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实验7 直接抗人球蛋白实验ppt课件

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《抗人球蛋白试验》课件

《抗人球蛋白试验》课件

监测治疗效果和复发
抗人球蛋白试验在监测治疗效 果中的应用
抗人球蛋白试验在预测复发风 险中的应用
抗人球蛋白试验在评估治疗效 果和复发风险中的局限性
抗人球蛋白试验在临床实践中 的应用案例
抗人球蛋白试验的 注意事项
试验前的准备
确保试验环境清洁、无菌 准备试验所需的试剂和仪器 确保试验人员具备相应的专业知识和技能 确保试验对象符合试验要求，并签署知情同意书
抗人球蛋白试验的 发展趋势和展望
抗人球蛋白试验的进展
抗人球蛋白试验的发展历程 抗人球蛋白试验的应用领域 抗人球蛋白试验的技术进步 抗人球蛋白试验的未来发展趋势
抗人球蛋白试验的未来发展方向
应用领域：拓展到更多疾病 诊断和治疗领域
标准化：建立统一的检测方 法和标准，提高检测结果的
可比性
技术进步：提高检测灵敏度 和准确性，降低检测成本
抗人球蛋白试验的优缺点
优点：操作简单，结果准确， 可用于检测多种疾病
缺点：需要专业人员操作， 成本较高，可能存在假阳性
和假阴性结果
抗人球蛋白试验的 应用
诊断自身免疫性疾病
抗人球蛋白试验： 用于检测自身免疫 性疾病的抗体
自身免疫性疾病： 免疫系统攻击自身 组织或器官的疾病
应用：抗人球蛋白 试验可以帮助诊断 多种自身免疫性疾 病
应用：用于诊断和治疗多种 疾病，如系统性红斑狼疮、
类风湿性关节炎等
目的：检测人体内是否存在 抗人球蛋白抗体
重要性：有助于医生制定更 准确的治疗方案，提高患者
的生活质量
抗人球蛋白试验的 方法
直接抗人球蛋白试验
原理：通过检测血清中抗人球蛋白抗体的含量，来判断是否感染了某些疾病 步骤：取患者血清，加入抗人球蛋白抗体，观察反应结果 结果判断：如果出现凝集反应，说明患者感染了某些疾病 注意事项：试验过程中要避免污染，保证结果的准确性

实验7 直接抗人球蛋白实验

实验7 直接抗人球蛋白实验

2021/6/16
16
结束语
若有不当之处，请指正，谢谢！
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
2021/6/16
10
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须单克隆IgG抗D血清致敏）
进一步分析。
2021/6/16
5
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
2021/6/16
6
第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
2021/6/16
7
直接抗人球蛋Biblioteka 试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
❖ 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将 未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
❖ 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
2021/6/16
13
结果判定
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
2021/6/16
8
受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）

抗人球蛋白试验PPT课件

抗人球蛋白试验PPT课件
7.Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾没 有妊娠Rh阳性胎儿者，间接反应阳性，第一次输 血后（Rh阳性的血），数天之内间接反应也会变 为阳性
.
15
8.在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴 瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒 、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等， 病人直接反应亦可阳性
抗人球蛋白
自身抗体
直接Coombs试验
.
7
4.结果解释
阳性：待检标本RBC已致敏IgG不完全抗体 或补体；
阴性：待检标本RBC未致敏不完全IgG抗体 。
.
8
间接抗人球蛋白试验
间接抗人球蛋白试验原理：
用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不 完全抗体；或用已知的不完全抗体检测红细胞上 相应的抗原。
9.阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性 发作后用抗补体血清做试验直接反应常为 阳性。
.
16
我们科室Coombs试验已开展，报告方法： 1、接收标本； 2、完成试验； 3、免疫组中免疫手工中报告结果。
.
17谢谢.18 Nhomakorabea抗人球蛋白试验
马强虎
.
1
1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs） 等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验
，即抗人球蛋白试验。别名： Coombs‘试验(库姆 斯试验) 。 Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为 第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗
体，使红细胞凝集。
.
2
抗人球法是检测不完全抗体的经典方法， 分为直接试验(直接反应)和间接试验(间 接反应)。
2.新生儿同种免疫溶血病：因Rh血型不合所致溶血 病，直接及间接反应均强阳性，持续数周、换血 输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合 引起 的溶血病，直接常为阴性或弱阳性，间接反 应为阳性.

实验直接抗人球蛋白实验

实验直接抗人球蛋白实验
第10页，共15页。
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须 单克隆IgG抗D血清致敏）
第11页，共15页。
受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对照。 按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC
5％阴性对照RBC
5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
录结果。
第13页，共15页。
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集者直接抗球 蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
第14页，共15页。
注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释放出来。
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白， 以防止假阴性结果。
第9页，共15页。
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min，分离血 浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份的压积红细胞 各5滴混匀，备用； 2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积的单克隆 IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min； 3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍体积的 NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制成约5％的致敏红 细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备用
——直接抗人球蛋白试验阳性
第3页，共15页。
致敏红细胞
抗人球蛋白直ຫໍສະໝຸດ 抗人球蛋白试验第4页，共15页。
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗- C3

抗人球蛋白试验ppt课件

抗人球蛋白试验ppt课件
抗人球蛋白试验
马强虎
1
1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs） 等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验 ，即抗人球蛋白试验。别名： Coombs‘试验(库姆 斯试验) 。 Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为 第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗
体，使红细胞凝集。
2
抗人球法是检测不完全抗体的经典方法， 分为直接试验(直接反应)和间接试验(间 接反应)。 直接Coombs试验：是检查被检红细胞上 有无不完全抗体。 间接Coombs试验：是检查血清中游离的 不完全抗体。
15
8.在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴 瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒 、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等， 病人直接反应亦可阳性
9.阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性 发作后用抗补体血清做试验直接反应常为 阳性。
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我们科室Coombs试验已开展，报告方法： 1、接收标本； 2、完成试验； 3、免疫组中免疫手工中报告结果。
自身抗体
直接Coombs试验
7
4.结果解释 阳性：待检标本RBC已致敏IgG不完全抗体
或补体； 阴性：待检标本RBC未致敏不完全IgG抗体
。
8
间接抗人球蛋白试验
间接抗人球蛋白试验原理：
用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不 完全抗体；或用已知的不完全抗体检测红细胞上 相应的抗原。
在37℃条件下，若被检血清或红细胞有对应的不 完全抗体或抗原，则抗原抗体作用使红细胞致敏
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3.药物诱发的免疫性溶血性贫血 ①α-甲基多巴型：直接及间接反应均阳性。 ②青霉素型：直接反应阳性，间接反应阴性 ③福阿亭型：（奎宁等药物）抗体通常为IgM，偶有IgG 型者，直接反应为阳性，间接反应阴性

实验7 直接抗人球蛋白实验

实验7 直接抗人球蛋白实验

学习交流PPT
16
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
学习交流PPT
8
受检标本
红细胞悬液配制：
1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀） 1000g 离心3min 分离上层血浆
2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min）
（注意操作轻柔，防溶血！）
3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
• 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗 IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。
• 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈 阴性反应。
• 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳性。
学习交流PPT
15
实验重点掌握： • 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
学习交流PPT
10
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须单克隆IgG抗D血清致敏）
• 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将未 出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
• 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性。 加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g离心 15s，观察凝集，记录结果。
学习交流PPT
13
结果判定

实验7 直接抗人球蛋白实验

进一步分析。
学习交流PPT
5
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
学习交流PPT
6
第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
学习交流PPT
7
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
实验七 直接抗人球蛋白试验
学习交流PPT
1
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
学习交流PPT
2
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
学习交流PPT
11
受检者标本检测
• 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对照。 按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
1
阴性对照 1 1
学习交流PPT
阳性对照
1 1
12
受检者标本检测
• 混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。
学习交流PPT
16
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
学习交流PPT
14
注意事项
• 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释 放出来。
• 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白， 以防止假阴性结果。

实验直接抗人球蛋白实验优秀课件


致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗
- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
实验直接抗人球蛋白实验优秀 课件
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
——直接抗人球蛋白试验阳性
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。

实验7 直接抗人球蛋白实验

❖ 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将 未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
❖ 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
2021/6/16
13
结果判定
2021/6/16
9
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
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结束语
若有不当之处，请指正，谢谢！
进一步分析。
2021/6/16
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直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
2021/6/16
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第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
2021/6/16
7
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
2021/6/16
8
受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）

实验7直接抗人球蛋白实验


注意事项：避免干扰因素， 确保实验准确性
解读方法：结合临床资料， 综合分析结果
直接抗人球蛋白实 验的局限性
直接抗人球蛋白实验的局限性之一是可能出现假阳性结果，即错误地将正常红细胞判定为阳性。 假阳性结果可能是由于抗体与红细胞结合的亲和力不足或抗体浓度过高导致。 抗体与红细胞结合的亲和力不足可能导致实验结果不稳定，容易出现假阳性或假阴性。 抗体浓度过高可能导致非特异性结合增加，从而产生假阳性结果。
直接抗人球蛋白实 验的步骤
采集静脉血液样本 避免溶血和污染
分离血清或血浆 记录样本信息
准备试剂和器材： 确保所需的试剂 和器材已经准备 好，包括抗人球 蛋白抗体、离心
机、试管等。
样本处理：将 待检测的样本 进行离心处理， 分离出血浆和
红细胞。
抗体孵育：将 抗人球蛋白抗 体与离心后的 红细胞混合， 孵育一定时间。
红细胞上的抗原与特异性抗体结合后，可引起红细胞凝集，出现阳性反应。
未结合抗体的红细胞不会发生凝集，呈现阴性反应。
通过观察凝集程度，可以判断待测血清中抗体的含量。
直接抗人球蛋白实验的原理是利用抗原抗体反应的特异性，将抗人球蛋白抗体与待测血清中的红细胞结合，观察 是否发生凝集反应。 抗人球蛋白抗体与红细胞上相应的抗原结合后，可引起红细胞凝集，从而判断待测血清中是否存在相应的抗体。
正确使用试剂：使用经 国家药品监督管理局批 准的合格试剂，确保实 验结果的准确性。
标准化操作：严格按 照试剂盒说明书进行 操作，避免操作过程 中的人为误差。
避免交叉污染：在实验 过程中，要确保不同样 本之间的交叉污染，以 免影响实验结果。
阳性结果：可能存在自身 抗体
阴性结果：不能完全排除 自身抗体存在
直接抗人球蛋白实 验的局限性之一是 可能出现假阴性结 果。
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受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
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人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
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未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
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受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
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结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
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注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释 放出来。
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋 白，以防止假阴性结果。
❖ 离心时间和离心力要按标准操作。 ❖ 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗
实验七 直接抗人球蛋白试验
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第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
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直接抗人球蛋白试验原理 ： 直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被
不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的细胞相互连接起来出现凝集现象。
——直接抗人球蛋白试验阳性
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致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
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抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗
- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
进一步分析。
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直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
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第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
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直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
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阴性对照 1 1
阳性对照
1 1
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受检者标本检测
❖ 混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。
❖ 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将 未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
❖ 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 ❖ 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈
阴性反应。 ❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳性
。
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实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
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