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•18•实用临床医药杂志Journal of Clinical Medicine in Practice2022,26(11)：18-21,33.重建人类表皮模型医疗器械体外皮肤刺激试验中白细胞介素和白细胞介素的表达变化刘佳，范春光，孙立魁，赵增琳(山东省医疗器械和药品包装检验研究院/国家药品监督管理局材料器械安全性评价重点实验室/山东省医疗器械生物学评价重点实验室，山东济南，250101)摘要：目的探讨以体外皮肤刺激试验作为家兔皮肤刺激的替代试验，检测皮肤刺激性,分析试验模型相关分子标记物。
方法选取2种医疗器械产品，通过重建人类表皮模型(RhE模型)体外皮肤刺激试验检测皮肤刺激性。
收集皮肤组织培养基，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养基中白细胞介素(IL)-laJL-8含量。
结果组织病理学显示，使用4%乳酸处理，上皮细胞萎缩,角质层脱落；采用其他方式处理的上皮组织未见明显异常。
氯化钠注射液配制的1%的十二烷基硫酸钠(SDS)极性阳性对照和芝麻油制备1%的SDS非极性阳性对照中,上皮细胞变性坏死。
EUSA结果显示，培养基中IL-la表达与皮肤刺激指数呈正相关，IL£与皮肤刺激指数呈负相关。
结论IL-la可作为RhE模型体外皮肤刺激试验的分子标记物，以分析医疗器械产品的皮肤刺激性。
关键词：重建人类表皮模型；白细胞介素-la；白细胞介素皮肤刺激；医疗器械；分子标记物中图分类号：R197.39；Q81文献标志码：A文章编号:1672-2353(2022)11-018-04D0I：10.7619/jcmp.20214815Expression changes of interleukin-la and interleukin-8in vitro skin stimulation test of medical devicesfor medical devices with reconstructed humanepidermis modelLIU Jia,FAN Chunguang9SUN Likui,ZHAO Zenglin(Shandong Institute of Medical Device and Pharmaceutical Packaging Inspection,NationalMedical Products Administration Key Laboratory far Safety Evaluation of Biomaterials andMedical Devices,Shandong Key Laboratory of Biological Evaluation for Medical Devices,Jinan Shandong,250101)Abstract:Objective To explore the skin irritation test in vitro as a substitute test for rabbit skin irritation to detect skin irritation,and to analyze the molecular markers related to the test model. Methods Two kinds of medical devices were selected,and skin irritation was detected by reconstructing human epidermis(RhE)model in vitro skin stimulation test.Skin tissue substrates were collected,and the contents of interleukin(IL)-la and IL-8in the substrate were determined by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Results The histopathology showed that the epithelial cells with4%lactate were atrophied and the cuticle was exfoliated；there was no obvious abnormality in epithelial tissue by other methods.Epithelial cells were degenerate and necrotic in1%sodium dodecyl sulfate(SDS)polar positive control with sodium chloride injection and1%non-polar nonpolar positive control with sesame oil.ELISA results showed that IL-la expression in substrate was positively correlated with skin irritation index,but IL-8was negatively correlated with skin irritation index. Conclusion IL-la can be used as a molecular marker for RhE model skin irritation test in vitro to analyze skin irritation of medical devices.Key words:reconstruction of human epidermis model;interleukin-1a;interleukin-8;skin irritation；medical device;molecular marker收稿日期：2021-12-07基金项目：国家重点研发计划(2016YFC1103205)；山东省医疗器械产品质量检验中心内部课题基金资助项目(ZX201801)表面接触医疗器械使用过程中与人体皮肤接触,其材料本身和（或）其可沥滤物可能会导致皮肤产生刺激反应。
REV20190712仅供研究，不用于临床诊断。
客服热线: 400-7060-959﹡技术支持邮箱: **************公司官网: 目录简介 ........................................................................................................................................................... - 3 -检测原理 ................................................................................................................................................... - 3 -试剂盒组分 ............................................................................................................................................... - 4 -储存条件 ................................................................................................................................................... - 5 -其他实验材料(不提供，但可协助购买) : ............................................................................................. - 5 -注意事项 ................................................................................................................................................... - 5 -样本收集处理及保存方法 ....................................................................................................................... - 6 -试剂准备 ................................................................................................................................................... - 6 -操作步骤 ................................................................................................................................................... - 8 -操作流程图 ............................................................................................................................................... - 8 -操作要点提示 ........................................................................................................................................... - 9 -结果判断 ................................................................................................................................................... - 9 -结果重复性 ............................................................................................................................................. - 10 -灵敏度 ..................................................................................................................................................... - 10 -特异性 ..................................................................................................................................................... - 10 -参考文献 ................................................................................................................................................. - 10 -该产品由北京四正柏生物科技有限公司研制。
从基本免疫反应来看，过敏性鼻炎属抗体IgE介导的Ⅰ型变态反应。
当机体接触了过敏原以后，机体会产生一种抗体叫IgE，它会吸附在组织肥大细胞、嗜碱性粒细胞表面，机体即处于致敏状态。
当人体再次接触同一过敏原时，这些过敏原就会和IgE相结合，引起肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放组胺、激肽、白细胞三烯、前列腺素、嗜酸细胞趋化因子、血小板活化因子、五羟色胺等生物活性介质，这些介质作用在相应的组织上就会引发过敏反应。
组胺是过敏性鼻炎的最重要的介质，其可使小血管扩张、血管通透性增加、外分泌活动加强，这是过敏性鼻炎患者鼻粘膜水肿、分泌物增多、鼻呼吸阻力增加的重要物质基础。
激肽可引起周围血管扩张、血压下降、血管通透性增加和组织水肿。
白细胞三烯可使鼻粘膜血流量增加，它可能是急性变态反应时组织中中性粒细胞和嗜酸性粒细胞浸润的重要介质。
前列腺素是花生四烯酸通过环加氧酶途径代谢的产物，有类似组胺的作用。
这些介质通过它们各自在鼻粘膜血管壁、腺体和神经末梢上的受体，使小血管扩张，血管通透性增高，渗出增加，炎性细胞浸润（以嗜酸细胞为主），组织水肿，神经末梢兴奋性增强等。
上述病理变化即可导致相应的临床症状和体征。
ELISA法检测白细胞介素-2[方法学原理] 在微孔反应板上包被抗人IL-2单克隆抗体，待测标本和标准品中的IL-2会与抗人IL-2单克隆抗体结合，游离的成分被洗去，同时加人生物素化的抗人IL-2抗体和HRP标记的亲和素。
生物素与亲和素特异结合，抗人IL-2抗体与结合在单克隆抗体上的人IL-2结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。
加入显色剂，若反应孔中有11．-2，HRP会使无色的显色剂呈现蓝色，加终止液变黄色。
在波长450nm处测吸光度，IL-2浓度与吸光度成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中的IL-2浓度。
[标本准备] 静脉血2ml，不抗凝。
[检测步骤]1．在微孔反应板相应孔中分别加入待测样本、不同浓度标准品IOOul，再加生物素化抗体工作液50gl。
实验研究穿心莲内酯调节cGAS-STING信号通路对银屑病小鼠的治疗作用何亚男，蔡翔△，邱百怡，孙邦梅，李伶华摘要：目的 探究穿心莲内酯（Andro）调节GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激物（cGAS-STING）信号通路对银屑病小鼠的治疗作用及机制。
方法 90只BALB/c小鼠分为对照组（Control组），模型组（Model组），穿心莲内酯低、中、高剂量组（Andro-L、M、H组，10、30、50 mg•kg-1•d-1 Andro）和穿心莲内酯高剂量+STING激活剂DMXAA组（Andro-H+ DMXAA组，50 mg•kg-1•d-1 Andro+5 mg•kg-1•d-1 DMXAA）。
除Control组外，其余组小鼠背部施用咪喹莫特（IMQ）建立银屑病小鼠模型。
观察小鼠银屑病面积并进行严重程度指数（PASI）评分，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-1β、IL-23、IL-17A、干扰素（IFN）-γ和IFN-β水平，苏木素-伊红（HE）染色和甲苯胺蓝染色测定表皮厚度和肥大细胞数，免疫荧光染色检测Ki-67、CD4阳性细胞表达率，RT-qPCR检测cGAS和STING mRNA表达水平，免疫印迹实验检测cGAS、STING、干扰素调节因子3（IRF3）、p-IRF3蛋白水平。
结果 与Control组相比，Model组小鼠背部皮肤出现严重的红斑、鳞屑，有大量的炎性细胞浸润；抓挠次数、PASI评分、表皮厚度、肥大细胞数量、IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-23、IL-17A、IFN-γ和IFN-β水平、Ki-67和CD4阳性表达率、cGAS 和STING mRNA和蛋白表达水平及IRF3磷酸化水平升高（P＜0.05）。
与Model组相比，Andro-L组、Andro-M组和Andro-H组小鼠皮肤红斑、鳞屑、炎性细胞浸润现象减轻；抓挠次数、PASI评分、表皮厚度、肥大细胞数量、IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-23、IL-17A、IFN-γ和IFN-β水平、Ki-67和CD4阳性表达率、cGAS和STING mRNA和蛋白表达水平及IRF3磷酸化水平呈剂量依赖性降低（P＜0.05）；STING激活剂DMXAA逆转了穿心莲内酯对银屑病小鼠的保护作用（P＜0.05）。
人白细胞介素23（IL-23）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中白细胞介素23（IL-23）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素23（IL-23）水平。
用纯化的人白细胞介素23（IL-23）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素23（IL-23），再与HRP标记的白细胞介素23（IL-23）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素23（IL-23）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素23（IL-23）浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：450ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
第1篇一、实验目的1. 了解炎症的基本概念和分类。
2. 掌握炎症实验的基本操作技术。
3. 通过实验观察炎症过程中的细胞和分子变化，加深对炎症机制的理解。
二、实验原理炎症是机体对损伤的一种防御反应，是多种细胞和分子参与的复杂过程。
炎症实验主要观察炎症过程中的细胞浸润、血管通透性增加、细胞因子释放等现象。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠（体重20-25g）2. 实验试剂：无菌生理盐水、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒、细胞因子试剂盒等3. 实验仪器：显微镜、细胞培养箱、酶标仪、离心机等四、实验方法1. 动物分组：将实验动物随机分为对照组和实验组，每组10只。
2. 制备抗原：将弗氏完全佐剂与抗原混合均匀，制成乳剂。
3. 皮下注射：对照组动物注射无菌生理盐水，实验组动物注射抗原乳剂。
4. 观察指标：分别在注射后24小时、48小时、72小时观察炎症反应，包括局部肿胀、细胞浸润等。
5. 组织学观察：在注射后48小时，取实验组动物炎症部位组织，进行组织切片、HE染色，显微镜观察炎症细胞浸润情况。
6. LDH活性检测：取实验组动物炎症部位组织，按照LDH试剂盒说明书进行操作，检测炎症组织中LDH活性。
7. 细胞因子检测：取实验组动物炎症部位组织，按照细胞因子试剂盒说明书进行操作，检测炎症组织中细胞因子水平。
五、实验结果1. 实验组动物注射抗原后，局部出现明显肿胀，与对照组相比，炎症反应显著增强。
2. 组织学观察：实验组动物炎症部位组织切片显示，炎症细胞浸润明显，以巨噬细胞为主。
3. LDH活性检测：实验组动物炎症组织中LDH活性显著高于对照组。
4. 细胞因子检测：实验组动物炎症组织中细胞因子水平显著高于对照组。
六、实验讨论本实验通过观察炎症过程中的细胞浸润、血管通透性增加、细胞因子释放等现象，证实了炎症反应的存在。
实验结果表明，抗原注射后，实验组动物局部出现明显肿胀，炎症细胞浸润显著，LDH活性升高，细胞因子水平升高，表明炎症反应已发生。
小鼠白细胞介素（17(IL）17)说明书小鼠白细胞介素-17(IL-17)酶联免疫测定试剂盒使用说明本试剂盒仅用于研究目的检测范围:3PG/mL-120 pg/mL目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样品中白细胞介素-17的含量实验原理本试剂盒采用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素-17的水平用纯化的小鼠白细胞介素-17抗体包被微孔板，制备固相抗体。
将白细胞介素-17(IL-17)依次加入包被有单克隆抗体的微孔中，然后与辣根过氧化物酶标记的白细胞介素-17(IL-17)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标记的抗体复合物。
彻底清洗后，加入基质TMB进行显色TMB 在辣根过氧化物酶的催化下变成蓝色，在酸的作用下变成黄色。
颜色的深度与样品中的白细胞介素-17呈正相关。
用酶标仪在450纳米波长下测定吸光度(吸光度值)，用标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素-17的浓度。
试剂盒由1 2 3 4 5 6 30倍浓缩洗涤液酶标试剂酶标包被板样品稀释液显影剂A溶液显影剂B溶液20毫升× 1瓶6毫升×1瓶1 2孔×8条6毫升×1瓶6毫升×1瓶6毫升×1瓶6毫升×1瓶6毫升×1瓶/瓶789 10112终止液标准(240皮克/毫升)标准稀释液说明书密封板膜密封袋6毫升×1瓶0.5毫升×1瓶1.5毫升×1瓶1部分2件1 96T 256组成标本采集后应尽快提取，提取应根据相关文件进行，提取后应尽快进行实验如果不能立即进行试验，样品可以在-20℃下保存，但应避免重复冻融2。
因为NaN3抑制辣根过氧化物酶(HRP)活性，所以不能检测到含有NaN3的样品。
操作步骤1。
标准稀释:该试剂盒提供原始标准样品的一个标准样品。
用户可以根据下图在小试管中稀释120皮克/毫升60皮克/毫升30皮克/毫升15毫克/毫升7.5毫克/毫升5号、4号、3号、2号、1号、150微升原标准品、150微升标准稀释液、150微升5号标准品、150微升标准稀释液、150微升4号标准品、150微升标准稀释液、150微升标准稀释液、150微升标准稀释液、150微升标准稀释液、150微升3号标准品、150微升样品添加:分别设置空白孔(空白对照孔不添加样品和酶标试剂，其他步骤相同)、标准孔和个待测样品孔将50μl标准物质准确加入酶标包被板，将40μl样品稀释液加入待测样品孔，然后加入10μl待测样品(样品最终稀释5倍)添加样品将样品添加到酶标板孔的底部，尽量不要接触孔壁，轻轻摇动并混合均匀。
人白细胞介素2（IL-2）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T40pg/ml-1200pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素2（IL-2）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素2（IL-2）水平。
用纯化的人白细胞介素2（IL-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2（IL-2），再与HRP标记的白细胞介素2（IL-2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素2（IL-2）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素2（IL-2）浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
小鼠白细胞介素-6（IL-6）酶联免疫分析试剂盒利用说明书本试剂盒仅供研究利用。
检测范围：96T3pg/ml-120pg/ml利用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及组织样本中白细胞介素-6（IL-6）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素-6（IL-6）水平。
用纯化的小鼠白细胞介素-6（IL-6）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-6（IL-6），再与HRP标记的白细胞介素-6（IL-6）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，通过完全洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素-6（IL-6）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素-6（IL-6）浓度。
1．标本搜集后及早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
假设不能马上进行实验，可将标本放于-20℃保留，但应幸免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可依照以下图表在小试管中进行稀释。
2.加样：别离设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽可能不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：警惕揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反映（现在蓝色立转黄色）。
天津医药2023年7月第51卷第7期2022，28（1）：6-11.ZHOU H Y ，LUO L ，CHEN Y Y ，et al.Effects of formononetin on sepsis induced acute kidney injury in rats by regulating the SIRT1/PGC-1αpathway ［J ］.Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy ，2022，28（1）：6-11.doi ：10.13862/43-1446/r.2022.01.046.［18］王锦淳，王蕾，秦爱萍，等.芒柄花黄素对糖尿病小鼠认知功能障碍的改善作用研究［J ］.临床合理用药杂志，2022，15（9）：1-5，9.WANG J C ，WANG L ，QIN A P ，et al.Improvement of formononetin on cognitive dysfunction in diabetic mice ［J ］.Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy ，2022，15（9）：1-5，9.doi ：10.15887/ki.13-1389/r.2022.09.001.［19］HE Y ，JIANG K ，ZHAO X.Taraxasterol protects hippocampal neuronsfrom oxygen-glucose deprivation-induced injury through activation of Nrf2signalling pathway ［J ］.Artif Cells Nanomed Biotechnol ，2020，48（1）：252-258.doi ：10.1080/21691401.2019.1699831.［20］CHEN Y ，TANG J ，ZHANG Y ，et al.Astaxanthin alleviatesgestational diabetes mellitus in mice through suppression of oxidative stress ［J ］.Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol ，2020，393（12）：2517-2527.doi ：10.1007/s00210-020-01861-x.（2022-09-13收稿2022-11-02修回）（本文编辑陆荣展）基于PI3K/Akt/NF-κB 信号通路探讨升阳益胃汤对肺癌大鼠免疫力的影响王宏君，孙星星，张润莲摘要：目的探究升阳益胃汤对肺癌大鼠免疫力的影响及其可能作用机制。
仅供科研使用，不得用于临床检验。
小鼠白细胞介素3（IL-3 ）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）说明书
黄石市艾恩斯生物科技有限公司
【产品名称】
通用名称：小鼠白细胞介素3（IL-3 ）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）
英文名称：Mouse Interleukin 3（IL-3 ）ELISA KIT
【包装规格】
48人份/盒，96人份/盒
【预期用途】
仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中小鼠白细胞介素3（IL-3 ）的浓
度。
【检验原理】
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗小鼠白细胞介素3
（IL-3 ）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入小鼠白细胞介素3（IL-3 ）校准品和待
测样本，再加入另一株HRP标记的抗小鼠白细胞介素3（IL-3 ）抗体（酶标抗体），经过温
育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心
复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，
最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中小鼠白细
胞介素3（IL-3 ）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中小鼠白细胞介素3
（IL-3 ）的浓度。
【主要组成成分】
主要成分
组分 数量 主要成分
校准品 0.5ml/管*6管 抗原配制的6个浓度标准品
包被微孔板 96T 预包被固相抗体
HRP标记抗体 6mL HRP标记的检测抗体
底物液A 6mL 过氧化脲工作液
底物液B 6mL TMB工作液
20×浓缩洗涤液 30mL 含0.15%Tween20的PBS
仅供科研使用，不得用于临床诊断。
2
说明书 1份 --
自封袋 1个 --
不干胶 2片 --
校准品检测范围：7.8-500pg/ml。校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、
HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照
具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材
1、酶标仪
2、精密移液器及一次性吸头
3、蒸馏水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、37℃水浴锅或恒温箱
6、500ml量筒
7、无粉一次性乳胶手套
【储存条件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。
2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回
2-8℃冰箱。
3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，
其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。
【适用仪器】
半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。
【样本要求】
样本类型和采集
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在-
20℃以下，避免反复冻融。
2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件
下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上
仅供科研使用，不得用于临床诊断。
3
清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。
样本保存和稳定性
样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。样本收集后，不是一次
检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分
解冻。
【检验方法】
试剂准备
1、使用前，所有的组分都要至少复温30min，确保充分复温到室温。
2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使
结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸
馏水。
3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。
操作程序
1、所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。
2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
4、设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，样本孔加
待测样本50μL，空白孔不加。
5、除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL。
6、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
7、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，
吸水纸上拍干。
8、如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添
加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，
充分拍干反应板。
9、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住
反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。
10、所有孔加入终止液50μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD值）。
【检验结果的解释】
仅供科研使用，不得用于临床诊断。
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检测完成后，以标准品浓度做为纵坐标，对应的吸光度（OD值）作为横坐标，利用计算
机软件，采用四参数Logistic曲线拟合（4-pl），创建标准曲线方程，通过样本的吸光度（OD
值），利用方程计算样品的浓度值。
如果样品被稀释，通过上述方法测的的浓度值，要乘以稀释倍数，才是样品的最终浓度。
【检验方法的局限性】
1、仅供科研使用，不得用于临床诊断。
2、在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。
3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。
4、使用试剂盒配套的样品稀释液。
5、如果样本值高于最高标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。
6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果，检测前，请排除该因素。
7、通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。
【产品性能指标】
1、物理性能
试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破
损漏气。
2、剂量反应曲线线性
校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.9900。
3、精密度
批内精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。
批内变异系数CV%小于10%。
批间精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。批
间变异系数CV%小于15%。
4、灵敏度
最低检出剂量小于。
5、回收率
三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次回收率评估，回收率在85%-115%之间。
6、特异性
仅供科研使用，不得用于临床诊断。
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本试剂盒识别天然和重组小鼠白细胞介素3（IL-3 ），与结构类似物无交叉。
7、稳定性
2℃-8℃保存，有效期6个月。
【注意事项】
生物安全
1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废
弃物都应按照传染物进行处置。
2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟
雾与皮肤接触。
3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。戴上防护手套，实验完成
后彻底洗手。
技术提示
1、混合蛋白溶液时，避免起泡。
2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，
避免交叉污染。
3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。
4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。
5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为
黄色。
6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行
温育操作。
废物处理
所有使用或未使用的试剂，所有污染性的一次性材料，应当遵循传染性或潜在传染性产品
的处理程序，每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别，进行废物和污物的处理，
同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。
