蜂胶对乙醇所致化学性肝损伤的保护作用研究

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文章编号:1006-3110(2010)06-1207-03

蜂胶对乙醇所致化学性肝损伤的保护作用研究

戴󰀁伟1,尹晓晨2

󰀁󰀁摘要:󰀁目的󰀁研究蜂胶对乙醇所致化学性肝损伤的保护作用。󰀁方法󰀁取雄性昆明种小鼠50只,随机分为5组:

空白对照组、肝损伤模型对照组、蜂胶低、中、高剂量组,实验末用乙醇给小鼠经口一次灌胃,造成急性肝损伤模型。用试

剂盒检测肝组织中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH),全自动生化分析仪测定肝组织中甘油三酯(TG)的含量,病理

检测小鼠肝脏组织脂肪改变的程度。󰀁结果󰀁蜂胶高剂量组动物的肝脏TG明显低于模型对照组,肝脏GSH明显高于模

型对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。蜂胶高剂量组动物的肝脏脂肪改变程度明显低于模型对照组,差

异有统计学意义(P<0.01)。󰀁结论󰀁蜂胶对乙醇所致化学性肝损伤具有保护功能。

关键词:󰀁蜂胶;化学性肝损伤;MDA;GSH;TG

中图分类号:R-332󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁文献标识码:A

StudyonProtectiveActionofPropolisonChemical-inducedLiverInjuryCausedbyEthanol󰀁DAIWei,YINXiao-chen

(InstitutionServiceBureau,MinistryofHealth,thePeople󰀂sRepublicofChina,Beijing,100044,China)

Abstract:󰀁Objective󰀁Tostudytheprotectiveeffectofpropolisonchemical-inducedliverinjuredbyethanol.󰀁Meth󰀁

ods󰀁FiftymaleKunmingmiceweredividedinto5groupsrandomly:blankcontrolgroup,modelcontrolgroupwithhepaticin󰀁

jury,low-,middle-andhigh-dosepropolisgroups.Ethanolwasgiventomicebyoralgavageonceinordertomakethe

acuteliverinjurymodelattheendofexperiment.ThecontentofMDAandGSHinhepatictissuewasdetectedbykit.Thecon󰀁

tentofTGinhepatictissuewasdetectedbyautomaticbiochemistryanalyzerandthepathologicalchangeoffatinhepatictis󰀁

suewasdetermined.󰀁Results󰀁ThecontentofTGinhigh-dosepropolisgroupwassignificantlylowerthanthatinmodel

controlgroup,whilethecontentofGSHinhigh-dosepropolisgroupwassignificantlyhigherthanthatofmodelcontrolgroup,

andthedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05orP<0.01).Thepathologicalchangeoffatinhepatictissueinhigh

-dosepropolisgroupwassignificantlylessthanthatofmodelcontrolgroup,andtherewerestatisticallysignificantdifferenc󰀁

esbetweenthetwogroups(P<0.01).󰀁Conclusions󰀁Propolishasthefunctionofprotectingtheliverfromchemical-in󰀁

ducedinjurycausedbyethanol.

Keywords:󰀁Propolis;Chemical-inducedliverinjury;MDA;GSH;TG

󰀁󰀁蜂胶(Propolis)是蜜蜂采集植物的树胶,并混入其上颚腺

分泌物和蜂蜡经蜜蜂咀嚼调制而成的一种胶状物质,共有300

多种化合物,有丰富的黄酮类化合物、萜类、芳香酸与芳香酸

酯、氨基酸等药理活性成分[1]。国外医学研究表明,蜂胶无毒

副作用,具有抗菌、抗病毒、抗溃疡、抗炎、局部麻醉、降血压、增

强免疫力、抗肝瘤等多种药理作用[2]。笔者通过建立乙醇急性

肝损伤模型,对蜂胶的保肝作用进行了实验研究。

1󰀁材料与方法

1.1󰀁实验动物与分组󰀁SPF级雄性昆明种小鼠50只,体重18

~22g,由河南省实验动物中心提供。随机分为5组:空白对照

组、肝损伤模型对照组、蜂胶低、中、高剂量组分别为0.20、

0.40、1.20g󰀁kg bw(分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍)。

1.2󰀁试剂与主要仪器󰀁蜂胶胶囊由某生物科技有限公司提

作者单位:1中华人民共和国卫生部机关服务局(北京󰀁100044);󰀁2湖南省疾病预防控制中心毒理科供,人体口服推荐量为每日2.4g,成人体重按60kg计算,折合

剂量0.04g󰀁kg bw。丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)测

试盒由南京建成生物工程研究所提供,甘油三酯(TG)测试盒由

上海复星长征医学科学有限公司提供。OLYMPUSAU400全

自动生化分析仪、722分光光度计、加样器、恒温水浴锅、离心

机、混悬器、组织匀浆器。

1.3󰀁实验方法

1.3.1󰀁动物处理󰀁各剂量组按1.1灌胃给予受试液,空白对

照组、模型对照组灌胃给予植物油,每日1次,连续30d,灌胃体

积为0.1ml󰀁10g bw。第30d各剂量组和模型对照组灌胃给

予50%乙醇(12ml󰀁kg bw),造成急性肝损伤模型,空白对照组

灌胃给予等体积植物油。禁食16h处死动物,进行各项指标检

测及病理组织学检查。

1.3.2󰀁指标检测󰀁取肝脏用生理盐水制成10%的肝匀浆,检

测肝组织中还原型谷胱甘肽(GSH)和甘油三酯(TG)的含量。

另取肝脏用0.2M磷酸盐缓冲液制成5%肝匀浆,检测肝组织1207实用预防医学󰀁2010年6月󰀁第17卷󰀁第6期󰀁PracticalPreventiveMedicine,Jun.2010,Vol17,No.6中丙二醛(MDA)含量。肝组织内GSH、MDA含量按南京建成

生物工程研究所提供的测试盒说明书进行,肝组织内TG含量

用OLYMPUSAU400全自动生化分析仪测定。

1.3.3󰀁病理组织学检查󰀁从小鼠肝左叶中部做横切面取材,

冰冻切片,苏丹!染色。镜检时从肝脏的一端视野开始记录细

胞的病理变化,用40倍物镜连续观察整个组织切片,观察脂滴

在肝脏的分布、范围和面积,并按以下标准进行评分:0分,肝细

胞内脂滴散在、稀少;1分,含脂滴的肝细胞不超过1󰀁4;2分,含

脂滴的肝细胞不超过1󰀁2;3分,含脂滴的肝细胞不超过3󰀁4;4

分,肝组织几乎被脂滴代替。

1.4󰀁实验数据统计󰀁用SPSS11.0软件进行统计分析,先对数

据进行方差齐性检验,若方差齐,采用单因素方差分析进行总

体比较,发现差异再用Dunnett法进行各剂量组、空白对照组与

一个模型对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对原始数

据进行适当的变量转换,满足方差齐性检验后,用转换后的数

据进行统计;若变量转换后仍未达到方差齐的目的,改用秩和

检验进行统计,发现总体比较有差异,则采用不要求方差齐性

的Tamhane󰀂sT2检验进行两两比较。

2󰀁结果

2.1󰀁蜂胶胶囊对动物体重的影响󰀁见表1。各剂量组体重与

模型对照组及空白对照组比较,差异均无统计学意义(P>

0.05)。表明蜂胶及乙醇急性肝损伤对小鼠体重无明显影响。

表1󰀁蜂胶胶囊对小鼠体重的影响(󰀂x∀s,g)

分组动物数(只)初始体重中期体重末期体重增重

模型对照1019.89∀1.0929.92∀2.0635.80∀2.5015.91∀1.86

空白对照1019.91∀1.0530.07∀2.8835.25∀4.0515.34∀3.19

低剂量组1019.98∀1.0230.72∀2.0236.81∀2.3716.83∀2.02

中剂量组1020.00∀1.0831.55∀1.5537.12∀2.5017.12∀2.31

高剂量组1020.05∀1.0531.13∀2.2636.54∀2.7316.49∀2.04

表2󰀁蜂胶胶囊对小鼠肝组织内MDA、GSH、TG含量的影响(󰀂x∀s)

分组动物数(只)MDA含量(󰀁mol󰀁g肝)GSH含量(󰀁mol󰀁g肝)TG含量(mmol󰀁g肝)

模型对照101.77∀0.44*9.43∀4.56*0.0325∀0.0051*

空白对照100.96∀0.2123.50∀4.420.0190∀0.0043

低剂量组101.64∀0.4011.30∀5.720.0287∀0.0062

中剂量组101.53∀0.4913.76∀5.410.0265∀0.0058

高剂量组101.51∀0.3515.12∀3.88#0.0236∀0.0063#

󰀁󰀁注:*与空白对照组比较P<0.01,#与模型对照组比较P<0.05

或P<0.012.2󰀁蜂胶胶囊对肝组织中MDA、GSH、TG含量的影响󰀁见表2。模型对照组的MDA、TG均高于空白对照组,模型对照组的

GSH低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.01),说明肝

损伤模型成立。高剂量组的TG明显低于模型对照组,GSH明

显高于模型对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<

0.01)。表明高剂量的蜂胶具有降低乙醇性损伤的小鼠的肝组

织TG含量、升高GSH含量的作用。

2.3󰀁蜂胶胶囊对肝组织病理的影响󰀁见表3。模型对照组肝

脏脂肪改变的程度高于空白对照组,差异有统计学意义(P<

0.01),表明肝损伤模型成立;高剂量组肝脏脂肪改变的程度明

显低于模型对照组,差异有统计学意义(P<0.01),表明蜂胶具

有减轻乙醇性肝损伤的小鼠肝组织脂肪变性的作用。

表3󰀁蜂胶胶囊对小鼠肝脏组织脂肪改变程度的影响

分组动物数(只)各级病变动物数

0分1分2分3分4分改变程度积分(󰀂x∀s)

模型对照10000463.60∀0.52

空白对照10640000.40∀0.52

低剂量组10001633.20∀0.63

中剂量组10002623.00∀0.67

高剂量组10004512.70∀0.67#

󰀁󰀁注:#与模型对照组比较P<0.01

3󰀁讨论

急性酒精性肝损伤的机制是大量乙醇一次性进入机体后,

在乙醇脱氢酶的催化下大量脱氢氧化为乙醛和乙酸盐,使三羧

酸循环障碍和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢。MDA是脂质

过氧化的最终产物,MDA含量的增多可表明脂质过氧化反应

增强。GSH是一种抗氧化剂,是GSH-Px的底物,GSH-Px

是一种含硒的酶蛋白,能有效地还原有机氢过氧化物自由基

(ROOH)生成相应醇,能阻断或减轻ROOH所致的脂质过氧化