牛奶中掺入尿素_白明胶等非电解质及病理乳的检验方法
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牛奶中掺入尿素、白明胶等非电解质
及病理乳的检验方法
姚俊卿
1,丁伟2
(1.山西省农垦技术服务站,太原 030001;2.山西农业大学,太谷 030801)
摘要:收购鲜奶时,发现送奶户在牛奶中掺入尿素、白明胶等非电解质掺假物质及病理性乳等,严重影响了消费者身体健
康和牛奶加工企业的经济效益。因此我们立项试验,研究并筛选出牛奶中掺入尿素、牛尿、蔗糖、白明胶、淀粉、豆浆及血和脓
汁、乳房炎乳的快速检验方法,以提高消费者的鉴别能力,并推荐给牛奶加工企业在收购鲜奶时检验使用。
关键词:牛奶;掺假;快速检验
中图分类号:S879.1 文献标识码:B 文章编号:167127236(2005)07200192
02
在农场收购鲜奶现场检验时发现牛奶中掺入尿素、白明胶等非电解质掺假物质及病理性乳,严重影响到消费者身体健康和牛奶加工企业的经济效益,因此我们立项试验,研究并筛选出比较快速准确的检验方法,以提高消费者的鉴别能力和供加工企业在检验鲜奶时参考。1 尿素及牛尿的检出1.1 格里斯试剂法 尿素与亚硝酸盐在酸性溶液中反应生成气体(二氧化碳等),亚硝酸盐与格里斯试剂发生偶氮反应生成紫红色化合物。1.1.1 试剂 ①格里斯试剂:称取89g酒石酸、10g对氨基苯磺酸及1gΑ2萘胺,在研钵中研成粉末状,装入棕色瓶中备用;②浓硫酸;③0.05%亚硝酸盐溶液:50mg亚硝酸钠溶于100ml蒸馏水中置棕色瓶中保存。1.1.2 检测方法 取被检牛奶3ml放入具有胶塞大试管中,再加入0.05%亚硝酸钠溶液0.5ml和浓硫酸1ml,将胶塞盖塞紧后,充分混匀,待泡沫消失后向试管中加入约0.1g格里斯试剂,充分混合(或稍加热),待25min后观察结果。1.1.3 判定 被检乳不变色判为阳性,证明牛乳中含尿素。因尿素在酸性溶液中破坏了亚硝酸钠,故不能生成紫红色化合物。如被检乳变为红色,为阴性,表明乳中没有掺入尿素。本试验最好与正常牛乳做对照试验。本法灵敏度为0.01%,被检乳不能少于2.5ml。1.2 D、A、M2酸混合试剂法 双乙酰可与尿素形收稿日期:2004211230作者简介:姚俊卿(1953-),女,山西人,高级兽医师,从事农垦系统科学研究与技术推广工作。成二嗪衍生物显色反应。由于双乙酰本身不稳定,故
以二乙酰一肟代替。
1.2.1 试剂 ①D、A、M试剂:取20
g
二乙酰一肟
溶于1000ml蒸馏水中备用,放置数日后如变成淡
黄色,并不影响使用,在冰箱中可保存半年;②酸混
合试剂:向100ml蒸馏水中加入浓硫酸(一级
)
44ml、浓磷酸(一级85%)66ml,
冷却后加氨基硫脲
0.05g及硫酸镉(CdSO4・8H2O)2g,
溶解后加蒸馏
水至1000ml,在冰箱中能保存半年。
1.2.2 方法 取被检乳5ml,
加D、A、M试剂
0.5ml和酸混合试剂3ml,充分混合后,
在沸水中准
确加热
1
min
(最多不能超过1.5min)
。如有牛尿及
尿素存在,被检乳呈粉红色,不含尿素的牛乳则不
显色。
2
蔗糖的检出
2.1
间苯二酚法 蔗糖是D2葡萄糖和D2果糖组
成的双糖,在浓盐酸的存在下,加热水解成单糖,具
有酮糖的性质,与间苯二酚反应生成红色的糖醛衍
生物。
2.1.1 试剂 ①浓盐酸;
②间苯二酚(雷锁辛)。
2.1.2 方法 取10ml乳样于试管中,加2
ml
浓
盐酸混匀,再加入0.1g间苯二酚充分摇匀,置80℃
水浴中于20min内观察。如果变成红色,表示牛乳
中有蔗糖。本法可检出0.2%的蔗糖。
2.2
二苯胺法
2.2.1 试剂 ①二苯胺试剂:取10%
二苯胺酒精
溶液10ml,加冰醋酸25ml及浓盐酸65ml混合
;
②冰醋酸。
2.2.2 方法 提取乳清(10ml乳样,滴加0.5
ml
冰醋酸混匀离心)3ml,加入等体积的二苯胺试剂。
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中国畜牧兽医 2005年第32卷第7期奶业专栏
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摇匀,在沸水浴上保持数分钟,若有蔗糖存在时则于1～2min内即可出现淡蓝色。如无蔗糖存在则在10min后才出现淡蓝色。因此,本法一定要同时做空白对照试验。本法可检出0.1%～1%的含糖量。3 白明胶的检出白明胶也称动物胶,是动物蛋白质。溶于热水后掺入牛乳中可增加密度,使之变得粘稠,再加水可增加乳的体积。3.1 试剂 ①25%硝酸汞溶液;②苦味酸(三硝基苯酚)饱和溶液。3.2 方法 取乳样5ml于试管中,加入25%硝酸汞溶液1ml混匀,40000rmin离心1min。用胶头吸管吸取离心透明乳清约3ml于试管中,再加等量的饱和苦味酸溶液。如有白明胶存在,则有云雾状沉淀发生;若白明胶含量高,则沉淀呈现黄色;若牛乳中无白明胶,则溶液清澈透明。3.3 注意事项 ①苦味酸是极毒的黄色晶体,遇到金属或金属氧化物极易引起爆炸。因此使用本试剂时绝对不能与金属物质接触;②用重金属盐沉淀牛乳酪蛋白时,如有白明胶则其沉淀物成块状,白明胶越多,成块越大。4 淀粉的检出植物淀粉分直链淀粉和支链淀粉。直链淀粉遇碘液产生深蓝色,支链淀粉在热水中糊化,形成粘稠液体,遇碘液产生紫红色。这是淀粉的特效反应,非常灵敏。4.1 试剂 碘溶液:称取1g碘和2g碘化钾溶解于5ml蒸馏水中,待完全溶解后再加水至100ml(如无碘化钾配成2%的碘酒精溶液亦可)。4.2 方法 取检样乳5ml于试管中,滴加3～5滴碘溶液,充分混匀,若呈现蓝色或紫红色,则证明有淀粉的存在,若加热蓝色会消褪,冷却后仍出现蓝色。5 豆浆的检出5.1 氢氧化钾显色反应 豆浆中含有皂角素,皂角素与氢氧化钾(或钠)作用呈黄色的显色反应。5.1.1 试剂 ①28%氢氧化钾(或氢氧化钠)溶液;②乙醇与乙醚的等量混合液。5.1.2 方法 取乳样5ml于试管中,加入乙醇乙醚等量混合液3ml,再加入28%氢氧化钾溶液2ml,充分混匀,在5～10min内观察其颜色变化,同时用正常乳作对照,若有豆浆存在时呈黄色,无豆浆时颜色不变。
5.2
甲醛沉淀法
5.2.1 方法 取2ml检样乳于试管中,加入40%
的甲醛液0.2ml,轻轻转动试管混匀,再加入
0.1%
甲基红指示剂2滴,再加入1.5%醋酸溶液
0.1ml,
轻转试管混匀,用手斜置试管,缓缓旋转4～5周,观
察试管口处乳层有无沉淀生成。若有明显沉淀,表明
有豆浆存在。但注意不可把乳皮(是片状不是颗粒
状)误认为沉淀。
5.2.2
注意事项 ①严格遵守试剂用量及加入顺
序,如加入醋酸量大时,乳蛋白亦会沉淀;加入甲醛
量过多时,不加醋酸也使牛乳蛋白沉淀;②加入试剂
混合时,振摇不能剧烈,否则使产生的沉淀分散碎
裂,不易观察;③若牛乳放置过久,酸度升高,不宜用
此试验。
6
乳中血和脓汁的检出
血液中含有过氧化物酶,能分解过氧化氢释放
出初生态氧原子,可将联苯胺氧化生成蓝绿色的二
酰亚胺代对苯醌。
6.1 试剂 ①3%过氧化氢溶液:
取过氧化氢原液
3ml加入27ml蒸馏水;②联苯胺酒精溶液:
称取
0.5g联苯胺于棕色瓶中,加20ml95%的酒精;
③
以上两液混合后再加入1ml冰醋酸即成。
6.3 方法 取乳样5ml于试管中,
加上述混合液
5ml,混合均匀。如牛乳中有血和乳脓汁存在,20
～
30
min
内其混合液呈蓝绿色。
7
乳房炎的检出
7.1
溴麝香草酚蓝试验 正常牛乳的pH平均为
6.62,乳房炎乳pH为6.99(经常变动在6.88
～
7.58)。而溴麝香草酚蓝变色范围的pH为6.0～7.
6,
颜色由黄到蓝。因此采用此指示剂加入到牛乳中
观察其颜色变化,可鉴定出属病理牛乳或正常乳。
7.1.1 试剂 0.2%溴麝香草酚蓝酒精溶液:
称取
200mg溴麝香草酚蓝溶于100ml60%
酒精溶液中
即可。
7.1.2
方法 在白瓷反应盘的凹坑中滴入被检乳
4～5滴,然后再加0.2%溴麝香草酚蓝酒精溶液1
～2滴,混匀,观察颜色变化。也可在试管内注入被
检乳5ml,加入0.2%溴麝香草酚蓝酒精溶液
1ml,
振荡混合,观察颜色变化。
7.1.3 判定 正常牛乳为黄色或浅黄绿色,
轻度乳
腺炎呈蓝绿色或淡绿色。
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奶业专栏中国畜牧兽医 2005年第32卷第7期
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