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柱前衍生化-高效液相色谱法分析木糖结晶母液的单糖组成孟海波;高绍丰;张海燕;孟汉卿【摘要】The reversed - phase high performance liquid chromatographic ( HPLC) method of pre-column - derivatization with l-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP) was developed to separate the traditional eight monosaccharides and detect the monosac-charide composition of crystallization solution of xylose. The results showed that crystallization solution of xylose consisted of mannose, rharanose, cellobiose, glucose, galactose, xylose, arabinose, fucose, and the dominant component monosaccharides were glucose, ga-lactose, xylose and arabinose. Peak height was used to quantify. The concentration of eight kinds of monosaccharide was liner with correspond peak area with correlation coefficients (r2) of 0.9897 -0.9994. The detection limit was 0.002 1 -0.003 1 mg/mL. The recovery was 98.4% - 101.0% , and relative standard deviation of detection results was 0.66% -0.21 % (n = 6). The HPLC method is simple, rapid, sensitive, convenient and can be applied to the quality control of crytallization solution of xylose.%采用1-苯基-甲基-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化-反相高效液相色谱(HPLC)法建立了8种常见单糖的分离模式,并用于木糖结晶母液单糖组成的定量分析.结果表明:木糖结晶母液至少由甘露糖、鼠李糖、纤维二糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖及岩藻糖8种单糖组成,其中以葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖为主.以峰高定量,8种单糖的浓度与相应的峰高呈良好的线性关系,相关系数r2在0.9897 -0.9994范围内,方法检出限为0.0021-0.0031 mg/mL,回收率为98.4% -101.0%,测定结果的相对标准偏差为0.66%-1.21%(n=6).该方法简单、快速、灵敏,可用于木糖结晶母液的质量控制.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2011(020)005【总页数】3页(P47-49)【关键词】木糖结晶母液;单糖组成;衍生化;高效液相色谱【作者】孟海波;高绍丰;张海燕;孟汉卿【作者单位】济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204【正文语种】中文木糖、阿拉伯糖作为一种良好的食品添加剂已被广泛应用于食品生产中。
柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成马定远 陈 君 李 萍3胡卓逸(中国药科大学生药药用植物教研室,南京210038)(中国药科大学生化研究室,南京210009)摘 要 报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。
采用反向高效液相色谱250nm 紫外检测和使用梯度洗脱,6种还原单糖的12苯基232甲基252吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。
对单糖组成的定量测定进行了方法学考察,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。
关键词 单糖,多糖,衍生化,高效液相色谱 2001207204收稿;2002201209接受1 引 言单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。
已有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色谱法为主。
由于单糖分子的多样性,关于糖的分析方法仍在不断发展。
12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP )衍生化方法自运用以来,得到不断完善1～3。
Strydom 运用此法对中性、酸性和碱性醛糖进行了分析,可以使15种单糖得到很好的分离2。
本文首先建立了6种常见单糖(包括一种酸性糖)的分离模式,通过内标法对3种中性单糖的定量进行了方法学考察,并应用所建立的方法对多糖中的单糖进行了组成分析,为此法的更好运用提供了依据。
2 实验部分2.1 仪器与试剂HP1100型高效液相色谱系统,包括G 1312A 二元泵,G 1315A DAD 检测器,HP ChemStation 色谱工作站(Hewlett 2Packard )。
衍生化试剂12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP ,上海化学试剂采购供应站试剂厂),甲醇重结晶两次。
色谱用乙睛(T edia )、三氟乙酸(CP 级,上海化学试剂公司)。
单糖对照品:葡萄糖(G lc ,上海化学试剂公司)、甘露糖(Man ,Sigma 公司)、半乳糖(G al ,Sigma 公司)、鼠李糖(Rham 公司)、葡萄糖醛酸(G lcUA )和木糖(Xyl )(上海化学试剂二厂产品)。
柱前衍生-反相高效液相色谱法1.引言1.1 概述概述部分的内容可以介绍柱前衍生-反相高效液相色谱法的背景和意义。
下面是一个概述的范例：正如我们所知，液相色谱法是一种常用的分离和检测分析技术，在化学、药学、环境科学等领域具有广泛的应用。
然而，传统的液相色谱法在某些情况下可能面临一些挑战，如分离效果不理想、分析时间较长等。
为了克服这些问题，柱前衍生-反相高效液相色谱法被提出并逐渐受到关注。
柱前衍生是指在样品处理中，在样品中引入适当的衍生试剂，通过与目标分析物发生化学反应，使其在色谱分析中具有更好的分离性能和检测灵敏度。
反相高效液相色谱法是基于分离样品中不同化学性质的分子在反相色谱柱上的亲水作用，达到分离和定量分析的目的。
柱前衍生-反相高效液相色谱法不仅可以提高色谱分析的分离效果，还能够提高检测灵敏度和减少分析时间。
这对于复杂样品的分析具有重要意义，例如药物代谢产物、环境污染物等。
通过引入适当的衍生试剂，可以有效地改善样品的分离性能，同时提高对目标分析物的响应，从而实现快速、灵敏的定量分析。
本文将对柱前衍生-反相高效液相色谱法的原理、方法和应用进行详细介绍。
首先，我们将阐述柱前衍生的基本原理和常用的衍生试剂。
然后，重点介绍反相高效液相色谱法的步骤和关键参数。
最后，我们将通过实例和应用案例来阐述柱前衍生-反相高效液相色谱法在药物分析、环境监测等领域的应用前景。
通过本文的阅读，读者将能够全面了解柱前衍生-反相高效液相色谱法的原理和实践，为他们的研究和实验工作提供参考和指导。
文章结构部分应包括以下内容：本文主要分为三个部分，即引言、正文和结论。
具体结构如下：1. 引言1.1 概述本部分将简要介绍柱前衍生-反相高效液相色谱法的研究背景和意义。
首先，说明柱前衍生技术在分析化学领域的重要性，该技术可以通过将样品与特定试剂反应生成易于分析的化合物，从而提高液相色谱分析的敏感性和选择性。
其次，介绍反相高效液相色谱法在分析化学中的广泛应用，包括药物分析、环境监测和食品安全等领域。
柱前衍生化-高效液相色谱法测定白念珠菌中多胺的含量纪松岗;杨宇;李康;吴海棠;朱臻宇【摘要】目的建立同时测定白念珠菌中4种多胺(腐胺、尸胺、亚精胺和精胺)的HPLC方法.方法样品经苯甲酰氯衍生化,资生堂C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,3.0μm)分离,以甲醇(A)-0.1％甲酸水(B)为流动相进行梯度洗脱,0～5min,30％～48％ B; 5～12 min,48％ B;12～15 min,48％～70％ B;15～25 min,70％B,流速0.6 ml/min,检测波长254 nm.结果腐胺、尸胺、亚精胺和精胺浓度分别在0.775 ～77.50 μg/ml(r=0.999 9)、1.160 ～116.0 μg/ml(r =0、999 9)、5.800 ～580.0μg/ml(r=0.9998)、2.533 ～192.7 μg/ml(r =0.999 9)的范围内线性关系良好.4种多胺的加样回收率为94.27％～ 109.3％,精密度RSD ＜4％.结论该含量测定方法灵敏、重现性好,能同时测定白念珠菌中4种多胺的含量.【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2013(031)006【总页数】4页(P412-414,453)【关键词】多胺;柱前衍生化;高效液相色谱法;白念珠菌【作者】纪松岗;杨宇;李康;吴海棠;朱臻宇【作者单位】解放军第401医院药剂科,山东青岛,266071;第二军医大学药学院,上海,200433;解放军第169医院,湖南衡阳,421000;第二军医大学药学院,上海,200433;第二军医大学药学院,上海,200433【正文语种】中文【中图分类】R917多胺是一类具有生物活性、低分子量的含氮有机化合物的总称[1]，广泛存在于原核及真核生物细胞中。
多胺具有多种重要的生理功能，如:稳定核酸上的电荷、清除活性氧[2，3]；调节细胞的生长和分化[4]。
有研究表明,通过控制多胺水平可影响白念珠菌菌丝形成[5],所以多胺可能是诱导白念珠菌被膜形成的重要因素之一。
柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成王媛媛;张晖;杨俊松;宗智慧【摘要】Objective To establish a precolumnderivatization procedure with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone ( PMP )-high performance liquid chromatography ( HPLC ) method for the determination of the monosaccharide composition of nine polysaccharides.Methods The nine polysaccharides were hydrolyzed, derivatized by PMP and analyzed by HPLC with the Inertsil ODS-SP C18 column(260mm ×4.6mm,5μm).The mobile phase was the 20%triethylamine-buffer solution withKH2PO4(pH=6.9),and the flow rate was 1.0 ml/min.The UV absorbance was detected at a wavelength of 254 nm,and the injection volume was 10μl with the column temperature 30℃.Results The method was successful in the separation of the mixture monosac-charide standards.The calibration line of each monosaccharide had a good relationship.And the precision, stability and reproducibility were also good.The nine polysaccharides were composed of different monosac-charide and the contents had some difference.Conclusion The method was accurate and stable for the deter-mination of the monosaccharide composition and content of nine polysaccharides.%目的：建立1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（ PMP）柱前衍生化-高效液相色谱法（ HPLC）对甘草多糖等9种多糖的单糖组成成分进行分析。
柱前衍生-高效液相色谱法测定岩藻多糖的单糖及糖醛酸含量邢丽红;祝纯静;孙伟红;翟毓秀;李兆新;苗钧魁;冷凯良【摘要】建立了一种同时测定岩藻多糖7种单糖及2种糖醛酸含量的柱前衍生-高效液相色谱检测方法.岩藻多糖用三氟乙酸水解、1 -苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化,并采用配有紫外检测器的反相高效液相色谱仪在250 nm波长下进行测定,实现了7种单糖和2种糖醛酸的良好分离.7种单糖和2种糖醛酸在1～50μg/mL 范围内线性关系良好,相关系数r ＞0.998,回收率在86％～105％之间,相对标准偏差均＜10％.甘露糖和岩藻糖检出限分别为0.5μg/mL和2.0 μg/mL,其余单糖和糖醛酸检出限为1.0 μg/mL.该方法重现性好,能够快速地对多糖样品进行组成分析.【期刊名称】《中国渔业质量与标准》【年(卷),期】2011(001)001【总页数】6页(P64-69)【关键词】岩藻多糖;1 -苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮;柱前衍生化;高效液相色谱法【作者】邢丽红;祝纯静;孙伟红;翟毓秀;李兆新;苗钧魁;冷凯良【作者单位】中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071;中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071【正文语种】中文【中图分类】S912岩藻聚糖（Fucoidon）是一种独特的结合有硫酸基团的水溶性多糖，也称褐藻多糖硫酸酯、褐藻糖胶，主要存在于褐藻和一些海洋无脊椎动物中［1］。
岩藻多糖主要有二种类型:一类是F-岩藻多糖，它的线性主链是岩藻吡喃环以α-1，3-糖苷键连接而成，还夹杂着其他糖类，如木糖、半乳糖、葡萄糖醛酸等，该糖通常在4-O基发生硫酸化作用；另一类是U-岩藻多糖，其中20%的成分为葡萄糖醛酸。
柱前衍生化高效液相色谱法测定当归酸性多糖单糖组成的新方法李卫燕;李萍;曹蔚【摘要】首次建立柱前衍生化高效液相色谱法分析当归酸性多糖中糖醛酸、氨基糖和中性糖的方法.D-甘露糖、D-葡萄糖胺、L-鼠李糖、D-半乳糖胺、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-岩藻糖等10种单糖经柱前衍生化法处理后作为标准品.色谱条件:Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm i.d.×250 mm,5μm),流动相由乙酸铵水溶液(100 nmol/L,pH =5.0)、乙腈和四氢呋喃以81:17:2的体积比组成,流动相流速1.0 mL/min,检测波长250 nm,柱温25℃.实验结果表明,当归酸性总多糖是由D-甘露糖、D-葡萄糖胺、L-鼠李糖、D-半乳糖胺、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸和D-葡萄糖以1.5:14.1:1.7:1.6:2.0:2.3:1.0的摩尔比例组成.【期刊名称】《科学技术与工程》【年(卷),期】2015(015)010【总页数】4页(P151-154)【关键词】当归;多糖;高效液相色谱;柱前衍生化;单糖【作者】李卫燕;李萍;曹蔚【作者单位】第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032;第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032;第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032【正文语种】中文【中图分类】R284.2中药当归是伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.) Diels的干燥根，主产于甘肃岷县，为常用中药，具有补血活血、调经止痛、润肠通便的功效。
近十几年来，经过国内外学者的研究，发现多糖是当归的主要成分之一[1]。
药理学研究表明，当归多糖具有抗血栓及改善血液流变、保护心血管系统、抑菌、抗肿瘤、保护肺部组织细胞、利胆保肝、补血等生物活性[2]。
多糖的单糖组成分析是控制多糖质量和分析多糖结构的重要环节。
柱前衍生化HP LC 分析白花蛇舌草多糖中单糖组成宝炉丹, 徐国防, 马 郑, 郭 娜, 郭兴杰3(沈阳药科大学,辽宁沈阳110016)收稿日期:2007202210作者简介:宝炉丹(1981～),女(蒙古族),硕士。
3通讯作者:郭兴杰(1956～),女,教授,博士生导师,主要从事体内药物分析工作,Tel:024*********,E 2mail:gxjhyz@yahoo 。
关键词:白花蛇舌草多糖;柱前衍生化;高效液相色谱法;单糖摘要:目的:采用微波提取法提取不同产地白花蛇舌草水溶性多糖,并对多糖的含量及组成进行研究。
方法:以苯酚2硫酸法测定总糖含量,柱前衍生化高效液相色谱法鉴别和测定其多糖的单糖组成。
结果:不同产地药材中多糖含量以广东最高,白花蛇舌草多糖是由鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖及甘露糖组成的杂多糖。
结论:柱前衍生化高效液相色谱法分析白花蛇舌草多糖中单糖组成方法简便,快速,准确。
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:100121528(2008)0320406203Ana lysis of polys acchar i de com positi on of H edyotis difusa W illd polys accar i des by pre 2column der i va ti za ti on HPLCBAO Lu 2dan, XU Guo 2fang, MA Zheng, G UO Na, G UO Xing 2jie(Shenyang Phar m aceutical U niversity,Shenyang 110016,L iaoning,China )KE Y WO R D S :Hedyotis difusa W illd polysaccharide;p re 2colu mn derivatizati on;high perf or mance liquid chr oma 2t ogaphy;monosaccharideABSTRACT:A I M :The polysaccharides of Hedyotis difusa W illd of different s ources were extracted and its con 2tent and co mpositi on of the polysaccharide was analyzed .M ETHOD S :The m icr owave was e mp l oyed for the aque 2ous extract of Hedyotis d ifusa W illd and the content of t otal sugar was deter m ined by phenol 2sulfur test,the mono 2saccharides compositi on was deter m ined by HP LC with p re 2column derivatizati on .RESU L TS :The polysaccharide obtained fr om the sa mp les of Guangdong Pr ovince had the highest content .The analytic data showed that the com 2positi on of monosaccharides in hydr olytic polysaccharides of Hedyotis d ifusa W illd were mannose,glucose,galac 2t ose,arabinose and rha mnose,the average content of polysaccharides was 9.82%.CO NCL US I O N :The HP LC method with p re 2column derivatizati on is app r op riate f or the analysis of monosaccharide compositi on of Hedyotis di 2fusa W illd polysaccharides and the method is si m p le,quick and accurate . 白花蛇舌草(Hedyotis difusa W illd )为茜草科耳草属植物,味甘淡、性凉,具清热解毒,活血消痈之功效,其多糖具有明显的增强机体免疫能力和抑制肿瘤的作用[1,2]。
柱前衍生化高效液相色谱等度洗脱分析单糖的方法建立徐瑾¹常州工程职业技术学院摘要以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为柱前衍生化试剂,建立了高效液相色谱等度洗脱分离分析5种单糖的方法。
采用简化的衍生化方法,在流动相:乙腈-醋酸盐缓冲液(0.1mol/L,p H=5.5,V/V=22B78)的色谱分离条件下,5种单糖衍生物可以达到基线分离,检测限分别为0.54~0.90ng,也对方法的线性范围、精密度、稳定性进行了系统的考察。
关键词单糖1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化高效液相色谱等度洗脱1.前言近年来,糖类物质在生物学领域的作用已越来越被重视,人们将研究的重点放在糖类物质的定量、定性以及结构分析上,并对此做了大量的研究。
因为糖的种类较多,且结构近似,所以无论对哪种糖进行分析,首先必须将分析的对象与其它糖分离开来。
另一方面糖类物质几乎没有光学活性,对分离后的物质进行直接光学检测比较困难,结合灵敏度、选择性等方面的问题,人们多采用通过化学标记将糖类物质转变为具有光学活性的物质,然后再进行分离分析的方法。
衍生方法与高效液相色谱(HPLC)结合使用不但能提高检测的灵敏度,而且可以改善分离特性。
迄今为止,文献报道的用于糖类物质衍生的紫外衍生试剂种类很多[1-3],它们都各有优缺点。
近年来出现的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)是一种具有强紫外吸收的衍生试剂,Honda等[4]发现该试剂可以与还原性的糖在温和条件下反应,无需酸催化,不会引起脱甲硅基的作用,产物无立体异构体,在紫外245nm处有强烈的吸收。
该方法自应用以来,已得到了不断的完善[3-6]。
马定远等[7]在前人的基础上简化了其衍生化方法,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立的方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。
鉴于该物质的这些优点,本文采用它对单糖进行柱前衍生,结合HPLC技术,建立了5种常见单糖的等度洗脱分离模式,通过外标法对这5种单糖进行了定量研究。
2.实验部分2.1仪器UV200Ò紫外可变波长检测器;P200Ò高压恒流泵;Echrom98工作站(大连依利特科学仪器有限公司);真空过滤器(天津市腾达过滤器件厂);H19321pH计(HANNA);DZF-150型数显小型恒温真空干燥箱(郑州长城科工贸有限公司)2.2试剂乙腈、甲醇(色谱纯);三氯甲烷、乙酸铵、氢氧化钠(分析纯);PMP(99%,AC ROS);D-半乳糖、D-木糖、鼠李糖(生化试剂);葡萄糖、D -甘露糖(分析纯)2.3单糖-PMP衍生产物的制备以葡萄糖(Glucose)为例,将1mol的Glucose 溶于1.5mL的Na OH溶液(0.3mol/L)中,取该溶液150L L与100L L的PMP/甲醇溶液(0.2006年第2期总第四十八期常州工程职业技术学院学报J OUR NAL OF CHANGZ HOU INSTI TUTE OF ENGINEERING TECHNO LOGYVol.22006Jun No148¹作者简介:徐瑾,硕士。
5mol/L)混合,在70e 下反应30min 。
取出后冷却至室温,然后加入150L L 的HCl(0.3mol/L)进行中和,中和后的溶液放入真空干燥箱中,100e 下烘干。
烘干后的物质用2mL 的水及2mL 的氯仿溶解,充分振荡后除去有机相,萃取过程重复3次。
水相溶液经0.45L m 的滤膜过滤后,用水稀释至一定倍数,进样量10L L 进行HPLC 分析。
2.4HPLC 条件色谱柱:Hypersil ODS2(150mm @4.5mm i.d.,5L m,大连依利特公司);柱温:室温;流动相:A-醋酸盐缓冲液(0.1mol/L,pH = 5.5),B -乙腈;流速:1mL/min;UV 检测波长:245nm 。
3.结果与讨论3.1衍生方法的选择与其它文献[3-7]的方法不同,无需将待测样品水溶液真空干燥后再进行衍生,直接将待测样品溶解于Na OH 溶液中,衍生试验时移取一定量样品溶液直接进行衍生。
但是糖/NaOH 溶液必须在低温下保存。
因为常温下保存,数天后衍生产物的峰面积明显减小,并出现了两个杂峰,可能的原因是糖的醛基在碱性条件下容易氧化。
而低温下保存可以有效地避免这种情况的发生。
在大多数文献[3-6]中,HCl 中和衍生溶液后,首先将溶液真空干燥,再用水溶解,萃取完成后的水相再一次进行真空干燥,最后的干燥物用水溶解进行HPLC 的分析。
这些步骤以除去衍生反应中剩余的试剂和产生的杂质为目的,因此PMP 衍生方法操作复杂,无法避免各个步骤中衍生产物的损失。
有人用PMP 衍生时没有采取任何干燥步骤,直接进行萃取,多余的衍生试剂虽然没有完全除尽,但是由于衍生试剂峰在其它六种单糖的衍生产物峰前流出,所以并不干扰分离分析,这就在很大程度上简化了衍生试验的步骤,衍生产物几乎没有任何损失[7]。
本文在采用该方法时发现,在Man 衍生产物的峰后有一个小峰(P MP),等度洗脱无法与其分开(如图1a 所示)。
采取一次干燥即可解决这一问题,既达到了简化实验步骤的目的,降低了衍生产物的损失,使得定量实验更加准确,又在最大程度上使衍生试剂峰减小。
(如图1b 所示)。
图15种单糖衍生产物的色谱图Fig.1HPLC-UV chromatogram of the PMP derivatives of 5small sugars (a)without drying process (b)with drying process3.2有机萃取剂的选择柱前衍生需要使用过量的衍生试剂以达到衍生完全的目的,但必须在样品进入HPLC 之前除去过量的衍生试剂,以清除衍生试剂的干扰,延长色谱柱的使用寿命。
分别选取常用的有机试剂)))苯、氯仿、乙酸乙酯、乙酸异戊酯、正己烷作萃取剂进行试验,除去衍生反应中产生的杂质和残留衍生试剂。
对衍生的最后产物使用同样体积的不同有机试剂进行萃取,比较了这5种有机萃取剂去除杂质的效果(用PMP剩余量表示)和对衍生产物的回收率(用Sugar-PMP的回收率表示)。
结果证明5种有机试剂中,氯仿在这两方面的作用是最佳的。
其用量为PMP的200倍(体积比)时,三次萃取后PMP仅剩2%,Glucose-PMP的回收率可达到82.7%。
对PMP衍生的其他单糖,如甘露糖、半乳糖、木糖等,氯仿的回收率也令人满意。
采用乙酸异戊酯分两次萃取时,虽然萃取效率低于氯仿,但各种单糖(甘露糖、葡萄糖和半乳糖)的回收情况一致,萃取各单糖峰面积的精密度在1.5%~ 3.5%之间。
采用氯仿萃取,一次萃取后鼠李糖、葡萄糖、半乳糖的回收情况基本一致,但甘露糖的回收率较高,同时木糖的回收率较低。
二次萃取后,甘露糖回收率减小。
三次萃取完成后各单糖的回收情况非常接近(在80%~83%之间),其(甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和木糖)峰面积的精密度(RSD,n=3)依次为:3.15%、2.77%、2.90%、2. 90%和2.99%。
3.3色谱分离条件的优化选用醋酸盐缓冲液作流动相,将Snyder 等[8]与卢等[9]提供的条件优化选择方案相结合,经过分离条件选择的系列试验(包括缓冲液pH值的选择,乙腈含量的选择),最终确定最佳等度分离的色谱条件:流动相A-醋酸盐缓冲液(0.1mol/L,pH=5.5),B-乙腈,A B B= 78B22(V/V),使用4.5@150mm的色谱柱, UV245nm检测,分离谱图如图1b所示。
各种单糖的衍生物色谱峰都达到了基线分离。
文献中选用流动相:A-15%(V/V)乙腈+50mmol/L 磷酸盐缓冲液(pH=6.9),B-40为%(V/V)乙腈+50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH= 6.9);梯度模式:时间梯度为0min y9min y25min,相应浓度体梯度0%y10%y55%B。
应用此色谱条件,可以使上述5种单糖获得相似的分离效果。
但等度洗脱的方法相对快速简便,对色谱系统的要求不高,且重现性好,更具有普适性。
3.4标准曲线与检测限采用外标法对5种单糖进行线性考察:精确称取5种单糖的标准品适量,经NaOH溶液溶解并配制成一系列摩尔浓度的工作溶液,依次进样10L L,根据UV测定的峰面积y对相应的糖的进样浓度x(mmol/L)进行线性回归,结果见表1。
由表1可见,所测定的5种单糖的峰面积与其绝对进样量之间呈良好的线性关系。
再将最小摩尔浓度的标准溶液逐级稀释进样,计算当信噪比为3时所对应的标准溶液的质量浓度以确定检测限,得到Man、Rham、Glu、Gal和Xyl的最低检测限(LOD)分别为0.54、0.54、0.9、0.9和0.7ng。
表1五种单糖的线性范围及其最低检测限Table.1The linear range and LOD of five monosaccharides 糖相关系数标准曲线线性范围Carbohydrate C orrelation Standurd curve(n=6)Linear rangecoefficient(mmol/L) Mannose0.9995y=3656.94x-184.150.025~5.0 Rha mnose0.9997y=3924.24x-209.230.025~4.0 Glucose0.9981y=2555.54x-327.560.025~5.0 Galacose0.9978y=2663.46x-249.190.025~4.0 Xylose0.9991y=2008.36x-302.020.025~4.03.5精密度试验精密吸取5糖-PMP衍生物的标准溶液10L L,重复进样5次,甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和木糖的精密度(RSD,n=5)分别为:0. 23%、0.22%、0.17%、0.17%、0.15%。
3.6衍生样品稳定性不采取任何干燥手段的衍生化方法,从酸中和后开始计时,16h内各衍生物峰面积的精密度(RSD,n=8)在1.6%~ 2.6%之间,能够满(下转第59页)方面,同时结合查档特点编制一些实用的检索工具,如:我院是新移址的学校,基建工程的头绪多,所以一段时间基建档案查阅人数较多,为此我们专门编制了基建档案专题目录,为查找利用者提供方便。
,我们发现经常有人查阅土地证和征用土地的文件,我们编制了土地证和征用土地等专题目录。
这些具体工作都在档案开发利用中发挥了一定的作用。
5.4必须熟悉了解学院档案历史,是体现科学管理的重要标志。
在提供利用工作中,能否做到方便及时,档案人员必须掌握相关报告的内容及存放的箱盒号,这样才能有效的提供所需的档案资料。
5.5要主动适应当前信息时代对文件档案信息的需求。
