河蚬提取物对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用

药物研究　２００９年第ｌ８卷第ｌ期　

河蚬提取物对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用　

景金柱，崔哲，张秀梅，孙志坡　

（河北大学药学院，河北保定０７１００２）　

摘要：目的研究河蚬提取物对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用。方法采用灌胃给予乙醇或腹腔注射四氯化碳（ｃｃｌ　）方法制备小鼠急性　化学性肝损伤模型，检测血清丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）和天门冬氨酸氨基转移酶（ＡｓＴ）活性、肝脏指数。结果连续６　ｄ灌胃给予１５．０，　

３０．０，６０．０　ｍｇ／（ｋｇ。ｄ）的河蚬提取物能明显抑制肝损伤小鼠血清ＡＩ｜ｒｒ及ＡｓＴ活性的升高（Ｐ＜０．Ｏ５），降低增加的肝脏指数。结论河蚬提　取物对四氯化碳及乙醇引起的小鼠急性肝损伤具有保护作用。　关键词：河蚬；四氯化碳；乙醇；肝损伤　

中图分类号：Ｒ２８５．５；Ｒ２８４．７４　文献标识码：Ａ　文章编号：１ＯＯ６—４９３ｌ（２ｏ０９）Ｏ１一ＯＯＯ６一Ｏ２　

Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｅｘｔｒａｃｔ　０ｆ　Ｃｏｒｂｉｃｕｌａ　Ｆｌｕｍｉｎｅａ　ｏｎ　Ａｃｕｔｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ—Ｉｎｄｕｃｅｄ　Ｌｉｖｅｒ　Ｉｎｉｕｒｙ　Ｍｉｃｅ　

，　ｔ，　，　，Ｃ　Ｚ　ｅ，Ｚ　ｒ上，ｌｇ　ｌ上，ｎｅ　，Ｓ『上ｎ　Ｚ　ｐｏ　（　ｚｆ　ｎｒｍ㈣ｕ　ｃ　Ｓｃ　ｅ　ｓ，　６ｅ　曰ｎ０ｄ　，　ｎ０　Ｄ７　０Ｄ２）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ｏｂ　ｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｖ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｌｆｅｃｔ　０ｆ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｃｏｒｈｉｃｕｌａ　ｎｕｍｉｎｅａ　ｏｎ　ａｃｕｔｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ—ｉｎｄｕｃｅｄ　１ｉｖｅｒ　ｉｎｉｕｒｙ　ｍｉｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　Ｉｎｊｕｒｅｄ　１ｉＶｅｒ　ｍｏｄｅｌｓ　ｗｅＩｌｅ　ｍａｄｅ　ｂｙ　ｉｎｊｅｃｔｉｎｇ　ｃａｒｂ０ｎ　ｔｅｔｒａ（　ｈｌｏｒｉｄｅ（ＣＣｌ４）　ｉｎｔＩ＿ａｐｅｒｉｔ０ｎｅａｌｌｙ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｗｉｔｈ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｂｙ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｇａｖａｇｅ．　

Ｉｌｈｅ　ｌｅＶｅｌｓ　ｏｆ　ｓｅｍｍ　ａｌａｎｉｎｅ　ａｍｉｎ０ｔｆａｎｓ　ｒａｓｅ（ＡＬＴ），ａｓｐａｒｔａｔｅ　ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｆａｓｅ（ＡＳＴ）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｉｖｅｒ　ｗｅ　ｈｔ　ｉｎｄｅｘ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ．ＲｅｓｕＩｔｓ　Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　０ｆ　ｃｏｒｂｉｃｕｌａ　ｆｌｕｍｉｎｅａ　ｌ０ｗｅｒｅｄ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　０ｆ　ＡＩ　ａｎｄ　ＡｓＴ　ｉｎ　ｓｅｒｕｍ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）　ａｎｄ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｔｈｅ　ｅｎｌａＩｇｅｄ　ｌｉｖｅｒ　ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　０ｒａｌ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｄｏｓａｇｅｓ　ｗｅｒｅ　１５．０，３０．０　ａｎｄ　６０．０　ｍｇ／（ｋｇ’ｄ）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ　ｆ０ｒ　ｃ０ｎｓｅｃｕｔｉｖｅ　６　ｄ．ＣｏｎｃＩｕｓｉ０ｎ　Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｃｏｒｂｉｃｕｌａ　ｆ１ｕｍｉｎｅａ　ｃｏｕ１ｄ　ｐｍｔｅｃｔ　ｔｈｅ　１ｉｖｅｒ　ｆｌｒ０ｍ　ａｃｕ￡ｅ　ｊ　ｕｒｙ　ｂｙ　ＣＣｌ４　ａｎｄ　ｅｔｈａｎ０１．　

：Ｉ【ｅｙ　ｗｏｒｄ　：ｃｏｒｂｉｃｕｌａ　ｎｕｍｉｎｅａ；ｃａｒｂｏｎ　ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ；ｅｔｈａｎｏ１；ｌｉｖｅｒ　ｉｎｊｕｒｙ　

河蚬（ｃ０ｒｈｉｃｕｌａ　ｎｕｍｉｎｅａ）又称黄蚬、金蚶、扁螺等，为双壳类软　体动物，广泛分布于湖泊、江河中，是我国重要经济贝类之一。河蚬　

作为中药药材，有祛湿毒、治肝病及麻疹、退热等功效…。河蚬提取　物具有增强巨噬细胞吞噬活性的作用　。笔者通过建立四氯化碳　（Ｃｃｌ　）和乙醇肝损伤模型，对河蚬提取物的保肝作用进行了实验　

研究。　１　试验材料　

药物与试剂：河蚬提取物（乳白色粉末，本实验室自制），益肝　

灵片（每片含水飞蓟宾３８．５　ｍｇ，批号为０７０３０５，山东康威药业有　限公司），使用时均用蒸馏水配制成所需质量浓度的药液，置４℃　备用；四氯化碳（分析纯，５００　ｍＬ，莱阳市双双化工有限公司，批号　

为２ｏ０７０４０５），使用时用注射用玉米油稀释成０．５％的浓度；无水　乙醇（分析纯，烟台市化工有限公司，批号为２０Ｏ７０９Ｏ６），使用时用　

蒸馏水稀释成５５％的浓度。血清丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）试剂盒　（批号为Ｏ７２５０２），天门冬氨酸氨基转移酶（ＡＳＴ）试剂盒（批号为　

０７２５０６），均由北京中生生物工程高技术公司提供。　动物与仪器：昆明种小鼠，雌雄兼用，合格证号为ｓｃｘＫ（冀）　２００３一ｌ一００３，由河北省实验动物中心提供。实验动物使用许可证　

号为ＳＹｘＫ（冀）２００７一ｏ００１，饲养环境为温度２０～２５℃，湿度　４０％～７０％，风速０．１～０．２　ｍ／ｓ，气流≥２８次／ｈ；饲料由河北省实　

验动物中心提供，合格证号为ｓｃｘＫ（冀）２ｏ０３～２—０【）１。７１８０型全　自动生化分析仪（日本日立公司）。　

２方法与结果　２．１　对乙醇致小鼠急性肝损伤的影响　

取体重为２２～２４　ｇ的雌性小鼠６０只，随机分为６组：正常对　照组（Ａ组），模型对照组（Ｂ组），益肝灵阳性对照组（Ｃ组），河蚬提　

取物大剂量组（Ｄ　组）、中剂量组（Ｄ：组）、小剂量组（Ｄ，组）。均灌胃　

给药，给药容积为２５　ｍＬ／ｋｇ体重。Ａ组及Ｂ组给予等容积蒸馏水，　连续给药６　ｄ。于第６天给药后５　ｈ，除Ａ组外，均灌胃给予５５％乙　

醇１５　ｍｇ／　。于末次给药后２４　ｈ，摘眼球取血（取血前禁食１６　ｈ），　

・６・　分离血清测定Ａ　及ＡｓＴ，同时剖取肝脏，称重后计算肝脏指数，　比较组间差异。结果见表１，可见，河蚬提取物在１５．Ｏ～６Ｏ．Ｏｍｇ／ｋｇ　剂量下，能够明显抑制乙醇所致的动物血清ＡＬＴ及ＡｓＴ升高，同　时可降低肝脏指数，说明河蚬提取物在本试验剂量范围内对乙醇　

所致急性肝损伤具有明显的保护作用。　２．２　对ＣＣＩ　致小鼠急性肝损伤的影响　

取体重为２２～２４　ｇ的小鼠（雄性）６Ｏ只，分组及给药方法同　２．１项，连续给药６　ｄ。于第６天给药后６　ｈ，除Ａ组外，均腹腔注射　

给予０．１％ｃｃＬ　１０　ｍｇ／　，于末次给药后２４　ｈ，摘眼球取血（取血前　禁食ｌ６　ｈ），分离血清测定ＡＬＴ及ＡＳＴ，同时剖取肝脏，称重后计算　肝脏指数，比较组问差异。结果见表ｌ。给予ｃｃｌ４后，Ｂ组小鼠血清　

Ａ　及ＡｓＴ水平明显升高，肝脏指数明显增加，而河蚬提取物在　ｌ５．０～６Ｏ．０ｍｇ／　剂量范围内可使动物血清ＡＬＴ及ＡｓＴ水平、肝　

脏指数明显降低，与Ｂ组比较差异显著，说明河蚬提取物对ＣＣｌ４所　致小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用。　

表１河蚬提取物对乙醇或ＣＣｋ所致，Ｊ、鼠急性肝损伤的影响（　：ｌＯ．　±ｓ）　圳　乙醇所致急性肝损伤　ＣＣｌ　所致急性肝损伤　ＡＬＴ（ｕ儿）　Ａ　（ｕ儿）　肝脚撤【　∞ｇ体重）　ＡｆｌＴ【Ｌ儿）　Ａ盯（ｕ儿）　肝麟教　００ｇ体重　

注：与Ａ组比较，　Ｐ＜０　０５，　Ｐ＜０　Ｏ１；与Ｂ组比较，　Ｐ＜０　Ｏ５，‘Ｐ（Ｏ．０１。　

３　讨论　试验结果显示，河蚬提取物对乙醇、ｃｃ１　所致急性化学性肝损　

伤小鼠的血清Ａ１　及ＡｓＴ升高有明显的预防性抑制作用，对急性　化学性肝损伤有明显的保护作用。乙醇可使小鼠肝和血清中的一　

些酶水平发生明显的改变…，如乙醛脱氢酶（ＡＬＤＨ）、超氧化物歧　

中国药业　口　

ｎ删口ｃｅＨ疵口　２０（１９年第１８卷第ｌ期　药物研究　

促黄体生成激素释放激素拮抗类似物的分离纯化研究　

刘苗苗　

（天津市计划生育研究所药物室，天津　３００１９１）　

摘要：目的采用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法分离纯化促黄体生成激素释放激素（ＬＨＲＨ）枯抗类似物。方法制备型色谱柱为Ｄｙｎａｍａｘ一３００Ａ　型ｃｌ　８柱（２５Ｏ　ｍｍ×４．１４　ｍｍ，５　ｍ），分析型色谱柱为Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ型Ｃ，８柱（２５０　ｍｍ×５　ｍｍ，５　ｍ）；流动相Ａ为含０．１％三氟醋酸和３％乙腈　

的水溶液（ｐＨ：２），流动相Ｂ为含７Ｏ％乙腈的水溶液；流速为４０　ｍＬ／ｍｉｎ（用于分离）和１．２　ｍＬ／ｍｉｎ（用于分析）；检测波长为２２０　ｎｍ。结果　ＬＨＲＨ拮抗类似物纯品的产率可达２２％～５２％，纯度高达９７％～９９％，分离度大于１．５。结论ＨＰＬＣ法分离纯化的ＬＨＲＨ拮抗类似物纯　

品产率大，纯度高，且该法操作简便、快捷。　

关键词：高效液相色谱法；分离纯化；促黄体生成激素释放激素拮抗类似物　中图分类号：Ｒ９１４：Ｒ９７８．１　６　文献标识码：Ａ　文章编号：ｌＯ０６—４９３ｌ（２０Ｏ９）Ｏｌ二００Ｏ７—０２　

Ｓｔｕｄｙ　０ｎ　ＳｅｐａｒａｔｉＯｎ　ａｎｄ　ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉＯｎ　Ｏｆ　ＬＨＲＨ　Ａｎｔａｇ０ｎｉｓｔｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　

“　Ⅱｏ，ｎ　ｒ上ｏ　ｆ　。　几肘“ｎ　。ｆ　ｅ８ｒｃ＾　胁“把＿厂０ｒ　Ｆ０ｍ　Ｐ２０肌　，　Ⅱ　ｎ，　。　３０Ｄ　９』Ｊ　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ｏｂ　ｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｑｕｉＩｌｅ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｕｎｅｉｎｉｚｉｎｇ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｈｏｒｍｏｎｅ　（ＬＨＲＨ）　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ　ｂｙ　

ＨＰＬＣ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＨＰＬＣ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ．Ｔｈｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ　ｔｙｐｅ　ｃｏｌｕｍｎ　（Ｄｙｎａｍａｘ一３００Ａ　Ｃ】８，２５０　ｍｍ×４．１４　ｍｍ，５　ｍ）　ａｎｄ　ａｎａｌｙｔｉｃａ１　ｔｙｐｅ　ｃｏｌｕｍｎ　（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　Ｃｌ８，２５０　ｍｍ×５　ｍｍ，５　ｍ）；ｔｈｅ　ａｑｕｅ０ｕｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　１％　ｔｒｉｎｕｏＩ＿ｔ】ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　３％　ａｃｅｔ０ｎｉｌｅ　ａｓ　ｔｈｅ　ｍ０ｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　Ａ（ｐＨ＝２），　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　７０％　ａｃｅｔｏｎｉ１ｅ　ａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　Ｂ；ｔｈｅ　ｎｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　４Ｏ．０　ｍＬ／ｍｉｎ　（ｆｎｒ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）　ａｎｄ　１．２　ｍＬ／ｍｉｎ　（ｆ０ｒ　

ａｎａｌｙｓｉｓ），ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃ【ｉｎｇ　ｗａｖｅ１ｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　２２０　ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｐｒ０ｄｕｃｔ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｗａｓ　２２％一５２％　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｕｒｉｔｙ　ｗａｓ　９７％一　９９％，ｔｈｅ　ｒｅｓｏ１ｕｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｌａｒｇｅ　ｔｈａｎ　１．５．Ｃ０ｎｃｌｕｓｉ０ｎ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｆａｓｔ．Ｔｈｅｒｅｆｂｒｅ　ＬＨＲＨ　ａｎｔａｇ０ｎｉｓｔｓ　ｃａｎ　ｂｅ　ｗｅｌｌ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｂｙ　

ｔｈｅ　ｗａｙ　０ｆ　ＨＰＬＣ．　

Ｋｅ１ｒ、ｖ０ｒｄｓ：ＨＰＬＣ；ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ—ｐｕ　ｒｊｆｉｃａｔｉ０ｎ；ＬＨＲＨ　ａｎｔａｇ０ｎｉｓｔｓ　

自１９７１年阐明促黄体生成激素释放激素（ＬＨＲＨ）的结构（Ｐ—　Ｇｌｕ—Ｈｉｓ—Ｔ　ｐ—ｓｅｒ—Ｔｙｒ—Ｇｌｙ—Ｌｅｕ—Ａｒｇ—Ｐｍ—Ｇｌｙ—ＮＨ２）以来，　

相继又合成了数以千计不同氨基酸取代的ＬＨＲＨ类似物，特别是　非天然氨基酸取代的拮抗类似物的研究为抗生育及治疗内分泌紊