柱前衍生化_高效液相色谱法测定牛磺酸的条件优化

牛磺酸含量测定方法牛磺酸（Taurine）是一种非必需氨基酸，存在于人体和许多动物的组织中，尤其是在肌肉、大脑、心脏和眼睛中含量较高。

牛磺酸在维持生理功能、调节酶活性、参与脂类代谢、抗氧化等方面具有重要作用。

因此，准确测定牛磺酸的含量对于研究其在生物体内的功能以及制定适当的剂量和用药路线至关重要。

目前常用的牛磺酸含量测定方法主要有以下几种：1.高效液相色谱法（HPLC）HPLC方法是最常用的牛磺酸含量测定方法之一、该方法使用色谱柱将样品中的牛磺酸与其他组分分离，并通过检测器（如紫外检测器）测定牛磺酸的峰面积或峰高，进而计算出牛磺酸的含量。

HPLC方法具有高灵敏度、高精确度和高重复性的优点，适用于多种样品的检测，但需要耗费较长的时间。

2.气相色谱法（GC）GC方法使用气相色谱柱将样品中的牛磺酸分离，并通过检测器（常用的是质谱检测器）测定牛磺酸的峰面积或峰高，然后通过校准曲线计算出其浓度。

GC方法的优点是分离效果好、分析速度快，但需要将样品进行预处理，如甲醇提取和衍生化等。

3.生化分析法生化分析法是目前常见的一种快速测定牛磺酸含量的方法。

该方法使用牛磺酸酶（Taurine aminohydrolase）作用于样品中的牛磺酸，将其水解为丙醛胺（Acetaldehyde amine）和氨，然后通过比色反应测定产生的丙酮酸（Pyruvic acid）的含量来计算牛磺酸的浓度。

生化分析法操作简单、快速，但需要使用特定的酶和反应物，对样品的性质有一定要求。

4.核磁共振法（NMR）核磁共振法是一种非常准确的牛磺酸含量测定方法。

该方法通过测定样品中的^1H或^13C核磁共振信号来确定牛磺酸的浓度。

核磁共振法需要使用昂贵的仪器并对操作人员有一定的技术要求，但其结果具有较高的准确性和可靠性。

总结来说，测定牛磺酸含量的方法有高效液相色谱法、气相色谱法、生化分析法和核磁共振法等。

在选择具体方法时，需要综合考虑样品特性、分析目的、仪器设备和实验人员的技术要求，并进行合适的方法验证和准确性评估。

剂 的 乙腈 溶 液． ６ 在 Ｏ℃ 水 浴 中衍 生 化 ｌ 后 ， 别 ｈ 分 以磷 酸 缓 冲溶 液 （ Ｈ一 ７ 定 容 ， 样 分 析． ｐ ） 进 以进 样 浓度 为 横坐标 ， 以对 照 品和 内标物 的峰面积 之 比为
纵坐 标 ， 行线 性 回归 ， 进 测得 内标 法工作 曲线 ．
Ｍ ａ． ２ ７ ｒ ＯＯ
文 章 编 号 ：１ ０ － １ ０ ２ ０ ） １０ ８ — ３ ０ ０ １ ９ （ ０ ７ ０ － ０ ２０
柱前衍生高效液相 色谱 内标法 检 测牛磺酸 的研究
吴 莉 ，刘 永 琼 ，柏 正 武 ，祝 宏 ，汪立 耀 ，陈 琳
（ 湖北 省新 型反 应 器 与绿 色化 学 工 艺 重 点 实 验 室 ， 汉 ４ ０ ７ ） 武 ３年 ３月
华中师范大学学报 （ 自然 科 学 版 ）
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＨＵＡＺＨＯＮＧ ＮＯＲＭ ＡＬ Ｕ ＮＩ ＶＥＲＳ ＴＹ（ ｔ ｃ． Ｉ Ｎａ ．Ｓ ｉ）
Ｖｏ ． ｌ Ｎｏ １ Ｉ４ ．
上 分 离 效 果 很 好 ， 磺 酸 和 中 间 体 的 线 形 相 关 系 数 分 别 为 ０ ９ ９ ６和 ０ ９９ ２ 平 均 回 收率 分 别 为 牛 ． ９ ８ ． ９ ， ９
１ ０ ４ 和 １ ０ ６ ； 现性 实验 相对 标 准 偏 差 分 别 为 ０ ３ 和 ２ ４ ． ０．３ ０．７ 重 ．８ ．５
（ ． ４６ ｍｍ×ｌ ０ ５ ｍｍ） ５ Ｉ． 动相 ： Ｈ一７磷 酸缓 ， 雎 Ｉ流 Ｔ Ｐ 冲溶液 ： ：乙腈 一７ 水 ０：１ ５ 体 积 比） 紫外 检 ５： （ ．
测 波长 ３ ０ ｍ； 速 １ ０ ｍｉ ； 样量 ２ Ｌ ６ 流 ｎ ． ／ ｎ 进 ｍＩ ０ ．

２０２０．
［９］ 谭 志 斗 ，田大 听 ，陈 小 强 ，等 ．微 乳 液 在 氨 基 酸 薄 层 中 的 应 用 ［Ｊ］．湖北 民族学 院学报 （自然科学版 ），２００１，１９（１）：７８—８０．
［１０］ 郭 丽冰 ，陶 曙 红．中药 化 学 实 验 ［Ｍ］．广 州 ：广 东 药学 院 ，
７６
化 学 分 析 计 量
２０１０年 ，第 １９卷 ，第 １期
剂分 离所 得斑 点更 为集 中 ，故 而灵敏 度更 高 。 ３ 结语
以十 二烷基 硫 酸 钠 为表 面 活 性 剂 ，正 丁 醇 为助 表 面活性 剂 ，正庚 烷 为油相 ，水 为水相 的微 乳液 作展 开剂 对糖 在硅胶 板上 进行 了分 离分析 。与传统 展开 剂相 比，含 水 ２０％ ～６０％ 的微 乳 液 作展 开 剂 在硅 胶 板 上分离 糖 ，均 可得 到规 则 清 晰 、圆而集 中 、不 扩散 不拖 尾 的斑点 ，将该 法 用 于 槐米 芸 香 苷 水解 糖 样 品 的分 离 ，得 到理想 的分离效 果 。
物质罂粟碱 的特征 ，普通食 品 中不 会含有 罂粟碱 ，通过 对食 品中罂粟碱 的含量测定 来 以判定食 品中主要 是火锅料 中是 否 非 法 添 加 罂 粟 壳 。其 分 析 过 程 ，根 据 罂 粟 碱 的 溶 于 热 水 的 及罂粟碱在 ２４０ ｎｍ下 有紫外 吸收 的特点 ，首先将 样 品经加 热煮沸 ，冷却后过滤 ，过 ０．４５ ｍ滤膜 ，注入液相色谱仪 。运 用液相色谱仪 ，通过保 留时间定性 ，并 以盐酸 罂粟碱 对照 品 定量 ，其操作简单快速 ，数据 精确并 能排 除干扰 物质 。由此 可见 ，本发明的方法 ，为食 品中非法添加 罂粟 碱的含 量的测 定提供 了一种可靠 的便 于实施 的方法 ，能够满足研究和生产 中 的需 要 。

４ ． ｍＬ ～ ０ ｇ・ Ｌ 峰 面 积 与 进 样 量 的 线 性 关 系 良好 （ ＝ ．９ ） 回 收 率 在 ９ ．５ ～ｌ １ １ ％ ， Ｓ ０ｐ ｇ－ 一 ２ ０ ｍ Ｒ ＝ ０ ９ ９１ ， ８８％ ０ ．５ Ｒ Ｄ
＝ ０ ７９ 。本法精 密度高 ， 现性好 ， ＝ ．４ ％ 重 定量准确 ， 可用于测定泡腾片 中牛磺酸的含量。 关键词 高效液 相色谱法 柱前衍生化 牛磺酸 泡腾片
对于新研制的牛磺酸泡腾片前还没有含aksr一10高效紫外测定牛磺酸含量有到各种方法量控制很有实际意纯度的试剂均为分o收稿日期cogxre溶液的制备色谱条件下得色谱酸钠缓冲溶的测定无干扰1g用水溶解定1015o01m用水溶解o01t0ml制成即为试样溶液
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ｗｔ ａｅ ｎｔｌ ｉ ｃｔ ｉｉ ｈ ｏ ｒｅ—ｍ ｔａｏ —ｗ ｔ （ ： ： ｓ ｏ ｉ ｈ ｓ． ｈ ｏ ｔ ｗ ｓ ． ｅ ｎ ｌ ａｅ １ １８ ｂｌ ｐ ａｅＴ ｅｆ ｗ ｒ ｅ ａ ０ｍＬ・ ｉ 一．Ｔ ｅｄｔｃ ｖ ａｅ ｈ ｒ ａ ｍ ｅ ｌ ａ １ ｍｎ ｈ ｅ ｔ ｅｗ ｖ・ ｅｉ
ｔ ｎｈｐｉ ｔｅｒｎｅｏ ｏ ｃｎｒ ｉｎ ０ Ｉ ｍＬ ～ ０ ｇ‘ Ｌ （ ．９ ） Ｔ ｅｒｃｖｒ ａ ８ ８ ％ ～ ｉ ｓｉ ｎ ｈ ａ ｇ ｆ ｎｅ ｔ ｔ ｇ・ 一 ２ ０ ｏ ｃ ａｏ ４ ｘ ｍ Ｒ ＝０ ９ ９ １ ． ｅｏ ｅ ｗ ｓ ． ５ ｈ ｙ ９
牛磺 酸是 一种含 硫 的 一氨基 酸 ， 有 多 种生 理 具 和药理作 用 ， 以促 进大脑 细胞 发育 、 可 提高免 疫力 、 缓
器、 料与试剂 、 材
１ １ 仪 器 、 料与试 剂 ． 材
解疲劳 、 调节神 经传 导 ， 有 消炎 、 热 、 还 解 镇痛 、 抗病 毒

应用报告文档编号：LC-AR-0201001 HPLC法测定牛牛奶中牛磺酸的含量
摘要：本文根据食品安全国家标准GB5413.26—2010第二法（单磺酰氯柱前衍生法）所规定乳品中牛磺酸的测定方法，对某液态奶样品进行了方法验证。

实验结果表明：采用RIGOL L-3000高效液相系统进行牛奶中牛磺酸含量测定，能完全满足中华人民共和国药典要求，方法准确、灵敏。

关键词：液态奶、牛磺酸、HPLC
色谱条件及谱图：
仪器：RIGOL L-3000高效液相色谱仪
色谱柱：RIGOL Compass C18,5μm,4.6mm×250mm柱温：35℃
流动相：A：0.82g/L乙酸钠溶液，乙酸调PH至4.2B:乙腈
检测波长：254nm A:B=7：3
流速：1.0mL/min进样体积：10μL
图1.牛磺酸对照品的色谱图图2.液态奶色谱图
结论：食品安全国家标准GB5413.26—2010第二法（单磺酰氯柱前衍生法）中规定，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%，本实验结果相对差值最大为1.76%<10%。

定量限1.50µg/mL，低于方法检出限5µg/mL。

所有测试结果完全满足食品安全国家标准GB5413.26—2010第二法（单磺酰氯柱前衍生法）中规定。

且仪器基线稳定，噪音小，检测灵敏度高,完全满足分析要求。

HPLC柱前衍生化测定泡腾片中牛磺酸含量李胜松;祝宏;刘永琼;李萤;李俊杰【期刊名称】《化工时刊》【年(卷),期】2008(22)8【摘要】建立测定泡腾片中牛磺酸含量的方法.牛磺酸经邻苯二甲醛衍生,采用Diamondsil C18(5 μm×250 mm×4.6 mm)色谱柱分离;流动相为乙腈-甲醇-水(1∶1∶8);流速1.0 mL·min-1;波长330 nm;外标法定量.牛磺酸在40 μg·mL-1～200 μg·mL-1峰面积与进样量的线性关系良好(R2=0.999 1),回收率在98.85%～101.15%,RSD=0.749%.本法精密度高,重现性好,定量准确,可用于测定泡腾片中牛磺酸的含量.【总页数】3页(P39-40,55)【作者】李胜松;祝宏;刘永琼;李萤;李俊杰【作者单位】武汉工程大学,湖北,武汉,430073;武汉工程大学,湖北,武汉,430073;武汉工程大学,湖北,武汉,430073;武汉工程大学,湖北,武汉,430073;武汉工程大学,湖北,武汉,430073【正文语种】中文【中图分类】TQ46【相关文献】1.柱前衍生化HPLC法测定牛磺酸软胶囊中牛磺酸的含量 [J], 李云兰;丁红;刘玉明;贾卫丽;李青山2.柱前衍生化-HPLC法同时测定灵芝孢子粉中牛磺酸与精氨酸的含量 [J], 周芬霞;黄宏南;张占蓬;华永有;罗虹建3.柱前衍生化-高效液相色谱法测定复方牛磺酸滴眼液中牛磺酸与氨基己酸含量 [J], 汪玲;王莉艳;吴文耀4.HPLC柱前衍生化测定野生与养殖全蝎中游离牛磺酸含量 [J], 桑晓;王立娜;姜悦;马明珠;王集会5.柱前衍生化反相HPLC法测定几种营养口服液中的牛磺酸 [J], 郭升平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

液相串联质谱法测定牛磺酸蔡伟江（汤臣倍健股分，广东珠海 519040）[摘要]目的成立玛珈压片糖果的牛磺酸含量的测定方式。

方式采纳高效液相色谱串联质谱法，色谱柱：安捷伦poroshell 120 EC-C18（150mm×4.6mm，μm），以0.386g乙酸铵加水0.5L溶解，然后加入0.5L乙腈，混合，用乙酸调pH=为流动相，流速min。

结果牛磺酸的浓度与峰面积线性关系良好（R2=）,平均回收率为%，RSD=%（n=6）。

结论高效液相色谱串联质谱法靠得住、灵敏、准确，可用于玛珈压片糖果中牛磺酸的含量测定。

关键词：牛磺酸；玛珈压片糖果；液质联用法；含量测定Liquid chromatography tandem mass spectrometry method for thedetermination of taurineCAI Weijiang(By-Health Co.，Ltd, Zhuhai, Guangdong 519040)[Abstract] Objective: To establish a method for the determination of taurine in tablet : Using high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry, chromatographic column: Agilent poroshell 120 EC-C18 (150mm × 4.6mm, μ m), To 0.386g ammonium acetate dissolved in 0.5L water, then add 0.5L acetonitrile, mixed, adjusted the pH value to with acetic acid as the mobile phase ,the flow rate was min. Results: The linear relationship between concentration and peak area of taurine is good (R2=, the average recovery was %，RSD=% (n=6).Conclusion: High performance liquid chromatography tandem mass spectrometry method is reliable, sensitive and accurate, and can be used for content determination of taurine in Ma Jia tablet candy.Keywords: Taurine；Ma Jia tablet candy；liquid chromatography-mass spectrometry；Determination of content牛磺酸又称β-氨基乙磺酸，最先由牛黄中分离出来，故得名。

婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定—单磺酰氯柱前衍生法（二）11 仪器和设备 11.1 高效液相色谱仪，带紫外检测器或二极管阵列检测器或者荧光检测器。

11.2 pH计：精度为0.01。

11.3 涡旋混合器。

11.4 超声波振荡器。

11.5 离心机：转速≥5000转/分钟。

11.6 0.45um微孔滤膜。

11.7 天平：感量1mg,0.1mg。

12 操作步骤 12.1 试样的处理 12.1.1 试液提取称取固体样品1g～5g,液体样品5g～30g试样(精确至0.01g,若用紫外检测器，试样中含宜在1ug以上，若用荧光检测器，试样中含牛磺酸宜在50ug以上)于100 mL容量瓶中，加入80mL 温水(50℃～60℃)溶解，充分混匀，置超声波振荡器上振荡10min,冷却到室温。

加1.0mL沉淀剂I(10.12.1),涡旋混合，1.0mL沉淀剂II(10.12.2),涡旋混合，用水定容至刻度，充分混匀，试液于5000转/分钟下离心10 min,取上清液备用。

上清液在4℃暗处保存放置24 h 稳定。

12.1.2 试液衍生化吸取1.00mL上述上清液到10mL具塞玻璃试管中，加入l.00mL缓冲液(10.13), 1.00mL溶液(10.14),充分混合，室温避光衍生反应2h(1h后需摇摆1次)，加入0.10mL溶液(10.15)涡旋混合，以终止反应，避光静置至沉淀彻低。

取上清液经0.45um微孔滤膜(11.6) 过滤，取滤液备用。

衍生物在4℃可避光保存48 h。

另取1.00mL标准工作液(10.17.2),与试液同步举行衍生。

12.2 测定12. 2.1 参考色谱条件色谱柱：C18反相色谱柱(粒径5 um, 250 mm×4.6mm)或同等性能色谱柱。

流淌相：10mmol/L缓冲液(10.16)—(10.1)=70+30。

流速：1.00 mL/min。

柱温：室温。

检测波长：紫外检测器或二极管阵列检测器：254nm；或荧光检测器：激发波长：330 nm；放射波长：530nm。

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分析检 测
高双液相色桂前衍生化； 蠹
涓定食量Ｉ斡警 ｌ ｌ
（ 东 省 生 物 药物 研 究 院 ， 南 ２ ０ １ ） 山 济 ５ ０ ４ 杨素珍 王淑 华 于盛茂 刘 燕
■
要 研 完 了采 用 柱 前 斯 生 击 测 定食 品 中 聍 牛 磺 酸 一 样 品 拄 两
体 奶 的盛 量并减 少 问题 的发 生 。
压 头 。为 了使 物 料 或 水 能 顺 利 排 出 ， 两 泵 出 口管 道 上 均 需 加 装 单 向 阀 ｉ 出 料 （ 水 ｊ 径 选 择 台 适 ， 出 管 宜 过 细 ， 则 会 造 成 出 料 （ 水 ） 难 。 闲 蒸 脱 气 过 程 否 出 困
收 稿 日期 ：２０卜 【－ ７ ０ ２ ２ 怍 者 简 介 扬 紊 珍 （９ ８ 女 ． 程 师 ． 宽 方 向 保 健食 品 南 新 药 】６ 一） 工
研 完
外检 测器 下 检测 定 量 。率 法操 作 简单 ， 敏度 高 ， 灵 专
一
眭 强 ， 仪 器 比较 普 及 ， 于 推 广 。 且 易
处 理 ． ２４ 二 硝 基 氧 革 发 兰 暂 生 化 反 应 与 一 高 鼓 液 枢
神 经 系 统 的 发 育 极 为 重 要 因 此 牛 磺 酸 作 为 新 型 营 养
强 化 剂 厂 泛 添 加 在 各 类 婴 幼 儿 营 养 食 品 中
色 谱 仪 测 定 。流 动 相 曲 ｐ ７０磷 醢 盐一甲 醇 （５３ ） Ｈ ． ６ ：５ 常
外幢 测 往 兰 为 ３ ３ｍ７平 均 田 ＿ 率 为 １ ５ 立 乒 系数 为 ５ｔ 敏 ∞ ％．
１３ ％ 。 ２
目前 牛 磺 酸 常 用 的 含 量 测 定 法 有 氨 基 酸 自 动 分 析 仪 法 、 层 扫 描 法 、 后 衍 生 离 子 色 谱 法 等 。 氨 基 薄 柱

作者简介 ：陈瑞瑾 ，从事 中药制剂生产 和质量控制的研究。Ｅ—ｍ ｉ ９ ０ ７ ６ ＠ｑ ．ｃｎ。 ａｌ ４ ２ １４ ｑ ｏ ：６
药 物 研 究
中国民族 民间医药
Ｃ ｉｅｅ ｊｕ ｌ ｏ ｔｎ ｍｅ ｉｉｅ ａ ｄ ｅ ｎ ｐ ａｍａ ｙ ｈｎ ｓ ｏ ｍａ ｆｅｈ ｏ ｄｅｎ ｎ ｔ ｏ ｈ ｒ ｅ ｈ ・５ ・ ７
（ 上接第 ５ ３页 ）
以葛根素浓度 ｃ对吸 收度 Ａ进 行线性 回归 ，得 回归方 程 ：Ａ＝ ．７ ７ ＋０ ０ ４ （ ０ ０７ Ｃ ．２ ３ 相关 系数 ｒ ．９ ５ 即为本 ＝０ ９ ９ ） 品含量 测定 标准工作曲线。 试验 表明葛根素溶液在 ４ ０ ６～１． ８ １ ／ 浓 度范 围 ．９ ６３ ４￣ ｍｌ ｇ 内其浓 度与来自收度具有 良好 的线性关 系。
参考文献
［ ］ 中华人 民共 和国 药典 （ １ 一部 ） ［ ］ ｓ ．北 京 ： 学 工业 出版社 ，２ １ 化 ００
： ３１ ２．
２ ５ 加样 回收试验 ． 精密称取 已知总黄 酮含 量 的本品 ５份 ，加入 葛 根素 对 照品 ，按样 品溶液制备方法处 理 ，制成加 样 回收供 试品液 ， 按标准 曲线测定方法测定 ，在 ２ ０ ｍ 的波长处测定 吸收度 ， ５ｎ
表 １ 加 样 回收 率 试 验 ２ ４ 测定法 衍生 试剂 配制 ：称 取 ０ １ ． ． ｇ邻苯 二 甲醛用 ｌ Ｏ ｍ 甲醇溶解 ，加 ０ １ｍ ｌ ． ｌ乙硫 醇 ，０ ４ ｌＬ硼 酸钠 缓 冲 液 ． ｍｏ ／ （ Ｈ＝ ． ）定容 至 １０ｍ 。（ 时新 配 ，保存 ４ Ｐ ９４ ０ ｌ 用 ８小时 ） 精密吸取对照 品工作液及样 品溶 液各 ０ ５ ｌ ． ｍ ，分别加衍 生剂 ０ ５ ｌ ． ｍ ，摇匀 ，在 ４ ｉ ｍ ｎ内取 混合 液 ｌ ｕ 注入液 相色谱 Ｏｌ 仪 ，测定 ，即得。 ２５ 线性关 系考察 精密吸取 牛磺 酸对 照品溶液 以 １． ０ ． ００ 、 ２ ．０、３ ．０、 Ｏ ０ 、５ ．Ｏ ｇ Ｌ按拟 定 的色 谱条 件 测定 ００ ０ ０ ４ ．ｏ ０ Ｏ ｍ ／ 峰面积 ，以峰 面积分 值 为纵坐 标 ，牛磺 酸含 量 为横坐 标绘 制标准 曲线 ，计 算得 回归 方程 ：Ｙ ＝１４ ６ ＋１５ ，ｒ＝ ６６Ｘ ０１ ０９９ ．９ ９，结 果表 明 ，牛 磺 酸进 样 浓 度 在 １ ０～５ ｍｇＬ范 围 ０ ／ 内，进样浓度 与牛磺 酸峰面积呈 良好线性关 系。 ２ ６ 精密度试验 分 别精密吸取 牛磺酸对 照品溶液 和供试 ． 品溶液 （ 批号 ２ １０ ０ ）各 １ １ ，重 复进样 ５次 ，记 录色 ０ １９ １ ０ｚ ｌ 谱 图，测 定 牛磺 酸 面 积 ，０ ４ 、０ ４ 、０ ４ 、０４ 、０ ４ ．２ ． ３ ． １ ．２ ． １ ２ ０ ０１ ０１ ９ １ ０ ４２ ． １４ ． ｍ ／￣，其 Ｒ Ｄ为 １４ ，表 明仪器精 密度 良好 。 ｇｎ Ｓ ．％ ２ ０ ０ ０１ ９ ２ １ ０ ．４１ １６ ． ２ ７ 稳 定 性 试 验 精 密 吸 取 供 试 品 溶 液 （ 号 ： ． 批 ０ ４３ ． １３ ． ２ １００ ）１ 分别于 ０ 、８ ２、１ 、２ ０ １９ １ ０ 卜 、４ 、１ ６ ４小时进行 测 ２ ０ ０３ ０１ ９ １ 定 ，其峰 面 积 Ｒ Ｄ为 １６ ，表 明 供 试 品溶 液 在 ２ ｈ内 Ｓ ．％ ４ 稳定 。 结果表 明 ，本 法具有 良好 的 回收率。 ２ ８ 阴性对照试验 按处 方 比例取 处方 中缺 章鱼 ，照制 法 ３ 讨 论 ． 制取 阴性样 品。取 阴性样 品 ５ ，并按供试 品溶 液提取方法 ３ １ 流 动 相 的选 择 流 动 相 组 成 及 配 比选 择 ：参 考 文 ｍｌ ． 制成阴性对 照溶液 ，测定 ，在 上述 色谱 条件 下 ，缺 牛磺 酸 献 Ｉ ，曾试用 甲醇 一磷 酸盐 缓 冲液溶 液和 乙腈 一水 的 不 ２ 阴性对照溶液 ，在 牛磺 酸谱 峰处无 干扰 峰 出现 ，表 明对 被 同配 比，摸 索液 相 色谱 的最 佳 测定 条 件 。试 验 结 果表 明， 测 成分无干扰 。 选用 甲醇＿ ００ ｍ ｌＬ醋酸钠 溶液 （ Ｏ ０ ，牛磺 酸 出峰 一 ．５ ｏ ／ ６ ：４ ） ２ ９ 重复性试验 取 同一批 号供试品 （ ． 批号 ２ １００ ）共 时间适宜 ，与其它 共存 成分 分 离度 大 于 １５ ０ １９ １ ． ，达 到基 线 分 ５份 ，精密量取 ，按样 品测定 项下方法进行提取 ，测定 ，结 离 ，峰型和分离度较好 ，阴性对 照无 干扰。 果 测 得 平 均 值 ０４ ｍ ／ ｌ Ｓ ％ ＝１４ ，表 明 重 复 性 ３ ２ 波 长 的选 择 采 用 ３ ０ ｍ 作 为检 测 波 长 ；文 献 ． ２ ｇ ｍ ，Ｒ Ｄ ．％ ． ３ｒ ｉ 良好 。 （ Ｐ Ｃ法测定食 品中牛磺 酸 的含量 ）采 用 ３０ ｍ作为检测 ＨＬ ３ｎ ２ １ 加 样 回收率 试 验 取 已测 知 含量 的供 试 品 （ 号 波长 ；故选择 ３０ ｍ作为本 品的检验波长 。 ．０ 批 ３ｎ ２ １０ ０ ，含量 ：０４ ｍ ／ １ ６份 ，每 份 精 密 量 取 样 品 ３ ３ 样 品提取溶 剂 的选择 精 密称取 供试 品 １ ｍ 分 别加 ０ １９ １ ．２ ｇｍ ） ． ０１ （ 精密吸取样 品溶液 ５ ｌ １０ ｌ ｍ 于 ０ ｍ 容量瓶 内加蒸馏 水定容 至 水 、流动相 、甲醇 ３ ｍ ，制 备供 试液 。结 果 表明 ，三 种溶 ０ｌ 刻度 。摇 匀 ，滤 过 ，取 续 滤 液 ，即 得 ） １ ｌ ｍ ，精 密 加 入 剂测得结果无 明显差别 ，但 是用 流动 相 和 甲醇 做提取 溶剂 ０ ０ １２ ｇ ｍ 牛磺 酸对照 品溶 液 １ ｌ ．３９ｍ ／ ｌ ｍ ，按 样 品测 定项 下 方 所 得杂质峰较多 ，故采用水为提取溶剂 。 法进行 ，并按上述 色谱 条件 依法测 定 ，计 算 回收率 ，结果 参考文献

饲料中牛磺酸含量测定方法牛磺酸（分子式NH2CH2CH2SO2OH，分子量125）是一种氨基磺酸，牛磺酸除了能促进大脑的正常发育外，还能增强机体的免疫力。

牛磺酸常用的含量测定方法有：邻苯二醛柱后衍生、2,4-二硝基氟苯柱前衍生、邻苯二醛柱前衍生高效液相色谱法。

本文采用2,4-二硝基氟苯柱前衍生高效液相色谱法测定饲料中牛磺酸的含量。

1.原理：采用2,4-二硝基氟苯为柱前衍生化试剂与牛磺酸在pH9.0的碳酸氢钠溶液中定量进行化学衍生反应，缩合成二硝基苯氨基酸，在反相色谱柱上进样分离，用紫外检测器进行检测。

2.检测方法2.1试剂：牛磺酸对照品（中国药品生物制品检定所）、乙腈（色谱纯）、超纯水、2,4-二硝基氟苯（分析纯）、碳酸氢钠（分析纯）、磷酸二氢钾（分析纯）、硫酸锌（分析纯）、磷酸盐缓冲液pH7.0（取磷酸二氢钾6.8g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液291ml，用水稀释至1000ml，即得）。

2.2 仪器：SHIMADZU-10A液相色谱仪（UV检测器）、离心机、超声仪。

2.3色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Phenomenex C18 Synergi 4u Hydro-RP 80A（150×4.6mm,4um）；流动相：磷酸盐缓冲液（pH7.0）-乙腈-水（70:20:10）；检测波长：360nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量10ul。

理论板数按牛磺酸衍生物峰计算不低于1500，牛磺酸衍生物与2,4-二硝基氟苯乙腈峰的分离度应大于1.5。

2.4溶液的制备2.4.1对照品溶液的制备：精密称取牛磺酸对照品10mg，加水制成每1ml含0.5mg的溶液，精密量取2ml，按2.4.3方法操作，即得。

2.4.2供试品溶液的制备：精密称取样品约5g于具塞锥形瓶中，精密加入25ml水，超声15分钟溶解，精密加入0.1mol/L盐酸溶液10ml，摇匀，加入15g/L硫酸锌溶液5ml，摇匀，精密加入10ml水，摇匀，4000r/min离心20分钟，取上清液过滤，取续滤液2ml，按2.4.3方法操作，即得。

品主要采用高效液相色谱法 ， 由于牛磺酸 自身紫
外 吸收 较 弱 ， 测 灵 敏 度较 低 ， 检 因此 常 采 用衍 生 化 的方法 提高 检测 的灵敏 度 。 本实验 采用 ２４ ， 一二硝基 氟苯 作 为柱 前衍 生试 剂 ， 立 了测定 牛磺 酸 的高效 建
牛磺 酸标 准 品 （ 国药 集 团化 学试 剂 有 限公 司 ，
ｔ ｔＣｓ （５ ｉ ｅ ｌ ２０×４ ｍ ５ ｍａ 柱 ． ｍ， ｍ） ６ 色谱柱 上 ，． ０５ ％ＺＬ胺（ 用磷酸调Ｐ － ．） 乙腈为流动 相进 行梯度洗脱 ， Ｈ ０和 ￣ 检测波长
３ ０ ｍ。 ６ ｎ 牛磺酸在４ ８Ｘ１— ８ ９ ０ ｍ ｌ 范围内与峰面积呈现 良好的线性关系 （ ０９ ９ ） 所建立 的方法简单 、 ． ０１ ． １－ ｏ Ｌ ６ ０ ４Ｘ Ｓ ／ ｒ ． ８。 － ＝ ９ 简单 ， 可用于制剂中牛磺酸含量的测定。 关键词 ：牛磺 酸； 高效液相色谱法 ； 柱前衍生
牛磺酸是一种具有简单化学结构 的含硫氨基 酸 ， 人 及 动 物 的 重要 营养 物 质 ， 以游离 形 式 存 是 它
在 于哺 乳 动物 几乎 所有 的脏器 中 ， 中枢 神 经 系统 在 中含量 尤其 丰 富 。牛磺 酸 具有 重要 的生 理作 用 ， 能
粒 中牛磺 酸 的含量 。
１ 实验 部 分
ａ ｅｏ ｉ ｉ ｂ ｌ ｈ ｓ ，ａ ｄ ｔ ｅｆ ｗ ｒ ｔ Ｗａ ．ｍＬ ｍｉ ． ｈ ｅ ｅ ｔ ｎ ｗａ ｅｅ ｇ ｈ Ｗａ ｅ ｔ３ ０ ｍ． ｈ ａｉ ｒｔ ｎ ｃ ｔｎ ｔ ｌ ａ ｍｏ ｉ ｐ ａ ｅ ｎ ｈ ｏ ａｅ ｓ １０ ／ ｎ Ｔ ｅ ｄ ｔ ｃｉ ｖ ｌｎ ｔ ｓ ｓ ｔａ ６ ｎ Ｔ ｅ ｃ ｂ ａ ｉ ｒ ｅｓ ｅ ｌ ｏ ｌ ｏ

高效液相色谱法测定抗疲劳类保健食品饮料中牛磺酸含量摘要：目的验证《GB/T 5009.169-2016食品安全国家标准食品中牛磺酸的测定》第二法丹磺酰氯柱前衍生法高效液相色谱法是否适用于测定抗疲劳类保健食品中牛磺酸的含量。

方法采用衍生化的方法，将稀释后的样品以丹磺酰氯作为衍生剂，色谱柱为Kromasil 100-5-C18（4.6×150mm，5 μm），流动相：A为乙酸钠缓冲液，B为乙腈，进行等度洗脱（70+30），流速：0.8ml/min，柱温30℃，进样量：5μl，在254nm检测波长为254处进行检测。

结果牛磺酸在6.125μg/ml-30.63μg/ml（R2=0.9991，n=8）范围内与峰面积线性关系良好，加样回收率范围为99.6%～103.3%。

结论本方法具有专属性强、灵敏度高、稳定性好、重复性佳，适用于抗疲劳类保健食品饮料中牛磺酸的测定，可作为产品质量控制方法。

关键字：高效液相色谱法牛磺酸丹磺酰氯引言牛磺酸广泛分布于动物体内，尤其是海洋动物和鸡胚中[1]。

牛磺酸是一种含硫的非蛋白质氨基酸，在体内以游离状态存在，不参与蛋白质的合成，是人体的条件必须氨基酸，具有广泛的生理功能，可通过保护细胞、抑制自由基、抗氧化、调解细胞内外钙离子平衡等起到缓解体力疲劳、增强免疫力的作用，在营养食品和功能性食品中有着巨大的开发和应用潜力[2]。

目前牛磺酸含量的测定方法主要有分光光度法[3]、气相色谱法[4]、薄层色谱法[5]、氨基酸自动分析仪法[6]、高效液相色谱法[7]等。

从操作的便捷性、结果的准确性以及仪器的适用性方面考虑，高效液相色谱法操作简便、专属性强、灵敏度高、重现性好，更好地适用与含牛磺酸的保健食品饮料的测定。

选择《GB/T 5009.169-2016食品安全国家标准食品中牛磺酸的测定》第二法丹磺酰氯柱前衍生法高效液相色谱法来测定抗疲劳类保健食品中牛磺酸的含量。

1仪器与试药高效液相色谱仪（带有二极管阵列或紫外检测器）、分析天平（感量分别为0.0001 g和0.001 g）、涡旋振荡器、超声波振荡器、pH计（精度0.01）、离心机（不低于5000r/min）、微孔滤膜（0.45μm）。

高效液相色谱法测定乳粉中牛磺酸前处理条件优化【摘要】本文分别采用盐酸沉淀前处理方法和亚铁氰化钾沉淀前处理方法提取乳粉中的牛磺酸，并采用丹磺酰氯柱前衍生高效液相色谱法对乳粉中的牛磺酸含量进行测定。

结果表明采用亚铁氰化钾沉淀法所得的谱图存在的杂质峰对牛磺酸谱峰产生干扰，造成牛磺酸谱峰出现肩峰影响测试结果。

而采用盐酸沉淀法所得液相色谱谱图出现的杂质峰对牛磺酸谱峰不造成干扰。

【关键词】牛磺酸；前处理方法；液相色谱法；肩峰【DOI 编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2021.06.029郁蕉竹1，林洋1，张宏宏1，王韵1，刘鹏2*（1.沈阳市食品药品检验所，辽宁沈阳110036；2.沈阳建筑大学，辽宁沈阳110036）Optimization of Pretreatment Conditions for HPLC Determination of Taurine in Milk PowderAbstract ：Taurine in milk powder was extracted with hydrochloric acid or potassium ferrocyanide.The content of taurine was determined by high performance liquid chromatography （HPLC ）with dansulfonyl chloride as pre-column derivatization.The shoulder peak may affect the test results when using potassium ferrocyanide as the precipitation.While the impurity peaks make no differences in the spectrogram when using hydrochloric acid as the precipitation.Key words ：taurine ；pretreatment method ；HPLC ；shoulder peakYU Jiao-zhu 1，LIN Yang 1，ZHANG Hong-hong 1，WANG Yun 1，LIU Peng 2*（1.Shenyang Food and Drug Inspection Institute ，Shenyang 110036，China ；2.Shenyang Jianzhu University ，Shenyang 110036，China ）牛磺酸（2-氨基乙磺酸）是一种非蛋白类氨基酸，它在人体内主要以游离氨基酸形式存在，具有一定的抗肿瘤活性，对提高婴幼儿机体免疫力和抗病能力有十分重要的作用[1-2]。

柱前衍生高效液相色谱法测定红牛维生素功能饮料中牛磺酸含
量
黄岛平;陈秋虹;劳燕文
【期刊名称】《广西科学院学报》
【年(卷),期】2006(022)0z1
【摘要】用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生高效液相色谱法,运用C18色谱柱为固定相,甲醇+0.05mol/L NaAc溶液(45+55)为流动相,检测波长330nm,测定红牛维生素功能饮料的牛磺酸.结果衍生化反应迅速,分离效果好,在10～50μg/ml的浓度范围内,牛磺酸色谱峰面积与浓度之间的线性相关系数为0.9999,加标回收率为
97.48%～101.0%,RSD为2.5%.
【总页数】3页(P419-421)
【作者】黄岛平;陈秋虹;劳燕文
【作者单位】广西分析测试中心,广西南宁,530022;广西分析测试中心,广西南宁,530022;广西分析测试中心,广西南宁,530022
【正文语种】中文
【中图分类】O657.72
【相关文献】
1.PITC柱前衍生反相高效液相色谱法测定维生素功能饮料中L-赖氨酸和牛磺酸的含量 [J], 冯盛斌;胡海娥
2.结合研究热点及科研课题的实验——结合柱前衍生的分散液相微萃取:高效液相
色谱法测定维生素功能饮料中VB1 [J], 曹江平;魏娟娟;邸宏伟;王亚丽;梁永锋;白晓朝
3.邻苯二甲醛柱前在线衍生反相高效液相色谱法测定功能饮料中赖氨酸的含量 [J], 李灿明;柏建国;刘桂果;孙丽鹏;程东;白燕楠
4.柱前衍生化-高效液相色谱法测定复方牛磺酸滴眼液中牛磺酸与氨基己酸含量 [J], 汪玲;王莉艳;吴文耀
5.柱前衍生-高效液相色谱法测定饲料中牛磺酸的研究 [J], 殷秋妙;何绮霞;吴维煇;王威利;续倩;张展
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和 25.0 μg/mL。 1.3 色谱条件
色谱柱：C18（250 mm×4.6 mm， 5 μm）；流动相：A 相为 0.01 mol/L NaAc+0.018% 三 乙 胺 +0.3% 四 氢 呋 喃，B 相 为 0.01 mol/L 的 NaAc 水 溶 液 +40% 乙 腈 +40% 甲 醇。 流 速： 1.0 mL/min；柱温：室温；荧光检测 器设置：0 ～ 19min，运行时间：1min， 梯度洗脱。梯度洗脱程序见表 1。 1.4 样品处理
Agilent 1200 高效液相色谱仪（配 有 荧 光 检 测 器）， 安 捷 伦 公 司；KQ250DV 超声仪，昆山市超声有限公司； 3K15 离心机，SIGMA 公司。 1.2 试剂与配制溶液
1.2.1 试剂 牛磺酸标准品，纯度≥ 98%, 购于
Chem Service；乙腈、甲醇、三水合 乙酸钠、氢氧化钾，均为色谱纯，购 自上海阿拉丁公司；三乙胺、四氢呋喃、 邻苯二甲醛（OPA）、硼酸、2- 巯基乙 醇（C2H6OS）均为分析纯，购自天津科 密欧化学试剂公司；实验用水为 GB/T 6682— 2008 规定的一级水；聚氧乙烯 月桂酸醚（Brij-35），高级纯 , 购自麦 克林公司。
2.1.1 衍生试剂的用量
步骤 1 2 3 4 5 6 7
表 1 梯度洗脱程序
时间 /min
组分 A（/ %）
0
80
5
80
9
35
12
5
17
5
17
80

19
80
组分 B（/ %） 20 20 65 95 95 20 20
79 Jun 2021 CHINA FOOD SAFETY Copyright©博看网 . All Rights Reserved.

两种柱前衍生法测定奶粉中牛磺酸的比较研究康绍英，刘宇星，赵红清，李　灿，刘　兰*，张　新（湖南省产商品质量检验研究院，食品安全监测与预警湖南省重点实验室，湖南长沙 410017）摘　要：实验采用邻苯二甲醛和丹磺酰氯两种柱前衍生高效液相色谱法测定奶粉中牛磺酸的含量，并比较了两种方法的优劣。

样品用水溶解除去蛋白质后，上清液用邻苯二甲醛和丹磺酰氯衍生，衍生产物经C18反相色谱柱分离，采用高效液相色谱法测定，以外标法定量。

两种衍生化方法灵敏度好、分离度高，均可用于奶粉中牛磺酸的测定，但邻苯二甲醛法具有样品前处理快、分析时间短、干扰少等优点，是较理想的牛磺酸测定方法。

关键词：邻苯二甲醛；丹磺酰氯；柱前衍生；高效液相色谱法；牛磺酸Comparison of Two Pre-Column Derivatization Methods for the Determination of Taurine in Milk PowderKANG Shaoying, LIU Yuxing, ZHAO Hongqing, LI Can, LIU Lan*, ZHANG Xin(Hunan Provincial Institute of Product and Goods Quality Inspection, Hunan Provincial Key Laboratory of Food Safety Monitoring and Early Warning, Changsha 410017, China)Abstract: The content of taurine in milk powder were determined by high performance liquid chromatography with two kinds of pre-column derivatization by o-phthalaldehyde dansyl chloride. The advantages and disadvantages of the two methods were compared. After the samples were dissolved with water to remove the protein, the supernatant was derivatized with o-phthalaldehyde and dansyl chloride. The derivatives were separated by C18 reversed-phase column and determined by HPLC and quantified by external standard method. The two derivatization methods have good sensitivity and high resolution and can be used for the determination of taurine in milk powder. However, the o-phthalaldehyde method has the advantages of fast sample preparation, short analysis time and less interference, and is an ideal taurine determination method.Keywords: o-phthalaldehyde; dansyl chloride; pre-column derivatization; high performance liquid chromatography; taurine牛磺酸又名2-氨基乙磺酸、牛胆素、牛胆酸，因最早从牛黄中提取出来而得名。