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直接抗人球蛋白试验(DAT)操作规程

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直接抗人球蛋白试验（DAT）操作规程 SXYJ-GZ-0210
1目的用于检测体内致敏的红细胞。

2适用范围研究药物致敏的红细胞、免疫性溶血性贫血的诊断、新生儿溶血病的诊断、输血反应等鉴定。

3职责检测者依据此程序进行直接抗人球蛋白试验操作。

4材料与设备抗人球蛋白试剂（-IgG/-C3d、-IgG、-C3d）、阴性对照细胞（试剂红细胞）；
一次性使用滴管、试管、玻片；KUBOTA KA-2200型离心机；CH20BIMF200型电子显微镜等。

Biovue工作站（包括微柱凝胶卡、低离子增强液、孵育器、离心机）。

5操作方法
5.1试管法
5.1.1待检标本应为EDTA抗凝血，吸出部分红细胞，用0.9%生理盐水充分洗涤四遍，配制
成2%红细胞盐水悬液。

5.1.2取待检红细胞盐水悬液1滴，移入加有2滴抗人球蛋白血清的小试管内，混匀。

5.1.3阴性对照抗人球蛋白血清2滴，加2％试剂红细胞悬液1滴，混匀。

5.1.4待检管以及阴性对照管同时以3400转/分，离心15秒（KA-2200型离心机Ⅱ档），轻
轻揺动，肉眼及显微镜下观察结果。

5.2微柱凝胶法方法参见微柱凝胶技术操作规程（SXYJ-GZ-0228）。

6结果判定原则如阴性对照管不凝集，受检红细胞凝集者为直接抗人球蛋白试验阳性，不凝集者为阴性。

凝集强度可参见SXYJ-GZ-0202: 5.2.1.6对结果进行判断。

7注意事项
7.1标本采取后应立即进行试验，延迟或中途停止试验可使抗体从细胞上丢失。

7.2抗人球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度，否则，可产生前带或后带现象而误为阴性
结果。

7.3也有将浓的抗人球蛋白血清在白瓷板上做倍量系列稀释，再各加受检者10％洗涤红细胞
悬液1滴，不断转动瓷板，肉眼观察凝集反应。

凡出现凝集的最高稀释倍数的倒数即为直接抗人球蛋白试验效价。

这种效价并不表示受检者红细胞被不完全抗体致敏的强度。

7.4受检红细胞一定要用盐水洗涤4次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白，以防止假阴性
结果。

7.5当实验结果有疑问时，可以对阴性结果进行核实：即在该试管中再加1滴IgG抗D致敏
红细胞（取3人份RhD阳性O型红细胞，混合，经盐水洗涤后取压紧的红细胞，加等量的IgG抗D血清，置37℃水浴30min，取出后离心去除上清液，用盐水洗涤3次，最后再用盐水配成2％红细胞悬液），3400r/min离心15秒（KA-2200型离心机Ⅱ档），轻轻揺动，如结果为阳性，则表示试管内的抗人球蛋白血清确未被消耗，试验结果可靠。

单价抗人球7.6如需了解在体内致敏红细胞的Ig类型，则可分别以抗IgG、抗IgM或抗C
3d 蛋白血清进行试验。

7.7若被检红细胞上吸附抗体太少或患者为Coombs阴性自身免疫性溶血性贫血，直接抗人
球蛋白试验可呈假阴性反应。

7.8全凝集或冷凝集血液标本及脐血标本中含有Wharton胶且洗涤不充分，血液标本中有很
多网织红细胞且抗人球蛋白血清中含有抗运铁蛋白时，都可使红细胞产生凝集，出现假阳性。

8依据《全国临床检验操作规程》（第3版）中华人民共和国卫生部医政司。

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抗球蛋白试验

抗球蛋白试验


操作步骤
标记3支试管，分别为阳性对照、阴性对照和待检， 在标记好的试管中分别加入2滴阳性对照血清、阴性 对照血清和待检血清。
在3支试管中各加1滴5%O型红细胞悬液。 37℃孵育30-60min 。 用生理盐水洗涤红细胞3-4次，末次洗涤后，彻底去除
上清液。 在3支试管里各加2滴多特异性抗人球蛋白试剂，混匀。
红细胞上若吸附抗体较少，自身免疫性溶血性 贫血直接抗球蛋白试验可呈假阴性反应。
全凝集、冷凝集血液标本或脐血标本含有 Wharton胶，试验前应充分洗涤。
间接抗球蛋白试验
【实验原理】 红细胞在体外与血清（浆）孵育，如果血清中含有相 应特异性不完全抗体，不完全抗体的Fab段与红细胞相 应抗原特异性结合，但不出现肉眼可见的凝集反应， 充分洗涤后，去除血清中未结合的游离抗体后，加入 抗人球蛋白试剂，抗人球蛋白抗体Fab段和红细胞膜上 不完全抗体的Fc段结合，以此抗人球蛋白搭桥，形成 肉眼可见的凝集反应。
结果判断
阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，待检红 细胞凝集者为阳性，不凝集者为阴性。
如果阴性对照和待检管都出现阳性反应，表示 红细胞有自身凝集，在检测前应解决红细胞自 身凝集问题。
在第5步骤，加入IgG致敏的红细胞，应该出 现凝集，如果仍未凝集表示阴性结果无效，试 验应重做。
注意事项
标本采集后立即进行试验，试验延迟或中途停 止可使抗体从细胞中释放出来。
抗球蛋白试验
直接抗球蛋白试验
原理 检测红细胞在体内是否被不完全抗体和（或）补
体致敏的一种方法。 不完全抗体在体内与相应红细胞抗原结合，红细
胞不出现肉眼可见的凝集，当加入抗人球蛋白 试剂后，则出现凝集反应。
应用
胎母血型不合新生儿溶血病 免疫性溶血性输血反应 自身免疫性溶血性贫血以及药物诱导产生的溶
抗人球蛋白检测卡(交叉配血)操作规程

抗人球蛋白检测卡(交叉配血)操作规程

抗人球蛋白检测卡（交叉配血）标准操作规程一、目的：为规范交叉配血试验的技术操作，保证临床输血安全有效，特制定本规程。

二、适用范围：适用于输血科进行交叉配血试验。

三、职责：输血科技术人员负责交叉配血试验四、试剂及材料（一）试剂：抗人球蛋白检测卡（二）设备：专用离心机，专用孵育器，微量移液器（5-50ul）、普通离心机、玻璃或塑料试管、0.9%生理盐水等五、标本要求：（一）抽取受血者抗凝（抗凝剂为EDTA．K2）静脉血2-3ml，在3000r／min条件下离心5分钟备用。

（二）标本保存：血液样本必须密封，2-6℃保存7天。

（三）用于交叉配血必须是2-6℃保存3天以内的标本。

六、操作步骤：（一）交叉配血前，复检患者ABO和RH血型（二）在抗人球蛋白卡片上标明患者姓名（三）将受血者和献血者的红细胞和血清分离（四）取试管两支，用低离子溶液分别配患者和献血者0.5％-0.8％红细胞悬液（取分离血清后受血者底层红细胞8ul与0.9%生理盐水1mL配成0.8％受血者盐水悬液，取分离血清后供血者底层红细胞8ul 与0.9%生理盐水1mL 配成0.8％供血者盐水悬液）（五）交叉配血：主侧：患者血清50uL＋献血者红细胞悬液50uL次侧：献血者血清50uL＋患者红细胞悬液50uL（六）将卡放入37℃孵育箱15分钟（七）移出放入离心机5分钟，900rmp2分钟，1500rpm3分钟，取出观察结果。

七.结果观察：（一）阴性结果：主侧和次侧均不凝集，红细胞完全沉于凝胶管底部，配血相合。

（二）阳性结果：主侧和次侧均凝集，红细胞位于凝胶表面或中间，配血不相合。

（三）如果发生溶血，提示为阳性结果。

八．微柱卡式法凝集强度描述。

直接抗球蛋白试验阳性患者血液输注

直接抗球蛋白试验阳性患者血液输注


使用柱凝集试验(例如：凝胶检测)进行DAT不需 要洗涤红细胞，因为血浆蛋白不中和红细胞与 检测抗体的结合反应。（经适当的离心作用，红细胞可以进 入柱体，而血清或血浆仍留在柱体上方）这种方法可能更利 于低亲和力IgG抗体的检出。
五、直接抗球蛋白试验阳性结果的来自析仅DAT阳性不能诊断溶血性贫血。对DAT结果阳性的解释需要了解患者的诊断、 近期用药史、妊娠史和输血史、造血干细胞移植史，以及是否存在获得性或无法解 释的溶血性贫血。保持与临床医生沟通非常重要，需要将患者临床情况与实验室结 果相结合，来对DAT阳性结果进行分析。
大多含IgG阳性且很弱，一般≤1+或±； 有近期输血史且输血效果未达预期（2周以内）； 血浆颜色异常（黄、褐色、深褐色、甚至酱油色）；
六、直接抗球蛋白试验阳 性 患 者 血 液 输 注
2、发现直抗阳性导致 的次侧凝集怎样发血？
临床信息支持； 血清中抗体与酶处理细胞呈强阳性反应； 经洗涤后直抗强度下降； 镜下凝集异常。 （注意：必须使用相应的药物才能确认存在药物抗体）
结合实验室的结果、患者的病史和临床资料，有助于将所涉及 的问题分类。
五、直接抗球蛋白试验阳性结果的分析
3、放散
(1)存在免疫性溶血的临床症状和体征。 (2)有近期输血史的患者血清检测结果阴性或不确定。 (3)怀疑HDFN,但母亲血浆中未检测到同种抗体。
。大部分输血前 DAT结果阳性的标本放散液却是阴性的，DAT阳性通常与血清球 蛋白增高有关。
凝集，加温至37℃凝集又会散开。 一般正常人血清中存在冷自身抗体，效价低于64,在室温和37℃环境
下几乎不影响血型血清学试验，属于生理性冷抗体。病理状态下的冷自身 抗体往往因为某些病理原因引起抗体效价升高，会给血型鉴定、抗体鉴定 和交叉配血带来干扰。
抗人球蛋白试验ppt资料

抗人球蛋白试验ppt资料


间接抗人球蛋白试验
间接抗人球蛋白试验原理：
用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不 完全抗体；或用已知的不完全抗体检测红细胞上 相应的抗原。
在37℃条件下，若被检血清或红细胞有对应的不 完全抗体或抗原，则抗原抗体作用使红细胞致敏
再加抗人球蛋白试剂，与红细胞上不完全抗体结 合，出现肉眼可见凝集。
3.药物诱发的免疫性溶血性贫血 直接反应阳性，间接反应阴性（ 37℃）。
抗人球蛋白试验
马强虎
1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs） 等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验
，即抗人球蛋白试验。别名： Coombs‘试验(库姆 斯试验) 。 Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为 第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗
体，使红细胞凝集。
抗人球法是检测不完全抗体的经典方法， 分为直接试验(直接反应)和间接试验(间 接反应)。
或补体； 撕开检测卡的封膜于反应腔中依标记分别加入相应的.
撕开检测卡的封膜于反应腔中依标记分别加入相应的0. 撕开检测卡的封膜于反应腔中加入待检1%RBC生理盐水悬液50ul；
阴性：待检标本RBC未致敏不完全IgG抗体 5%筛选细胞LIM悬液100ul，各管再加入待检血浆或血清25ul；
在37℃条件下，若被检血清或红细胞有对应的不完全抗体或抗原，则抗原抗体作用使红细胞致敏
抗人球蛋白试验意义
1.本试验是诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的重 在37℃条件下，若被检血清或红细胞有对应的不完全抗体或抗原，则抗原抗体作用使红细胞致敏 红红细细胞 胞血血型型不不要合合引引依起起的的据输输血血反反，应应 特别是IgG型引起的溶血性贫血，直接 反应常呈强阳性，间接反应大多阴性，但亦可阳 再加抗人球蛋白试剂，与红细胞上不完全抗体结合，出现肉眼可见凝集。