柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成

当归多糖的分级制备及组成分析孙元琳1’2，申瑞玲3，蔡宝玉4，汤坚1(1．江南大学食品学院，江苏无锡214036；2．山西运城学院生命科学系，山西运城044000 3．山西农业大学动物科技学院，山西太谷030801；4．江南大学测试中心，江苏无锡214036)当归多糖经离子交换柱层析得到3个多糖组分：W-ASPl由葡萄糖及少量阿拉伯糖和半乳糖组成，为中性多糖；W—ASP2主要由半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖及GalA(35．38％)组成，为弱酸性W-ASP3主要含半乳糖、阿拉伯糖和鼠李糖，Gal含量最高(58．27％)，结合单糖组成分析确定是一种果胶类多糖．酸水解结合HPAEC-PAD测定当归多糖中的糖醛酸种类为半乳糖醛酸．对于糖醛酸含量较高的多糖样品，糖醛酸对苯酚一硫酸试剂虽然显色，但不能反映真实含量，所以苯酚一硫酸法测量结果并不能代表其总糖含量(低于真实含量)．通过苯酚一硫酸法绘制半乳糖醛酸的于扰标准曲线，以消除GalA干扰可测得多糖样品的中性糖含量，再结合GalA的含量从而能够真实反映样品的总糖含量．当归多糖XC-1的分离与结构研究陈汝贤徐桂云#* 王海燕许鸿章刘叶民#!（中国协和医科大学中国医学科学院医药生物技术研究所北京10005）（!中国科学院化学研究所分子科学中心北京100080）XC-1的单糖组成及糖苷键XC-经水解、乙酰化后的GC分析）表明，该多糖是由葡萄糖组成。

毛细管电泳分析未发现有酸性糖，其结果也表明只含有葡萄糖，与乙酰化GC"测定结果一致。

经甲基化-水解-还原-乙酰化-GC分析，从部分甲基部分乙酰基单糖衍生物的实际保留时间与标准的2,3,4,6-0-四甲基-1,5-0-二乙酰基葡萄糖醇乙酸酯的实际保留时间进行比较，得到的相对比较，并结合GC-MS联用技术测定结果，确定了单糖的部分甲基化部分乙酰化糖醇乙酸保留值再与文献［3］值乙酯的结构。

[3] Jansson P F,Kenne L,Liedgren H et ai. Chem. Commun’ 1976, 8(15):1~74当归多糖ASP3的甲基化分析孙元琳中瑞玲汤坚顾小红(1．运城学院生命科学系，运城044000；2．郑州轻工业学院食品与生物工程学院，郑州450002；3．江南大学食品科学与技术国家重点实验室，无锡214122)果胶多糖是当归多糖的主要组成部分[1]其化学组成和糖链结构都比较复杂．甲基化分析是测定多糖分子糖苷键连接方式的有效方法【5 】．对于含有糖醛酸的多糖，如植物果胶或其它酸性多糖，其甲基化分析难度较大．这是因为：(1)甲基化反应在碱性条件下进行，糖醛酸在此过程中易发生口-消去反应，使与之相连的中性糖产生降解；(2)糖醛酸在酸性条件下不易水解，因此直接甲基化会使糖醛酸以及与其相连的中性糖的信息丢失，影响甲基化分析结果的准确性．由此，本实验采用氘代试剂NaBD4将多糖样品中的GalA还原为相应的中性糖，同时用氘进行标记(6，6’-d2-Gal)以区别于样品中的相应中性糖(Gal)，再进行甲基化分析，克服了上述缺陷．【1】Sun Y., Tang J., Gu X. H., et al.. In T. J. Riol.. Macromol.[J],2005,36;283--289【2】Dell A.,Methods in Enzymoloy[J],1990,193;647—660.当归多糖X—C一3一ii的糖链组成及结构研究徐桂云1，刘叶民1 陈淑贤广西师范大学学报(自然科学版)JOURNAl，OF GUANGXI NORMAl，UNIVERSITYV ol 21 No．2 2003年10月(1中国科学院化学研究所分子科学中心，北京10080；2中国医学科学院医药生物技术研究所，北京100050)近年来，已有报道当归多糖有抗肿瘤及抗辐射损伤的作用【3】．为研究多糖复合物结构和活性的关系，我们采用选择性酸水解方法和应用Gc／Ms和NMR技术研究了当归多糖x—C 一3一Ⅱ糖链组成和结构，在当归中首次发现以果糖为主链的多糖．采用温和酸水解多糖x c 3Ⅱ，然后将单糖衍生为糖醇乙酸酯衍生物的气相色谱分析表明X_C_ 3一Ⅱ糖链中有60％是呋喃型果糖．在这个分析条件下也得到了阿拉伯糖，通过定量得到阿拉伯糖：果糖=1：9．采用剧烈酸水解多糖X—C一3一Ⅱ后的分析结果是阿拉伯糖；半乳糖：葡萄糖=1：l：4．在后一步水解条件下未出现甘露糖的峰可表明果糖已被完全破坏，不影响X-C一3一Ⅱ中葡萄糖的测定．从而确定多糖X-C-3-Ⅱ中单糖组成为阿拉伯糖：半乳糖：葡萄糖：果糖=1：1：4：9．为确定单糖连接点，我们对多糖X-C-3-Ⅱ进行了甲基化分析．相对于两种不同的水解条件，我们称其为甲基化分析条件I和Ⅱ．色谱定性是通过对标准品1，5-O一二乙酰基一2,3,4，6一O一四甲基葡萄糖醇酯的相对净保留时间与文献值[3]比较确定的，并经Gc／Ms验证．各种糖残基的摩尔比按E．C．r．理论根据色谱峰面积和响应因子计算．我们得到如下结论：(1)X—C一3一Ⅱ是高分支的多糖；(2)果糖和阿拉伯糖是呋喃型糖苷；半乳糖和葡萄糖是吡喃型糖苷．这些信息在NMR谱中也可得到证实[2]；(3)多糖X-C-3-Ⅱ的主链由一1)Fruf(2一和一6)GIc，(1一组成．这样我们可以看出x—C一3一Ⅱ由两部分组成：一部分以一1)Frur(2一为主链，非还原性端基是Frur(2一，在一6，1)Frut(2一处接有侧链；另一部分具有更加复杂的分支结构并以一6)Glc。

柱前衍生化-高效液相色谱法分析木糖结晶母液的单糖组成孟海波;高绍丰;张海燕;孟汉卿【摘要】The reversed - phase high performance liquid chromatographic ( HPLC) method of pre-column - derivatization with l-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP) was developed to separate the traditional eight monosaccharides and detect the monosac-charide composition of crystallization solution of xylose. The results showed that crystallization solution of xylose consisted of mannose, rharanose, cellobiose, glucose, galactose, xylose, arabinose, fucose, and the dominant component monosaccharides were glucose, ga-lactose, xylose and arabinose. Peak height was used to quantify. The concentration of eight kinds of monosaccharide was liner with correspond peak area with correlation coefficients (r2) of 0.9897 -0.9994. The detection limit was 0.002 1 -0.003 1 mg/mL. The recovery was 98.4% - 101.0% , and relative standard deviation of detection results was 0.66% -0.21 % (n = 6). The HPLC method is simple, rapid, sensitive, convenient and can be applied to the quality control of crytallization solution of xylose.%采用1-苯基-甲基-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化-反相高效液相色谱(HPLC)法建立了8种常见单糖的分离模式,并用于木糖结晶母液单糖组成的定量分析.结果表明:木糖结晶母液至少由甘露糖、鼠李糖、纤维二糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖及岩藻糖8种单糖组成,其中以葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖为主.以峰高定量,8种单糖的浓度与相应的峰高呈良好的线性关系,相关系数r2在0.9897 -0.9994范围内,方法检出限为0.0021-0.0031 mg/mL,回收率为98.4% -101.0%,测定结果的相对标准偏差为0.66%-1.21%(n=6).该方法简单、快速、灵敏,可用于木糖结晶母液的质量控制.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2011(020)005【总页数】3页(P47-49)【关键词】木糖结晶母液;单糖组成;衍生化;高效液相色谱【作者】孟海波;高绍丰;张海燕;孟汉卿【作者单位】济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204【正文语种】中文木糖、阿拉伯糖作为一种良好的食品添加剂已被广泛应用于食品生产中。

当归多糖的结构研究进展李卫燕;李萍;闫涵威;孙莉;曹蔚【摘要】目的：总结近年来各学者在当归多糖结构领域的研究成果，以期对后期的研究提供借鉴。

方法查阅以近10年来为主的相关文献，对其结构研究成果进行总结归纳。

结果文献中对当归总多糖、中性多糖和酸性多糖的重均相对分子质量、单糖组成及其比例、单糖连接位点等结构信息都有不同程度的研究。

结论文献中对当归总多糖和中性多糖的结构研究较为深入，但对当归酸性多糖的研究相对浅显。

%Objective To summarize the research results of polysaccharide structure from A ngelica sinensis ,and to provide reference for researchers .Methods Relative literatures reported within 10 years about the structure of polysaccharide from Angelicasinen‐sis were summarized .Results The average molecular weight ,monosaccharide composition and their molar ratio ,the sequence of glucopyranosyl residues of the total polysaccharides ,neutral and acidic polysaccharides were researched .Conclusion The studies on the total sugar and neutral polysaccharides were comprehensive ,but the structure of the acidic polysaccharide needs further study .【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】5页(P321-325)【关键词】当归;多糖;结构【作者】李卫燕;李萍;闫涵威;孙莉;曹蔚【作者单位】第四军医大学药学院天然药物学教研室，西安 710032;第四军医大学药学院天然药物学教研室，西安 710032;第四军医大学药学院天然药物学教研室，西安 710032;沈阳军区司令部门诊部，沈阳 110006;第四军医大学药学院天然药物学教研室，西安 710032【正文语种】中文【中图分类】R284(Oliv.) DielsKey words:Angelicasinensis; polysaccharide; structure*通信作者：曹蔚，女，副教授，硕士生导师当归始载于《神农本草经》，为伞形科植物当归Angelicasinensis (Oliv.)Diels 的干燥根。

柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成马定远　陈　君　李　萍3胡卓逸(中国药科大学生药药用植物教研室,南京210038)(中国药科大学生化研究室,南京210009)摘　要　报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。

采用反向高效液相色谱250nm 紫外检测和使用梯度洗脱,6种还原单糖的12苯基232甲基252吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。

对单糖组成的定量测定进行了方法学考察,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。

关键词　单糖,多糖,衍生化,高效液相色谱　2001207204收稿;2002201209接受1　引 言单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。

已有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色谱法为主。

由于单糖分子的多样性,关于糖的分析方法仍在不断发展。

12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP )衍生化方法自运用以来,得到不断完善1～3。

Strydom 运用此法对中性、酸性和碱性醛糖进行了分析,可以使15种单糖得到很好的分离2。

本文首先建立了6种常见单糖(包括一种酸性糖)的分离模式,通过内标法对3种中性单糖的定量进行了方法学考察,并应用所建立的方法对多糖中的单糖进行了组成分析,为此法的更好运用提供了依据。

2　实验部分2.1　仪器与试剂HP1100型高效液相色谱系统,包括G 1312A 二元泵,G 1315A DAD 检测器,HP ChemStation 色谱工作站(Hewlett 2Packard )。

衍生化试剂12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP ,上海化学试剂采购供应站试剂厂),甲醇重结晶两次。

色谱用乙睛(T edia )、三氟乙酸(CP 级,上海化学试剂公司)。

单糖对照品:葡萄糖(G lc ,上海化学试剂公司)、甘露糖(Man ,Sigma 公司)、半乳糖(G al ,Sigma 公司)、鼠李糖(Rham 公司)、葡萄糖醛酸(G lcUA )和木糖(Xyl )(上海化学试剂二厂产品)。

收稿日期：2011-06-21；修订日期：2011-10-10作者简介：周威（1982-），男（汉族），湖北鄂州人，现为复旦大学药学院博士研究生，主要从事药物质量分析和药物代谢动力学研究工作．*通讯作者简介：段更利（1955-），男（汉族），上海人，现任复旦大学药学院教授，博士研究生导师，硕士学位，主要从事新药质量标准研究和体内方法学研究工作．微波辅助提取-柱前衍生高效液相色谱法分析板蓝根多糖的单糖组成周威1，张晓燕1，2，段更利1*（1．复旦大学药学院，上海201203；2．武汉大学基础医学院，湖北武汉430071）摘要：目的建立了一种微波辅助提取柱前衍生高效液相色谱法测定板蓝根多糖的单糖组成。

方法采用了微波辅助提取，PMP 柱前衍生单糖，Dikma －C 18色谱柱，流动相为乙腈－磷酸盐缓冲液，检测波长为250nm 。

结果L －鼠李糖，D －葡萄糖和D －半乳糖在0．156 62．5μg /ml 浓度范围内线性关系良好（r ＞0．9995），板蓝根多糖主要由D －葡萄糖、L －鼠李糖和D －半乳糖组成。

结论该方法简便、快速、准确，适用于分析测定板蓝根多糖的单糖组成。

关键词：板蓝根多糖；单糖；微波辅助提取；柱前衍生；高效液相色谱DOI 标识：doi ：10．3969/j．issn．1008-0805．2012．01．105中图分类号：R284．2文献标识码：B 文章编号：1008-0805（2012）01-0236-02板蓝根为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort 的干燥根，具有清热解毒、凉血利咽之功效［1］，是传统的抗病毒中药之一，临床上常用于抗病毒、抗菌。

据报道板蓝根多糖具有多种生物活性，是一种免疫增强剂［2 4］。

板蓝根多糖所含组分的相对分子质量差别较大，成分结构复杂等因素给板蓝根多糖的进一步开发利用造成困难。

水煎煮法作为板蓝根多糖的传统提取方法，表现出耗时、费力等不足。

柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成王媛媛;张晖;杨俊松;宗智慧【摘要】Objective To establish a precolumnderivatization procedure with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone ( PMP )-high performance liquid chromatography ( HPLC ) method for the determination of the monosaccharide composition of nine polysaccharides.Methods The nine polysaccharides were hydrolyzed, derivatized by PMP and analyzed by HPLC with the Inertsil ODS-SP C18 column(260mm ×4.6mm,5μm).The mobile phase was the 20%triethylamine-buffer solution withKH2PO4(pH=6.9),and the flow rate was 1.0 ml/min.The UV absorbance was detected at a wavelength of 254 nm,and the injection volume was 10μl with the column temperature 30℃.Results The method was successful in the separation of the mixture monosac-charide standards.The calibration line of each monosaccharide had a good relationship.And the precision, stability and reproducibility were also good.The nine polysaccharides were composed of different monosac-charide and the contents had some difference.Conclusion The method was accurate and stable for the deter-mination of the monosaccharide composition and content of nine polysaccharides.%目的：建立1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（ PMP）柱前衍生化-高效液相色谱法（ HPLC）对甘草多糖等9种多糖的单糖组成成分进行分析。