邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性

动物血中超氧化物歧化酶的提取和活性测定原理超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase，简称SOD)广泛存在于生物体内的含Cu、Zn、Mn、Fe的金属类酶。

它作为生物体内重要的自由基清除剂，可以清除体内多余的超氧阴离子，在防御生物体氧化损伤方面起着重要作用。

离子(02-)是人体氧代谢产物，它在体内过量积累会引起炎症、肿瘤、色斑沉淀、衰老等疾病，超氧阴离子与生物体内许多疾病的发生和形成有关。

由于SOD能专一消除超氧阴离子(O2 -)而起到保护细胞的作用，SOD作为一种药用酶，具有广阔的应用前景，并引起了国内外医药界、生物界和食品界的极大关注。

按金属辅基成分的不同可分成3种类型。

最常见的一种含有铜锌金属辅基(CuZn-SOD)，主要存在于真核细胞的细胞质中，在高等植物的叶绿体基质、类囊体内以及线粒体膜间隙也有存在，CuZn-S0D 酶蛋白的分子量约为3.2×104，纯品呈蓝绿色，每个酶分子由2个亚基通过非共价键的疏水基相互作用缔合成二聚体。

每个亚基(肽链)含有铜、锌原子各一个，活性中心的核心是铜。

第二种含有锰离子(Mn-SOD)，主要存在于真核细胞的线粒体和原核细胞中，在植物的叶绿体基质和类囊体膜上也有存在，纯品呈粉红色，由4条或2条肽链组成。

第三种是Fe-S0D，过去一直认为只存在于原核细胞中，近来发现有一些真核藻类甚至某些高等植物中也有存在。

Fe-SOD纯品呈黄色或黄褐色，由2条肽链组成，多数情况下每一个二聚体中含有一个Fe原子。

l969年，McCord和Fridovich第一次从牛血中提纯到超氧化物岐化酶。

自然界中SOD分布极广，其含量随生物体的不同而不同，即使同一种生物的不同组织或同一组织的不同部位，其SOD的种类和含量也有很大差别。

迄今为止人们已从细菌，真菌、原生动物。

藻类、昆虫、鱼类、植物和动物等各种生物体内分离得到SOD。

为拓宽提取SOD的原料，筛选或基因过程开发产SOD量较高的菌株。

邻苯三酚自氧化法测定血浆超氧化物歧化酶的方法学评价及临床应用探讨张凡;李兴武;钟政荣【期刊名称】《淮海医药》【年(卷),期】2015(000)003【摘要】目的：对邻苯三酚自氧化法测定血浆超氧化物歧化酶（ SOD）的方法学进行评价，并探索其临床应用价值。

方法根据美国临床和实验室标准协会（CLSI）的评价方法，应用邻苯三酚自氧化法检测血浆SOD，评价其精密度、准确度、线性和回收率；随机选取2014年健康体检者42例作为对照组，2014年3－12月我院住院氧化应激反应相关疾病患者1580例作为疾病组，测定血浆SOD的活性水平，进行临床应用评价。

结果用邻苯三酚自氧化法测定SOD精密度试验中批内精密度为1．57％和4．8％，批间精密度为2．17和2．21％；准确性试验相对偏倚为：1．6％和2．4％；线性试验在0～250 U／ml内R2为0．9978；回收率为96．2％～103．4％；SOD在各疾病组与健康对照组差异均具有显著性（P＜0．01）。

结论邻苯三酚自氧化法测定SOD方法学评价符合要求，其精密度高、准确性好，线性范围宽，具有较高的临床应用价值。

%Objective To evaluatethe methodology of determination of plasma superoxide dismutase(SOD) by means of pyrogallol autoxidation and explore its clinicalapplication.Methods Based on the USA Clinical and Laboratory StandardsIn-stitute (CLSI),plasma SOD was determined using pyrogallol autoxidation to evaluate its precision,accuracy,linearity and re-covery rate.42 healthy checkup people in 2014 were selected as a control group and 1580 casesof inpatients from March to December in 2014 who had related disease with oxidative stress reaction were chosen as a disease group.Their level activity of plasma SOD was determined.These inpatients were divided into 6 disease groups in terms of liver,renal,digestive system,re-spiratory system,cardiovascular,and diabetes diseases.Results By the test of determining the precision of SOD with pyrogal-lol autoxidation,the within-run precision were 1.57%and 4.8%and the between-run precision were 2.17%and 2.21%.The relative biases were 1.6% and 2.4% in the accuracy test.R2 was 0.9978 within 0~250U/ml in the linear test.Recovery rates were 96.2%~103.4%.There were significant differences of SOD between each disease group and healthy control group (P<0.01).Conclusion The methodological evaluation of determining SOD with pyrogallol autoxidation meets the require-ment for its high precision,good accuracy and wide linear range.The method has high value in clinical application.【总页数】3页(P227-229)【作者】张凡;李兴武;钟政荣【作者单位】蚌埠医学院第一附属医院检验科，安徽蚌埠 233004;蚌埠医学院第一附属医院检验科，安徽蚌埠 233004;蚌埠医学院第一附属医院检验科，安徽蚌埠 233004【正文语种】中文【中图分类】R44【相关文献】1.邻苯三酚自氧化法测定血清超氧化物歧化酶变异因素的探讨和控制 [J], 张建新;石南宁;康学军;王彦;黄新生2.邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性的研究 [J], 许雅娟;赵艳景;胡虹3.人血浆、红细胞超氧化物歧化酶活性邻苯三酚自氧化抑制同步测定法及其临床应用 [J], 徐元仁;穆红;孙传珍;翟德佩;苏中;刘春艳4.四种邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性方法的比较 [J], 张宏;谭竹钧5.邻苯三酚自氧化法测定血中超氧化物歧化酶的活性 [J], 赵云斌;刘敏;余忠谊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

超氧化物歧化酶（SOD ）活性的测定方法
一、试剂
1. 0.1mol/L HCl
2. 10mmol/L HCl
3. 0.1mol/L Tris 标准溶液：12.114g 三羟甲基氨基甲烷溶于蒸馏水，并定容至1000ml.
4. 50mmol/LTris 缓冲溶液：50ml0.1mol/L Tris 标准溶液中加入0.1mol/L HCl 19.9～22.0ml,定容至100ml ，PH 为8.20。

5. 30mmol/L 邻苯三酚盐酸溶液：3.7833g 邻苯三酚溶于10mmol/LHCl 中，并用10mmol/LHCl 定容至1000ml.
二、仪器
1. 紫外分光光度计
2. 酸度计
3. 恒温水浴锅
三、操作方法
1.邻苯三酚自氧化速率测定
在试管中加入4.5ml 50mmol/LTris 缓冲溶液，于25℃保温20min,加入10～20ul 30mmol/L 邻苯三酚，立即计时并摇匀，倾于比色杯内，于325nm 下，每隔1min 测吸光值一次，空白以10mmol/L HCl 代替邻苯三酚，要求自氧化速率控制在0.070 OD/min 左右。

%1004
min 1min 5⨯值值－第第自氧化速率＝OD OD 2.SOD 活性测定
将样液加入到Tris 缓冲溶液中，其余步骤同自氧化速率测定方法。

活力单位定义：将一定条件下使每毫升反应液自氧化速率抑制50%的酶量定义为一个单位（u ）。

样品质量样液体积样品稀释倍数自氧化速率速率自氧化速率－样液氧化＝活力（⨯⨯⨯⨯5.4%50%100)/SOD ml u。

胞外抗氧化酶类酶活力的测定
原理:在碱性条件下,邻苯三酚发生自氧化反应,并产生O2-,在SOD存在下,自氧化反应受到抑制。

参考邻苯三酚测活法(Marklund 法)孙 [66]，按下表加入0.1M Tris-HCl（PH 8.0,内含1mM EDTA）和ddH2O，25℃恒温水浴20 min，加入1 mL 待测液后加入25℃预热的邻苯三酚溶液，摇匀，立即于320nm测吸光值A320，每0.5 min测定一次，持续测到5 min。

邻苯三酚自氧化法测定SOD酶活力
酶活力的定义为：温度25 ℃，pH 8.0，波长320 nm处，在每毫升反应液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率达50％的酶量为1个酶活力单位，酶活力按下式计算。

单位菌体SOD酶活力（U/g）=
1
-
50%
A A
V N V A
V W
∆∆
⨯⨯⨯∆
⨯⨯
邻菌
邻
A∆
邻:1分钟邻苯三酚自氧化时A320的变化量；A∆
菌：加入待测液后1分钟邻苯三酚氧化
时A320的变化量；V：待测液总体积；N：待测液稀释倍数；V0：加入的待测液的体积;W:菌体重；V1：反应总体积。

稻米中超氧化物歧化酶含量及活性分析作者：杨先炯来源：《安徽农业科学》2017年第02期摘要[目的]对不同稻米中超氧化物歧化酶（SOD）的含量及活性进行测定、分析。

[方法]采用沉淀法从不同种类稻米中提取SOD，然后用改良的邻苯三酚自氧化法进行SOD活性分析，比较不同稻米中SOD含量及活性的差异。

[结果]糯米中的SOD含量高于粳米，但两者活性差异不大。

高纬度地区所产稻米的SOD含量及活性均高于低纬度地区所产稻米。

胚芽保留程度高的鲜糙米SOD含量及活性最高。

[结论]沉淀法可以有效地从稻米中提取SOD。

不同种类、产区和加工工艺稻米中SOD含量及活性存在差异。

关键词稻米；超氧化物歧化酶；含量；活性；邻苯三酚自氧化中图分类号 S511 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2017）02-0011-02Abstract[Objective] To determine and analyze the content and activity of superoxide dismutase （SOD） in different types of rice.[Method] SOD was isolated by precipitation process from different types of rice， and its activity was determined through modified pyrogallol selfoxidation.[Result] Glutinous rice had higher SOD content than japonica rice， however， SOD activity did not have significant difference. Both of SOD content and activity in rice from high latitude area were higher than that of rice from low latitude region. Moreover， brown rice with germ exhibited the highest SOD content and activity.[Conclusion] Precipitation process is an effective method for SOD isolation from rice. There are significant differences of SOD content and activity in different types of rice.Key words Rice；Superoxide dismutase；Content；Activity；Pyrogallol selfoxidation超氧化物歧化酶（SOD）是生物体内的重要抗氧化酶，具有特殊的生物学活性[1]。

185第11卷 第5期 2009 年 5 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 11 No. 5 May，2009邻苯三酚法测定3种食用菌超氧化物歧化酶（SOD）活性张中林1，孙宏伟2，郑剑玲1，李 岩1，王美惠1，段 薇1（1.辽宁中医药大学职业技术学院，辽宁 沈阳 110101；2.辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110032）摘 要：目的：比较3种食用菌中超氧化物歧化酶（SOD）活性。

方法：选取辽宁省农科院食用真菌研究所提供的3种鲜菌菇，采用邻苯三酚法对食用菌进行SOD 活性的测定。

结果：3种食用菌中SOD 酶活性均为阳性。

结论：3种食用菌SOD 酶活性依次递增顺序为鲜金针菇、滑子菇、草菇。

关键词：超氧化物歧化酶；邻苯三酚；食用菌中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2009)05- 0185- 02Determination of the Superoxide Dismutase in Three Typesof Edible Fungi by Hepatocyes Autoxidation ZHANG Zhong-lin 1, SUN Hong-wei 2，ZHENG Jian-ling 1, LI Yan 1，WANG Mei-hui 1，DUAN Wei 1（1.Vocational and Technical Education College of Liaoning University of TraditionalChinese Medicine ,Shenyang 110101, Liaoning,China；2. Liaoning University ofTraditional Chinese Medicine，Shenyang 110032, Liaoning, China）Abstract：Objective :To compare the superoxide dismutase （SOD ）activities of the three types of edible fungi. Methods : Fresh edible fungi were chosen from edible fungi institute liaoning academy of agricutural sciences. The SOD activities were determined by hepatocytes autoxidation. Results : It was showed that SOD activities were fond in three types of edible fungi. Conclusion : The SOD activities increases by a golden needle mushroom, pear mushroom, straw mushroom.Key words：SOD; Hepatocytes Autoxidation ; Edible Fungi 收稿日期：2008-12-02作者简介：张中林 (1963-) ，女，辽宁沈阳人，实验师，学士，主要从事免疫生化工作。

3经验交流3邻苯三酚自氧化法测定SOD活性中测定波长的选择孙雪奇,陈齐英,别小琳(四川省药品检验所,四川成都610034)提要:用岛津UV-240型、260型和T-1901紫外可见分光光度计进行实验,确定邻苯三酚自氧化法测定S OD活性的最适波长非文献使用的420nm和325nm,而应为320nm。

关键词:邻苯三酚自氧化法;S OD活性;波长中图分类号:R917文献标识码:B文章编号:1006-0103(2004)05-0404-02 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,S OD)为体内自由基的清除剂,在生物体的正常代谢中起重要作用,其活性测定常用邻苯三酚自氧化法[1]。

该方法主要是通过测定邻苯三酚自氧化前4min内, S OD对自氧化初始中间产物增加的抑制作用来测定S OD活性。

文献报道的测定波长主要有420nm[1]和325nm[2]。

为探讨初始中间产物的吸收峰位置,进而确定测定波长,特对此进行了研究。

1　实验部分111　仪器与试剂 UV-260和UV-240紫外可见分光光度计(日本岛津公司);T-1901紫外可见分光光度计(上海科学仪器厂)。

试剂均为国产分析纯。

112　方法 吸取4.5ml100mm ol・L-1的T ris-HCl缓冲液(pH812)和4146ml蒸馏水,混匀后置25℃水浴中20min,立即加入在25℃预热的30mm ol・L-1邻苯三酚40μl(10mm ol・L-1的HCl溶液配制),立即混匀,迅速倒入比色池中,以10mm ol・L-1的HCl溶液为空白,分别用上述3种型号的紫外可见分光光度计测定邻苯三酚自氧化中间产物的吸光度。

113　结果 UV-240紫外可见分光光度计测定可知,邻苯三酚自氧化初始中间产物的吸收峰在320～319nm 处。

T-1901和UV-260紫外可见分光光度计两种仪器测得的λmax均出现在320nm波长处,此时在420nm处吸光度还很小,到5min时吸光度<011,可见420nm处吸光度的变化不能反映中间产物的积累,因此,用420nm进行S OD酶活性测定是不正确的。