
新鲜配制的ＤＡＢ溶液，显微镜下观察３—５ ｍｉｎ，阳性显色为
棕黄色。自来水冲洗，苏木精复染，１％盐酸乙醇分化，１％氨
水返蓝。经梯度乙醇脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。 冷冻切片免疫组化染色：冷冻切片经冷丙酮固定１０ ｍｉｎ
后，ＰＢＳ洗３ ｍｉｎ×３次；后经体积分数为０．３％ＴｒｉｔｏｎＸ一１００／
ＰＢＳ溶液于室温浸泡１０～１５ ｍｉｎ，ＰＢＳ洗１０ ｍｉｎ×３。后续步 骤同上述石蜡切片免疫组化法。
１．３结果判定按上述免疫组化技术处理后，观察冷冻切
片Ｂ—Ｔｒｃｐ抗体在石蜡切片及冷冻切片直肠癌组织中免疫反
应性的表达情况。Ｂ－Ｔｒｃｐ阳性染色主要定位于细胞质，少部
分细胞膜着色，为棕黄色颗粒。随机选择１０个高倍镜视野，
阳性细胞数≥２０％为阳性表达。 １．４统计学分析采用ＳＰＳＳ １１．５软件进行统计分析，计
数资料采用ｘ 检验。
２结果
２．１￣Ｔｒｅｐ冷冻切片抗体在直肠癌组织中的表达 石蜡
切片经免疫组化染色处理后，６Ｏ例石蜡切片直肠癌组织中
［３］谭郁彬，张乃鑫．外科诊断病理学［Ｍ］．天津：天津科学技术 出版社，２０００：８—２８．
［４］张缨，宗晓福，李祥周，等．肺隐球菌病１７例临床病理分 析［Ｊ］．临床与实验病理学杂志，２００９，２５（５）：４８５—８． ［５］ 易祥华，孔洁，朱美芳，等．原发性肺隐球菌病的病理诊断 和超微结构观察［Ｊ］．中华病理学杂志，２００４，３３（５）：４２４—８． ［６］ Ｋｉｓｈｉ Ｋ，Ｈｏｍｍａ Ｓ，Ｋｕｒｏｓａｋｉ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｏｓｉｓ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｎｉｈｏｎ Ｋｏｋｙｕｋｉ Ｇａｋｋａｉ
Ｚａｓｓｈｉ，２００３，４１（１）：３０—４．
