检测磺胺类药物残留

磺胺类及氟喹诺酮类药物兔单克隆抗体的制备与多残留检测技术研究1. 本文概述在当前食品安全和公共卫生领域，对动物源性食品中的化学药物残留进行有效监控是确保消费者健康的关键环节。

磺胺类药物和氟喹诺酮类药物作为广泛使用的抗菌剂，在畜牧业中的应用尤其普遍。

这些药物的不当使用或过量残留可能对人类健康产生严重威胁。

开发一种高效、灵敏的检测技术以监测和控制这些药物的残留水平显得尤为重要。

本文旨在研究并制备针对磺胺类和氟喹诺酮类药物的兔单克隆抗体，并通过这些抗体建立一种多残留检测技术。

通过使用现代生物技术手段，我们成功地制备了一系列高特异性和高亲和力的单克隆抗体。

这些抗体能够准确识别目标药物，并在后续的检测实验中显示出优异的性能。

本研究首先涉及了抗原的设计和合成，随后通过免疫学方法在兔体内产生相应的抗体。

通过筛选和优化，我们获得了一组性能最佳的单克隆抗体。

本文还将介绍基于这些抗体的多种检测平台，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光免疫分析和免疫层析条带（Lateral FlowAssay, LFAS）等，以实现对磺胺类和氟喹诺酮类药物残留的快速、准确检测。

通过本研究，我们期望为食品安全监管机构和相关行业提供一种新的技术手段，以更有效地控制和管理动物源性食品中的药物残留问题，从而保护公众健康并促进行业的可持续发展。

2. 材料与方法化学试剂：弗氏完全和不完全佐剂、辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗、蛋白质AG亲和层析柱等。

偶联载体蛋白：将合成多肽与载体蛋白（如BSA或KLH）偶联，制备免疫抗原。

免疫程序：描述免疫新西兰大白兔的具体步骤，包括免疫原的注射剂量、频率和途径。

杂交瘤细胞的筛选与克隆化：通过HAT选择性培养基筛选，有限稀释法进行克隆化。

单克隆抗体的生产与纯化：采用体外培养或小鼠腹腔注射的方法生产单克隆抗体，并通过亲和层析法纯化。

亲和力常数测定：利用表面等离子共振（SPR）等技术测定抗体与抗原的亲和力。

ELISA方法：建立磺胺类和氟喹诺酮类药物的多残留ELISA检测方法。

摘要对国家标准GB/T 21316—2007测定动物源性食品中磺胺类药物残留量的测量不确定度进行评定。

根据《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1—2012)和《化学分析中不确定度的评估指南》(CNAS-GL006:2019)中的规定,建立测定鳗鱼肉中磺胺残留量测定的数学模型,根据测量不确定度的来源,以磺胺甲基嘧啶为例,对各个不确定度分量进行评定和分析。

评定结果表明,当样品磺胺甲基嘧啶含量检测结果为10.4μg/kg 时,扩展不确定度为3.4μg/kg 。

不确定度按照从大到小排列,依次为标准曲线最小二乘法拟合、测量重复性、回收率、标准溶液制备、LC/MS/MS 定量重复性、样品定容、样品称量。

关键词国家标准;GB/T 21316—2007;动物源性食品;磺胺;不确定度评定中图分类号S859.84文献标识码A 文章编号1007-5739(2020)01-0224-04开放科学(资源服务)标识码(OSID )Uncertainty Evaluation for Determination of Sulfonamide Residues in Animal-derived Foods by National StandardGB/T 21316-2007CHEN Zhang-jie(Fujian Institute for Food and Drug Quality Control ,Fuzhou Fujian 350001)Abstract The uncertainty of determination of sulfonamide residues in animal-derived foods by GB/T 21316-2007was evaluated.According to "Evaluation and Expression of Uncertainty in Measurement"(JJF 1059.1-2012)and "Guidance on Quantifying Uncertainty in Chemical Analysis"(CNAS -GL006:2019),a mathematical model for determination of sulfonamide residues in eel meat was established.Based on the sources of the measurement uncertainty ,each uncertainty of sulfamethazine as an example was evaluated and analyzed.The evaluation results showed that the extended uncertainty was 3.4μg/kg when the test result of sulfamethazine content in samples was 10.4μg/kg.The uncertainty was arranged in order from large to small ,which were least squares calibration ,measurement repeatability ,recovery rate ,standard solution preparation ,LC/MS/MS quantitative repeatability ,sample volume determination and sample weighing.Key words national standard ;GB/T 21316-2007;animal-derived food ;sulfonamide ;uncertainty evaluation国家标准GB/T 21316—2007测定动物源性食品中磺胺类药物残留量的不确定度评定陈章捷(福建省食品药品质量检验研究院,福建福州350001)磺胺类药物是以对位氨基苯磺酰胺(简称磺胺)为基本结构的一类人工合成抗生素的总称,具有抗菌谱广、吸收迅速、使用方便、价格低廉等优点,广泛应用于人类医学和畜牧行业。

农质发〔2014〕5号文件附件8磺胺类药物在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法1 范围本标准规定了动物组织中五种磺胺类药物（磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺二甲氧嘧啶和磺胺喹噁啉）残留检测的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于猪肉中五种磺胺类药物残留量的测定。

2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法３原理样品经乙腈提取后，在上清液中加入正己烷进行液液分配，取下层溶液浓缩，残留物用95%乙腈溶解，过碱性氧化铝小柱, 以70%乙腈溶液洗脱，加入正丙醇浓缩后，残留物用流动相溶解，高效液相色谱仪进行检测，外标法定量。

４试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的二级水。

4.1 磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺二甲基嘧啶（SM2）、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺二甲氧嘧啶（SDM）、磺胺喹噁啉（SQ）对照品：含量均不得少于98.0%4.2 乙腈色谱纯4.3 甲醇色谱纯4.4 正已烷4.5 冰乙酸4.6 正丙醇4.7 无水硫酸钠4.8 95 %乙腈溶液取乙腈95 mL加水至100 mL，混匀。

4.9 70 %乙腈溶液取乙腈70 mL加水至100 mL，混匀。

4.10 磺胺类药物标准储备液（1mg/mL）：分别准确称取适量上述五种磺胺类药物对照品，置同一棕色容量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为1mg/mL的标准储备液。

-20℃以下冰箱中保存，有效期6个月。

4.2.10 磺胺类药物标准工作液（10µg/mL）：精密移取磺胺类药物标准储备液1.0 mL，置100 mL棕色容量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

磺胺类药物（S A s）是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类化学药物的总称，被广泛用于畜禽生产中以防治细菌感染。

在养殖密度较大的家禽行业中，使用磺胺类药物防治细菌感染的做法尤为普遍，因此禽蛋中存在着磺胺类药物残留的风险。

目前，我国相关的动物源性食品中磺胺类药物的检测方法已有相关标准，但对鸡蛋中仪器检测的报道文献较少。

本文建立了鸡蛋中16种磺胺类药物的超高效液相色谱串联质谱检测方法，其灵敏度高、稳定性好，能够满足对鸡蛋中磺胺类药物残留的检测要求。

1 实验部分1.1试剂与耗材磺胺乙酰、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺二恶唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑、磺胺吡啶、磺胺地索辛、磺胺甲氧哒嗪、磺胺二甲基异噁唑、苯甲酰磺胺、磺胺喹恶啉、磺胺邻苯甲氧嘧啶，德国DR.E公司。

乙腈、甲醇、甲酸等，均为色谱纯（国药）。

将标准品用甲醇配制成单标母液，并配制10μg/mL混合储备液于-20℃保存，使用时现配为系列标准工作液。

鸡蛋购于超市，经液质分析确认均为阴性样本。

1.2仪器设备ACQUITYTM型超高效液相色谱仪、Waters Xevo TQS四极杆质谱仪（配电喷雾离子源）、ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1mm×100mm，1.7μm），美国Waters公司；离心机；纯水仪；氮吹仪。

1.3试验1.3.1 前处理方法优化本实验比较了乙腈、1%甲酸乙腈作为提取溶剂，对事先添加25μg/kg混标溶液的空白鸡蛋样本进行提取，并进行提取溶剂优化试验；比较了涡旋振荡提取、涡旋振荡+超声配合提取，对事先添加25μg/kg混标溶液的空白鸡蛋样本进行萃取，同时进行提取方法优化试验；比较了10g无水硫酸钠加入与否对结果的影响；最终确定最优的前处理条件。

1.3.2 优化后的前处理方法称取样品2g，加入混合内标工作液100ng、无水硫酸钠10g、12mL1%甲酸乙腈，涡旋振荡2min，超声提取10min；7000rpm离心5min，取上清，60℃水浴氮吹至干。