2-酶谱法检测血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性课件

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MMP-2、MMP-9与胃癌侵袭、转移的关系

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实用临床医学２１０２年第ｌ３卷第２期
Ｐａ￣ａＣｉｉａｌＭｒｃｃｌｌｃｎ
—
ｅｃｎｅ，２２，ｉ１Ｎｏ２ｄｉｉ０１Ｖｏ３，
—
移。其中男２４例，２女０例，龄２～７年８８岁，均平
（４８１．）。５． ± ３４岁
侵袭与转移过程＿２。引。ＭＭＰ２ＭＭＰ９是ＭＭＰ一、一ｓ家族的重要成员，它们能破坏细胞外基质中最重要的成分 Ⅳ 、型胶Ｖ原和明胶，同时它们可以激活并促进新生血管生成。它们的过度表达与人类多种恶性肿瘤侵袭转移及预后密切相关。潘海邦等研究发现，胃癌中ＭＭＰ９一呈高表达，且与胃癌的分化、浸润、转移、临床分期均密切相关，示ＭＭＰ９与胃癌的浸润、移、后提一转预有密切关系。仰丽丽等［检测６５４例胃癌原发灶标本中ＭＭＰ２表达结果提示ＭＭＰ２的表达与胃癌一一临床分期、有无淋巴结转移及ＴＮＭ分期相关。本实验显示ＭＭＰ２ＭＭＰ９表达在浆膜层有一、－浸润中的表达高于无浸润，有淋巴结转移中的表在达高于无转移，与以往的相关研究结论一致。因这此笔者考虑ＭＭＰ２ＭＭＰ９与肿瘤的发展和预后一、－有关，能的原因为胃癌细胞的侵袭及转移须依赖可于两类相互作用，胃癌细胞与宿主基质细胞之间即的细胞一细胞相互作用及胃癌细胞与细胞外基质之间的细胞一基质相互作用。这２种相互作用的联合效应就是产生、释放和激活一系列细胞因子及生长因子，们可以直接或间接调节ＭＭＰ２ＭＭＰ９它－、一。

酶谱法检测金属蛋白酶活性

原理酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE，含0.1%明胶）电泳分离，然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性，在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶，最后用考马斯亮蓝将凝胶染色，再脱色，在蓝色背景下可出现白色条带，条带的强弱与MMP-2和MMP-9活性成正比。

复性原理：在电泳过程中，SDS与样品中的MMPs结合（当然是可逆性结合），破坏其氢键、疏水键而使MMPs不能发挥其分解明胶的作用，而只有当将胶置Trition中洗脱（最好是放在摇床上摇，30min/次，做2次或15min/次，4次。

静置于Trition中是不妥的。

）时，由于SDS被Trition结合而去除，从而使MMPs恢复了活性。

2试剂的配制（1）配制10%SDS聚丙烯酰胺凝胶（含1.0mg/ml 明胶，配好后1周内使用，明胶含量低灵敏度高）A．分离胶的配制（注：根据你所用的电泳仪胶的大小确定配制胶的量）10% SDS聚丙烯酰胺凝胶10ml（包括）ddH2O 4.5ml30%储备胶（0.8%BIS+29.2%丙烯酰胺）2ml1.5mol/l Tris（PH 8.8）2.5ml10% SDS 100ul10%过硫酸铵（APS）100ulTEMED 8ul1%明胶（1g明胶-->100ml，37°C水浴溶解）0.5mlB.浓缩胶的配制浓缩胶6mlddH2O 4.5ml30%储备胶0.75ml1mol/l Tris-HCL( PH 6.8) 0.76ml10% SDS 60ul10%过硫酸铵60ulTEMED 6ul（3）5×Tris –甘氨酸电极缓冲液0.125mol/l Tris-HCL，1.25mol/l 甘氨酸，0.5%SDS（PH 8.3）（4）4 ×上样缓冲液0.32% Tris-HCL 6.4ml4%SDS（PH7.2）8ml16%甘油3.2 ml溴酚蓝0.024gddH2O 2.4ml(5) 洗脱液:2.5% Triton X-100，50mmol/L Tris-HCl<6.057g/L> ，5mmol/LCaCl2<0.5549g/L>，pH7. 6 （40分钟两次，中间换液）（6）漂洗液：50mmol/L Tris-HCl，5mmol/L CaCl2，pH7. 6 （20分钟2次）（7）孵育液：50mmol/LTris,pH7.5,150mmol/LNaCl,10mmol/LCaCl2,0.02%NaN3（孵育42小时）（8）染色液：0.05% Coomassic 亮蓝R-250，30%甲醇，10%乙酸（染色3小时）（9）脱色液A、B、C：甲醇浓度分别为30%、20%、10 % ,乙酸浓度分别为10 %、10 %、5% （分别30min、1h、2h脱色）3实验步骤1.取对数期的癌细胞在的无血清培养基DMEM中培养24h。

急性脑梗死患者血清MMP-2、MMP-9和hs—CRP检测的临床意义

参考文献：
［］蔡志友，勇，１晏王凤英，急性脑梗死患者血清ＭＭＰ２ＭＭ－等．－、Ｐ９与血糖、岛素及ＩＦ１相关性研究［］重庆医学，０８３胰Ｇ一Ｊ．２０，７
（）２４２７３：８－８．
［］王庄，金水，２诸谈鹰，急性脑梗死患者血浆ｈ—ＲＭＭＰ９等．ｓＰ、Ｃ－、Ｉ－Ｌ６含量的测定及临床意义［］中国实用神经疾病杂志，０６Ｊ．２０，
急性脑梗死（ＣＡＤ患者血清基质金属蛋白酶＿（ＮＰ２Ｍ一２、Ｐ９和超敏Ｃ反应蛋白（ｓＲ））ＭＭ－ｈ— Ｐ的表达水平，Ｃ
死范围的增大而显著升高（００）ＭＰ２在不Ｐ＜．５，Ｍ－同梗死范围组间的差别无统计学意义（Ｐ＞００）．５。
９６：９６．（）５－０
死的发生发展中可能起重要作用；ＭＭＰ２ＭＭＰ９－、－和ｈ—ＲｓＣＰ的表达与梗死范围有关，示联合检测血提清ＭＭ－、Ｐ２ＭＭＰ９和ｈ—Ｒ一ｓＰ水平对判断ＡＩ变ＣＣ病程度有重要价值。ＭＭＰ２和ＭＭＰ９能降解细胞外－－
中图分类号：７３３１４．１文献标志码：Ｂ文章编号：０２２６２１）９４一２１０－Ｘ（０００￣０１Ｄ６
研究表明，梗死发病时细胞因子的变化可能对脑
其发生发展有重要作用ｕ。本研究通过检测１２例】０
（收稿日期：０９１＿８２ｏ —２２）

糖尿病肾病患者血清mmp-2、mmp-9水平与血管钙化的关系

ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００２－７３８６.２０２０.０３.００４论著糖尿病肾病患者血清ＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９水平与血管钙化的关系魏琦㊀曹洁㊀蒋文励君项目来源:湖北省自然科学基金项目(编号:２０１７ＣＫＢ０２３)作者单位:４３００００㊀湖北省武汉市红十字会医院内分泌科㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀目的㊀探讨糖尿病肾病患者血清基质金属蛋白酶￣２(ＭＭＰ￣２)㊁基质金属蛋白酶￣９(ＭＭＰ￣９)水平与血管钙化的关系ꎮ方法㊀收治的糖尿病肾病患者１７８例ꎬ分为糖尿病肾病未钙化组９２例㊁糖尿病肾病钙化组８６例ꎬ同期选择门诊正常体检者８７例为对照组ꎬ测定３组血肮酐(Ｓｃｒ)㊁血磷(Ｐ３＋)㊁血钙(Ｃａ２＋)㊁ＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９㊁甲状旁腺激素(ＰＴＨ)㊁碱性磷酸酶(ＡＬＰ)㊁超敏Ｃ￣反应蛋白(ｈｓ￣ＣＲＰ)水平ꎮ结果㊀糖尿病肾病钙化组ＭＭＰ￣２水平高于糖尿病肾病未钙化组和对照组ꎬ糖尿病肾病未钙化组ＭＭＰ￣２水平高于对照组ꎻ糖尿病肾病钙化组ＭＭＰ￣９水平低于糖尿病肾病未钙化组和对照组ꎬ糖尿病肾病未钙化组ＭＭＰ￣９水平低于对照组ꎬ差异均有统计学意义(Ｐ<０.０５)ꎻ糖尿病肾病钙化组Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋㊁ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ水平高于糖尿病肾病未钙化组和对照组ꎬ糖尿病肾病未钙化组Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋㊁ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ水平高于对照组ꎬ差异有统计学意义(Ｐ<０.０５)ꎻＭＭＰ￣２与Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋㊁ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ呈正相关ꎬＭＭＰ￣９与Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋㊁ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ呈负相关ꎬ差异有统计学意义(Ｐ<０.０５)ꎻＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９㊁Ｃａ２＋㊁ＰＴＨ均为糖尿病肾病发生血管钙化的危险因素(Ｐ<０.０５)ꎻＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９ＲＯＣ曲线下面积(ＡＵＣ)相近(Ｐ>０.０５)ꎬ两者诊断糖尿病肾病合并血管钙化的灵敏度㊁特异度相近(Ｐ>０.０５)ꎮ结论㊀ＭＭＰ￣２高表达㊁ＭＭＰ￣９低表达能加速糖尿病患者肾脏损伤程度ꎬ加剧血管钙化ꎻＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９㊁Ｃａ２＋㊁ＰＴＨ可能为糖尿病肾病发生血管钙化的危险因素ꎬＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９可作为判定糖尿病肾病合并血管钙化的生物学标志物ꎬ值得推广应用ꎮʌ关键词ɔ㊀糖尿病肾病ꎻ基质金属蛋白酶￣２ꎻ基质金属蛋白酶￣９ꎻ血管钙化ʌ中图分类号ɔ㊀Ｒ５８７.２㊀㊀ʌ文献标识码ɔ㊀Ａ㊀㊀ʌ文章编号ɔ㊀１００２－７３８６(２０２０)０３－０３４０－０５ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＭＭＰ￣２ꎬＭＭＰ￣９ｉｎｓｅｒｕｍｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙａｎｄｔｈｅｉｒｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ㊀ＷＥＩＱｉꎬＣＡＯＪｉｅꎬＪＩＡＮＧＷＥＮＬｉｊｕｎ.ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙꎬＷｕｈａｎＲｅｄＣｒｏｓｓＨｏｓｐｉｔａｌꎬＨｕｂｅｉꎬＷｕｈａｎ４３００００ꎬＣｈｉｎａʌＡｂｓｔｒａｃｔɔ㊀Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｓｅｒｕｍｌｅｖｅｌｓｏｆＭＭＰ￣２ꎬＭＭＰ￣９ａｎｄｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀Ａｔｏｔａｌｏｆ１７８ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ(ｎ＝９２)ａｎｄｎｏｎ￣ｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ(ｎ＝８６)ꎬａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅꎬｔｈｅｏｔｈｅｒ８７ｈｅａｌｔｈｓｕｂｊｅｃｔｓｗｅｒｅｅｎｒｏｌｌｅｄａｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ.ＴｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＳｃｒꎬＰꎬＣａꎬＭＭＰ￣２ꎬＭＭＰ￣９ꎬＰＴＨꎬＡＬＰａｎｄｈｓ￣ＣＲＰｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄａｎｄｃｏｍｐａｒｅｄａｍｏｎｇｔｈｅｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ＴｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＭＭＰ￣２ｉｎｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｎｏｎ￣ｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｇｒｏｕｐａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬｈｏｗｅｖｅｒꎬｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＭＭＰ￣９ｉｎｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｎｏｎ￣ｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｇｒｏｕｐａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬｍｏｒｅｏｖｅｒꎬｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＭＭＰ￣９ｉｎｎｏｎ￣ｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ(Ｐ<０.０５).ＩｎａｄｄｉｔｉｏｎｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＳｃｒꎬＰꎬＣａꎬＰＴＨꎬＡＬＰꎬａｎｄｈｓ￣ＣＲＰｉｎｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｎｏｎ￣ｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｇｒｏｕｐａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬｗｈｉｃｈｉｎｎｏｎ￣ｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ(Ｐ<０.０５).ＭｏｒｅｏｖｅｒＭＭＰ￣２ｗａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈＳｃｒꎬＰꎬＣａꎬＰＴＨꎬＡＬＰａｎｄｈｓ￣ＣＲＰꎬｈｏｗｅｖｅｒꎬＭＭＰ￣９ｗａｓｎｅｇａｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈＳｃｒꎬＰꎬＣａꎬＰＴＨꎬＡＬＰａｎｄｈｓ￣ＣＲＰ(Ｐ<０.０５).ＭＭＰ￣２ꎬＭＭＰ￣９ꎬＣａａｎｄＰＴＨｗｅｒｅｒｉｓｋｆａｃｔｏｒｓｆｏｒｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ(Ｐ<０.０５).ＴｈｅａｒｅａｕｎｄｅｒｔｈｅＲＯＣｃｕｒｖｅ(ＡＵＣ)ｏｆＭＭＰ￣２ａｎｄＭＭＰ￣９ｗａｓｓｉｍｉｌａｒ(Ｐ>０.０５)ꎬｗｈｉｃｈｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｏｆｔｈｅｔｗｏｉｎｄｅｘｅｓｉｎｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙｗｉｔｈｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｗｅｒｅｓｉｍｉｌａｒ(Ｐ>０.０５).Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＴｈｅｈｉｇｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭＭＰ￣２ａｎｄｌｏｗｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭＭＰ￣９ｃａｎａｃｃｅｌｅｒａｔｅｔｈｅｓｅｖｅｒｉｔｙｏｆｒｅｎａｌｄａｍａｇｅｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓꎬｗｈｉｃｈｃａｎｅｘａｃｅｒｂａｔｅｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ.ＭＭＰ￣２ꎬＭＭＰ￣９ꎬＣａａｎｄＰＴＨｍａｙｂｅｔｈｅｒｉｓｋｆａｃｔｏｒｓｆｏｒｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙꎬｔｈｅｒｅｂｙꎬＭＭＰ￣２ａｎｄＭＭＰ￣９ｍａｙｂｅｒｅｇａｒｄｅｄａｓｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｍａｒｋｅｒｓｉｎｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙｗｉｔｈｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬａｎｄｉｔｉｓｗｏｒｔｈｙｏｆｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ.ʌＫｅｙｗｏｒｄｓɔ㊀ｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙꎻＭＭＰ￣２ꎻＭＭＰ￣９ꎻｖａｓｃｕｌａｒｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ㊀㊀全球糖尿病患病率高达１２.３％ꎬ约１.１４亿人ꎬ严重影响患者的生活质量和寿命ꎬ其并发症是致死致残的主要原因[１ꎬ２]ꎮ糖尿病肾病是糖尿病的重要并发症ꎬ其引起的死亡率占糖尿病患者的６０％~７０％[２]ꎬ流行病学研究显示ꎬ糖尿病患者罹患肾病的概率高达８５％~９１％ꎬ而６０岁以上的糖尿病患者若有高危心血管因素ꎬ其罹患肾病的概率更高[３ꎬ４]ꎮ血管钙化在糖尿病肾病患者中相当普遍ꎬ是导致猝死及心血管疾病发生的重要原因ꎬ其致残㊁致死率较高ꎬ严重影响患者的身心健康和生活质量ꎬ因此准确筛查出糖尿病肾病中的血管钙化者ꎬ对预防及治疗糖尿病肾病晚期的心血管并发症有重要意义ꎮ基质金属蛋白酶￣２(ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ￣２ꎬＭＭＰ￣２)㊁基质金属蛋白酶￣９(ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ￣９ꎬＭＭＰ￣９)是基质金属蛋白酶的重要成员ꎬ其功能与降解和重构细胞外基质动态平衡密切相关[５ꎬ６]ꎬ研究发现ＭＭＰ￣２能激活和趋化单核细胞ꎬ介导内皮功能紊乱ꎬ增加细胞因子释放㊁激活补体系统㊁促进细胞外基质重构ꎬ具有直接的促炎作用ꎬ并能损伤血管内皮ꎬ暴露胶原组织㊁释放组织因子ꎬ加速血小板附着和聚集ꎬ导致纤维蛋白及免疫球蛋白水平增高ꎬ形成高凝状态和高钙化斑块ꎬ诱导心血管疾病的发生ꎻ而ＭＭＰ￣９的生物学效能与ＭＭＰ￣２相反[７ꎬ８]ꎮ本研究探讨糖尿病肾病患者血清ＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９水平与血管钙化的关系ꎬ为糖尿病肾病患者血管钙化的诊断及治疗提供理论及临床依据ꎮ１㊀资料与方法１.１㊀一般资料㊀选择２０１５年３月至２０１８年９月在我院确诊的糖尿病肾病患者１７８例ꎮ纳入标准:(１)经临床表现(肾脏病者㊁明显高血压㊁严重高血压者㊁胰岛素抵抗)㊁实验室检查(血常规㊁血生化㊁尿白蛋白排泄率持续升高２０~２００μｇ/ｍｉｎꎬ或尿白蛋白３０~３００ｍｇ/２４ｈ)及常规检查确诊ꎬ符合中华医学会糖尿病学会分会微血管并发症学组于２０１４年颁布的糖尿病肾病防治专家共识[９]ꎻ(２)未使用影响观察的药物(如钙剂㊁磷结合剂㊁活性维生素Ｄ制剂等)ꎻ(３)无肺栓塞病史ꎮ排除标准:(１)合并恶性肿瘤ꎻ(２)患有胆汁淤积㊁自身免疫性疾病ꎻ(３)６周内手术史㊁下肢外伤史或长期卧床史患者ꎮ依据糖尿病肾病患者血管钙化情况分为:糖尿病肾病未钙化组９２例㊁糖尿病肾病钙化组８６例ꎬ具体分类标准[９]:测定动脉内膜中层厚度(ＩＭＴ)ꎬＩＭＴȡ１.０ｍｍ为ＩＭＴ增厚(突向管腔的局灶性动脉壁增厚必须在纵轴和横轴图像的同一部位见到ꎬ其厚度至少超过相邻区域的５０％ꎬ回声不均匀或明显增厚)ꎮ１７８例糖尿病肾病患者中高血压１４８例㊁冠心病１６０例㊁高血脂１５７例ꎮ同期选择在我院门诊正常体检者８７例为对照组ꎮ所有研究对象(或研究对象直系亲属)签署知情同意书ꎬ本研究经医院伦理委员会批准ꎮ１.２㊀仪器与试剂㊀贝克曼ＡＵ￣４８０全自动生化分析仪(美国库尔特公司)㊁ＭＫ３￣３酶标仪(美国热电)㊁血肌酐(ｓｅｒｕｍｃｒｅａｔｉｎｉｎｅꎬＳｃｒ)㊁血磷(ｂｌｏｏｄｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓꎬＰ３＋)㊁血钙(ｂｌｏｏｄｃａｌｃｉｕｍꎬＣａ２＋)㊁碱性磷酸酶(ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅꎬＡＬＰ)试剂盒为ＡＵ￣４８０全自动生化分析仪原厂自带试剂ꎻ基质金属蛋白酶￣２(ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ￣２ꎬＭＭＰ￣２)㊁基质金属蛋白酶￣９(ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ￣９ꎬＭＭＰ￣９)㊁甲状旁腺激素(ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅꎬＰＴＨ)㊁超敏Ｃ￣反应蛋白(ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅＣ￣ｒｅａｃｔｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎꎬｈｓ￣ＣＲＰ)Ｅｌｉｓａ试剂盒购于上海信帆生物科技有限公司ꎮ１.３㊀观察指标测定㊀清晨空腹及肱静脉抽血ꎻ取静脉血１０ｍｌ置于无菌管中ꎬ室温静置３０ｍｉｎꎬ３０００ｒ/ｍｉｎ离心１０ｍｉｎꎬ分离血清ꎬ贝克曼ＡＵ￣４８０全自动生化分析仪测定Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋ꎬＭＫ３￣３酶标仪测定ＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９㊁ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰꎮ１.４㊀统计学分析㊀应用ＳＰＳＳ２３.０统计软件ꎬ计量资料以ｘʃｓ表示ꎬ采用单因素方差分析ꎬ多重比较采用ＬＳＤ￣ｔ检验ꎬ相关分析采用Ｐｅａｒｓｏｎ积差相关分析ꎬ采用多因素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ逐步回归模型(α入＝０.０５㊁α出＝０.１０)探讨糖尿病肾病患者血管钙化发生的危险因素ꎬＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９评分的ＡＵＣ比较采用秩和检验ꎬＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９评分对糖尿病肾病合并血管钙化诊断的灵敏度㊁特异度比较采用χ２检验ꎬＰ<０.０５为差异有统计学意义ꎮ２㊀结果２.１㊀３组基础资料比较㊀糖尿病肾病未钙化组和糖尿病肾病钙化组收缩压㊁舒张压高于对照组ꎬ差异有统计学意义(Ｐ<０.０５)ꎻ而性别㊁年龄㊁吸烟㊁饮酒分布及体重指数(ＢＭＩ)水平与对照组差异无统计学意义(Ｐ>０.０５)ꎮ见表１ꎮ２.２㊀３组血清Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋水平比较㊀糖尿病肾病钙化组Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋水平均高于糖尿病肾病未钙化组和对照组ꎬ糖尿病肾病未钙化组Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋水平均高于对照组ꎬ差异有统计学意义(Ｐ<０.０５)ꎮ见表２ꎮ２.３㊀３组ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ水平比较㊀糖尿病肾病钙化组ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ水平高于糖尿病肾病未钙化组㊁对照组ꎬ糖尿病肾病未钙化组ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ水平高于对照组ꎬ差异有统计学意义(Ｐ<０.０５)ꎮ见表３ꎮ２.４㊀３组血清ＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９水平比较㊀糖尿病肾病钙化组血清ＭＭＰ￣２水平高于糖尿病肾病未钙化组和对照组ꎬ糖尿病肾病未钙化组血清ＭＭＰ￣２水平高于对照组ꎬ差异均有统计学意义(Ｐ<０.０５)ꎻ糖尿病肾病钙表１㊀３组基础资料比较㊀项目对照组(ｎ＝８７)糖尿病肾病未钙化组(ｎ＝９２)糖尿病肾病钙化组(ｎ＝８６)性别(例)㊀男４０５０４０㊀女４７４２４６吸烟(例)㊀是４６４５３８㊀否４１４７４８饮酒(例)㊀是３８４３４５㊀否４９４９４１年龄(岁ꎬ ｘʃｓ)５７.３５ʃ１９.８７５６.３７ʃ２１.４４５６.９４ʃ１９.０６收缩压(ｍｍＨｇꎬ ｘʃｓ)１２３.５５ʃ２２.５６１３９.７４ʃ１９.８５∗１４２.７４ʃ１８.０８∗舒张压(ｍｍＨｇꎬ ｘʃｓ)６６.５６ʃ１２.６５８９.７４ʃ１４.９１∗９６.９２ʃ１９.７４∗ＢＭＩ(ｋｇ/ｍ２ꎬ ｘʃｓ)２２.６５ʃ２.７２２２.７１ʃ２.８０２３.０８ʃ２.６７㊀㊀注:与对照组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５表２㊀３组血清Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋水平比较ｘʃｓ㊀组别Ｓｃｒ(μｍｏｌ/Ｌ)Ｐ３＋(ｍｍｏｌ/Ｌ)Ｃａ２＋(ｍｍｏｌ/Ｌ)对照组(ｎ＝８７)７５.２５ʃ１６.６５１.２１ʃ０.２０２.１６ʃ０.１０糖尿病肾病未钙化组(ｎ＝９２)９７６.４５ʃ１８７.８７∗１.９８ʃ０.３０∗２.２４ʃ０.１３∗糖尿病肾病钙化组(ｎ＝８６)１０７８.５６ʃ１２８.３４∗＃２.９０ʃ０.４０∗＃２.４１ʃ０.１４∗＃㊀㊀注:与对照组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎻ与糖尿病肾病未钙化组比较ꎬ＃Ｐ<０.０１表３㊀３组ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ水平比较ｘʃｓ㊀组别ＰＴＨ(ｐｇ/ｍｌ)ＡＬＰ(Ｕ/Ｌ)ｈｓ￣ＣＲＰ((ｍｇ/Ｌ)对照组(ｎ＝８７)４５.４５ʃ１２.３６７４.３８ʃ１５.６１０.８５ʃ０.１２糖尿病肾病未钙化组(ｎ＝９２)８８.２９ʃ１４.０１∗９９.２１ʃ２５.５０∗７.８７ʃ２.１２∗糖尿病肾病钙化组(ｎ＝８６)１３３.２５ʃ３１.１５∗＃１２９.２５ʃ４８.２８∗＃１５.０９ʃ１.９８∗＃㊀㊀注:与对照组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎻ与糖尿病肾病未钙化组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５化组血清ＭＭＰ￣９水平低于糖尿病肾病未钙化组和对照组ꎬ糖尿病肾病未钙化组血清ＭＭＰ￣９水平低于对照组ꎬ差异均有统计学意义(Ｐ<０.０５)ꎮ见表４ꎮ表４㊀３组血清ＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９水平比较ｎｇ/ｍｌꎬ ｘʃｓ㊀组别ＭＭＰ￣２ＭＭＰ￣９对照组(ｎ＝８７)４５.２５ʃ４.５６１０６.４６ʃ５.８糖尿病肾病未钙化组(ｎ＝９２)８９.９２ʃ４.１１∗８９.６５ʃ６.９∗糖尿病肾病钙化组(ｎ＝８６)１２８.８２ʃ６.９８∗＃５９.９８ʃ５.８１∗＃㊀㊀注:与对照组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎻ与糖尿病肾病未钙化组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５２.５㊀ＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９与各变量的相关性分析㊀ＭＭＰ￣２与Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋㊁ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ正相关关系明显ꎬＭＭＰ￣９与Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋㊁ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ负相关关系明显ꎬ差异有统计学意义(Ｐ<０.０５)ꎮ见表５ꎮ２.６㊀糖尿病肾病合并血管钙化发生的多元Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析㊀以糖尿病肾病患者是否发生血管钙化为应变量(是＝１ꎬ否＝０)ꎬ单因素分析有意义的因素为自变表５㊀ＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９与各变量的相关性分析变量１变量２ｒ值Ｐ值ＭＭＰ￣２Ｓｃｒ０.６５１<０.００１Ｐ３＋０.５７２<０.００１Ｃａ２＋０.４８３<０.００１ＰＴＨ０.４９４<０.００１ＡＬＰ０.７４７<０.００１ｈｓ￣ＣＲＰ０.４３８<０.００１ＭＭＰ￣９Ｓｃｒ－０.６３６<０.００１Ｐ３＋－０.７１８<０.００１Ｃａ２＋－０.５０９<０.００１ＰＴＨ－０.５２０<０.００１ＡＬＰ－０.７６３<０.００１ｈｓ￣ＣＲＰ－０.４１４<０.００１量进行多因素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ逐步回归分析ꎬ结果发现ＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９㊁Ｃａ㊁ＰＴＨ均为糖尿病肾病发生血管钙化的危险因素(ＯＲ＝２.４３㊁４.６２㊁５.０２㊁１７.８９ꎬＰ<０.０５)ꎮ见表６ꎮ表６㊀糖尿病肾病合并血管钙化发生的多元Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析㊀自变量回归系数标准误Ｗａｌｄχ２Ｐ值ＯＲ(９５％ＣＩ)ｈｓ￣ＣＲＰ０.７６０.４５１.５２４０.２２１２.１３(０.８８~５.１６)ＭＭＰ￣２０.８９０.３９７.４５３０.０１２２.４３(１.１３~５.２３)ＭＭＰ￣９１.４５０.４２１１.４６５０.０１１４.２６(１.８７~９.７１)Ｃａ２＋１.６１０.３８９.５７２０.０１５５.０２(２.３６~１０.６８)Ｐ３＋０.０６０.５４０.０１１０.９２２１.０６(０.３７~３.０５)ＡＬＰ０.５３０.５８０.８２６０.３７３１.６９(０.５４~５.３３)ＰＴＨ２.４１０.２９１５.９０８０.００１１７.８９(１２.６７~２５.８９)Ｓｃｒ０.４８０.２１１.４３２０.５９１０.３１(０.６２~２.３４)２.７㊀ＲＯＣ曲线及灵敏度㊁特异度分析㊀受试者工作特征曲线提示ꎬＭＭＰ￣２与ＭＭＰ￣９两者ＡＵＣ相近(Ｐ>０.０５)ꎬ两者诊断糖尿病肾病合并血管钙化的灵敏度㊁特异度相近(χ２＝１.９３２㊁１.７６４ꎬＰ>０.０５)ꎮ见表７ꎬ图１ꎮ表７㊀ＲＯＣ曲线及灵敏度、特异度分析指标ＡＵＣ(９５％ＣＩ)灵敏度特异度ＭＭＰ￣２０.８４５(０.７９６~０.９８１)０.７５２０.７０１ＭＭＰ￣９０.８２３(０.６８９~０.９３４)０.７４１０.６８９红曲线:ＭＭＰ￣２ꎻ蓝曲线:ＭＭＰ￣９图１㊀ＭＭＰ￣２与ＭＭＰ￣９诊断糖尿病肾病合并血管钙化的ＲＯＣ曲线３㊀讨论㊀㊀血液动力学的改变是糖尿病肾病血管钙化疾病的高危因素ꎮ作为纤维蛋白原及细胞外基质的降解酶ꎬＭＭＰ￣２能明显破坏血管内皮细胞ꎬ活化炎性细胞和血小板ꎬ增强凝血因子含量ꎬ使抗凝㊁纤溶因子含量减少ꎬ导致止血㊁凝血及抗凝系统失衡ꎬ使血液呈现易于血栓形成的一种病理生理状态[１０]ꎮＭＭＰ￣９主要参与细胞浸润㊁肾小球硬化㊁间质纤维化等多种病理过程ꎬ其通过特异性结合ＰＹＹ调控血管平滑肌细胞的增殖过程与炎性反应ꎮ神经肽Ｙ(ＮＰＹ)是由下丘脑分泌的Ｌ类重要交感神经递质ꎬ可通过与多种不同受体结合而发挥不同的生物学效应[１１ꎬ１２]ꎬ其中Ｙ１受体主要存在于循环系统中ꎬ表达于肾小球中ꎬＭＭＰ￣９与ＮＰＹ同源异构体结合ꎬ通过Ｙ１受体发挥持续㊁较强的缩血管作用ꎬ并激活淋巴细胞㊁中性粒细胞上相应的趋化因子受体ꎬ此外Ｙ１受体的高表达可能参与高血压的发生发展过程ꎻ大鼠和人血管平滑肌细胞的离体实验发现ꎬＮＰＹ/Ｙ１可介导动脉血管平滑肌的异常增殖ꎬ影响血管平滑肌的修复功能ꎬ导致内皮功能障碍ꎬ进而出现高凝状态或血栓前状态[１３ꎬ１４]ꎮ本研究中ꎬ钙化组ＭＭＰ￣９水平低于糖尿病肾病未钙化组㊁对照组ꎬ糖尿病肾病未钙化组糖尿病肾病钙化组ＭＭＰ￣２水平高于糖尿病肾病未钙化组㊁对照组ꎬ糖尿病肾病未钙化组ＭＭＰ￣２水平高于对照组ꎻ糖尿病肾病ＭＭＰ￣９水平低于对照组ꎬ糖尿病肾病未钙化组㊁糖尿病肾病钙化组收缩压㊁舒张压高于对照组ꎬ这与上述讨论符合ꎬ同时也说明ＭＭＰ￣２高表达㊁ＭＭＰ￣９低表达与糖尿病肾病血管钙化密切相关ꎮ㊀㊀Ｓｃｒ是反应肾脏损害程度的指标ꎬＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ能诱导白介素￣６㊁肿瘤坏死因子￣α产生ꎬ介导内皮功能紊乱ꎬ加速脂质沉淀ꎬ增加细胞因子释放㊁激活补体系统㊁促进血管细胞外基质重构ꎬ具有直接促进血管钙化的作用[１５]ꎮＰＴＨ是调节Ｃａ２＋㊁Ｐ３＋代谢的多肽类激素ꎬ其能动员骨Ｃａ２＋入血ꎬ促进肾小管对Ｃａ２＋㊁Ｐ３＋的重吸收ꎬ使血Ｃａ２＋㊁Ｐ３＋浓度增加ꎬ而高血Ｃａ２＋水平在糖尿病患者体内高血糖状态下ꎬ能与体内的蛋白质㊁血糖酶结合形成糖基化终末产物ꎬ糖基化终末产物能诱导自由基的产生ꎬ导致内皮细胞破坏ꎬ促进钙化粥样斑块形成[１６]ꎮ本研究结果同时显示ꎬ糖尿病肾病钙化组Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋㊁ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ水平高于糖尿病肾病未钙化组㊁对照组ꎬ糖尿病肾病未钙化组Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋㊁ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ水平高于对照组ꎬＭＭＰ￣２与Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋㊁ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ正相关关系明显ꎬＭＭＰ￣９与Ｓｃｒ㊁Ｐ３＋㊁Ｃａ２＋㊁ＰＴＨ㊁ＡＬＰ㊁ｈｓ￣ＣＲＰ负相关关系明显ꎬ这说明ꎬＭＭＰ￣２高表达㊁ＭＭＰ￣９低表达能加速糖尿病患者肾脏损伤程度ꎬ加剧血管钙化ꎮ本研究结果同时提示ꎬＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９㊁Ｃａ２＋㊁ＰＴＨ可能为糖尿病肾病发生血管钙化的危险因素ꎻＭＭＰ￣２ＲＯＣ曲线下面积(ＡＵＣ)为０.８４５(９５％ＣＩ:０.７９６~０.９８１)ꎬＭＭＰ￣９ＲＯＣ曲线下面积(ＡＵＣ)为０.８２３(９５％ＣＩ:０.６８９~０.９３４)ꎬ二者ＡＵＣ相近ꎬ二者诊断糖尿病肾病合并血管钙化的灵敏度㊁特异度相近ꎮ可作为判定糖尿病肾病合并血管钙化的生物学标志物ꎮ㊀㊀综上所述ꎬＭＭＰ￣２高表达㊁ＭＭＰ￣９低表达能加速糖尿病患者肾脏损伤程度ꎬ加剧血管钙化ꎻＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９㊁Ｃａ㊁ＰＴＨ可能为糖尿病肾病发生血管钙化的危险因素ꎬＭＭＰ￣２㊁ＭＭＰ￣９可作为判定糖尿病肾病合并血管钙化的生物学标志物ꎬ值得在临床上推广应用ꎮ参考文献１㊀贾伟平.中国２型糖尿病防治指南(２０１７年版).中华医学会糖尿病学分会ꎬ２０１７ꎬ４:２３￣２５.２㊀王金梅ꎬ郭俊杰.中医药治疗２型糖尿病胰岛素抵抗研究进展.世界中西医结合杂志ꎬ２０１７ꎬ１２:５８８￣５８９.３㊀ＳｅｇｏＳ.Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ.ＮｅｐｈｒｏｌｏｇｙＮｕｒｓｉｎｇＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＮｅｐｈｒｏｌｏｇｙＮｕｒｓｅｓＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎꎬ２０１７ꎬ１２:３９１￣３９９.(下转３４８页)２㊀ＰａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓＶꎬＢａｒａｌｄｉＭꎬＧｕｉｌａｒｔｅＴＲꎬｅｔａｌ.Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ(１８ｋＤａ):ｎｅｗｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅｆｏｒｔｈｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ￣ｔｙｐｅｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｂａｓｅｄｏｎｉｔｓｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｆｕｎｃｔｉｏｎ.ＴｒｅｎｄｓＰｈａｒｍａｃｏｌＳｃｉꎬ２００６ꎬ２７:４０２￣４０９.３㊀ＲｕｐｐｒｅｃｈｔＲꎬＰａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓＶꎬＲａｍｍｅｓＧꎬｅｔａｌ.Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ(１８ｋＤａ)(ＴＳＰＯ)ａｓａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｆｏｒｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃｄｉｓｏｒｄｅｒｓ.ＮａｔＲｅｖＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖꎬ２０１０ꎬ９:９７１￣９８８.４㊀ＨöｇｅｌＨꎬＲｉｓｓａｎｅｎＥꎬＶｕｏｒｉｍａａＡꎬｅｔａｌ.ＰｏｓｉｔｒｏｎｅｍｉｓｓｉｏｎｔｏｍｏｇｒａｐｈｙｉｍａｇｉｎｇｉｎｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＭＳｐａｔｈｏｌｏｇｙｉｎｖｉｖｏ.ＭｕｌｔＳｃｌｅｒꎬ２０１８ꎬ２４:１３９９￣１４１２.５㊀ＴｕｒｎｅｒＭＲꎬＣａｇｎｉｎＡꎬＴｕｒｋｈｅｉｍｅｒＦＥꎬｅｔａｌ.Ｅｖｉｄｅｎｃｅｏｆｗｉｄｅｓｐｒｅａｄｃｅｒｅｂｒａｌｍｉｃｒｏｇｌｉａｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｎａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃｌａｔｅｒａｌｓｃｌｅｒｏｓｉｓ:ａｎ１１Ｃ(Ｒ)￣ＰＫ１１１９５ｐｏｓｉｔｒｏｎｅｍｉｓｓｉｏｎｔｏｍｏｇｒａｐｈｙｓｔｕｄｙ.ＮｅｕｒｏｂｉｏｌＤｉｓꎬ２００４ꎬ１５:６０１￣６０９.６㊀ＶｅｎｎｅｔｉＳꎬＬｏｐｒｅｓｔｉＢＪꎬＷａｎｇＧꎬｅｔａｌ.ＰＫ１１１９５ｌａｂｅｌｓａｃｔｉｖａｔｅｄｍｉｃｒｏｇｌｉａｉｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓｄｉｓｅａｓｅａｎｄｉｎｖｉｖｏｉｎａｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｕｓｉｎｇＰＥＴ.ＮｅｕｒｏｂｉｏｌＡｇｉｎｇꎬ２００９ꎬ３０:１２１７￣１２２６.７㊀ＨｏｍｍｅｔＣꎬＭｏｎｄｏｎＫꎬＣａｍｕｓＶꎬｅｔａｌ.ＮｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄβａｍｙｌｏｉｄｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒｓｄｉｓｅａｓｅ:ｉｎｖｉｖｏｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｗｉｔｈｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｍａｇｉｎｇ.ＤｅｍｅｎｔＧｅｒｉａｔｒＣｏｇｎＤｉｓｏｒｄꎬ２０１４ꎬ３７:１￣１８.８㊀ＶｅｉｇａＳꎬＣａｒｒｅｒｏＰꎬＰｅｒｎｉａＯꎬｅｔａｌ.Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ１８ｋＤａｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｒｅａｃｔｉｖｅｇｌｉｏｓｉｓ.Ｇｌｉａꎬ２００７ꎬ５５:１４２６￣１４３６.９㊀ＢｏｒｄｅｔＴꎬＢｕｉｓｓｏｎＢꎬＭｉｃｈａｕｄＭꎬｅｔａｌ.Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｃｈｏｌｅｓｔ￣４￣ｅｎ￣３￣ｏｎｅꎬｏｘｉｍｅ(ＴＲＯ１９６２２)ꎬａｎｏｖｅｌｄｒｕｇｃａｎｄｉｄａｔｅｆｏｒａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃｌａｔｅｒａｌｓｃｌｅｒｏｓｉｓ.ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＥｘｐＴｈｅｒꎬ２００７ꎬ３２２:７０９￣７２０.１０㊀ＢａｒｒｏｎＡＭꎬＧａｒｃｉａ￣ＳｅｇｕｒａＬＭꎬＣａｒｕｓｏＤꎬｅｔａｌ.ＬｉｇａｎｄｆｏｒｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎｒｅｖｅｒｓｅｓｐａｔｈｏｌｏｇｙｉｎａｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒｓｄｉｓｅａｓｅ.ＪＮｅｕｒｏｓｃｉꎬ２０１３ꎬ３３:８８９１￣８８９７.１１㊀ＣｈｏｉＨＢꎬＫｈｏｏＣꎬＲｙｕＪＫꎬｅｔａｌ.Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ￣ｉｎｄｕｃｅｄｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ￣２ꎬｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ￣ａｌｐｈａａｎｄＣａ２＋ｉｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎｈｕｍａｎｍｉｃｒｏｇｌｉａｂｙｔｈｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｌｉｇａｎｄＰＫ１１１９５.ＪＮｅｕｒｏｃｈｅｍꎬ２００２ꎬ８３:５４６￣５５５.１２㊀ｄｏＲｅｇｏＪＬꎬＶａｕｄｒｙＤꎬＶａｕｄｒｙＨ.Ｔｈｅｎｏｎ￣ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅａｎｘｉｏｌｙｔｉｃｄｒｕｇｅｔｉｆｏｘｉｎｅｃａｕｓｅｓａｒａｐｉｄꎬｒｅｃｅｐｔｏｒ￣ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒｏｓｔｅｒｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ.ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１５ꎬ１０:ｅ０１２０４７３.１３㊀ＤａｉＴꎬＺｈｏｕＸꎬＬｉＹꎬｅｔａｌ.Ｅｔｉｆｏｘｉｎｅｐｒｏｍｏｔｅｓｇｌｉａ￣ｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｉｔｅｏｕｔｇｒｏｗｔｈｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏ.ＪＲｅｃｏｎｓｔｒＭｉｃｒｏｓｕｒｇꎬ２０１４ꎬ３０:３８１￣３８８.１４㊀ＧｉｒａｒｄＣꎬＬｉｕＳꎬＡｄａｍｓＤꎬｅｔａｌ.Ａｘｏｎａｌｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍ￣ａｔｉｏｎ:ｒｏｌｅｓｆｏｒｔｈｅｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ１８ｋＤａ.ＪＮｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ.２０１２ꎬ２４:７１￣８１.１５㊀ＬｉＭꎬＲｅｎＨꎬＳｈｅｔｈＫＮꎬｅｔａｌ.ＡＴＳＰＯｌｉｇａｎｄａｔｔｅｎｕａｔｅｓｂｒａｉｎｉｎｊｕｒｙａｆｔｅｒｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ.ＦＡＳＥＢＪꎬ２０１７ꎬ３１:３２７８￣３２８７.１６㊀ＧｉｒａｒｄＰꎬＰａｎｓａｒｔＹꎬＧｉｌｌａｒｄｉｎＪＭ.Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅａｎｄｃｕｒａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｔｉｆｏｘｉｎｅｉｎａｒａｔｍｏｄｅｌｏｆｂｒａｉｎｏｅｄｅｍａ.ＣｌｉｎＥｘｐＰｈａｒｍａｃｏｌＰｈｙｓｉｏｌꎬ２００９ꎬ３６:６５５￣６６１.１７㊀ＤａｕｇｈｅｒｔｙＤＪꎬＳｅｌｖａｒａｊＶꎬＣｈｅｃｈｎｅｖａＯＶꎬｅｔａｌ.ＡＴＳＰＯｌｉｇａｎｄｉｓｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｉｎａｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｓｃｌｅｒｏｓｉｓ.ＥＭＢＯＭｏｌＭｅｄꎬ２０１３ꎬ５:８９１￣９０３.１８㊀Ｓｉｍｏｎ￣Ｏ'ＢｒｉｅｎＥꎬＧａｕｔｈｉｅｒＤꎬＲｉｂａｎＶꎬｅｔａｌ.Ｅｔｉｆｏｘｉｎｅｉｍｐｒｏｖｅｓｓｅｎｓｏｒｉｍｏｔｏｒｄｅｆｉｃｉｔｓａｎｄｒｅｄｕｃｅｓｇｌｉａｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎꎬｎｅｕｒｏｎａｌｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎꎬａｎｄｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎａｒａｔｍｏｄｅｌｏｆｔｒａｕｍａｔｉｃｂｒａｉｎｉｎｊｕｒｙ.ＪＮｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎꎬ２０１６ꎬ１３:２０３.１９㊀ＳｈｅｈａｄｅｈＭꎬＰａｌｚｕｒＥꎬＡｐｅｌＬꎬｅｔａｌ.ＲｅｄｕｃｔｉｏｎｏｆＴｒａｕｍａｔｉｃＢｒａｉｎＤａｍａｇｅｂｙＴｓｐｏＬｉｇａｎｄＥｔｉｆｏｘｉｎｅ.ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉꎬ２０１９ꎬ２０:Ｅ２６３９.２０㊀ＣｏｓｔａＢꎬＣａｖａｌｌｉｎｉＣꎬＤａＰｏｚｚｏＥꎬｅｔａｌ.ＴｈｅＡｎｘｉｏｌｙｔｉｃＥｔｉｆｏｘｉｎｅＢｉｎｄｓｔｏＴＳＰＯＲｏ５￣４８６４ＢｉｎｄｉｎｇＳｉｔｅｗｉｔｈＬｏｎｇＲｅｓｉｄｅｎｃｅＴｉｍｅＳｈｏｗｉｎｇａＨｉｇｈＮｅｕｒｏｓｔｅｒｏｉｄｏｇｅｎｉｃＡｃｔｉｖｉｔｙ.ＡＣＳＣｈｅｍＮｅｕｒｏｓｃｉꎬ２０１７ꎬ８:１４４８￣１４５４.２１㊀ＢｏｒｏｗｉｃｚＫＫꎬＰｉｓｋｏｒｓｋａＢꎬＢａｎａｃｈＭꎬｅｔａｌ.Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅａｃｔｉｏｎｓｏｆｎｅｕｒｏｓｔｅｒｏｉｄｓ.ＦｒｏｎｔＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌ(Ｌａｕｓａｎｎｅ)ꎬ２０１１ꎬ２:５０.２２㊀ＩｒｗｉｎＲＷꎬＢｒｉｎｔｏｎＲＤ.ＡｌｌｏｐｒｅｇｎａｎｏｌｏｎｅａｓｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｆｏｒＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓｄｉｓｅａｓｅ:ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｏｍｉｓｅ.ＰｒｏｇＮｅｕｒｏｂｉｏｌꎬ２０１４ꎬ１１３:４０￣５５.２３㊀ＧｈｅｚｚｉＰꎬＳａｎｔｏＥＤꎬＳａｃｃｏＳꎬｅｔａｌ.ＮｅｕｒｏｓｔｅｒｏｉｄｌｅｖｅｌｓａｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｖｉｖｏａｆｔｅｒＬＰＳｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄｎｅｇａｔｉｖｅｌｙｒｅｇｕｌａｔｅＬＰＳ￣ｉｎｄｕｃｅｄＴＮＦｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ.ＥｕｒＣｙｔｏｋｉｎｅＮｅｔｗꎬ２０００ꎬ１１:４６４￣４６９.２４㊀ＤｅｐｌａｎｑｕｅＤꎬＭａｃｈｕｒｏｎＦꎬＷａｕｃｑｕｉｅｒＮꎬｅｔａｌ.Ｅｔｉｆｏｘｉｎｅｉｍｐａｉｒｓｎｅｉｔｈｅｒａｌｅｒｔｎｅｓｓｎｏｒｃｏｇｎｉｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｅｌｄｅｒｌｙ:Ａｒａｎｄｏｍｉｚｅｄꎬｄｏｕｂｌｅ￣ｂｌｉｎｄꎬｐｌａｃｅｂｏ￣ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｃｒｏｓｓｏｖｅｒｓｔｕｄｙ.ＥｕｒＮｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１８ꎬ２８:９２５￣９３２.(收稿日期:２０１９－０８－１７)(上接３４３页)４㊀ＭａｒｋｅｔｏｕＮＰꎬＣｈｒｏｕｓｏｓＧＰꎬＫａｎａｋａｇａｎｔｅｎｂｅｉｎＣ.Ｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙｉｎｔｙｐｅ１ｄｉａｂｅｔｅｓ:ａｒｅｖｉｅｗｏｆｅａｒｌｙｎａｔｕｒａｌｈｉｓｔｏｒｙꎬｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｄｉａｇｎｏｓｉｓ.Ｄｉａｂｅｔｅｓ/ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍＲｅｓｅａｒｃｈＲｅｖｉｅｗｓꎬ２０１７ꎬ３３:４５￣４７.５㊀ＣｈａｎｇＨＬꎬＣｈａｎｇＹＭꎬＬａｉＳＣꎬｅｔａｌ.Ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎｉｎｈｉｂｉｔｓｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｖｉａｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ￣２ａｎｄ￣９.ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＭｅｄｉｃｉｎｅꎬ２０１７ꎬ１３:７３９￣７４１.６㊀ＭｅｄｅｉｒｏｓＮＩꎬＦａｒｅｓＲＣＧꎬＦｒａｎｃｏＥＰꎬｅｔａｌ.Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ２ꎬ９ａｎｄｃｙｔｏｋｉｎｅｓｂｙｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓａｎｄｍｏｎｏｃｙｔｅｓｉｎｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｆｏｒｍｓｏｆｃｈａｇａｓｄｉｓｅａｓｅ.ＰｌｏｓＮｅｇｌｅｃｔｅｄＴｒｏｐｉｃａｌＤｉｓｅａｓｅｓꎬ２０１７ꎬ１１:２８４￣２８６.７㊀ＴｈｅｏｄｏｒｅＬＮꎬＨａｇｅｄｏｒｎＥＪꎬＣｏｒｔｅｓＭꎬｅｔａｌ.Ｄｉｓｔｉｎｃｔｒｏｌｅｓｆｏｒｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ２ａｎｄ９ｉｎｅｍｂｒｙｏｎｉｃｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｅｍｅｒｇｅｎｃｅꎬｍｉｇｒａｔｉｏｎꎬａｎｄｎｉｃｈｅｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ.ＳｔｅｍＣｅｌｌＲｅｐｏｒｔｓꎬ２０１７ꎬ８:１２２６￣１２４１.８㊀ＴｈｅｏｄｏｒｅＬꎬＨａｇｅｄｏｒｎＥꎬＣｏｒｔｅｓＭꎬｅｔａｌ.Ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ２/９ａｒｅｎｅｃｅｓｓａｒｙｆｏｒｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ￣ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍａｎｄｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ.ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＨｅｍａｔｏｌｏｇｙꎬ２０１７ꎬ５３:Ｓ６３￣Ｓ６４.９㊀中华医学会糖尿病学分会微血管并发症学组.糖尿病肾病防治专家共识(２０１４年版).中国糖尿病杂志ꎬ２０１４ꎬ６:７９２￣８０１.１０㊀ＰａｌｌａｖｉＡꎬＢｈａｔｌａＮꎬＤｈｉｎｇｒａＲ.Ｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ２ａｎｄ９ｉｎｐｒｅｅｃｌａｍｐｓｉａ.ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｎａｔｏｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙｏｆＩｎｄｉａꎬ２０１７ꎬ６６９:Ｓ７１￣Ｓ７２.１１㊀ＭａｌｉｈＳꎬＳａｉｄｉｊａｍＭꎬＳｏｌｅｉｍａｎｉａｓｌＳꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆａｄｉｐｏｒｏｎｏｎｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｃａｓｐａｓｅ３ꎬｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ２ａｎｄ９ꎬａｎｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｒａｔｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ￣ｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌ.ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｓｆａｈａｎＭｅｄｉｃａｌＳｃｈｏｏｌꎬ２０１８ꎬ３６:１￣７.１２㊀ＢｅｌｅｔｓｋａｙａＩＳꎬＫａｒｏｎｏｖａＴＬꎬＡｓｔａｋｈｏｖＳＹ.２５￣ＨｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎＤａｎｄｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ￣２ꎬ￣９ｌｅｖｅｌｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｐｒｉｍａｒｙｏｐｅｎａｎｇｌｅｇｌａｕｃｏｍａａｎｄｐｓｅｕｄｏｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅｇｌａｕｃｏｍａ/ｓｙｎｄｒｏｍｅ.２０１７ꎬ１０:１０￣１６.１３㊀ＬｉｕＮꎬＣａｏＹꎬＺｈｕＧ.Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ￣２ꎬ￣９ａｎｄｒｅｖｅｒｓｉｏｎ￣ｉｎｄｕｃｉｎｇｃｙｓｔｅｉｎｅ￣ｒｉｃｈｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈＫａｚａｌｍｏｔｉｆｓｉｎｇｉｎｇｉｖａｉｎｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｈｅａｌｔｈａｎｄｄｉｓｅａｓｅ.ＡｒｃｈｉｖｅｓｏｆＯｒａｌＢｉｏｌｏｇｙꎬ２０１７ꎬ８:６２￣６７.１４㊀ＷａｎｇＤ.Ｅｆｆｅｃｔｏｆｅｘｅｎａｔｉｄｅｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｍｅｔｆｏｒｍｉｎｔｈｅｒａｐｙｏｎｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅꎬｌｉｖｅｒｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈＮＡＦＬＤ.ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨａｉｎａｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ２０１７ꎬ２３:６７￣６９.１５㊀ＭａｔｔｈａｎＮＲꎬＳｏｌａｎｏ￣ＡｇｕｉｌａｒＧꎬＭｅｎｇＨꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｏｓｓａｂａｗｐｉｇｉｓａｓｕｉｔａｂｌｅｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｍｏｄｅｌｔｏｅｖａｌｕａｔｅｄｉｅｔａｒｙｐａｔｔｅｒｎｓａｎｄｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙｄｉｓｅａｓｅｒｉｓｋ.ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｕｔｒｉｔｉｏｎꎬ２０１８ꎬ１４８:５４２￣５５１.１６㊀ＢｒｉｎｇｓＳꎬＦｌｅｍｉｎｇＴꎬＦｒｅｉｃｈｅｌＭꎬｅｔａｌ.Ｄｉｃａｒｂｏｎｙｌｓａｎｄａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃａｔｉｏｎｅｎｄ￣ｐｒｏｄｕｃｔｓｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓａｎｄｔａｒｇｅｔｓｆｏｒｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ.ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ２０１７ꎬ１８:５６￣５９.(收稿日期:２０１９－０６－１９)。

2酶谱法检测血清基质金属蛋白酶MMP2MMP9活性护理课件

案例二
某大型综合医院利用酶谱法检测血清MMP-2、MMP-9活性，成功监测了一例结直肠癌患者的病情进展。通过定期检测血清中MMP-2、MMP-9的活性，医护人员能够及时了解患者病情变化，为调整治疗方案提供科学依据。
失败案例分析
案例一
某医疗机构在采用酶谱法检测血清MMP-2、MMP-9活性时，由于试剂质量不过关，导致检测结果不准确，未能及时发现患者的恶性肿瘤。该案例提示我们，选用质量可靠的试剂是保证酶谱法检测准确性的关键。
实验环境要求
实验室应保持清洁、干燥、通风良好，避免有害气体滞留。
实验室的废弃物应分类存放，并及时处理，避免对环境和人体造成危害。
实验室的温度和湿度应控制在适宜范围内，避免影响实验结果和仪器设备的正常运转。
废弃物处理
实验中产生的废液、废气和固体废弃物应分类收集，并按照相关
规定进行处理。
实验中使用的危险化学品和放射性物质应存放在专用的安全柜内
。
操作步骤
按照酶谱法检测血清基质金属蛋白酶mmp2、mmp9活性的实验操作步骤进行实验，确保每一步操作准确无误。
质量控制
在实验过程中进行质量控制，确保实验结果的准确性和可靠性。
结果报告与反馈
结果分析
对实验结果进行分析，包括数据整理、统计和图表制作等。
结果报告
根据分析结果撰写实验报告，包括实验目的、方法、结果和结论等。
有助于早期发现疾病，提高治疗效果和患者生存率。Leabharlann 02酶谱法检测技术
酶谱法原理
酶谱法是一种通过检测酶的活性来反映生物体生理或病理状态的
方法。
酶是生物体内的一种蛋白质，具有催化特定化学反应的能力。
通过检测酶的活性，可以了解生物体内相关生化过程的状况，进

MMP-2和MMP-9在人腹主动脉瘤组织中的表达及意义的开题报告

MMP-2和MMP-9在人腹主动脉瘤组织中的表达及意义的
开题报告
概述：
腹主动脉瘤是指腹主动脉瘤被胃肠道或在腹腔内发生的其他器官所压迫或撞击，引起的主动脉瘤的一种疾病。

这种疾病容易导致主动脉破裂，甚至导致患者死亡。

MMP-2和MMP-9分别是基质金属蛋白酶2和9的简写，这两种基质金属蛋白酶被证明在人腹主动脉瘤组织中表达。

目的：
本研究旨在分析MMP-2和MMP-9在人腹主动脉瘤组织中的表达及其意义，为研究腹主动脉瘤的发病机制提供理论依据。

方法：
1. 收集20例人腹主动脉瘤患者的组织标本和10例正常腹主动脉组织标本；
2. 使用实时荧光定量PCR和免疫组化方法检测MMP-2和MMP-9基因和蛋白的表达水平；
3. 分析MMP-2和MMP-9在腹主动脉瘤的发病机制中的作用。

预期结果：
通过以上方法的实验，预计得到以下结果：
1. 在人腹主动脉瘤组织中，MMP-2和MMP-9的表达水平均显著高于正常腹主动脉组织；
2. MMP-2和MMP-9可能参与腹主动脉瘤的形成和发展。

结论：
本研究可为腹主动脉瘤的治疗和预防提供新的思路和方向。

如果能进一步明确MMP-2和MMP-9在该疾病中的作用机制，将有助于开发新的治疗方法和预防策略，为患者的康复做出贡献。

基础学习实验4-酶谱法检测血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的活性

NGAL的三级结构

由N 端的310螺旋、C 端的α螺旋和中间的和中间的八段反平行的β折叠所构成，这
八段反平行式β折叠构成了一个β折叠桶结构。
此β折叠桶结构一端是开放的，为与配体结合提供了进口；而另一端则被短的N 端 310螺旋所封闭。在β折叠桶底部内侧排列着疏水的芳香族和脂肪族氨基酸残基，形成了一个疏水核或疏水内部，为结合亲脂性配体提供了位点。
实验设计
1. 查阅相关资料，讨论MMP-2与MMP-9在食管癌各发展阶段的活性检测能否作为监控癌症发展的一个指标，应该注意什么问题，其临床意义如何？ 2. 若发现MMP-2与MMP-9在癌症病人中出现异常，谈谈你可能采取的

含有2个锌离子和5个钙离子
右图可见一个小分子化合物位于酶活性中心，并与一个锌离子结合

NGAL能与MMP-9以二硫键的方式结合，能起到保护和调节MMP-9功能的作用，所以NGAL
与肿瘤的侵袭移动有密切的联系。
汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室李恩民教授课题组以转染有pcDNA3 空白质粒载体的SHEEC 细胞为对照，酶谱法检测结果表明，转染有pcDNA-NGAL (-) 的SHEEC 细胞分泌的MMP-9 和MMP-2的活性均明显降低；而与此同时，转染有pcDNA-NGAL (＋) 的 SHEEC 细胞分泌的MMP-9 和MMP-2的活性均明显升高。表明通过有义、反义技术使NGAL 基因表达发生改变可以对SHEEC 细胞分泌的MMP-9 和MMP-2 的活性产生明显影响。
（2）明胶酶，包括MMP-2和MMP-9,其作用底物主要是Ⅳ型胶原和明胶，还可降解Ⅶ、
Ⅸ、Ⅹ型胶原,但不能降解间质胶原；（3）间充质溶解素，包括MMP-3、MMP-7、MMP-10和MMP-11，其作用底物主要是

基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9在后发性白内障形成中的变化

ｐｎｆｒｏｒｔｎａｂｔｗｒｘｃｔｄ１ｗｅ１ｍｏｔ２ｍｏｔｓ，ｎｈｄ５ｍｏｔｓａｔｒｔｅｏｒｔｎｒｓｅｔｅｙＲｂｉｉｅａｔｐａｉ．７ｒｂｉｅｅｅｕｅｅｋ，ｎｈ，ｎｈ３ｍｏｔｓａｎｈｆｐａｉｐｃｖｌ．ａｂｔｅｅｏｓｅｎｅｈｅｏｅｉｓ
要］目的：探讨兔眼晶状体皮质吸出术后不同时期ＭＭＰ一、２ＭＭＰ一９的变化，推断其在后发性白内障形成过程中的
作用。方法：选用中国医科大学实验动物部提供的白色家兔４２只，随机分成实验组（５只）３及对照组（７只）。实验组肌肉注射氯胺酮１ｍｇｋ５／ｇ进行麻醉，由专人行双眼透明晶状体皮质吸出术。术后１阿托品眼膏散瞳双眼，％分别于术后１ … ２３５个月各周１、处死７只兔；对照组不做处理，直接处死。石蜡标本进行免疫组织化学定位检测ＭＭＰ一、２ＭＭＰ一９冷冻标本用Ｚｍａｒｐｙ方法，ｙｇａｈ进行ＭＭＰ－、２ＭＭＰ一９活性测定。结果： ①兔眼后发性白内障形成情况：术后不同时期裂隙灯下观察可见术后前３ｄ前房内炎症反应明显，虹膜充血；术后１可见前囊截缘出现白色环状混浊，周但后囊尚透明；后２周后囊呈薄纱状；术１个月出现线条状混浊，
［关键词］基质金属蛋白酶；后发性白内障；晶体上皮细胞
中图分类号：７６１Ｒ７．文献标识码：Ａ文章编号：０４— ４２２０）９—１６０１００１（０７００８— ４

血清MMP-2、MMP-9表达在冠状动脉粥样硬化斑块诊断中的

血清ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９表达在冠状动脉粥样硬化斑块诊断中的价值探讨发表时间：2015-06-25T14:52:46.437Z 来源：《医师在线》2015年4月第7期供稿作者：陈景燕[导读] 临床实验检测分析血清ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９水平在冠状动脉粥样硬化斑块诊断中的应用依据及推广价值。

陈景燕（宁夏中卫市人民医院７５５０００）【摘要】目的：临床实验检测分析血清ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９水平在冠状动脉粥样硬化斑块诊断中的应用依据及推广价值。

方法；随机性选取宁夏中卫市人民医院内科２０１４年１月至２０１５年２月间收治的４８例冠状动脉病变患者为研究对象，根据病变类型分为ＡＣＳ组（２０例）、ＳＡ组（２８例），依据冠状动脉ＣＴ造影结果分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型，采用酶联免疫吸附发检测两组患者血清ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９指标进行比较分析。

结果：ＳＡ组、ＡＣＳ组患者血清ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９表达水平均明显高于健康对照组，ＡＣＳ组患者的血清ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９表达水平高于ＳＡ组，Ⅰ型、Ⅲ型班级的血清ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９表达水平明显低于Ⅱ型斑块。

结论：通过对两组患者血清ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９指标进行对照分析，冠状动脉粥样硬化斑块患者的血清ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９指标出现显著上升，可用于评估冠状动脉粥样硬化斑块进展情况。

【关键词】：冠状动脉粥样硬化斑块；粥样硬化斑块；ＭＭＰ－２；ＭＭＰ－９【中图分类号】Ｒ２【文献标号】Ａ【文章编号】２０９５－７１６５（２０１５）０７－０４３３－０２冠状动脉粥样硬化（Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）属于比较常见的动脉硬化病变类型，其可导致受累及动脉内膜出现脂质、复合糖类、钙沉积，并引发纤维组织大量增生及动脉中层病变。

若冠状动脉粥样硬化患者病情未得到有效控制，则可因血脂代谢异常导致胆固醇、甘油三酯大量沉积与冠状动脉血管壁上并形成硬化斑块，严重时可引发急性冠脉综合征、心脏缺血。

长期临床研究发现，引发冠状动脉粥样硬化斑块的病因较多及发病机制比较复杂，其中可能与血清蛋白产物水平、心功能改变有关［１］。

MMP-2、MMP-9在乳腺癌中的表达及其意义

MMP-2、MMP-9在乳腺癌中的表达及其意义冯悦年【期刊名称】《实用肿瘤学杂志》【年(卷),期】2008(022)004【摘要】目的检测基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)与乳腺癌的淋巴结转移、病理分级、患者年龄及肿瘤大小之间的可能关系,及对术后的影响.方法 65例乳腺癌蜡块,采用免疫组化S-P法染色,以细胞浆中有棕色颗粒计数分为:阴性;弱阳性;中度阳性及强阳性.结合随访材料进行统计分析.结果 MMP-2和 MMP-9的表达与乳腺癌患者的年龄及肿瘤大小无关;MMP-2与淋巴结转移有关,无淋巴结转移者,MMP-2表达较低;有淋巴结转移者,MMP-2表达较高.MMP-9的表达与淋巴结转移情况则无关.MMP-2和MMP-9的表达与病理分级相关.二者均影响预后,MMP-2低表达组术后10年生存率为100%,MMP-2高表达组术后1、3、5及10年生存率分别为100%、86.11%、75.0%、66.67%,两组间有显著性差异(P 《0.01);MMP-9低表达组术后10年生存率为100%,MMP-9高表达组术后1、3、5及10年生存率分别为100%、86.49%、72.97%、64.86%,两组间有显著性差异(P《0.01).结论 MMP-2和MMP-9的表达与乳腺癌病理学分级有关;MMP-2与淋巴结转移有关,而MMP-9与淋巴结转移无关.二者高表达生存率均降低,影响预后.【总页数】5页(P331-334,357)【作者】冯悦年【作者单位】大连市肿瘤医院,大连,116033【正文语种】中文【中图分类】R736.1【相关文献】1.乳腺癌中EZH2，MMP-2和MMP-9蛋白表达及其临床意义 [J], 嵇晓辉;闫琛;刘红伟;杨金花;2.乳腺癌中EZH2,MMP-2和MMP-9蛋白表达及其临床意义 [J], 嵇晓辉;闫琛;刘红伟;杨金花3.乳腺癌组织中 VEGF-D、MMP-2及 MMP-9的表达及其临床意义 [J], 张阿娜4.MMP-2和MMP-9在乳腺癌中的表达及其临床意义 [J], 崔泳;李宏元;王鹤令;刘金钢5.尿液中MMP-2、MMP-9及MMP-9/NGAL复合物的表达在乳腺癌筛查中的意义 [J], 申哲洙;顾晋;赵威;张志谦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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不同分子量的蛋白质在凝胶中运动示意图
不同聚丙烯酰胺凝胶浓度对不同分子量的蛋白质混合物分离能力的关系
5％ 10％
15％ 200 200 20
29
29
45
29
第二部分，酶谱法检测血清中基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的活性
肿瘤细胞的侵袭移动
A C
（2）弃去洗涤缓冲液，然后加入孵育缓冲液没过胶面，至 37℃恒温箱中，24h后取出；
（3）弃去孵育缓冲液，加入0.1%考马斯亮蓝染液染色约30min，回收染液，加入脱色液脱色至蓝色背景和白色条带均十分明显时，用 5％乙酸中止脱色；（4）待凝胶在5％乙酸中恢复到适当大小后，用凝胶图象处理系统分析结果，以白色条带的净光密度值相对定量样品中酶活性。
实验操作
样品制备: 血清、血浆和尿样品可取适量直接与2×SDS 样品缓冲液等体积混匀进行下
一步实验，如酶活性太高造成显带不理想，可适当进行稀释 ; 凝胶的制备: 玻璃板对齐后放入夹中垂直卡紧。按表格配10％分离胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶，灌胶时，可用5ml加样枪吸取凝胶沿玻璃板加进去，然后胶上加一层异丙醇，以隔离空气中的氧，促进凝胶聚合（灌胶时开始可快一些，胶面快到所需高度时要放慢速度。操作时凝胶一定要沿玻璃板流下，这样胶中才不会有气泡）。约几分钟后当异丙醇和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝了，再等 3min使胶充分凝固就可倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。按前面表格配 4％的浓缩胶，加入TEMED后
NGAL的三级结构

由N 端的310螺旋、C 端的α螺旋和中间的和中间的八段反平行的β折叠所构成，这
八段反平行式β折叠构成了一个β折叠桶结构。
此β折叠桶结构一端是开放的，为与配体结合提供了进口；而另一端则被短的N 端 310螺旋所封闭。在β折叠桶底部内侧排列着疏水的芳香族和脂肪族氨基酸残基，形成了一个疏水核或疏水内部，为结合亲脂性配体提供了位点。
电泳：带电粒子在电场中的定向移动。
由于混合物各组分所带电荷性质、数量以及分子量各不相同，在同一电场作用下，各组分的泳动方向和速度也各有差异，所以在一定时间内，它们移动距离不同，从而可达到分离鉴定的目的。
影响泳动率u的因素内因：1.净电荷：电荷愈多愈快 2.粒子大小：颗粒直径愈小愈快 3.粒子形状：愈接近球形愈快外因：1.V ( U/L)：电场强度越高电泳速度越快 2.缓冲液的pH (pH恒定)： PH值决定带电颗粒的解离程度，决定物质所带净电荷的多少 3. 离子强度 [I] 最适 :0.02-0.2 缓冲液的离子强度越高，电泳速度越慢 4.电渗：液体对固体支持物的相对移动，应尽量避免选用有电渗作用的支持物

含有2个锌离子和5个钙离子
右图可见一个小分子化合物位于酶活性中心，并与一个锌离子结合

NGAL能与MMP-9以二硫键的方式结合，能起到保护和调节 MMP-9功能的作用，所以NGAL
与肿瘤的侵袭移动有密切的联系。
汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室李恩民教授课题组以转染有 pcDNA3 空白质粒载体的SHEEC 细胞为对照，酶谱法检测结果表明，转染有pcDNA-NGAL (-) 的SHEEC 细胞分泌的MMP-9 和MMP-2的活性均明显降低；而与此同时，转染有pcDNA-NGAL (＋) 的 SHEEC 细胞分泌的MMP-9 和MMP-2的活性均明显升高。表明通过有义、反义技术使NGAL 基因表达发生改变可以对SHEEC 细胞分泌的MMP-9 和MMP-2 的活性产生明显影响。
MMP-2的结构

Pre: 信号肽序列 Pro: 带巯基的前肽 Zn: Zn离子结合部分 II: 能结合胶原的II型纤维结合素结构域 H: 绞链区 Hemopexin：类血红素蛋白结构，由四段重复序列组成，其中第一个与第四个间存在一个二硫键。
MMP-9的结构

由三个α螺旋与5个β折叠构成
（2）明胶酶，包括MMP-2和MMP-9,其作用底物主要是Ⅳ型胶原和明胶，还可降解Ⅶ、
Ⅸ、Ⅹ型胶原,但不能降解间质胶原；（3）间充质溶解素，包括MMP-3、MMP-7、MMP-10和MMP-11，其作用底物主要是
基质中的蛋白多糖和糖蛋白，如纤维粘连蛋白 (FN)、层粘连蛋白(LN)，间充质溶解素
对胶原的作用不同于间质胶原酶和明胶酶，它们能降解 Ⅳ、Ⅴ、Ⅷ、Ⅹ型胶原酶以及 Ⅰ型胶原的氨基端。

ECM在上皮或内皮细胞的基底部，即以基底膜(basement membranes，BM)的形式存在，在细胞间结构以间质结缔组织(interstitial connective tissue)形式存在。

胶原是ECM的主要成分，目前已发现，至少有12种不同胶原类型，其中以I、Ⅱ、Ⅲ 型胶原是间质结缔组织中的主要成分。Ⅳ型胶原则主要存在于基底膜内。
催化剂
丙烯酰胺
N,N′-甲叉（亚甲基）双丙烯酰胺
聚丙烯酰胺
聚丙烯酰胺凝胶有下列特性：
1. 在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好； 2. 化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶；
3. 对pH和温度变化较稳定；
4. 几乎无吸附和电渗作用，只要Acr纯度高，操作条件一致，则样品分离重复性好； 5. 样品不易扩散，且用量少，其灵敏度可达 10-6g； 6. 凝胶孔径可调节，根据被分离物的分子量选择合适的浓度，通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径；
生。分子量为92kDa，是MMPs中分子量最大的酶。
中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（neutrophil gelatinase associated lipocalin， NGAL)是1993年Kjeldsen等人在研究MMP-9在细胞内存在形式时发现的，它能够与MMP-9聚合形成异源二聚体，保护和调节MMP-9活性，从而促进恶变细胞的浸润和转移。检测MMP-9和MMP-2的活性，对分析肿瘤细胞恶性程度和预后提供帮助。
M：蛋白marker；1. 细胞培养基；2. pcDNA3；3. pcDNA-NGAL ( + )；4. pcDNA-NGAL ( - )
实验原理
MMP-2和MMP-9活性的强弱与肿瘤浸润和转移的能力密切相关。明胶是这两种酶的底物。所以在体外通过酶谱法（Zymography）检测样品（组织，细胞培养液，血清，血浆，尿）中MMP-2和MMP-9的活性，对了解肿瘤细胞的恶性程度、监测治疗效果
7. 分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和电荷效应为一体。因而较醋酸
纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有更高的分辨率。
SDS－PAGE的原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状结构，具有分子筛效应，蛋白质在电泳中保持完整的状态，蛋白在其中依三种因素分开：蛋白大小，形状和电荷。而SDS-PAGE仅根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白。这个技术首先是 1967年由 shapiro建立，他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，电荷因素可以忽视。 SDS（Sodium Dodecyl Sulfate）是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使绊胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白 - SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的蛋白量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。因此在电泳时，蛋白质分子的迁移速度则主要取决于蛋白质分子大小。

通过影响细胞外基质，基质金属蛋白酶蛋白家族参与胚胎发育、形态发生、组织重塑
等过程，并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。

MMP-2又叫明胶酶A，其蛋白主要由纤维结缔组织细胞和肿瘤细胞产生，分子量为72kDa。

MMP-9又称为明胶酶B，主要由单核细胞、巨噬细胞多形核白细胞和肿瘤细胞产

肿瘤细胞的侵袭是需要与细胞增殖、分化、移动的相关基因及其表达调控模式的改变
和促进细胞移动的外界因素两者的共同作用。

虽然肿瘤细胞侵袭的分子机制还不是十分清楚，但已发现许多调控细胞侵袭转移的关键分子及其信号通路。

肿瘤细胞通过其表面受体与ECM中的各种成分粘附后激活或分泌蛋白降解酶类来降解基质，从而形成局部溶解区，构成了肿瘤细胞转移运行通道。一般恶性程度高的肿瘤细胞具有较强的蛋白水解作用，可侵蚀破坏包膜，促进转移。目前较为关注的酶主
要是丝氨酸蛋白酶类，如纤溶酶原激活物(plasminogen activator, PA)和金属蛋白酶
(metalproteinase, MMP)类，如胶原酶IV、基质降解酶、透明质酸酶。
基质金属蛋白酶蛋白家族
MMPs家族成员根据其在细胞中表达部位的不同，分为胞质型和膜型两大类。前者分布在胞质中，后者表达在膜上。胞质型MMPs根据其作用底物的特异性、敏感性及氨基酸序列的同源性分为三大类：（1）间质胶原酶，包括MMP-1、MMP-5、MMP-8、MMP-13，其作用底物主要为间质胶原, 即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅶ、Ⅹ型胶原, 但不能降解明胶和Ⅳ型胶原；
电泳设备
垂直电泳系统
水平电泳系统
聚丙烯酰胺凝胶电泳原理
聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide，简称Acr)和交联剂N,N′-甲叉双丙烯酰胺 (N,N ′ -methylene-bisacylamide,简称Bis)在加速剂 N,N,N,N-四甲基乙二胺(N,N,N,Ntetram-ethyl ethylenedia mine，简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(ammonium persulfate (NH4)2S2O3，简称AP) 的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)。