直接Coombs试验ppt课件

直接抗人球蛋白试验1. 原理抗人球蛋白试验，又称Coombs’试验，是诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的重要依据。

用人球蛋白免疫动物使其产生抗体即抗人球蛋白。

抗人球蛋白试剂可凝集被人球蛋白致敏的红细胞。

抗人球蛋白试剂可以喝致敏在红细胞上人球蛋白反应，通过桥梁作用使致敏红细胞出现凝集，呈现阳性反应。

2. 试剂组成抗IgG，C3d（多特异性）10ml/支，1支/盒抗IgG 5ml/支，1支/盒抗C3d 5ml/支，1支/盒3. 试剂保存2-8℃保存，勿反复冻融，储存条件下有效期为24个月。

4. 样本要求应用EDTA抗凝标本，可反应体内红细胞被补体致敏的真实情况，弱怀疑冷抗体引起的直接抗球蛋白试剂阳性，其血液标本凝固应保持在37℃，直到血清被分离出来为止。

5. 操作步骤5.1 直接抗球蛋白试验5.1.1将1滴受检者3%红细胞悬液加入干净的小试管中,用盐水洗涤3次以2400转/分，离心1分钟，每次洗涤后，将上清液全部倒出。

5.1.2加入2滴抗IgG，C3d（多特异性）或者抗IgG或抗C3d，以2400转/分，离心15分钟，用肉眼或借助显微镜管凝集，并按程度记录结果。

5.1.3判断结果必须一定角度轻轻地摇动试管直到松动所有的细胞，然后反复倾斜试管，直到均匀的细胞悬液（阴性）或者凝集物（阳性）为止。

5.1.4如阴性结果，在室温中放置5-10分钟，再离心一次，重读结果。

这样做，阴性反应有时会变成阳性。

注意：仅对C3D和IgA致敏的红细胞有增强作用，IgG致敏红细胞反而会变弱（见注意事项）。

5.2 阳性对照（IgG抗D致敏细胞）5.2.1每批新世纪，或在4℃保存时间过长，需做阳性对照，只要每月一次，1滴阳性对照细胞加2滴直接抗人球蛋白试剂，离心判定结果。

5.2.2在试验中，于判断为阴性的试管内加入1滴阳性对照细胞，再离心，然后重悬液，判定结果。

如果最初洗涤能充分除去所有未结合的球蛋白，结果为阳性。

这是一个重要的对照，因为这是检测细胞是否洗涤充分的唯一方法。

coombs原理
Coombs原理是一种用于检测和诊断血液或体液中存在的抗体
和抗原反应的实验方法。

由英国免疫学家Robin Coombs于1945年提出。

Coombs试验可以用于血型鉴定、自身免疫性溶血性贫血、新
生儿溶血病等疾病的诊断。

该实验方法基于抗体与抗原之间的特异性反应，通过检测抗体与红细胞表面的抗原结合来确定是否存在抗体的结合，进而判断是否存在某种疾病。

Coombs试验主要包括两种类型：直接抗人球蛋白测试和间接
抗人球蛋白测试。

直接抗人球蛋白测试是通过将待测样品（如患者血液）与抗人球蛋白抗体结合后与红细胞悬液进行反应，观察是否发生凝集、沉降等现象来判断是否存在抗体的结合。

间接抗人球蛋白测试是通过将待测样品（如患者血清）加入到已知含有抗人球蛋白抗体的红细胞悬液中，观察是否发生凝集、沉降等现象来判断待测样品中是否存在抗原。

Coombs原理的应用可以帮助医生进行血型鉴定和自身免疫性
疾病的确诊，为疾病的治疗和预防提供重要依据。

抗人球蛋白试验（coombs实验）
直接试验：实验原理：本实验是检查不完全抗体试验，包括直接试验和间接试验。

直接试验和间接试验阳性为红细胞表面不完
全抗体存在及血清中游离的不完全抗体存在，判定结果凝
集为阳性。

试剂：
1、受检者红细胞：取患者全血脱纤维蛋白或抗凝，离
心除上清液，用大量生理盐水洗涤红细胞3—5次，
然后制成10%的红细胞悬液。

2、受检血清
3、正常0型混合红细胞：取数名正常0型抗凝血，离
心除血浆，用大量生理盐水洗涤红细胞3—5次，然
后制成10%的红细胞悬液。

4、抗人球蛋白血清
5、抗D血清
6、AB血清
7、0.85%生理盐水
操作方法：
取试管3支
1 2 3
反应物（低）
受检者阳性对照阴性对照
受检者压积红细胞 2 ——
对照同型压积红细胞— 2 2
抗D血清— 4 —
AB血清—— 4
将2 3 管置37℃水浴中1小时，然后3支试管均用大量生理盐水洗涤两次，每管再以生理盐水配成10%的红细胞悬液。

直接试验：
取小试管4支
反应物（滴）
受检者盐水对照阳性对照阴性对照
抗人球蛋白血清 2 — 2 2。

Coombs试验操作规程1. 引言Coombs试验是一种常用的血液学实验，用于检测抗体与红细胞表面抗原的反应。

本文档旨在详细描述Coombs试验的操作步骤，以确保实验结果的准确性和可靠性。

2. 实验材料•新鲜抗凝血集•血型试剂：抗人免疫球蛋白•0.9% 生理盐水•试管•离心机•显微镜•废弃品容器•实验记录表格3. 实验步骤步骤1：标本准备1.收集新鲜的全血标本，使用抗凝血集进行采样。

2.将采集的血液标本放置在室温下15分钟，使其凝集。

3.将血液标本离心10分钟，以分离血浆和红细胞。

步骤2：准备试剂1.取出适量的抗人免疫球蛋白试剂，放置于室温下30分钟，使其达到室温。

步骤3：搅拌红细胞1.使用0.9%生理盐水稀释红细胞，以获得合适的浓度。

2.将红细胞和0.9%生理盐水混合在试管中，用轻柔的手法搅拌均匀。

步骤4：加入试剂1.取出搅拌均匀的红细胞悬液，加入试管中。

2.加入相应量的抗人免疫球蛋白试剂，与红细胞充分混合。

步骤5：反应孵育1.将试管置于37摄氏度恒温箱中，孵育30分钟。

2.每5分钟轻轻地摇晃试管，以确保反应充分。

步骤6：离心沉淀1.将试管放入离心机中，以1000 rpm的速度离心10分钟。

2.小心地倒出上清液，保留红细胞沉淀。

步骤7：显微镜检查1.使用显微镜观察红细胞沉淀，检查是否出现凝聚或凝集现象。

2.记录观察结果，并与实验记录表格进行比对。

4. 实验结果分析根据显微镜观察到的红细胞沉淀形态，可得出以下结论：•阳性结果：红细胞出现凝聚或凝集现象，说明抗体与红细胞表面抗原发生反应。

•阴性结果：红细胞保持分散状态，没有出现凝聚或凝集现象，说明抗体与红细胞表面抗原没有发生反应。

5. 注意事项•实验过程中需要严格遵守操作规程，避免出现污染或交叉感染的情况。

•在操作过程中要注意用具的消毒和防护，以确保实验安全。

•实验前后需要进行必要的质量控制检查，以确保实验结果的准确性。

6. 结论通过本文档所描述的Coombs试验操作规程，可以进行准确可靠的血液抗体与抗原反应检测。

coombs试验原理Coombs试验原理Coombs试验是一种免疫学实验方法，用于检测抗体与红细胞表面抗原的结合。

它是由英国免疫学家Robin Coombs于1945年发明的，被广泛应用于临床诊断和研究领域。

Coombs试验的原理是通过检测抗体与红细胞表面抗原的结合情况来判断是否存在自身免疫性溶血贫血等疾病。

在正常情况下，人体的免疫系统会产生抗体来对抗外来物质，但有些情况下，免疫系统会错误地产生抗体攻击自身的红细胞。

这些抗体与红细胞表面抗原结合后，会导致红细胞破裂，从而引起溶血反应。

Coombs试验主要分为直接抗人球蛋白试验（Direct Antiglobulin Test，简称DAT）和间接抗人球蛋白试验（Indirect Antiglobulin Test，简称IAT）两种。

直接抗人球蛋白试验通过将患者的红细胞与抗人球蛋白抗体结合，然后观察是否发生凝集反应，来判断是否存在抗体与红细胞表面抗原的结合。

这种试验通常用于检测自身免疫性溶血贫血、新生儿溶血病等疾病。

间接抗人球蛋白试验则是通过将患者的血清与已知具有特定抗原的红细胞结合，再加入抗人球蛋白抗体，观察是否发生凝集反应。

这种试验常用于血型鉴定、输血前的抗体筛查、妊娠期的抗体检测等。

Coombs试验的操作步骤较为繁琐，需要严格控制实验条件，避免假阳性或假阴性结果的出现。

首先，需要收集患者的血液样本，并离心分离红细胞。

然后，将红细胞与抗人球蛋白抗体或抗人免疫球蛋白抗体结合，形成抗原-抗体复合物。

最后，通过观察是否发生凝集反应来判断试验结果。

Coombs试验的结果分为阳性和阴性两种。

阳性结果表示抗体与红细胞表面抗原结合，存在溶血现象。

阴性结果则表示未能检测到抗体与红细胞表面抗原的结合，不存在溶血现象。

Coombs试验在临床诊断和研究中具有重要意义。

它可以帮助医生确定溶血性疾病的诊断和治疗方案，指导输血前的血型鉴定和抗体筛查工作，确保输血安全。

此外，它还可以用于研究免疫学和血液学领域，深入了解免疫反应的机制和异常情况。