蜂胶对乙醇所致化学性肝损伤的保护作用研究
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文章编号:1006-3110(2010)06-1207-03
蜂胶对乙醇所致化学性肝损伤的保护作用研究
戴伟1,尹晓晨2
摘要:目的研究蜂胶对乙醇所致化学性肝损伤的保护作用。方法取雄性昆明种小鼠50只,随机分为5组:
空白对照组、肝损伤模型对照组、蜂胶低、中、高剂量组,实验末用乙醇给小鼠经口一次灌胃,造成急性肝损伤模型。用试
剂盒检测肝组织中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH),全自动生化分析仪测定肝组织中甘油三酯(TG)的含量,病理
检测小鼠肝脏组织脂肪改变的程度。结果蜂胶高剂量组动物的肝脏TG明显低于模型对照组,肝脏GSH明显高于模
型对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。蜂胶高剂量组动物的肝脏脂肪改变程度明显低于模型对照组,差
异有统计学意义(P<0.01)。结论蜂胶对乙醇所致化学性肝损伤具有保护功能。
关键词:蜂胶;化学性肝损伤;MDA;GSH;TG
中图分类号:R-332文献标识码:A
StudyonProtectiveActionofPropolisonChemical-inducedLiverInjuryCausedbyEthanolDAIWei,YINXiao-chen
(InstitutionServiceBureau,MinistryofHealth,thePeoplesRepublicofChina,Beijing,100044,China)
Abstract:ObjectiveTostudytheprotectiveeffectofpropolisonchemical-inducedliverinjuredbyethanol.Meth
odsFiftymaleKunmingmiceweredividedinto5groupsrandomly:blankcontrolgroup,modelcontrolgroupwithhepaticin
jury,low-,middle-andhigh-dosepropolisgroups.Ethanolwasgiventomicebyoralgavageonceinordertomakethe
acuteliverinjurymodelattheendofexperiment.ThecontentofMDAandGSHinhepatictissuewasdetectedbykit.Thecon
tentofTGinhepatictissuewasdetectedbyautomaticbiochemistryanalyzerandthepathologicalchangeoffatinhepatictis
suewasdetermined.ResultsThecontentofTGinhigh-dosepropolisgroupwassignificantlylowerthanthatinmodel
controlgroup,whilethecontentofGSHinhigh-dosepropolisgroupwassignificantlyhigherthanthatofmodelcontrolgroup,
andthedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05orP<0.01).Thepathologicalchangeoffatinhepatictissueinhigh
-dosepropolisgroupwassignificantlylessthanthatofmodelcontrolgroup,andtherewerestatisticallysignificantdifferenc
esbetweenthetwogroups(P<0.01).ConclusionsPropolishasthefunctionofprotectingtheliverfromchemical-in
ducedinjurycausedbyethanol.
Keywords:Propolis;Chemical-inducedliverinjury;MDA;GSH;TG
蜂胶(Propolis)是蜜蜂采集植物的树胶,并混入其上颚腺
分泌物和蜂蜡经蜜蜂咀嚼调制而成的一种胶状物质,共有300
多种化合物,有丰富的黄酮类化合物、萜类、芳香酸与芳香酸
酯、氨基酸等药理活性成分[1]。国外医学研究表明,蜂胶无毒
副作用,具有抗菌、抗病毒、抗溃疡、抗炎、局部麻醉、降血压、增
强免疫力、抗肝瘤等多种药理作用[2]。笔者通过建立乙醇急性
肝损伤模型,对蜂胶的保肝作用进行了实验研究。
1材料与方法
1.1实验动物与分组SPF级雄性昆明种小鼠50只,体重18
~22g,由河南省实验动物中心提供。随机分为5组:空白对照
组、肝损伤模型对照组、蜂胶低、中、高剂量组分别为0.20、
0.40、1.20gkg bw(分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍)。
1.2试剂与主要仪器蜂胶胶囊由某生物科技有限公司提
作者单位:1中华人民共和国卫生部机关服务局(北京100044);2湖南省疾病预防控制中心毒理科供,人体口服推荐量为每日2.4g,成人体重按60kg计算,折合
剂量0.04gkg bw。丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)测
试盒由南京建成生物工程研究所提供,甘油三酯(TG)测试盒由
上海复星长征医学科学有限公司提供。OLYMPUSAU400全
自动生化分析仪、722分光光度计、加样器、恒温水浴锅、离心
机、混悬器、组织匀浆器。
1.3实验方法
1.3.1动物处理各剂量组按1.1灌胃给予受试液,空白对
照组、模型对照组灌胃给予植物油,每日1次,连续30d,灌胃体
积为0.1ml10g bw。第30d各剂量组和模型对照组灌胃给
予50%乙醇(12mlkg bw),造成急性肝损伤模型,空白对照组
灌胃给予等体积植物油。禁食16h处死动物,进行各项指标检
测及病理组织学检查。
1.3.2指标检测取肝脏用生理盐水制成10%的肝匀浆,检
测肝组织中还原型谷胱甘肽(GSH)和甘油三酯(TG)的含量。
另取肝脏用0.2M磷酸盐缓冲液制成5%肝匀浆,检测肝组织1207实用预防医学2010年6月第17卷第6期PracticalPreventiveMedicine,Jun.2010,Vol17,No.6中丙二醛(MDA)含量。肝组织内GSH、MDA含量按南京建成
生物工程研究所提供的测试盒说明书进行,肝组织内TG含量
用OLYMPUSAU400全自动生化分析仪测定。
1.3.3病理组织学检查从小鼠肝左叶中部做横切面取材,
冰冻切片,苏丹!染色。镜检时从肝脏的一端视野开始记录细
胞的病理变化,用40倍物镜连续观察整个组织切片,观察脂滴
在肝脏的分布、范围和面积,并按以下标准进行评分:0分,肝细
胞内脂滴散在、稀少;1分,含脂滴的肝细胞不超过14;2分,含
脂滴的肝细胞不超过12;3分,含脂滴的肝细胞不超过34;4
分,肝组织几乎被脂滴代替。
1.4实验数据统计用SPSS11.0软件进行统计分析,先对数
据进行方差齐性检验,若方差齐,采用单因素方差分析进行总
体比较,发现差异再用Dunnett法进行各剂量组、空白对照组与
一个模型对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对原始数
据进行适当的变量转换,满足方差齐性检验后,用转换后的数
据进行统计;若变量转换后仍未达到方差齐的目的,改用秩和
检验进行统计,发现总体比较有差异,则采用不要求方差齐性
的TamhanesT2检验进行两两比较。
2结果
2.1蜂胶胶囊对动物体重的影响见表1。各剂量组体重与
模型对照组及空白对照组比较,差异均无统计学意义(P>
0.05)。表明蜂胶及乙醇急性肝损伤对小鼠体重无明显影响。
表1蜂胶胶囊对小鼠体重的影响(x∀s,g)
分组动物数(只)初始体重中期体重末期体重增重
模型对照1019.89∀1.0929.92∀2.0635.80∀2.5015.91∀1.86
空白对照1019.91∀1.0530.07∀2.8835.25∀4.0515.34∀3.19
低剂量组1019.98∀1.0230.72∀2.0236.81∀2.3716.83∀2.02
中剂量组1020.00∀1.0831.55∀1.5537.12∀2.5017.12∀2.31
高剂量组1020.05∀1.0531.13∀2.2636.54∀2.7316.49∀2.04
表2蜂胶胶囊对小鼠肝组织内MDA、GSH、TG含量的影响(x∀s)
分组动物数(只)MDA含量(molg肝)GSH含量(molg肝)TG含量(mmolg肝)
模型对照101.77∀0.44*9.43∀4.56*0.0325∀0.0051*
空白对照100.96∀0.2123.50∀4.420.0190∀0.0043
低剂量组101.64∀0.4011.30∀5.720.0287∀0.0062
中剂量组101.53∀0.4913.76∀5.410.0265∀0.0058
高剂量组101.51∀0.3515.12∀3.88#0.0236∀0.0063#
注:*与空白对照组比较P<0.01,#与模型对照组比较P<0.05
或P<0.012.2蜂胶胶囊对肝组织中MDA、GSH、TG含量的影响见表2。模型对照组的MDA、TG均高于空白对照组,模型对照组的
GSH低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.01),说明肝
损伤模型成立。高剂量组的TG明显低于模型对照组,GSH明
显高于模型对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<
0.01)。表明高剂量的蜂胶具有降低乙醇性损伤的小鼠的肝组
织TG含量、升高GSH含量的作用。
2.3蜂胶胶囊对肝组织病理的影响见表3。模型对照组肝
脏脂肪改变的程度高于空白对照组,差异有统计学意义(P<
0.01),表明肝损伤模型成立;高剂量组肝脏脂肪改变的程度明
显低于模型对照组,差异有统计学意义(P<0.01),表明蜂胶具
有减轻乙醇性肝损伤的小鼠肝组织脂肪变性的作用。
表3蜂胶胶囊对小鼠肝脏组织脂肪改变程度的影响
分组动物数(只)各级病变动物数
0分1分2分3分4分改变程度积分(x∀s)
模型对照10000463.60∀0.52
空白对照10640000.40∀0.52
低剂量组10001633.20∀0.63
中剂量组10002623.00∀0.67
高剂量组10004512.70∀0.67#
注:#与模型对照组比较P<0.01
3讨论
急性酒精性肝损伤的机制是大量乙醇一次性进入机体后,
在乙醇脱氢酶的催化下大量脱氢氧化为乙醛和乙酸盐,使三羧
酸循环障碍和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢。MDA是脂质
过氧化的最终产物,MDA含量的增多可表明脂质过氧化反应
增强。GSH是一种抗氧化剂,是GSH-Px的底物,GSH-Px
是一种含硒的酶蛋白,能有效地还原有机氢过氧化物自由基
(ROOH)生成相应醇,能阻断或减轻ROOH所致的脂质过氧化