柱前衍生高效液相色谱法测定食物中氨基酸含量

[检验医学]高效液相色谱法检测食品中氨基酸的方法研究仲岳桐,何彩,陈春晓摘要:目的 应用高效液相色谱法测定食品中氨基酸。

方法 使用带自动衍生功能的自动进样器进行在线衍生,梯度分离,利用二极管阵列-荧光检测器串联分析。

结果 在线衍生技术克服了离线手工衍生的偏差,双检测器联用技术能有效提高定性的可靠性和定量的准确性。

结论 研究的方法测定重复性好,灵敏度高,定性定量准确,结果满意。

关键词:高效液相色谱;氨基酸;食品中图分类号:TQ460.7 文献标识码:B 文章编号:1009-9727(2008)1-132-03Determination of amino acids in foods by high performance liquid chromatography.ZHONG Yue-tong,HE Cai,C HEN Chun-xiao.(Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention,Shenzhen518020,Guangdong,P R China) Abstract:Objective To determine amino acids from foods by high performance liquid chromatography Methods Food samples were collected and determined by using autoinjector with online derivati on function,gradient elution program and tandem de tectin g technicque Results The online derivation technicque overcame the deviation arised from manual operating and serial de tectin g technicque could enhance both reliabili ty and accuracy of determinati on Conclusion The method is accurate,quati tativelyand qualitatively as well as a reproductive and satisfactory resultsKey w ords:High performance liquid chromatography;Amino acids;Foods氨基酸分析是食品成份分析的重要组成部分,其研究对象可分为生理体液和食品两大部分,检测方法一般可分为氨基酸分析仪法、离子色谱法、高效液相色谱法等。

柱前衍生高效液相色谱法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量梁卫青;魏克民;浦锦宝;祝永强;郑军献;胡轶娟【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2008(37)8【摘要】目的用柱前衍生法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量,方法以磺酰氯二甲胺偶氮苯(DABS-CL)作衍生剂,采用柱前衍生高效液相色谱法(RP-HPLC),YMC-Pack ODS-A柱(250mm×4.6mm,5mm),流动相A为25mol/L KH2PO2,流动相B为乙腈:甲醇=70:30;流速1.5 ml/min梯度洗脱,检测波长436nm,柱温35℃,结果各种氨基酸均具有良好的线性关系(相关系数,=0.9989～0.9999)、精密度(RSD<1.50%)、稳定性(RSD<3.50%)、平均回收率(98.83%～107.83%),测定蚕蛹提取物中氨基酸含量,其含有人体必需氨基酸占总氨基酸含量的40%以上,结论该方法简便实用,分析结果准确可靠,适用于动植物中富有氨基酸含量的测定.【总页数】4页(P42-45)【作者】梁卫青;魏克民;浦锦宝;祝永强;郑军献;胡轶娟【作者单位】310007,杭州,浙江省中医药研究院;310007,杭州,浙江省中医药研究院;310007,杭州,浙江省中医药研究院;310007,杭州,浙江省中医药研究院;310007,杭州,浙江省中医药研究院;310007,杭州,浙江省中医药研究院【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.AccQ-Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定谷物及食糜中氨基酸含量 [J], 韩粉丽;韩飞;李爱科;陈曦;宋歌;范柳萍;余治权2.柱前衍生-反相高效液相色谱法测定柞蚕蛹蜕中氨基酸 [J], 杨彬;阮长春;刘志;孙光芝3.柱前衍生高效液相色谱法测定中韩泡菜中的氨基酸含量 [J], 贾载凯; 毛新刚; 苏晓岚; 张云; 洒荣波4.柱前衍生高效液相色谱法测定中韩泡菜中的氨基酸含量 [J], 贾载凯;毛新刚;苏晓岚;张云;洒荣波5.柱前衍生高效液相色谱法测定注射用骨肽中15种氨基酸含量 [J], 张雪艳;郭雷;周长明;张建敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

AQC柱前衍生化高效液相色谱法测定宝乐果中的游离氨基酸刘博;韩晓东;张敏婷;徐方方;周文;焦红【摘要】To determine and analyze free amino acids in Borojo.The sample was derivatized with 6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamate (AQC) and then was analyzed with high-performance liquid chromatography (HPLC).HPLC was performed on a Phenomenex C18 (250mm × 4.6 mm,5 μm) column with gradient elution of deionized water (A),acetonitrile (B) and 10 mmol/L ammonium acetate buffer solution (adjusted to pH 5.10 with glacial acetic acid) (C) at the flow rate of 0.8 ～1.0 mL/min,detected with Ultra Voilet (UV) at 248 nm.Linear relationship equations were obtained with 18kinds of amino acids in the range of0.02 ～ 0.5 mmoL/L,and their correlation coefficients were in the range of 0.998 3 ～ 0.999 2.Fourteen amino acids were detected and average recoveries of those added were in the range of 96.9 ％～ 106.9 ％ and RSD values were in the range of 0.67 ％～ 3.07 ％.The method could be used for determination of content of free amino acids in Borojo.%为了测定宝乐果中游离氨基酸的种类以及含量.该文的样品用6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基-氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生后进行高效液相色谱(HPLC)分析.采用Phenomenex Luna C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,柱温为35℃；流动相A为去离子水,流动相B为乙腈,流动相C为10 mmol/L醋酸铵缓冲液(以冰醋酸调至pH 5.10),梯度洗脱,流速为0.8～1.0 mL/min;检测波长为248 nm,同时测定宝乐果中的游离氨基酸.结果得:18种氨基酸在0.02～0.5 mmol/L浓度范围内有良好的线性关系,r 均在0.998 3 ～0.999 2之间；宝乐果中测得14种游离氨基酸,其含量范围为0.087 ～2.680 mg/g,平均加样回收率为96.9％～106.9％,RSD为0.67％～3.07％.该方法可用于检测宝乐果中游离氨基酸含量,测定的结果为宝乐果质量研究和评价提供了依据.【期刊名称】《中山大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(052)004【总页数】5页(P100-104)【关键词】宝乐果;AQC;游离氨基酸;柱前衍生法【作者】刘博;韩晓东;张敏婷;徐方方;周文;焦红【作者单位】广州中医药大学第二附属医院,广东广州510006;广州中医药大学第二附属医院,广东广州510006;广州中医药大学第二附属医院,广东广州510006;广州中医药大学第二附属医院,广东广州510006;广州中医药大学第二附属医院,广东广州510006;广东出入境检验检疫局,广东广州510623【正文语种】中文【中图分类】O657.7宝乐果 (Borojoa sorbilis Cuter.)是茜草科林果属植物Borojoa patinoi Cuatrec.和Borojoa sorbilis Cuatrec.的成熟果实，产于拉丁美洲厄瓜多尔气候的热带雨林，呈棕褐色，直径达7～12 cm，质量达700～1000 g，88%以上为果浆，黏性很强，味道酸涩［1］，有特殊果香。

邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法检测珍珠粉中的氨基酸含量【摘要】目的测定珍珠粉中的氨基酸含量。

方法邻苯二甲醛（OPA）柱前衍生反相高效液相色谱法，采用荧光检测，梯度洗脱。

结果该法在28 min之内分离出15种氨基酸。

结论该法样品用量少、灵敏度高、线性范围宽、重现性好，适于分离大量样品。

【关键词】高效液相色谱；柱前衍生法；氨基酸；珍珠粉Determination of the Contents of Amino Acids in Pearl Powder by RP-HPLC after Pre��column Derivation with O��Phthaldialdehyde (OPA)Abstract：ObjectiveIn this paper， we determined amino acids in pearl powder. Methods A manual pre-column derivation procedure has been developed by reversed-phase HPLC with O-phthalaldehyde and fluorescence detector. Results More than 15 amino acids were separated within 28 min. Conclusion The method is sensitive， precise and shows good repeatability.Key words：High��performance liquid chromatography；Pre��column derivation； Amino acids； Pearl powder随着生命科学和生物工程的发展，氨基酸作为组成生物大分子的基本单元，其分析方法受到重视。

20世纪70年代以后，反相高效液相色谱技术在氨基酸分析中得到广泛应用，使分离时间缩短。

河 北 医 科 大 学 学 报JO U RN A L OF HEBEI M ED ICA L U NI VER SI T YV o 1.17　No .3　1996高效液相色谱柱前自动衍生法测定氨基酸含量许彦芳　许新民　王永利药理教研室(050017) 摘　要　本文利用高效液相色谱(HP L C )柱前邻苯二甲酝酿(OP A )自动衍生、自动进样程序测定脑组织中谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、牛磺酸和r -氨基丁酸含量。

该法的最低检出限为10nmol /ml ,5种氨基酸峰面积测定值的变异系数平均为2.0±1.3%,线性相关系数平均为0.97±0.03。

关键词　HPL C;氨基酸;OP A ;自动衍生;自动进样HPLC -PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHIC DETERMINATION OFAMINO ACIDS BY AUTOMATIC PRECOLUMN DERIVATIZATIONXu Yan fang Xu Xinmin Wang YongliDep artment of Ph armacologyABSTRACT Glutamate,asparate,glycine,taurine and GABA in brain w ere seperated and determined by HPLC system of the autom atic processes of precolum n o -phthaldialdehydeder iv atization and injection .Average co efficient o f variatio n for peak areas of 5amino acids w as 2.0±1.3%w ith the detectio n lim it o f 50ng.Av erag e line co orelatio n coefficient w as 0.97±0.03.KEY WORDS HPLC ;o -phthaldialdehyde ;amino acids ;automatic derivatizatio n ;au-tom atic injection 生物样品中的微量氨基酸测定在医学领域中占重要地位。

柱前衍生化-超高效液相色谱法快速测定酱油中的18种氨基酸陈丽梅;尚艳芬;赵孟彬;刘虎威【摘要】建立了一种6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生,超高效液相色谱(UPLC)对酱油中18种氨基酸进行快速分离检测的方法.采用BEH C18色谱柱分离,在260 nm波长下检测,以乙酸铵-乙酸-乙腈-水和乙腈-乙酸为流动相,将流动相梯度和流速梯度相结合,在12 min内实现了18种氨基酸衍生物的分离.方法的线性回归系数(r2)均大于0.999,检出限为0.032～0.12 mg/L,日间相对标准偏差(RSD)为0.72% ～4.05% ,在酱油中18种氨基酸的加标回收率为90.2% ～103.7% .该方法前处理过程简单,分离时间短,是检测酱油中氨基酸的有效手段,可用于酱油的质量评定.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2010(028)012【总页数】4页(P1154-1157)【关键词】柱前衍生;超高效液相色谱;6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯;氨基酸;酱油【作者】陈丽梅;尚艳芬;赵孟彬;刘虎威【作者单位】北京大学化学与分子工程学院,北京,100871;北京锦绣大地农业股份有限公司,北京,100049;北京锦绣大地农业股份有限公司,北京,100049;北京锦绣大地农业股份有限公司,北京,100049;北京大学化学与分子工程学院,北京,100871【正文语种】中文【中图分类】O658酱油是烹饪和食品加工中的重要调味料,是以大豆、小麦为原料,经过天然晾晒或发酵制成。

在酱油酿造过程中,原料中的蛋白质经蛋白酶作用逐渐分解成氨基酸等人体需要的主要营养物质。

氨基酸含量是评价酱油品质的重要指标,同时氨基酸种类及含量也影响着酱油的风味[1]。

目前酱油品质的分级主要是根据其中氨基酸态氮的含量进行。

用于氨基酸检测的色谱方法主要有液相色谱法(LC)[2-4]、气相色谱法 (GC)、毛细管电泳法 (CE)、离子交换色谱法 (IEC)[5,6]及液相色谱-质谱 /质谱法 (LC-MS/MS)[7,8]。

DABS-Cl柱前衍生高效液相色谱法测定海参中羟脯氨酸含量宫向红;刘慧慧;徐英江;邹荣婕;于召强;张秀珍【摘要】建立了测定海参中羟脯氨酸( hydroxyproline,Hyp)含量的高效液相色谱法.样品经酸水解后,用4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯(DABS - Cl)衍生,以乙腈-柠檬酸溶液为流动相梯度洗脱,经C18柱分离,436 nm下紫外检测器检测.结果表明,羟脯氨酸衍生物与样品基质很好分离,在40 ～2 000 μg/L范围内线性关系良好(r ＞0.999),平均回收率84.2％～ 104％,RSD＜ 10％.此法灵敏、准确,适用于海参中羟脯氨酸含量的测定.【期刊名称】《中国渔业质量与标准》【年(卷),期】2012(002)003【总页数】5页(P45-49)【关键词】羟脯氨酸;DABS;柱前衍生;高效液相色谱法;海参【作者】宫向红;刘慧慧;徐英江;邹荣婕;于召强;张秀珍【作者单位】山东省海洋水产研究所;山东省海洋生态修复重点实验室;山东省海洋水产研究所;山东省海洋生态修复重点实验室;山东省海洋水产研究所;山东省海洋生态修复重点实验室;烟台山水海产有限公司,山东烟台264006;烟台山水海产有限公司,山东烟台264006;山东省海洋水产研究所;山东省海洋生态修复重点实验室【正文语种】中文【中图分类】O657.7胶原蛋白主要存在于动物的皮、骨、软骨、肌腱、韧带和血管中，是结缔组织中极其重要的结构蛋白质，起着支撑器官、保护肌体的重要作用。

羟脯氨酸（hydroxyproline，Hyp）是胶原蛋白的特异性氨基酸，在其它蛋白质中很少见［1］，而且其在胶原蛋白中含量稳定，占总氨基酸的10% ～14%；在胶原蛋白的生物合成过程中，没有游离的Hyp参与合成，所有的Hyp均由已合成的肽链中的脯氨酸经羟化酶作用转化而来，因而可通过测定Hyp计算胶原蛋白的含量［2-3］。

最新研究表明，胶原蛋白水解所得的胶原肽具有很好的吸收特性，而且还具有许多生理活性，而这些生理活性大多与L-Hyp有关。

食物中氨基酸含量的高效液相色谱法测定一、简介测定食物中氨基酸含量一般采用氨基酸分析仪，柱后衍生测定，但氨基酸分析仪价格昂贵，分析时间长，且只能用于分析氨基酸，限制了氨基酸分析技术的广泛应用。

七十年代以来，柱前衍生高效液相色谱法开始应用于氨基酸的测定。

液相色谱通用性强，检测灵敏度高,可用于多种物质的分析。

南京科捷应用研究所采用柱前衍生紫外检测的方法对几种食物中的16种氨基酸进行了测定。

二、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪配置LC-10Tvp高压恒流泵：2台SPD-10Tvp紫外检测器：1台SCL-10Tvp 系统控制器：1台7725i手动进样阀： 1套色谱工作站：1套（VI2010、N2000、N3000选用）液相色谱柱：1支（C18 4.6*250mn,5um）微量进样器：1支（50ul/100ul）进样支架：1只（进样阀用）三、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪特点LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪是南京科捷分析仪器有限公司为了快速地满足多样化的客户需求，在原有的STI501液相色谱仪的基础上经过优化，利用美国先进技术开发设计，国内加工生产的的一款新型的液相色谱仪。

LC-10Tvp等度高效液相色谱仪实现了人机对话，可实时对仪器的运行状态进行监控，并可对潜在和已出现的故障做出判断，同时提供在线解决方案。

该仪器也全面实现了远程的准无人操作，大大提高了仪器的使用效率，同时通过高精度的AS1000自动进样系统，实现自动化进样，最大程度抑制了样品的交叉污染，提供样品分析精度。

LC-10Tvp等度高效液相色谱仪可广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。

主要特点丰富的功能——符合客户对分析的不同需求硬件具有VP功能，记录维护信息和操作记录，符合GLP/GMP要求；系统控制器增具有时钟、温度计、湿度计等人性化设计的功能。

卓越的性能——满足客户对仪器的严格要求检测器采用进口氘灯、光电池以及1200条/mm凹面光栅组成的双光束单色器；精密加工的双透镜流通池，控制波长调节的高精度微处理器以及双路高速的采样频率，确保了低噪声、低漂移及超高灵敏度等特点。

柱前衍生高效液相色谱法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量梁卫青，魏克民，浦锦宝，祝永强，郑军献，胡轶娟（浙江省中医药研究院，杭州310007）摘要：目的用柱前衍生法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量，方法以磺酰氯二甲胺偶氮苯（DABS-CL）作衍生剂，采用柱前衍生高效液相色谱法（RP-HPLC），YMC-Pack ODS-A柱(250×4.6mm，5µm)，流动相A为25mol/L KH2PO4，流动相B为乙腈：甲醇=70：30；流速1.5 ml/min梯度洗脱，检测波长436nm，柱温35℃，结果：各种氨基酸均具有良好的线性关系（相关系数r=0.9989～0.9999）、精密度（RSD＜1.50%）、稳定性（RSD＜3.50%）、平均回收率（98.83%～107.83%），测定蚕蛹提取物中氨基酸含量，其含有人体必需氨基酸占总氨基酸含量的40%以上，结论：该方法简便实用，分析结果准确可靠，适用于动植物中富有氨基酸含量的测定。

关键词：柱前衍生；蚕蛹提取物；氨基酸；高效液相色谱Determination of Amino Acids in silkworm extract by High Performance Liquid Chromatography with Precolumn Derivatization. Liang Weiqing, Wei Kemin, Pu Jinbao, Zhu Yongqiang, Zheng Junxian, Hu Yijuan, Zhejiang Academy Of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou, 310007, ChinaAbstract: Objective Determination of Amino Acids in silkworm extract by High Performance Liquid Chromatography with Precolumn Derivatization. Methods The technology of precolumn derivatization, along with high performance liquid DABS-CL, A high-efficiency YMC-Pack ODS-A column(250×4.6mm, 5 μm), The mobile phase was A: 25mol/L KH2PO4 and B: acetonitrile : methyl alcohol =70:30, at flow rate of 1.5 ml/min, peaks were detected at 436 nm, column temperature 35℃. Results All kinds of amino acids have a nice linear relations (r=0.9989~0.9999), precision (RSD<1.50%), stability (RSD<3.50%), the average recovery rate of amino acids (98.83%~107.83%), it contains more than 40% essential amino acid. Conclusio n The method is simple, precise and reliable. It can be used to determine Amino Acids in animal and plant.Key words: precolumn derivatization; silkworm extract; amino acid; RP-HPLC蚕蛹蛋白系全价蛋白，是理想的天然优质氮源，蚕蛹水解提取物中含有人体生长发育，新陈代谢所需要的十八种氨基酸，包括不能在体内合成的8种必需氨基酸，蚕蛹提取物的应用十分广泛，为能更好控制蚕蛹提取物中复合氨基酸[1-2]的质量，以确保作为高附加值药品、保健食品、化妆品的原料资源，需对其中各个氨基酸的含量作出准确可靠的分析。

AccQ-Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定谷物及食糜中氨基酸含量韩粉丽1,2，韩 飞2，李爱科2，陈曦2，宋歌2，范柳萍1,*，余治权3（1.江南大学食品学院，江苏无锡 214122；2.国家粮食局科学研究院，北京 100037；3.内蒙古燕谷坊生态农业发展（集团）有限公司，内蒙古呼和浩特 010000）摘 要：用AccQ-Tag法测定不同谷物及食糜中氨基酸的含量，并优化原料与酸解剂的比例。

采用内标法定量，6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯为柱前衍生剂，用反相高效液相色谱仪，2475荧光检测器（激发波长250 nm、发射波长395 nm），Waters AccQ-Tag Nova-Pak TM C18柱（3.9 mm×150 mm，4 μm），柱温37 ℃，以醋酸钠（pH 4.95）缓冲液为流动相A，纯乙腈为流动相B，水为流动相C进行梯度洗脱，进样量为10 μL。

结果发现，5 mg原料的最优酸解剂为500 μL；17 种氨基酸线性回归方程在25～500 μmol/L范围内线性良好（胱氨酸（Cys）浓度在12.5～250 μmol/L之间），相关系数r为0.999 6～0.999 9，测定的平均回收率为97.56%～103.92%（n=3），相对标准偏差为0.31%～2.75%（n=3）。

本法快速简便，能够适用于谷物及食糜中氨基酸含量的测定。

关键词：反相高效液相色谱法；AccQ-Tag柱前衍生；谷物；食糜；氨基酸Determination of Amino Acid Contents in Cereals and Ileal Digesta by Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography with AccQ-Tag Pre-column Derivatization MethodHAN Fenli1,2, HAN Fei2, LI Aike2, CHEN Xi2, SONG Ge2, FAN Liuping1,*, YU Zhiquan3(1. School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China;2. Academy of State Administration of Grain, Beijing 100037, China;3. Inner Mongolia Oats House Ecological Agriculture Development (Group) Co. Ltd., Hohhot 010000, China)Abstract: The contents of amino acids in different cereals and ileal digesta were determined by reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) according to the AccQ-Tag method. The ratio of material to acidolysis agent was optimized in this paper. Quantification was performed using an internal standard method after pre-column derivatization with 6-aminoquinolinyl-N-hydroxysuccinimidate (AQC). The analysis procedure was carried out using a Waters 2695 HPLC system fitted with a Waters AccQ-Tag Nova-Pak TM C18 column (3.9 mm × 150 mm, 4 μm) and a Waters 2475 fluorescence detector (Waters Corp., USA) at an excitation wavelength of 250 nm and emission wavelength of 395 nm at 37 ℃. Sodium acetate (pH 4.95), acetonitrile and water were used respectively as mobile phases A, B and C for gradient elution and the injection volume was 10 μL. The results showed that the optimum ratio of material to acidolysis agent was 1:100 (mg/μL).The calibration curves of 17 amino acids were linear within the range of 25‒500 μmol/L (12.5–250 μmol/L for cystine) with correlation coefficients (r) of 0.999 6‒0.999 9. The average recoveries were in the range of 97.56%–103.92% with relative standard deviation (RSD) of 0.31%‒2.75% (n = 3). This method is rapid, simple and accurate for the determination of amino acids in cereals and ileal digesta.Keywords: reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC); AccQ-Tag pre-column derivatization;cereals; ileal digesta; amino acidsDOI:10.7506/spkx1002-6630-201804025中图分类号：TS201.4 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2018）04-0165-06引文格式：韩粉丽, 韩飞, 李爱科, 等. AccQ-Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定谷物及食糜中氨基酸含量[J]. 食品科学, 2018, 39(4): 165-170. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201804025. 收稿日期：2017-01-04基金项目：公益性行业（粮食）科研专项（201513003-8）第一作者简介：韩粉丽（1989—），女，硕士研究生，研究方向为粮油营养。

AccQ．Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定果品中氨基酸含量32分析仪器2007年第4期AccQ.Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定果品中氨基酸含量庞新安.万英(1.新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室,新疆阿拉尔,8433002.塔里木大学生物技术研究开发中心,新疆阿拉尔,843300)摘要采用AccQ.Tag柱前衍生反相高效液相色谱法同时测定16种氨基酸,氨基酸浓度在2.5～20tLmol/L范围内,其峰面积和氨基酸浓度的线性相关系数均在0.999以上.用该方法测定了四种新疆特产干鲜果品中氨基酸的含量,取得了满意的结果.关键词反相高效液相色谱法氨基酸AccQ.Tag干鲜果品1前言氨基酸是组成蛋白质的基本单位,是生物体中不可缺少的营养成分之一,对促进人体生长发育具有重要作用.目前,氨基酸主要采用茚三酮柱后衍生氨基酸自动分析仪进行测定,但随着氨基酸分析技术的发展,柱前衍生反相高效液相色谱法因其通用性强,选择性好,分离度高,可用于多种物质分析等优点而广泛应用于氨基酸的分析测定_】]. AccQ.Tag方法是Waters公司专门为柱前衍生高效液相色谱法分析氨基酸而开发的新方法,其核心在于AQC(6一氨基喹啉基一N一羟基琥珀酰亚胺基一氨基甲酸酯)专利衍生剂,它能与所有含氨基的化合物发生快速,定量反应,生成高稳定性脲(其最大吸收在250nm左右),用反相高效液相色谱仪分离衍生产物,再用荧光或紫外检测器外标法定量检测衍生产物lL6].新疆独特的自然生态环境,丰富的水土光热资源以及特殊的气候地理条件孕育了众多名,优,特,稀林果资源,其特产干鲜果品的营养丰富,是人们喜爱的美食之一.氨基酸是干鲜果品中主要营养成分之一,其种类和含量是衡量干鲜果品营养质量高低的一项重要指标,在干鲜果品品质鉴定中占有重要地位.传统检测干鲜果品中氨基酸的方法(国家标准方法)为茚三酮柱后衍生法,该法需要使用氨基酸自动分析仪.本实验利用Waters公司的AccQ.Tag方法,以磷酸盐一乙腈一水为流动相,建立了新疆特产巴旦杏,无花果,沙枣,石榴中游离氨基酸含量的高效液相色谱测定方法(HPLC).同时,根据联合国粮农组织和世界卫生组织(FAO/WH0)提出的必需氨基酸评分模式,计算了巴旦杏,无花果,沙枣,石榴中的必需氨基酸指数(EAAI),以期对巴旦杏,无花果,沙枣,石榴中氨基酸营养进行综合评价,从而为深层次地开发利用这4种干鲜果品提供科学依据.2实验部分2.1仪器与试剂Waters一2695高效液相色谱仪,配有2475荧光检测器,色谱工作站(美国Waters公司);Fw一100型高速万能粉碎机(北京市永光明医疗仪器厂); VIC一412型Sartorius电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);DHG一9101—2SA型电热恒温鼓风干燥箱(扬州鸿都电子有限公司);SK5200H型超声波洗涤器(上海科导超声仪器有限公司);旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司);SK一1型快速混匀器(江苏金坛医疗仪器厂).AccQ.Tag氨基酸测定试剂盒(美国Waters公司):包括AccQ—Flour氨基酸专利衍生剂,专用氨基酸分析柱,玻璃样品衍生管,16种混合氨基酸标准液,其浓度均为2.5b~mol/mL;醋酸盐一磷酸基金项目:新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用点重点实验室开放课题资助项目(BR0602).作者简介:庞新安,男,1974年出生,湖南常德人,汉族,硕士,助理研究员,研究方向:现代仪器分析与农产品品质检测鉴定.E—mail:***************2007年第4期分析仪器33盐缓冲溶液;浓盐酸(AR);苯酚(AR);氢氧化钠(AR).2.2色谱条件色谱柱:WatersAccQ.Tag氨基酸分析柱(3.9mm×150mm,4”m);流速:1.0mL/min;柱温:37℃;激发波长:250nm,发射波长:395nm;进样量:1O肚L;流动相A:醋酸盐一磷酸盐缓冲溶液,按1:10用MiliQ纯水稀释;流动相B:乙腈;流动相C:MillQ纯水;梯度洗脱程序如表1所示.表1梯度洗脱程序2.3样品制备2.3～.样品的水解精确称取预先处理好的巴旦杏,无花果,沙枣,石榴样品,其中巴旦杏,无花果,沙枣为干样,而石榴为鲜样,各放入干燥洁净的安瓿瓶中,倒入适量6.0mol/L盐酸(含0.5新蒸馏的苯酚),抽真空,充高纯氮气,重复3次,迅速将充好氮气的安瓿瓶瓶口置于酒精喷灯上封口,然后置于110℃恒温干燥箱中水解24h,取出水解液过滤并多次冲洗水解管,其滤液用旋转蒸发器蒸止近干,再用0.01mol/L的盐酸溶液溶解稀释后定容到一定体积,备用.2.3.2氨基酸标样与待测样品的衍生用移液器移取2OL已稀释的氨基酸标准溶液和巴旦杏,无花果,沙枣,石榴样液于对应的干净衍生管中,各加入7OL硼酸盐缓冲液,涡旋混和,在涡旋状态下各加入1OL刚配好的AccQ—FlourTM 衍生剂,并保持涡旋混匀1O～20S.在室温下放置1min,用石蜡膜封口,于55℃烘箱内加热10min,取出冷却至室温,供氨基酸分析用.3结果与讨论3.1氨基酸标样工作曲线将氨基酸标准液配制成浓度分别为2.5,5.0,1O,15,20~mol/L的溶液,每一标准液各取1O肚L 按2.3.2项衍生后进行测定,以氨基酸溶液浓度(C,~mol/L)为横坐标(X),以峰面积/内标面积(A,V?s)为纵坐标(Y)绘制氨基酸的标准工作曲线,利用峰面积与浓度进行线性回归.同时,按照2.2项色谱条件对浓度为10~mol/L氨基酸标准溶液平行测定5次进行精密度试验,计算相对标准偏差(RSD),并以3倍噪声(S/N一3)计算检出限.16种氨基酸标样的回归方程,相关系数,线性范围,RSD,最小检出限如表2所示.表2氨基酸标准工作曲线序号氨基酸回归方程相关系数m性.范l/暑(R%SD)篆墨序号晰程数mol/暑㈤RSD嚣IAspA=1550000C+115000.9999542.5—200.8271.9829ProA=2570000 C~448000.9999112.5~201.1564.0162SerA=3500000C+481000.9999582.5~200.7952.90210TyrA=4120O0 OC+2470OO0.9998672.5~20I.41121.7263GluA=1580000C~53400.9999552.5~200.8200.99811V a1A=7670O0O C+150O0O0.9999042.5~201.2034.5844G1vA=4O70O0OC+5990O0.9998512.5~20I.4922.21412MetA=6180 O0OC+750OO0.9999812.5~200.5383.6215HisA=4340000C~419000.9999712.5~200.6572.99713LysA=1590000 C~479000.9999042.5~20I.2O18.7976ArgA:3O70O0OC+1140OO0.9998472.5~20I.24512.95214IleA:940O 0OOC+2290OO0.9999202.5~201.0966.3937TllrA=5O80O0OC+230O0O0.9998592.5—2O1.45510.79415LeuA:8 960000C~1770000.9999652.5~200.7195.1848AlaA=5470000C~1170000.9999472.5~200.8953.81616PheA=1O70O 0OOC+330O0O0.9999172.5~201.11810.190注:Asp(天冬氨酸)Ser(丝氨酸)Glu(谷氨酸)Gly(甘氨酸)His(组氨酸)Arg(精氨酸)Thr(苏氨酸)Ala(丙氨酸)Pro(脯氨酸)Tyr(酪氨酸)V al(缬氨酸)Met(蛋氨酸)Lys(赖氨酸)Ile(异亮氨酸)Leu(亮氨酸)Phe(苯丙氨酸)34分析仪器2007年第4期结果表明,在一定浓度范围内,内标峰面积与氨基酸浓度线性关系良好,其相关系数为0.9998～0.9999,可以作为定量分析依据.同时,16种氨基酸标样的RSD均小于2,表明HPLC具有较好的精密度,荧光检测器的最小检出限为0.998～21.726t~g/L,符合国家标准要求.3.2氨基酸标样的HPLC分析标准氨基酸的分析色谱图如图1所示.图116种氨基酸标准溶液的色谱图1.天冬氨酸2.丝氨酸3.谷氨酸4.甘氨酸5.组氨酸6.精氨酸7.苏氨酸8.丙氨酸9.脯氨酸1O.酪氨酸11.缬氨酸12.蛋氨酸13.赖氨酸14.异亮氨酸15.亮氨酸16.苯丙氨酸3.3果品样品中氨基酸的HPLC分析巴旦杏,无花果,沙枣,石榴4种干鲜果品样品中各种氨基酸含量测定结果如表3所示.由表可知,4种干鲜果品样品中富含16种氨基酸,氨基酸总量为0.06%～12.44,其中8种必需氨基酸含量为0.05～5.25%,占总氨基酸含量的42.21%～82.78,高于FAO/WH0必需氨基酸评分模式的标准(36%),而与鸡蛋蛋白相当,因此具有较高的营养价值.同时,依据必需氨基酸指数计算公式:EAAI一[(Thrp/Thr)×(Tyrp/Tyr)×(V al/V al)×(Metp/Met)×(Lysp/Lys)×(Ilep/Ile.)×(Leup/Leu)×(Phe/Phe)]×100(式中为受验蛋白,为参考蛋白)计算的结果得知,4种干鲜果品样品中各种氨基酸含量合理,适宜人体吸收利用.果品样品(巴旦杏)中16种氨基酸的分析色谱图如图2所示.表3四种干鲜果品样品中氨基酸组成分析结果I号保留时间含量()保留时间含量()(min)巴旦杏无花果沙枣石榴孙暾(min)巴旦杏无花果沙枣石榴1Asp13.804～13.8370.8460.1450.5280.001411Va128.415～28.4360.4630.0660.0710.0032Ser15.293～15.3300.5810.1230.1850.001312Met28.924～29.5560.00980.00130.00680.00033Glu15.946～15.9812.1410.1890.3670.001513Lys31.722～31.7290.1990.0970.1340.00184Gly17.056～17.2720.7190.102未检出0.00114Ile32.430～32.4532.3272.1372.2940.0395His17.3OO～17.7950.4160.0660.1140.000315Leu33.044～33.0760.6420.0760.0800.00246Arg21.61O～21.63O1.7030.1590.224O.OO416Phe34.374～34.384O.8270.0680.0813O.OO147Thr21.945～21.9630.4770.0650.1190.003氨基酸总量()12.443.554.980.068Ala22.601～22.6060.3910.0670.1560.0004必需氨基酸()5.252.512.920.059Pro23.827～23.9500.3920.1810.4860.0009必需氨基酸/氨基酸总量()42.2170.8958.6482.7810Tyr27.221～27.2440.3070.0030.1340.001必需氨基酸指数(EAAI)52.1231.48—73.25一…注:为必需氨基酸;参考蛋白(鸡蛋);…参考蛋白(牛乳);…石榴为鲜样,无可比性2007年第4期分析仪器354结论图2果品样品(巴旦杏)中氨基酸分析色谱图1.天冬氨酸2.丝氨酸3.谷氨酸4.甘氨酸5.组氨酸6.精氨酸7.苏氨酸8.丙氨酸9.脯氨酸1O.酪氨酸11.缬氨酸12.蛋氨酸13.赖氨酸14.异亮氨酸15.亮氨酸16.苯丙氨酸利用AccQ.Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定了新疆特产巴旦杏,无花果,沙枣,石榴中游离氨基酸的含量,结果4种干鲜果品样品中富含16种氨基酸,其氨基酸配比合理,适宜人体吸收利用.该方法的线性范围比较宽,相关系数在0.9998～0.9999之间,RSD均小于2,其检出限符合国家标准要求,在40rain内完成待测样品中16种氨基酸的测定.实验证明,AccQ.Tag柱前衍生反相高效液相色谱法具有简便,快速,经济,灵敏度高,精密度好,准确度好的优点,可以满足巴旦杏,无花果,沙枣,石榴样品中氨基酸分析的要求,对其他果品中氨基酸的分析也具有一定的参考价值.参考文献1侯松嵋,孙敬,何红波,张旭东,王颜红.分析化学,2006,34(10):1395—14002吴光斌,陈发河.仲恺农业技术学院,2006,19(3):26—3O3姜曼花,邱细敏.湖南师范大学(医学版),2006,3(3):34—454瞿其曙,汤晓庆,胡效亚,李寿椿.化学进展,2006,18(6):789—7935刘惠文.氨基酸和生物资源,1995,17(2):50—556卢珍华,郭彩华.食品科学,2006,27(2):238—2417王天成,孙磊,宋为明,李学佩,寇丽筠.现代检验医学杂志,2006,21(6):18—208陈永波,饶斌,覃兰.氨基酸和生物资源,?/301,23(4):47—49收稿日期:2007—05—18 DeterminationofaminoacidsinfruitsbyAccQ.Tagpre-columnderivatizatio nreversedphaseHPLC.PangXinan,WanYing(1.KeyLaboratoryforProtectionandUtilization0厂BiologicalResourcesinTarimBasin,XinjiangProduction&amp;ConstructionCorps,Alar,Xinjia ng,843300;2.Biological TechnologyResearchandDevelopmentCenter,TarimUniversity,Alar,Xinj iang,843300) SixteenaminoacidsweredeterminedbyAccQ.Tagpre—columnderivatizationreversedphasehighper—formanceliquidchromatography.Thelinearcorrelationcoefficientbetween peakareaandconcentrationofaminoacidsintherangeof2.5～2O/~mol/Lwas&gt;O.999.Themethodhasbeenappliedtotheanalysisof fourdryandfreshfruitsofXinjiangwithgoodresults.。

黄莹，黄晶，杨晓，等. PITC 柱前衍生-高效液相色谱法测大米肽中的16种氨基酸含量[J]. 食品工业科技，2023，44（24）：279−285.doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023020133HUANG Ying, HUANG Jing, YANG Xiao, et al. Determination of 16 Amino Acids in Rice Peptides by PITCPre-column Derivatization High Performance Liquid Chromatography[J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(24): 279−285. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023020133· 分析检测 ·PITC 柱前衍生-高效液相色谱法测大米肽中的16种氨基酸含量黄　莹，黄　晶，杨　晓*，陈　曦，胡武瑶（中国健康促进基金会抗衰老营养与健康研发中心，湖北武汉 430000）摘　要：为了建立一种以高效液相色谱检测大米肽中氨基酸含量的方法，以异硫氰酸苯酯（Phenyl isothiocyanate ，PITC ）为柱前衍生剂，实现大米肽中16种氨基酸（天冬氨酸（Asp ）、谷氨酸（Glu ）、丝氨酸（Ser ）、甘氨酸（Gly ）、组氨酸（His ）、精氨酸（Arg ）、苏氨酸（Thr ）、丙氨酸（Ala ）、脯氨酸（Pro ）、酪氨酸（Tyr ）、缬氨酸（Val ）、蛋氨酸（Met ）、异亮氨酸（Ile ）、亮氨酸（Leu ）、苯丙氨酸（Phe ）、赖氨酸（Lys ））能同时、快速、有效地分析检测。

采用Athena AAA 色谱柱为分析柱，以甲醇:乙腈:水=20:60:20和50 mmol/L 乙酸钠（pH6.5）为流动相，进行梯度洗脱，流速为1.0 mL/min ，柱温35 ℃，紫外检测器波长为254 nm 。

柱前衍生-高效液相色谱法测定食醋中17种氨基酸赵博;肖瑞琪;肖昭竞;李根容;云雯;李红;朱永红【期刊名称】《中国调味品》【年(卷),期】2013(038)009【摘要】采用乙醇沉淀蛋白质,用2,4-二硝基氟苯做柱前衍生剂,高效液相色谱梯度洗脱-可见光紫外检测器同时测定食醋中17种氨基酸.方法的检出限(S/N=3)为0.04～1.45 mg/L,各氨基酸组分含量测定的相对标准偏差为2.1％～4.8％,回收率范围为87.3％～109％,满足食醋中氨基酸的检测要求.【总页数】4页(P96-98,103)【作者】赵博;肖瑞琪;肖昭竞;李根容;云雯;李红;朱永红【作者单位】重庆市计量质量检测研究院食品质量监督检验研究中心,重庆401123;重庆市计量质量检测研究院食品质量监督检验研究中心,重庆401123;重庆市计量质量检测研究院食品质量监督检验研究中心,重庆401123;重庆市计量质量检测研究院食品质量监督检验研究中心,重庆401123;重庆市计量质量检测研究院食品质量监督检验研究中心,重庆401123;重庆市计量质量检测研究院食品质量监督检验研究中心,重庆401123;重庆市计量质量检测研究院食品质量监督检验研究中心,重庆401123【正文语种】中文【中图分类】TS264.22【相关文献】1.柱前衍生高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液中氨基酸的含量 [J], 邓红英; 张永文; 李永贵2.柱前衍生高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液中氨基酸的含量 [J], 邓红英; 张永文; 李永贵3.柱前衍生-超高效液相色谱法测定3种奶粉中18种氨基酸 [J], 曲栗;古淑青;张嘉麒;赵超敏;邓晓军4.柱前衍生高效液相色谱法测定灵芝孢子粉中氨基酸的含量 [J], 殷娇阳;阎姝;田书霞5.柱前衍生高效液相色谱法测定注射用骨肽中15种氨基酸含量 [J], 张雪艳;郭雷;周长明;张建敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

PITC柱前衍生高效液相色谱法测定接骨木果实中氨基酸含量于洪超;马荣申;郭庆梅;周凤琴;郭俊国【摘要】为了测定接骨木果实中游离氨基酸和水解氨基酸含量,采用PITC柱前衍生高效液相色谱法(RP-HPLC)以异硫氰酸苯酯(PITC)作柱前衍生试剂,采用RP-HPLC梯度洗脱的方法测定接骨木果实中的游离和水解氨基酸的峰面积并计算其含量.结果表明:接骨木果实中氨基酸和水解氨基酸的含量分别为2.107％和7.297％;18种氨基酸分离良好,线性关系良好,空白无干扰,精密度RSD在0.634％～2.532％,稳定性RSD在0.729％～2.774％,重复性RSD在0.664％～2.884％,平均回收率在95.49％～103.67％,且RSD均小于3％.RP-HPLC法灵敏、简便、快捷,能准确测定接骨木果实中游离氨基酸和水解氨基酸的含量.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2015(043)008【总页数】4页(P213-216)【关键词】接骨木;游离氨基酸;水解氨基酸;异硫氰酸苯酯;高效液相色谱法【作者】于洪超;马荣申;郭庆梅;周凤琴;郭俊国【作者单位】山东中医药大学药学院,山东济南250355;济南天红苗木种植技术研发中心,山东济南250400;山东中医药大学药学院,山东济南250355;山东中医药大学药学院,山东济南250355;山东中医药大学眼科研究所,山东济南250002【正文语种】中文【中图分类】S567接骨木（Sambucus williamsii Hance）又名公道老、马尿骚等，为忍冬科（Caprofoliaceae）接骨木属（Sambucus L．）植物［1］。

接骨木的果实是一种具有极高开发利用价值的功能性产品，除含有大量对人体有益的不饱和脂肪酸外，还含有种类丰富的氨基酸［2］。

氨基酸含量是衡量接骨木果实营养价值高低和资源开发利用价值的重要指标。

氨基酸的分析测定多是通过离子交换树脂分离，然后通过柱后衍生化反应，再经紫外检测器检测分析，此方法分析时间长、灵敏度低，且仪器复杂、价格昂贵，严重限制其推广应用。