PMP柱前衍生高效液相色谱法-终版
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液相色谱柱前衍生
液相色谱柱前衍生是一种用于提高液相色谱分析灵敏度和选择性的技术。
在液相色谱分析中，样品中的某些化合物可能不具有足够的紫外吸收或响应，导致无法在液相色谱仪中进行检测。
这时，可以使用柱前衍生技术，通过在样品中加入一种或多种衍生剂，将目标化合物转化为具有更强紫外吸收或响应的衍生物，从而提高了检测灵敏度和选择性。
柱前衍生技术可以用于多种类型的液相色谱分析，包括反相高效液相色谱、正相高效液相色谱、离子交换高效液相色谱等。
在反相高效液相色谱中，常用的衍生剂包括甲醇、乙醇、乙腈等有机溶剂，这些衍生剂可以与目标化合物反应生成具有更强紫外吸收的衍生物。
在正相高效液相色谱中，常用的衍生剂包括胺类、醇类等化合物，这些衍生剂可以与目标化合物反应生成具有更强极性的衍生物，从而提高了分离效果。
在离子交换高效液相色谱中，常用的衍生剂包括酸类、碱类等化合物，这些衍生剂可以与目标化合物反应生成具有更强离子交换能力的衍生物。
柱前衍生技术的优点包括：提高检测灵敏度和选择性；改善分离效果；简化样品处理过程；适用于多种类型的液相色谱分析。
然而，柱前衍生技术也存在一些缺点，例如操
作繁琐、需要使用有毒有害的衍生剂等。
因此，在使用柱前衍生技术时需要注意安全问题，并选择合适的衍生剂和实验条件。
柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成
图 3 当归 多糖 经 TFA 水 解的 时 间对 各组成单糖的测定影响
F ig. 3 The e ffects of com ponent m onosacchar ides o f A ngelica polysaccha rides fo r different trifluoacetic ac id ( T FA ) hydro lysis tim e 1. 葡萄糖醛酸 ( glu cu ron ic acid) ; 2. 甘露糖 ( m annose) ; 3. 鼠李糖 ( rhamn ose); 4. 半乳糖 醛酸 ( ga laduron ic acid ) ; 5. 半 乳 糖 ( galactose); 6. 葡 萄 糖 ( g lucose) ; 7. 阿 拉 伯 糖 ( arabonose) 。
3 结果与讨论
3. 1 单糖对照品 PM P衍生物的 HPLC 分离 为实现当归多糖各组成单糖的高效分离, 本实验对当归多糖可能包含的 G lc、A ra、M an、G al、Rha、
Xyl、G lcUA、GalUA 及内标 Fuc等 9种标准单糖 PMP 衍生物的高效液相色谱分离条件进行了优化。结 果表明, 磷 酸缓 冲液 ( KH2 PO4-N aOH ) 的 pH 6. 9, 时 间梯 度 为 0→ 10→ 30 m in 和 相 应浓 度 梯度 为 0→ 8% → 20% 溶剂 B的梯度洗脱模式是分离此 9种单糖衍生物的较理想色谱分离条件。
1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 ( PM P) 柱前衍生化 H PLC 测定单糖含量的方法经过了不断地发展和完 善 [ 3~ 7] , 并成功地用于毛细管电泳分析。 PMP 是还原性糖的最好衍生化试剂之一, 如 PM P 衍生物不易 裂解, 分析时不产生异构峰, 且在 250 nm 处有强烈的紫外吸收。本研究采用 PMP 衍生化方法, 用常规 的紫外检测器和 C18烷基键合柱, 建立适于当归多糖单糖组成测定的 HPLC 新方法, 达到灵敏、快速、准 确、方便和可在线大批量分析的目标。
柱前衍生高效液相色谱法测定减肥药中的芬氟拉明 翦英红 龙
表 !$ 回收率及精密度 ! " (e* " = 6 ^ D :!$4 : 9 2 Y : G > : ?6 8 H\ G : 9 > ? > 2 8! (e*
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酸水解-柱前衍生化-高效液相色谱法测定面膜化妆品中透明质酸
酸水解-柱前衍生化-高效液相色谱法测定面膜化妆品中透明质酸黄芳;邓欣;王玉芹;谢淑桐;黄晓兰;吴惠勤【摘要】面膜化妆品样品在酸性条件下水解后,得到的水解产物与1-苯基-3-甲基-5-吡啶啉酮发生衍生化反应,采用高效液相色谱法测定面膜化妆品中透明质酸的含量.以Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分离柱,用乙腈和0.025 mol·L-1乙酸铵溶液以不同比例混合的溶液为流动相进行梯度洗脱,用紫外检测器测定.透明质酸的质量浓度在10.0～1000 mg·L-1内与其对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为0.010％.以空白样品为基体进行加标回收试验,所得回收率为101％～106％,回收量的相对标准偏差(n=6)为1.5％～7.2％.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2019(055)008【总页数】6页(P898-903)【关键词】高效液相色谱法;酸水解;柱前衍生化;透明质酸;化妆品;面膜【作者】黄芳;邓欣;王玉芹;谢淑桐;黄晓兰;吴惠勤【作者单位】中国广州分析测试中心广东省分析测试技术公共实验室,广州510070;中国广州分析测试中心广东省分析测试技术公共实验室,广州 510070;中国广州分析测试中心广东省分析测试技术公共实验室,广州 510070;中国广州分析测试中心广东省分析测试技术公共实验室,广州 510070;中国广州分析测试中心广东省分析测试技术公共实验室,广州 510070;中国广州分析测试中心广东省分析测试技术公共实验室,广州 510070【正文语种】中文【中图分类】O652.63透明质酸（HA）又名玻璃酸、玻尿酸，是一种天然存在于生物体内的糖胺聚糖，最早由美国哥伦比亚大学的MEYER和PALMER在1934年从牛眼玻璃体中分离出来［1］。
现在透明质酸的生产方法主要有两种，一种是从动物中提取（如鸡冠中），另一种是微生物发酵，多数生产厂家都采用微生物发酵生产透明质酸［2－3］。
免疫亲和柱净化柱前衍生化-高效液相色谱荧光检测法测定粮谷中的T-2毒素
B7 DE1 ) ，@F G+ ! ，HF7 I". ) ，J,7 K+15 ) ，<L8= HM%E2M+Leabharlann 5 ) ，J8(N GEA.15 )
（ ! $ %&’()&)* +),-. / " +0&, 1)2345,&() ’)6 78’-’),&)4 98-4’8 ，:’;&’) !!#$$! ，<=&)’ ； % $ !=4).’)* >*-&58;,8-4 ?)&@4-2&,. ，!=4).’)* !!$!#! ，<=&)’ ）
! ! 自然界中多种农作物的致病菌可以产 生 #"# 毒 素， 其中大部分来自镰孢菌属， 产毒能力随真菌种类 不同而异， 并受 到 环 境 因 素 的 影 响。 玉 米 和 黑 麦 中 的致病菌产毒能 力 较 强， 其 次 为 大 麦、 大 米 和 小 麦。 #"# 毒素的毒 性 主 要 作 用 于 增 殖 活 跃 的 细 胞， 如骨 髓、 肝、 黏膜上皮和 淋 巴 细 胞 等， 而对淋巴细胞的损 呕 害最为严重。 #"# 毒 素 的 中 毒 症 状 主 要 为 恶 心、 吐、 食欲减退或拒 食、 倦 怠 和 体 重 减 轻 等， 同时还具 有致畸性和弱的致癌性。在动物实验中发 现 #"# 毒 素对动 物 的 小 肠、 脾、 胸 腺、 肠 黏 膜、 淋 巴 器 官、 造血 器官和睾丸都有损 伤， 过量时可导致骨髓和淋巴组 织坏死、 溶解、 外周 血 粒 细 胞 减 少， 淋巴细胞严重缺 乏。同时 #"# 毒素 进 入 机 体 后， 迅速经酯酶代谢成 $#"# 毒素等多 种 代 谢 物［ ( ］。 国 际 上 对 #"# 毒 素 非 常重视， 前苏联已 提 出 国 家 的 食 品 卫 生 限 量 标 准 为 ()) ! % ! &% 。我国小麦 中 #"# 毒 素 的 污 染 率 和 含 量 是比较高的， 据对 "") 份小麦样品的调查结果 表明， 正常小麦中 #"# 毒 素 的 污 染 阳 性 率 为 *) ’ ， 平均含 量为 ’"& " ! % ! &% ， 最高含量可达( (##& ) ! % ! &%［ # ］。 ! ! #"# 毒 素 的 测 定 方 法 主 要 有： 薄层色谱法
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! ! 自然界中多种农作物的致病菌可以产 生 #"# 毒 素， 其中大部分来自镰孢菌属， 产毒能力随真菌种类 不同而异， 并受 到 环 境 因 素 的 影 响。 玉 米 和 黑 麦 中 的致病菌产毒能 力 较 强， 其 次 为 大 麦、 大 米 和 小 麦。 #"# 毒素的毒 性 主 要 作 用 于 增 殖 活 跃 的 细 胞， 如骨 髓、 肝、 黏膜上皮和 淋 巴 细 胞 等， 而对淋巴细胞的损 呕 害最为严重。 #"# 毒 素 的 中 毒 症 状 主 要 为 恶 心、 吐、 食欲减退或拒 食、 倦 怠 和 体 重 减 轻 等， 同时还具 有致畸性和弱的致癌性。在动物实验中发 现 #"# 毒 素对动 物 的 小 肠、 脾、 胸 腺、 肠 黏 膜、 淋 巴 器 官、 造血 器官和睾丸都有损 伤， 过量时可导致骨髓和淋巴组 织坏死、 溶解、 外周 血 粒 细 胞 减 少， 淋巴细胞严重缺 乏。同时 #"# 毒素 进 入 机 体 后， 迅速经酯酶代谢成 $#"# 毒素等多 种 代 谢 物［ ( ］。 国 际 上 对 #"# 毒 素 非 常重视， 前苏联已 提 出 国 家 的 食 品 卫 生 限 量 标 准 为 ()) ! % ! &% 。我国小麦 中 #"# 毒 素 的 污 染 率 和 含 量 是比较高的， 据对 "") 份小麦样品的调查结果 表明， 正常小麦中 #"# 毒 素 的 污 染 阳 性 率 为 *) ’ ， 平均含 量为 ’"& " ! % ! &% ， 最高含量可达( (##& ) ! % ! &%［ # ］。 ! ! #"# 毒 素 的 测 定 方 法 主 要 有： 薄层色谱法
柱前衍生-反相高效液相色谱法
柱前衍生-反相高效液相色谱法1.引言1.1 概述概述部分的内容可以介绍柱前衍生-反相高效液相色谱法的背景和意义。
下面是一个概述的范例：正如我们所知，液相色谱法是一种常用的分离和检测分析技术，在化学、药学、环境科学等领域具有广泛的应用。
然而，传统的液相色谱法在某些情况下可能面临一些挑战，如分离效果不理想、分析时间较长等。
为了克服这些问题，柱前衍生-反相高效液相色谱法被提出并逐渐受到关注。
柱前衍生是指在样品处理中，在样品中引入适当的衍生试剂，通过与目标分析物发生化学反应，使其在色谱分析中具有更好的分离性能和检测灵敏度。
反相高效液相色谱法是基于分离样品中不同化学性质的分子在反相色谱柱上的亲水作用，达到分离和定量分析的目的。
柱前衍生-反相高效液相色谱法不仅可以提高色谱分析的分离效果，还能够提高检测灵敏度和减少分析时间。
这对于复杂样品的分析具有重要意义，例如药物代谢产物、环境污染物等。
通过引入适当的衍生试剂，可以有效地改善样品的分离性能，同时提高对目标分析物的响应，从而实现快速、灵敏的定量分析。
本文将对柱前衍生-反相高效液相色谱法的原理、方法和应用进行详细介绍。
首先，我们将阐述柱前衍生的基本原理和常用的衍生试剂。
然后，重点介绍反相高效液相色谱法的步骤和关键参数。
最后，我们将通过实例和应用案例来阐述柱前衍生-反相高效液相色谱法在药物分析、环境监测等领域的应用前景。
通过本文的阅读，读者将能够全面了解柱前衍生-反相高效液相色谱法的原理和实践，为他们的研究和实验工作提供参考和指导。
文章结构部分应包括以下内容：本文主要分为三个部分，即引言、正文和结论。
具体结构如下：1. 引言1.1 概述本部分将简要介绍柱前衍生-反相高效液相色谱法的研究背景和意义。
首先，说明柱前衍生技术在分析化学领域的重要性，该技术可以通过将样品与特定试剂反应生成易于分析的化合物，从而提高液相色谱分析的敏感性和选择性。
其次，介绍反相高效液相色谱法在分析化学中的广泛应用，包括药物分析、环境监测和食品安全等领域。
柱前衍生化-高效液相色谱法测定白念珠菌中多胺的含量
柱前衍生化-高效液相色谱法测定白念珠菌中多胺的含量纪松岗;杨宇;李康;吴海棠;朱臻宇【摘要】目的建立同时测定白念珠菌中4种多胺(腐胺、尸胺、亚精胺和精胺)的HPLC方法.方法样品经苯甲酰氯衍生化,资生堂C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,3.0μm)分离,以甲醇(A)-0.1％甲酸水(B)为流动相进行梯度洗脱,0～5min,30％～48％ B; 5～12 min,48％ B;12～15 min,48％～70％ B;15～25 min,70％B,流速0.6 ml/min,检测波长254 nm.结果腐胺、尸胺、亚精胺和精胺浓度分别在0.775 ～77.50 μg/ml(r=0.999 9)、1.160 ～116.0 μg/ml(r =0、999 9)、5.800 ～580.0μg/ml(r=0.9998)、2.533 ～192.7 μg/ml(r =0.999 9)的范围内线性关系良好.4种多胺的加样回收率为94.27％～ 109.3％,精密度RSD ＜4％.结论该含量测定方法灵敏、重现性好,能同时测定白念珠菌中4种多胺的含量.【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2013(031)006【总页数】4页(P412-414,453)【关键词】多胺;柱前衍生化;高效液相色谱法;白念珠菌【作者】纪松岗;杨宇;李康;吴海棠;朱臻宇【作者单位】解放军第401医院药剂科,山东青岛,266071;第二军医大学药学院,上海,200433;解放军第169医院,湖南衡阳,421000;第二军医大学药学院,上海,200433;第二军医大学药学院,上海,200433【正文语种】中文【中图分类】R917多胺是一类具有生物活性、低分子量的含氮有机化合物的总称[1]，广泛存在于原核及真核生物细胞中。
多胺具有多种重要的生理功能，如:稳定核酸上的电荷、清除活性氧[2，3]；调节细胞的生长和分化[4]。
有研究表明,通过控制多胺水平可影响白念珠菌菌丝形成[5],所以多胺可能是诱导白念珠菌被膜形成的重要因素之一。
柱前衍生化高效液相色谱法测定他达拉非中氯乙酸残留量
·研究· Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
２０１９年 １０月 ５日 第 ２８卷第 １９期 Ｖｏｌ．２８牞Ｎｏ．１９牞Ｏｃｔｏｂｅｒ５牞２０１９
·检验检测·
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－４９３１．２０１９．１９．０１２
柱前衍生化高效液相色谱法测定他达拉非中氯乙酸残留量
徐然
（江苏省南京市食品药品监督检验院，江苏 南京 ２１１１００）
摘要：目的 建立测定他达拉非中氯乙酸残留量的柱前衍生化高效液相色谱法。方法 用 ２－硝基苯肼盐酸盐对样品进行衍生化，色谱 柱为岛津 ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ－３柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ），流动相为乙腈 －０．１％磷酸溶液 牗梯度洗脱 牘，流速 １．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长 ３９２ｎｍ。
结果 氯乙酸衍生物检测的专属性强，检测限 ２０ｎｇ／ｍＬ，定量限 ５０ｎｇ／ｍＬ；质量浓度在 ５０～５００ｎｇ／ｍＬ范围内与峰面积线性关系良好 （ｒ＝０．９９９６）；平均回收率为 ９４．６８％，ＲＳＤ为 ３．９４％（ｎ＝９）。结论 经方法学验证，该方法适用于他达拉非中氯乙酸残留量的测定。
关键词：他达拉非；氯乙酸；衍生化；高效液相色谱法
色 谱 柱 ：ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ－３柱 （２５０ｍｍ×４．６ｍｍ， ５μｍ）；流动相：乙腈（Ａ相）－０．１％磷酸溶液（Ｂ相），梯 度洗脱，０ｍｉｎ３０％Ａ～７０％Ｂ、１２ｍｉｎ５５％Ａ～４５％Ｂ；流 速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；进样量：２０μＬ；柱温：３０℃；检测波长： ３９２ｎｍ。 ２．２ 溶液制备
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｐｒｅ－ｃｏｌｕｍｎｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｒｅｓｉｄｕａｌｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃａｃｉｄ
ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
２０１９年 １０月 ５日 第 ２８卷第 １９期 Ｖｏｌ．２８牞Ｎｏ．１９牞Ｏｃｔｏｂｅｒ５牞２０１９
·检验检测·
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－４９３１．２０１９．１９．０１２
柱前衍生化高效液相色谱法测定他达拉非中氯乙酸残留量
徐然
（江苏省南京市食品药品监督检验院，江苏 南京 ２１１１００）
摘要：目的 建立测定他达拉非中氯乙酸残留量的柱前衍生化高效液相色谱法。方法 用 ２－硝基苯肼盐酸盐对样品进行衍生化，色谱 柱为岛津 ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ－３柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ），流动相为乙腈 －０．１％磷酸溶液 牗梯度洗脱 牘，流速 １．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长 ３９２ｎｍ。
结果 氯乙酸衍生物检测的专属性强，检测限 ２０ｎｇ／ｍＬ，定量限 ５０ｎｇ／ｍＬ；质量浓度在 ５０～５００ｎｇ／ｍＬ范围内与峰面积线性关系良好 （ｒ＝０．９９９６）；平均回收率为 ９４．６８％，ＲＳＤ为 ３．９４％（ｎ＝９）。结论 经方法学验证，该方法适用于他达拉非中氯乙酸残留量的测定。
关键词：他达拉非；氯乙酸；衍生化；高效液相色谱法
色 谱 柱 ：ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ－３柱 （２５０ｍｍ×４．６ｍｍ， ５μｍ）；流动相：乙腈（Ａ相）－０．１％磷酸溶液（Ｂ相），梯 度洗脱，０ｍｉｎ３０％Ａ～７０％Ｂ、１２ｍｉｎ５５％Ａ～４５％Ｂ；流 速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；进样量：２０μＬ；柱温：３０℃；检测波长： ３９２ｎｍ。 ２．２ 溶液制备
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｐｒｅ－ｃｏｌｕｍｎｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｒｅｓｉｄｕａｌｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃａｃｉｄ
PMP柱前衍生化-HPLC法分析不同生长年限黄芪中6种单糖的含量
PMP柱前衍生化-HPLC法分析不同生长年限黄芪中6种单糖的含量作者：余亦婷皮文霞谢辉曹丽娟李西文李霞陆兔林严国俊来源：《中国药房》2021年第12期摘要目的：分析并比较不同生长年限黄芪中6种单糖的含量。
方法：取来自3个产地的2～4年生黄芪药材，经水提醇沉、Sevage除蛋白后制得黄芪多糖;将上述多糖经三氟乙酸水解和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化后，采用高效液相色谱法测定其中甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等6种单糖的含量。
以Symmetry C18为色谱柱，以磷酸盐缓冲液（pH 6.8）-乙腈（84 ∶ 16，V/V）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为245nm，柱温为35 ℃，进样量为20 µL。
结果：黄芪多糖中甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖的含量分别为0.50～0.94、0.76～1.60、3.35～7.86、87.33～275.77、1.95～8.96、2.35～14.04 mg/g，2、3、4年生黄芪中上述单糖的总含量分别为98.26～139.92、173.81～295.71、122.37～182.41 mg/g。
3年生黄芪中葡萄糖的含量与2、4年生黄芪有显著差异（162.71～275.77 mg/g vs. 87.33～107.70、111.54～167.26 mg/g，P关键词黄芪;多糖;单糖;柱前衍生化;高效液相色谱法ABSTRACT OBJECTIVE： To analyze and compare the contents of 6 kinds of monosaccharide in Astragalus membranaceus from different growth years. METHODS： 2-4 years old A. membranaceus from three areas were extracted with water extraction and alcohol precipitation，Sevage deproteinization to obtain A. membranaceus polysaccharide. The samples were firstly hydrolyzed with trifluoroacetic acid （TFA） and then derivatized by 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone（PMP）. HPLC analysis was adopted to determine the contents of 6 kinds of monosaccharide as mannose， rhamnose， galacturonic acid， glucose， galactose， arabinose. The determination was performed on Symmetry C18 column with phosphate buffer solution （pH 6.8）-acetonitrile （84 ∶ 16， V/V） as mobile phase at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 245 nm， and column temperature was 35 ℃. The sample size was 20 µL. RESULTS： The contents of mannose， rhamnose， galacturonic acid， glucose， galactose and arabinose were 0.50-0.94， 0.76-1.60， 3.35-7.86， 87.33-275.77， 1.95-8.96， 2.35-14.04 mg/g，respectively. Total contents of monosaccharide from 2， 3， 4 years old A. membranaceus were 98.26-139.92， 173.81-295.71， 122.37-182.41 mg/g， respectively. There was significant difference in the contents of glucose between 3 old years A. membranaceus and 2， 4 old years A. membranaceus （162.71-275.77 mg/g vs. 87.33-107.70， 111.54-167.26 mg/g， PKEYWORDS Astragalus membranaceus;Polysaccharides;Monosaccharides;Pre-column derivatization;HPLC黃芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge. var. mongholicus（Bge.）Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根[1]，主产于我国山西、内蒙古等地[2]。
柱前衍生高效液相色谱法测定猪肉中5种青霉素残留量
第29卷2001年7月 分析化学(FE NXI H UAX UE ) 研究报告Chinese Journal of Analytical Chemistry 第7期779～781柱前衍生高效液相色谱法测定猪肉中5种青霉素残留量王 超3 王 星(中国进出口商品检验技术研究所,北京100025)摘 要 样品采用乙腈直接提取,离心分离及用液2液分配和固相萃取(C 18柱)净化方式,经衍生后,用液相色谱紫外检测器测定猪肉中5种青霉素残留量。
使用的分离柱是N ova Pak C 18柱,流动相为乙腈和磷酸盐混合液。
方法检出限0.02mg/kg ,回收率为70.9%～96.5%,相对标准偏差为3.10%～6.71%。
关键词 青霉素,残留,高效液相色谱,猪肉,柱前衍生化 2000208210收稿;2001201219接受1 引 言青霉素作为治疗家畜疾病的抗菌剂已获得广泛应用。
当食用肉食品时,可能会受到青霉素残留的危害。
为了保证人类食品的安全,欧盟对肉中青霉素最高残留限量规定为苄青霉素0.05mg/kg ,苯唑青霉素、邻氯青霉素和双氯青霉素分别为0.3mg/kg 。
测定猪肉中青霉素的方法已有许多报道,但对多种青霉素残留的测定方法,都是使用离子对反相色谱进行分离测定〔1～3〕。
由于离子对试剂对色谱的分离影响较大,作者报道了用反相液相色谱分离测定牛奶中多种青霉素残留量的方法〔4〕,在此基础上,本文通过增加样品脱脂净化处理,采用柱前衍生高效液相色谱法测定猪肉中多种青霉素残留量。
并用于实际样品分析,结果满意。
2 实验部分2.1 仪器与试剂日本岛津LC 210AD 高效液相色谱仪,RF 210A 紫外检测器,CR 27AD 数据处理机。
净化柱为Supel 2clean T M LC 218SPE Tubes (3m L )。
磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硫代硫酸钠、氯化汞、氯化钠、氢氧化钠和正己烷为分析纯。
乙腈为色谱纯。
水为蒸馏水或相应的去离子水。
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糖组成分析（PMP-HPLC）
混合单糖标准品的准备：
称取各单糖标准品（L-Fuc；L-Rha；L-Ara；L-Xyl；D-Man；D-Gal；D-Glc；D-GalA；D-GlcA）溶于去离子水中，配成1mg/ml以待分析。
多糖的水解
称取2-4mg多糖样品于鸡心瓶（10ml）中，加入1ml H2O预溶，再加入1ml 4M的TFA，橡皮膏封闭瓶口，置110℃烘箱中水解（中性多糖水解2h，酸性多糖水解4h）；冷却至室温后，加甲醇多次（4次）除去多余的TFA至无酸味；水解的多糖样品复溶于200μLH2O。
单糖的PMP衍生化
取50μL多糖水解液或50μL混合单糖标准品溶液于2ml EP管中，分别与50μL的0.6mol/L 的NaOH溶液充分混合，加入100μL 0.5mol/L的PMP（0.2613g/3ml）甲醇溶液，塞紧塞子封紧后，漩涡振荡仪混匀；在70℃水浴中反应100min，取出冷却至室温。
加入100μL 0.3 mol/L 的HCl中和，再加700μl去离子水以及1ml氯仿萃取，漩涡振荡，静置1-2h。
吸取上层水相900μl，再加入900μl的氯仿萃取一次，静置1h，再去上层水相800μl，再加入800μl 的氯仿萃取一次，或用低速离心代替静置处理。
用带有0.22μm微孔滤膜的注射器过滤后，装入液相瓶中待HPLC进样分析。
HPLC分析糖组成
Agilent 1260高效液相色谱系统
色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18，250mm×4.6mm, 5μm；
流动相：Buffer A: 15%乙腈+85%磷酸盐缓冲液
Buffer B: 40%乙腈+60%磷酸盐缓冲液
磷酸盐缓冲液：0.05M 磷酸二氢钾缓冲液（pH 6.7）
KH2PO4 13.6g及NaOH 1.8g溶液2L水中；
乙腈（HPLC级）；
时间（min）Buffer A Buffer B
0 100 0
10 90 10
30 80 20
35 80 20
45 80 20
45.01 100 0
55 100 0
柱温：20℃；
紫外检测波长：254nm；
流速：1ml/min；
进样体积：20μl。