抗球蛋白试验标准操作规程
一、目的
规范抗球蛋白的技术操作，保证鉴定结果准确有效。
二、适用范围
输血科日常抗球蛋白试验。
三、原理
本试验是一种检测血清中不完全血型抗体的方法。即用已知抗原的红细胞测定受检 血清中相应的不完全抗体，或用已知抗血清测定受检红细胞上相应抗原。此法可用于鉴定血型和检查血清中不完全抗体、输血前交叉配血试验及其他特殊研究。
四、设备与试剂
试剂：
（1）抗人球蛋白血清
（2）受检血清 （或已知抗体的血清）
（3）5 ％已知抗原的红细胞悬液 （或5 ％受检红细胞悬液）
（4）不完全抗D 血清
（5）AB 型血清
（6）5 ％阳性红细胞悬液
设备：普通离心机，血型血清学专用离心机，显微镜。
五、步骤和方法
1．方法
（1） 取试管3 支，标明受检管、阳性对照及阴性对照。
（2） 按下表将各反应物加入相应试管内。
反应物 受检者 阳性对照 阴性对照
血清（已知或受检） 2滴 — —
5%红细胞悬液（已知或受检） 1滴 — —
不完全抗D 血清 — 2 —
AB型血清 — — 2
5%阳性红细胞悬液 — 1 1
（3） 混匀，置37 ℃水浴1 小时，用生理盐水洗涤3 次。末次洗涤后，将上清液除尽，并用滤纸将附着于管口的盐水吸去，每管各留红细胞悬液1 滴。
（4） 每管各加适当浓度抗人球蛋白血清1 滴，混匀，以1000r／min 离心1min ，观察结果。
（5） 结果判定。阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管出现凝集者为阳性，表示受检血清中有不完全抗体（或受检红细胞上有相应抗原），如阳性或阴性对照出现不规则结果应分析原因。
（6） 效价滴定。如受检血清中检出有不完全抗体，可将受检血清以盐水作倍量稀释后，按上法进行测定。
六、注意事项
（1） 血清与相应红细胞在37 ℃水浴中致敏的时间经研究发现，如致敏1 小时，75 ％ 的抗体吸附于红细胞上，如致敏时间延长达2 小时，抗体吸附达95 ％；如以低离子强度盐水溶液（LISS）代替生理盐水配制5 ％红细胞悬液，则致敏时间可减少，大多数抗体经致敏15 ～30min 即可，但抗Fy 和抗Jk 抗体需较长的孵育时间。
抗人球蛋白配血试验
发表时间：2011-04-18T16:51:06.953Z 来源：《中外健康文摘》2011年第1期 作者： 刘宏扬
[导读] 红细胞表面被大量的IgG抗体分子及补体分子C3、C4的片段所包绕，这些包绕物均为人球蛋白。
刘宏扬（黑龙江哈尔滨市第四医院 150026）
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2011)01-0240-01
【关键词】 抗人球蛋白试验 抗体 血型 检测
1 抗人球蛋白配血法
(1)抗人球蛋白试验原理
红细胞表面被大量的IgG抗体分子及补体分子C3、C4的片段所包绕，这些包绕物均为人球蛋白，不足引起凝集反应，这种红细胞称为致敏红细胞。而抗人球蛋白血清(anti—globulin)，可以与致敏红细胞作用发生凝集，即红细胞表面的人球蛋白与抗人球蛋白血清发生特异性反
应而使红细胞凝集，抗人球蛋白分子起着搭桥作用，从而证明IgG抗体的存在。
(2)材料
1)受血者和供血者血清及5%红细胞悬液(红细胞需洗涤3次)。
2)抗人球蛋白血清(最适稀释度)。
3)抗D血清。
4)AB型血清。
5)5%Rh(D)阳性红细胞悬液。
(3)操作
1)取小试管3支，分别标明主侧管(Ps+Dc)即受血者血清加供血者红细胞，次侧管(Pc+DS)即受血者红细胞加供血者血清，自身对照管
(Ps+Pc)，即受血者血清加受血者红细胞。
2)主侧管内加受血者血清4滴和供血者5%红细胞悬液1滴；次侧管加供血者血清4滴和受血者红细胞悬液1滴；自身对照管内分别加受血者自身血清4滴和自身红细胞悬液1滴。摇匀混合，置37℃水浴30～60分钟，每隔15分钟振摇1次试管，促进反应。
3)取出试管以生理盐水洗涤红细胞3次，末次弃尽盐水。
4)各管内加最适稀释度抗人球蛋白血清2滴混匀。
5)以3 500r/min离心15秒。肉眼观察。
6)同时用抗D血清和AB型血清按上述与Rh(D)阳性红细胞做阳性、阴性对照。
抗球蛋白试验的方法及结果分析
【摘 要】抗球蛋白试验是1945年由Coombs等人建立的，是一种极为敏感的检查不完全抗体的方法，当加入抗该种球蛋白的抗体时，由于球蛋白与抗球蛋白抗体的特异性结合而出现凝集反应，显示出不完全抗体的存在。抗球蛋白试验的建立在血型血清上有着非常重要的意义。
【关键词】抗球蛋白；结果
1原理
红细胞表面包被了IgG抗体分子或补体分子C3、C4的片段，但不能产生凝集现象。IgG抗体和补体都是人球蛋白，用这些人球蛋白免疫动物，或用杂交瘤（hybridoma）技术可以得到抗球蛋白，这类抗体的特异性是针对IgG分子的Fc段或补体C3、C4的片段，可以和包被在红细胞上的抗体分子和补体分子作用，使红细胞发生凝集，抗球蛋白分子起着搭桥的作用。红细胞包被的抗体还可以是IgA或IgM，要用对应的抗IgA和抗IgM才能检出。
2抗球蛋白试剂
①多特异性抗球蛋白试剂 曾经称之为广谱抗球蛋白试剂，试剂中应含有抗IgG和抗C3d。如果用免疫动物制备的抗球蛋白，除抗IgG和抗C3d外，还可能含有抗C3b、抗C4b、抗IgM、抗IgA，但通常活性较低。用杂交瘤制备的单克隆抗体）则比较单一。多特异性抗球蛋白试剂主要用于配血试验和直接抗球蛋白试验，尤其是用于自身免疫性溶血性贫血的直接抗球蛋白试验。②单特异性抗球蛋白试剂 有抗IgG、抗IgM、抗IgA和抗C3、C4的片断，但实际应用的主要是抗IgG和抗C3d。
3方法
3.1直接抗球蛋白试验
直接抗球蛋白试验是用来检测体内被抗体或（和）补体致敏的红细胞。标本必须是抗凝血样，避免血液离体后被补体致敏，造成假阳性。操作时在小试管内加5%红细胞标本1滴，用足量生理盐水洗涤3～4次，每次倾到盐水要沥干，然后按试剂说明书加1～2滴最适浓度的多特异性抗球蛋白试剂，混匀后以1000转/分离心1分钟，立即轻轻摇起读取结果。如为阳性，用单特异性抗球蛋白再分型；如不凝集，置室温5分钟，再离心观察结果，如为阳性，是抗补体的反应结果。如两种情况都是阴性，要在反应试管中加1滴试剂对照细胞，即已被IgG和C3包被的红细胞，混匀后立即离心观察结果。如对照细胞阳性，上述阴性结果可靠。如对照细胞阴性，则阴性结果不可靠，可能是洗涤不成功，或抗球蛋白试剂失效。
间接抗人球蛋白试验（IAT）标准操作规程
1.目的 用于检测红细胞在体外是否被致敏
2.适用范围 常用于交叉配血、血型鉴定、抗体筛选和鉴定。
3.所需仪器和材料 离心机、水浴箱、抗球蛋白试剂等。
4.执行标准 《临床检验操作规程》。
5.原理 红细胞在体外与相应的抗体和(或)补体致敏后，将抗人球蛋白血清加入已致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面被结合的抗体球蛋白与抗球蛋白试剂发生特异性反应，使红细胞发生凝集而判断出红细胞表面是否含有被致敏的抗体或补体。
6.操作程序
⑴取小试管2支，分别标明主侧和次侧，主侧管加受血者血清0.1ml和供血者5%红细胞悬液0.1ml，次侧管加供血者血清0.1ml和受血者5%红细胞悬液0.1ml.
⑵混匀后，置37℃孵育45-60分钟（致敏），取出后，两管用生理盐水洗涤红细胞3-4次，每次离心后倾干上清液。
⑶加最适稀释度抗球蛋白血清1滴，混匀，1000r/min,离心1分钟，观察结果。
⑷阳性对照:2%抗-D抗体致敏的Rh阳性红细胞悬液0.05ml加抗球蛋白血清0.05ml,阴性对照：5% O型红细胞悬液0.05ml加抗球蛋白血清0.05ml,盐水对照（2管）:供血者5%红细胞盐水悬液0.05ml加等渗0.05ml；受血者5%红细胞盐水悬液0.05ml加等渗盐水0.05ml.
⑸结果判断：阳性对照管凝集，阴性、盐水对照管不凝集，主侧、次侧配血管都不凝集也无溶血，表示无输血禁忌，可以输血。主、次测有一测有凝集或溶血，表示有输血禁忌，不能输血。
7.注意事项 配血标本必须用EDTA抗凝，避免血液离体后被补体致敏导致假阳性；孵育后受血者和献血者的红细胞应用足量生理盐水洗涤3-4次，每次倾倒盐水应沥干。
