抗人球蛋白试验
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直接抗人球蛋白试验1. 原理抗人球蛋白试验,又称Coombs’试验,是诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的重要依据。
用人球蛋白免疫动物使其产生抗体即抗人球蛋白。
抗人球蛋白试剂可凝集被人球蛋白致敏的红细胞。
抗人球蛋白试剂可以喝致敏在红细胞上人球蛋白反应,通过桥梁作用使致敏红细胞出现凝集,呈现阳性反应。
2. 试剂组成抗IgG,C3d(多特异性)10ml/支,1支/盒抗IgG 5ml/支,1支/盒抗C3d 5ml/支,1支/盒3. 试剂保存2-8℃保存,勿反复冻融,储存条件下有效期为24个月。
4. 样本要求应用EDTA抗凝标本,可反应体内红细胞被补体致敏的真实情况,弱怀疑冷抗体引起的直接抗球蛋白试剂阳性,其血液标本凝固应保持在37℃,直到血清被分离出来为止。
5. 操作步骤5.1 直接抗球蛋白试验5.1.1将1滴受检者3%红细胞悬液加入干净的小试管中,用盐水洗涤3次以2400转/分,离心1分钟,每次洗涤后,将上清液全部倒出。
5.1.2加入2滴抗IgG,C3d(多特异性)或者抗IgG或抗C3d,以2400转/分,离心15分钟,用肉眼或借助显微镜管凝集,并按程度记录结果。
5.1.3判断结果必须一定角度轻轻地摇动试管直到松动所有的细胞,然后反复倾斜试管,直到均匀的细胞悬液(阴性)或者凝集物(阳性)为止。
5.1.4如阴性结果,在室温中放置5-10分钟,再离心一次,重读结果。
这样做,阴性反应有时会变成阳性。
注意:仅对C3D和IgA致敏的红细胞有增强作用,IgG致敏红细胞反而会变弱(见注意事项)。
5.2 阳性对照(IgG抗D致敏细胞)5.2.1每批新世纪,或在4℃保存时间过长,需做阳性对照,只要每月一次,1滴阳性对照细胞加2滴直接抗人球蛋白试剂,离心判定结果。
5.2.2在试验中,于判断为阴性的试管内加入1滴阳性对照细胞,再离心,然后重悬液,判定结果。
如果最初洗涤能充分除去所有未结合的球蛋白,结果为阳性。
这是一个重要的对照,因为这是检测细胞是否洗涤充分的唯一方法。
博学笃行自强不息
抗人球蛋白试验
抗人球蛋白试验是一种常用的免疫学实验,用于检测人体内是否存在抗人球蛋白抗体。
该试验的原理是将人球蛋白与抗人球蛋白抗体或血清样品反应,通过观察是否发生凝集、沉淀或溶解等反应来判断抗体的存在与否。
抗人球蛋白试验广泛应用于临床诊断及实验室研究中,可以用于检测某些自身免疫性疾病的诊断,例如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
同时,该试验还可以用于评估机体对疫苗或药物的免疫应答情况。
需要注意的是,抗人球蛋白试验只能检测抗体的存在与否,无法确定其具体种类或浓度。
因此,在临床应用中,通常需要结合其他检查方法综合分析。
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