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气相色谱指纹图谱用于连翘的质量控制

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气相色谱指纹图谱用于连翘的质量控制袁　敏1　曾　志31　宋力飞2　杨　挺1　刘乡乡2　曹　骋1　曾和平11(华南师范大学化学系分析测试中心,广州510631)

2(广州香雪制药股份有限公司,广州510530)

摘　要　建立连翘挥发油的指纹图谱测定分析方法,为含连翘中药制剂制定指纹图谱奠定基础。采用水蒸汽蒸馏法提取不同产地连翘的挥发油,用毛细管气相色谱技术测定其指纹图谱(GC2FPS),并选用模糊聚类法分析比较。该方法灵敏度高,谱图有较好的重现性,样品稳定性好,11种连翘色谱峰重叠率>97%。聚类分析法使谱图分析更为快速、准确,适用于连翘的质量控制。

关键词　连翘,指纹图谱,毛细管气相色谱,模糊聚类

　2002205216收稿;2002212202接受本文系广东省科技计划重大专项及重点项目(A301020101)、广东省自然科学基金资助项目(011442)、广东省教育厅高校自然科学研究项目(0124)及广东省中医药局科研项目(401039)

1　引 言中药连翘为木犀科植物(Forsythiasuspense(Thunb.)Vahl)的干燥果实。主要产于山西、陕西、河南等

省。具有清热解毒、抗病毒及保肝消炎功效。其挥发油的主要成分是α2水芹烯、蒎烯、对2聚伞花烯和芳樟醇,其中对2聚伞花烯和芳樟醇显示抗菌、抗病毒作用1。但对于中医理论指导下的中药,尤其是复方制剂,任何单一活性成分都不能确切反映中医用药所体现的整体疗效。某疾病的发生是多个病理过程的综合反映,对于特定疾病的某几个病理环节,中药复方的化学成分可能都有作用,或通过代谢以后的产物才发挥作用。因此,以一个或几个成分为指标判断中药提取工艺的优劣缺少中医用药理论基础,而宏观地综合分析将成为必然。色谱技术测定指纹图谱具有综合、宏观、“模糊”的非线性特点。在药效、毒理临床试验已经确认品种安全有效的前提下,可用指纹图谱技术确定产品的真伪2。近年来,高压液相色谱(HPLC)3、核磁共振(1HNMR)、薄层色谱(TLC)、气相色谱(GC)及随机扩散增多态DNA技术

(RAPD)在中药指纹图谱鉴定做了不少工作,为中药分析提供了有效的分析手段。本实验按照《中药注

射剂指纹图谱研究的技术要求》(暂行)的规定,以水蒸汽蒸馏法提取不同产地连翘的挥发油,用毛细管气相色谱技术测定其指纹图谱(GC2FPS),选用模糊聚类法分析比较。对产品的出油率、稳定性,实验方法的重现性,仪器的精密度、谱图的重叠率、测试条件的最佳选择等方面做了一系列研究,考察了分析方法的可靠性,建立连翘挥发油指纹谱图。

2　实验部分2.1　仪器与试剂色谱仪:GC216A气相色谱仪,氢火焰检测器(FID)(日本岛津公司)。色谱柱:25m×Φ0.32mm。ZYT21石英毛细管柱(兰州化学物理研究所制)。试剂:乙醚(分析纯),正己烷(分析纯),无水硫酸钠(分析纯)。样品:11种连翘药材。2.2　样品的提取分别称取原材料200g,用水蒸汽蒸馏法提取挥发油,用1mL正己烷定容制成供试品。11种样品来源、编号及出油率见表1。从实验结果可以看出,11种连翘提取的挥发油中,出油率较高的是2、5、10、4、8号样品,所有青翘的出油率都高于老翘。2.3　测试条件

柱温:T

c=60℃(3min)3℃Πmin250℃,检测器温度TD=250℃,进样器温度Tj=230℃;进样量:0.5

μL;载气流速:25mLΠmin;分流比:30∶1。

第31卷2003年4月 分析化学(FENXIHUAXUE)　研究简报ChineseJournalofAnalyticalChemistry 第4期455～458表1　样品来源和出油率Table1　Thesourceandextractionrateofthesamples

样品SampleNo.品　名 Type 来　源 Source

出油率

Extractionrate(%)

1青翘PuberaForsythiasuspense(Thunb.)Vahl陕西安康AnkangShaanxi1.272青翘PuberaForsythiasuspense(Thunb.)Vahl河南三门峡SanmenxiaHenan2.383老翘MaturityForsythiasuspense(Thunb.)Vahl河南焦作JiaozuoHenan0.324青翘PuberaForsythiasuspense(Thunb.)Vahl河南焦作JiaozuoHenan1.965青翘PuberaForsythiasuspense(Thunb.)Vahl河南嵩县HaoxianHenan2.106老翘MaturityForsythiasuspense(Thunb.)Vahl河南嵩县HaoxianHenan01967青翘PuberaForsythiasuspense(Thunb.)Vahl陕西渭南WeinanShaanxi1.168青翘PuberaForsythiasuspense(Thunb.)Vahl河南南阳NanyangHenan1.929青翘PuberaForsythiasuspense(Thunb.)Vahl广州天河TianheGuangzhou1.4410青翘PuberaForsythiasuspense(Thunb.)Vahl广州天河TianheGuangzhou2.2911青翘PuberaForsythiasuspense(Thunb.)Vahl广州天河TianheGuangzhou1.33

3　结果与讨论3.1　仪器精密度及重现性实验取同一份样品,在相同的色谱条件下,连续进样6次,考察色谱峰保留值和色谱峰面积的一致性。实验结果得出各色谱峰相对保留值的RSD值<0.21%;色谱峰面积的RSD<4.16%,表明仪器精密度好,样品测定具有较好的重现性。3.2　样品稳定性试验选取5号样品,色谱条件不变,分别在间隔10min、1、2、3、5、7、24、48、72、96和120h进行测定共11

次,考察各主要色谱峰相对保留值,结果表明:各主要组分保留值比较稳定,其RSD值<0.5。另外,我们曾把样品放在—4℃保存,4个月后测定,谱图保持不变,说明样品稳定性较好。3.3　指纹图谱的建立在上述条件下测定11种连翘药材样品,其典型的色谱指纹图谱见图1。选择峰11为参照峰,此峰

图1　1号样品的气相色谱指纹图Fig.1　Gaschromatographic(GC)fingerprintofsampleNo.1

检测条件(detectedcondition):柱温(columntemperature):T

c=60℃(3min)3℃Πmin250℃;检测器温度(detectortemperature):TD=

250℃;进样器温度(injectertemperature):Tj=230℃;色谱柱(column):25m×0.32mmZOV21701石英毛细管柱(capillarychromatographiccolumn);进样量(injection):0.5μL。为所有连翘样品所共有的,然后分别求出各组分与之相比的α值(调整保留时间之比)和各组分的相对峰面积(峰面积之比),制成各样品的GC2FPS表进行分析讨论4,其结果见表2。

3.4　指纹图谱的聚类分析11种连翘挥发油出峰数基本一致,约25个,选择19个比较明显的共有峰进行分析,根据PGC2FPS表中的数据,选用几何平均最小法对11张图谱进行聚类分析,结果见图2。图中X轴表示样品号,Y轴

654 分析化学第31卷表2　11种样品的GC2FPS

Table2　TheGasChromatography2fingerprintspectraof11samples

α样品Sample

1234567891011相对峰面积Relativepeakarea

0.390.570.560.590.570.590.490.490.540.630.610.860.424.524.804.614.785.064.584.354.735.375.198.910.510.310.300.320.330.300.260.300.250.310.270.470.6417.8512.919.0213.913.5917.5318.3117.0218.4713.1733.110.690.470.520.480.560.560.480.450.470.520.570.980.760.070.060.050.070.060.060.060.060.060.050.160.820.530.520.510.540.460.480.490.520.480.470.510.860.480.490.470.500.520.500.530.470.470.470.940.900.340.370.330.370.380.330.350.320.320.350.460.940.390.170.370.200.420.390.460.250.340.310.501.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.130.240.230.230.250.290.250.240.230.220.220.241.600.080.090.080.090.090.080.100.080.100.090.091.730.090.060.100.070.070.070.060.060.100.070.151.832.082.162.082.052.242.142.32.292.322.192.481.880.040.040.050.030.060.030.030.060.080.040.081.920.060.020.060.030.030.060.060.030.060.030.091.970.360.270.370.280.280.540.410.400.370.310.452.050.100.030.090.060.060.080.050.060.110.040.24

表示相关系数,数值越大,表示谱图越相似。可以看到,相关系数为0.97时,1、3号样品归为一类;相关

　图2　样品的聚类分析图Fig.2　Fuzzyclusterofsamples

系数为0.96时,2、4号样品归为一类;相关系数为0195时,1、3、6、7、9号样品归为一类;2、4、5、10号样品归为一类;相关系数为0.94时,2、4、5、10、8号样品归为一类;相关系数为0.93时,1、3、6、7、9、2、4、5、10、8号样品归为一类;相关系数为0.83时,全部样品归为一类。总的来说,这11张谱图都有较好的相似性。由于这11个样品是经过药厂筛选鉴定的,所以我们把这些图谱作为标准谱图,当其它待测药物图谱与其比较,相关系数<0.75时,可认为药物质量欠佳。从连翘挥发油的质谱分析可知,α值为0.64时,

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第五章指纹图谱

第五章指纹图谱


S1 S2 S3 S4 S5 对照指纹图谱
1.000 0.997 0.995 0.995 0.997 0.998
0.997 1.000 0.998 0.997 0.996 0.999
0.995 0.998 1.000 0.998 0.991 0.999
0.995 0.997 0.998 1.000 0.990 0.999
♦ 液相色谱 ● 色谱柱：比较试验加以选择
流动相：至少用三种不同组成比较
流动相 1
流动相 2
流动相 3
适宜的柱温和检测波长
15 203
20
210
25
236
30
254
35
365
五、方法学验证
1. 稳定性试验
供试品溶液的稳定性
表3 川芎指纹图谱稳定性试验相似度计算结果（n=5）
对照指纹图谱 S1 S2 S3 S4 S5
红外光谱图
小蓟丁酮提取物的红外 指纹图谱
• 中国药典规定：小 蓟在开花时采。 • 根据1384cm-1处 吸收峰的有无，可 以鉴别其采集时间 是否正确。
质谱（ＭＳ）
• 按照带电粒子的质荷比（ｍ／ｚ）和其相 对丰度大小排列组成图谱。 • 中药特征提取物置质谱仪中进行轰击裂解 为不同的碎片，获得提取物中化学成分的 MS图，不同中药由于所含化学成分的种类 及组成比例的不同，所得质谱图中分子离 子峰和碎片离子峰亦不一致。
HPCE, CE/MS 光谱技术 UV IR
波谱技术 MS NMR X-射线衍射法 分子生物学技术
薄层色谱
●可在同板同时分析多达18个样品， ●展距局限在 10cm~20cm ，‘柱效’ 时效高 相对较低，对复杂组分 ●所用的是正相展开剂，其组成变 不提高分离度则难以提 化灵活，可适应多种成分的分离 取指纹特征的药材受到 限制。 ●离线操作，即可直观比较图谱， 又可扫描得到轮廓图和处理数据 ●开放系统，对环境温 度、相对湿度要求较高 ●占机时间短
《连翘对照提取物制备及应用研究》

《连翘对照提取物制备及应用研究》

《连翘对照提取物制备及应用研究》一、引言连翘是一种常见的中草药，具有清热解毒、消肿散结等功效，广泛应用于中医药领域。

随着现代科技的发展，连翘对照提取物的制备及应用研究逐渐成为研究热点。

本文旨在探讨连翘对照提取物的制备方法、药理作用及其在医药、保健等领域的应用。

二、连翘对照提取物的制备1. 材料与设备连翘原料、乙醇、蒸馏水、旋转蒸发仪、超声波清洗器等。

2. 制备方法（1）将连翘原料清洗干净，晾干后粉碎成粉末；（2）将粉末加入乙醇中，进行超声波辅助提取；（3）将提取液进行旋转蒸发，去除乙醇，得到连翘对照提取物。

三、连翘对照提取物的药理作用连翘对照提取物具有清热解毒、抗炎、抗氧化等作用。

研究表明，连翘对照提取物能够抑制多种病原微生物的生长，具有广谱抗菌作用。

此外，它还能增强机体免疫力，减轻炎症反应，对多种疾病具有辅助治疗作用。

四、连翘对照提取物在医药领域的应用1. 用于感冒、流感等病毒感染性疾病的治疗。

连翘对照提取物具有抗病毒作用，可有效缓解病毒感染引起的症状。

2. 用于抗炎、抗氧化的保健和治疗。

连翘对照提取物具有抗炎、抗氧化作用，可用于治疗各种炎症性疾病和抗氧化保健。

3. 用于提高机体免疫力。

连翘对照提取物能够增强机体免疫力，提高抵抗力，预防疾病的发生。

五、连翘对照提取物在保健领域的应用1. 用于抗衰老保健。

连翘对照提取物具有抗氧化作用，能够清除体内自由基，延缓衰老。

2. 用于美容护肤。

连翘对照提取物具有美白、祛斑、抗氧化的作用，可用于制作美容护肤品。

3. 用于调节免疫功能。

连翘对照提取物能够调节机体免疫功能，提高身体抵抗力，对保持身体健康具有重要作用。

六、结论连翘对照提取物的制备方法简单、有效，其药理作用广泛，具有抗病毒、抗炎、抗氧化等作用。

在医药领域，连翘对照提取物可用于治疗感冒、流感等病毒感染性疾病，同时也可用于抗炎、抗氧化的保健和治疗。

在保健领域，连翘对照提取物可用于抗衰老保健、美容护肤和调节免疫功能等方面。

连翘提取物质量标准

连翘提取物质量标准

连翘提取物质量标准连翘，又名金银花，是一种常见的中药材，具有清热解毒、泻火解毒、散风清热等功效。

连翘提取物作为一种常见的中药材提取物，在医药、保健品等领域有着广泛的应用。

为了确保连翘提取物的质量安全和有效性，制定了一系列的质量标准，以保障连翘提取物的质量。

一、外观特征。

连翘提取物应为呈黄色至棕黄色的粉末状物质，具有特有的花香气味，无异味。

其外观应干燥，无结块、霉变等现象。

二、理化指标。

1. 含量测定。

连翘提取物中有效成分金银花苷的含量应符合国家标准规定，一般在20%~40%之间。

2. 溶剂残留。

连翘提取物中溶剂残留量应符合国家标准规定，一般不得超过10ppm。

3. 水分含量。

连翘提取物中水分含量应符合国家标准规定，一般不得超过5%。

4. 灰分含量。

连翘提取物中灰分含量应符合国家标准规定，一般不得超过5%。

三、微生物指标。

1. 细菌总数。

连翘提取物中细菌总数应符合国家标准规定，一般不得超过1000CFU/g。

2. 酵母菌和霉菌总数。

连翘提取物中酵母菌和霉菌总数应符合国家标准规定，一般不得超过100CFU/g。

3. 大肠菌群。

连翘提取物中大肠菌群应符合国家标准规定，一般不得检出。

四、重金属指标。

连翘提取物中重金属含量应符合国家标准规定，一般不得超过国家规定的限量标准。

五、农药残留。

连翘提取物中农药残留量应符合国家标准规定，一般不得超过国家规定的限量标准。

六、贮存。

连翘提取物应贮存在阴凉干燥处，远离阳光直射，避免潮湿。

七、包装。

连翘提取物的包装应符合国家标准规定，包装完好，密封良好，防潮防尘。

综上所述，连翘提取物作为一种常见的中药材提取物，在应用过程中需要严格遵守相关的质量标准，以确保其质量安全和有效性。

只有通过严格的质量控制，才能更好地发挥连翘提取物的药用价值，为人们的健康提供保障。

色谱指纹图谱在中药质量控制中的应用

色谱指纹图谱在中药质量控制中的应用

色谱指纹图谱在中药质量控制中的应用摘要：本文从指纹图谱的定义和特点，色谱指纹图谱的分类及其在中药质量控制中的应用几方面进行了阐述，以期为今后中药质量控制研究提供一定的信息和参考。

关键词：色谱指纹图谱；中药；质量控制近年来，随着中医药文化的弘扬和中医药产业的复兴，中药消费群体在逐渐壮大。

为了实现中药的现代化，对其进行质量控制以保证中药的安全和有效性已经成为关键环节。

其中，指纹图谱是目前公认的最适合、有效的中药质量控制手段。

1指纹图谱的定义和特点指纹图谱是指将中药材或中药制剂经过适当的前处理之后，利用现代检测技术对中药化学信息以图形或图像的方式进行表征并加以描述【1】。

指纹图图谱的基本特性是整体性和模糊性，具有信息量大、可量化、专属性强、稳定性好、有效性高、重现性好等优点。

现代检测技术主要包括色谱、光谱、波谱、质谱、生物或其联用技术，其中，色谱法具有分离效果好、样品用量少、分析速度快、灵敏度高等优点，因此，色谱指纹图谱在中药质量控制中的应用最为广泛。

2色谱指纹图谱的分类与应用色谱指纹图谱主要包括以下几种：（1）薄层色谱（TLC）指纹图谱薄层色谱法是将固定相（硅胶、聚酰胺、氧化铝、纤维素、硅藻土等）均匀涂布在玻璃板或塑料板上形成薄层板，将中药材或中药制剂的样品溶液点于薄层板的一端，然后将其转移到密闭的容器浸入适当极性的溶剂（展开剂）中展开。

利用各化学成分在展开剂中溶解能力和被固定相吸附能力的差异，实现各成分的薄层色谱分离。

薄层色谱法具有成本低、操作简便、分析直观等优点，但同时存在分离效能低、重现性差、定量不准确等缺陷，通常是用以初步评价中药质量。

廖华丽等【2】建立了防风薄层色谱指纹图谱，可有效地对防风真伪进行鉴别。

赵丽茹等【3】采用薄层色谱法，建立了不同产地两头尖药材的薄层色谱指纹图谱，发现各产地的两头尖药材的薄层色谱图有所不同，为两头尖药材的质量评价提供了可靠方法。

（2）气相色谱（GC）指纹图谱气相色谱法是以氮气、氢气或氦气等气体作为流动相，以固体吸附剂（硅胶、分子筛、活性炭、氧化铝、多孔聚合物等）或涂布在惰性固体上的高沸点液体（聚乙二醇、聚硅氧烷类、烃类、聚烷基氧化物、酯类、聚酯和树脂等）作为固定相，利用各化学成分在吸附剂表面吸附能力或者在固定液中溶解能力的差异，实现各成分的气相色谱分离。